人凝血因子Ⅷ效价测定一步法

血凝效价是衡量生物体血液中凝血因子活性的重要指标，通常用于评估凝血功能是否正常。

在实际应用中，血凝效价的计算常常采用一些简易方法，以便更快速地得出结果，为临床应用提供参考。

下面是血凝效价的简易计算法的介绍。

一、试管法
试管法是一种常用的血凝效价计算方法。

该方法需要使用凝血酶原时间（PT）试剂和凝血酶时间（TT）试剂。

首先将待测血浆与PT试剂混合，记录凝血时间。

然后将待测血浆与TT试剂混合，同样记录凝血时间。

最后通过计算公式，即可得出血凝效价。

二、机械法
机械法是一种自动化程度较高的血凝效价计算方法。

该方法需要使用自动凝血分析仪，将待测血浆加入分析仪中，由仪器自动完成凝血过程并计算出凝血时间。

该方法具有操作简便、结果准确等优点，因此在临床应用中越来越广泛。

三、比色法
比色法是一种基于光学原理的血凝效价计算方法。

该方法需要使用特定的比色试剂，将待测血浆与试剂混合后，通过比色计测量光密度变化，从而计算出凝血时间。

该方法具有灵敏度高、结果稳定等优点，但需要较为精密的仪器和操作技巧。

以上三种方法均为简易计算法，相对于传统的复杂计算方法具有更高的效率和实用性。

但需要注意的是，这些方法仅适用于特定的凝血因子检测，对于某些凝血因子缺陷或异常的情况可能无法得出准确结果。

因此，在实际应用中需要结合患者的具体情况选择合适的方法进行血凝效价的计算和评估。

冻干人血浆凝血因子Ⅷ效价检测条件探讨
胡东;张荣波;许礼发;王瑜;吴静;李朝品
【期刊名称】《国际检验医学杂志》
【年(卷),期】2005(026)007
【摘要】目的明确由于标准品不同及样品的处理不同而带来的差异,建立一种重复性好、可行性强的凝血因子Ⅷ效价测定的适宜方法.方法采用部分凝血活酶时间(APTT)法测定人凝血因子Ⅷ效价,同时对该方法的精密度、准确度进行分析.结果凝血因子Ⅷ为预稀释液效价检测回收率为1.0102,高于白蛋白CA BUFFER(回收率=1.0605);冷冻人干凝血因子Ⅷ为标准品明显低于标准血浆(t=8.536,P＜0.000 5).结论对于凝血因子效价检测,标准品及样品处理的统一规定是必要的.
【总页数】2页(P474-475)
【作者】胡东;张荣波;许礼发;王瑜;吴静;李朝品
【作者单位】232001,淮南,安徽理工大学医学院;232001,淮南,安徽理工大学医学院;232001,淮南,安徽理工大学医学院;232001,淮南,安徽理工大学医学院;232001,淮南,安徽理工大学医学院;232001,淮南,安徽理工大学医学院
【正文语种】中文
【中图分类】R5
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人凝血因子Ⅷ效价测定一步法1 试剂1.1样品稀释液：取1容积的3.8%枸橼酸钠液加入5容积咪唑缓冲液。

1.1.1 咪唑缓冲液称0.68g咪唑和1.17g氯化钠溶于100ml蒸馏水中，加入42.2ml 0.1mol/L盐酸，然后被加入蒸馏水至200ml,pH为7.3。

1.1.23.8%枸橼酸钠溶液称9.5g枸橼酸钠溶解于250ml蒸馏水中。

1.2 血小板代用品“兔（人）脑组织的氯仿抽提液”。

用前用生理盐水稀释至适当倍数。

1.3白陶土生理盐水混悬液称0.5g白陶土加生理盐水至100ml即可使用。

1.4 基质血浆取人凝血因子Ⅷ含量低于2%的血友病病人血浆或人工基质血浆，然后分装于5ml安瓿，冻干或-30℃保存。

1.50.05mol/L氯化钙溶液称111g氯化钙溶于1000ml蒸馏水中，配制成1mol/L氯化钙贮存液，用前进行20倍稀释，配成0.05mol/L氯化钙溶液。

1.6 人凝血因子Ⅷ标准品及标准血浆人凝血因子Ⅷ国家标准品或经国家标准品标化的工作标准（定量分装冻干，置-30℃保存，一般2IU/ml左右），用前取样品稀释液溶解成1IU/ml。

标准血浆系取30份新鲜正常人血浆等量混合后，分装于小瓶内，置-30℃保存。

自采血后至分浆冻结整个过程不得超过4小时。

1.7待测样品按标示量加入注射用水溶解，测定时稀释成1IU/ml。

2 测定2.1取2支试管，每管加入0.1ml基质血浆和0.1ml样品稀释液，混匀，再加0.1ml血小板代用品和0.1ml白陶土悬液，混匀，将试管置37℃水浴保温一定时间（一般2～6分钟），然后加入0.1ml0.05mol/L氯化钙溶液，记录凝固时间，2管平均值为基质血浆的“空白”值（一般应大于3分钟）。

2.2 标准品或标准血浆用样品稀释液分别进行10倍、20倍、40倍、100倍和200倍稀释，用不同稀释浓度标准品代替2.1项试验中样品稀释液，按上述方法分别测定凝固时间。

2.3 待测样品稀释成约0.02～0.04IU/ml，代替2.1项试验中样品稀释液，同时分别测定凝固时间。

凝血因子Ⅷ定性检测试剂盒(凝血块溶解法)简介：凝血因子Ⅷ在Ca 2+的参与下，能使可溶于尿素或单氯乙酸溶液的可溶性纤维蛋白单体聚合物变为纤维蛋白，因此含因子Ⅷ的血浆凝固后不再溶解于上述溶液。

如果待检血浆中缺乏因子Ⅷ，则聚合物可溶解于上述溶液。

Leagene 因子Ⅷ用于定性检测人、动物血浆中凝血因子Ⅷ。

该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。

组成：自备材料：1、 离心机2、 计时器3、 水浴锅操作步骤(仅供参考)：1、 制备待测血浆：取新鲜待测静脉血，与柠檬酸钠抗凝剂混合，轻轻混匀。

离心，收集上层液(缺乏血小板的血浆)，转移至塑料试管或离心管，以防止血小板被激活。

同时应设正常对照血浆。

2、 取待测血浆(包括正常对照血浆)、CaCl 2(25mM) l ，混匀。

3、 置于水浴，期间轻轻混匀数次，直至凝块形成。

4、 将凝块转移至F Ⅷ溶液，每5min 观察1次，共计2h ；2h 后每2～4h 观察1次，共计24h 。

参考区间： 24h 内纤维蛋白凝块不溶解则为阳性注意事项： 编号 名称 TC0321 100T Storage 试剂(A): 柠檬酸钠抗凝剂 30ml RT 试剂(B): CaCl 2(25mM) 10ml 4℃ 试剂(C): F Ⅷ溶液 10ml 4℃ 使用说明书 1份1、以上操作，应同时测定正常对照。

2、获得样本后，应及时检测，一般不应超过1h，4℃不应超过4h。

3、应精确控制孵育温度在37±1℃，过高或过低均会影响结果。

4、抽血要顺利，抗凝要充分。

5、分离血浆应在3000g离心10min，务必去除血小板。

6、本检测试剂盒敏感性低，特异性高。

有效期：6个月有效。

相关：编号名称CS0001 ACK红细胞裂解液(ACK Lysis Buffer)CS0201 细胞线粒体分离试剂盒DC0032 Masson三色染色液DF0135 多聚甲醛溶液(4% PFA)DM0002 姬姆萨染色液(Giemsa stain,1:9)PW0040 Western blot一抗稀释液TC0713 葡萄糖检测试剂盒(GOD-POD比色法)。

凝血因子活性测定凝血因子活性测定介绍：凝血因子活性测定是对人体内的各种凝血因子进行活性测定，凝血因子在血液凝固过程中，起着非常重要的作用，测定各个凝血因子的活性，有助于判断血友病的类型，血友病的轻重程度以及某些病理情况下的凝血状况。

凝血因子活性测定正常值：因子Ⅱ：C 、因子Ⅴ：C 、因子Ⅶ：C 、因子Ⅶ：C 、因子Ⅸ：C、因子Ⅹ：C、因子Ⅺ：C、因子Ⅻ：C均为 0.80～1.20因子Ⅷ：C为 0.60～1.60凝血因子活性测定临床意义：异常结果：降低：1. Ⅷ：C降低见于血友病A，血管性血友病，弥散性血管内凝血等;2.因子Ⅸ：C降低见于血友病C，肝脏疾病，维生素K缺乏，弥散性血管内凝血，口服抗凝药等;3.因子Ⅺ：C降低可见于先天性因子Ⅺ缺乏，维生素K缺乏，弥散性血管内凝血等;4.因子Ⅻ：C降低可见于先天性因子Ⅻ缺乏，弥散性血管内凝血，肝脏疾病等;5.因子Ⅱ：C ，因子Ⅴ：C ，因子Ⅶ：C ，因子Ⅹ：C降低，见于先天性凝血因子缺乏或获得性凝血因子降低，如肝脏疾病，维生素K缺乏，弥散性血管内凝血，口服抗凝药及血液中存在抗凝物质等。

升高：见于血液高凝状态和血栓性疾病，如深部静脉血栓形成，肺栓塞，肾病综合征，妊娠高血压综合征，恶性肿瘤等。

因子Ⅷ也见于肝脏疾病。

需要检查的人群：患有血液病的人群。

凝血因子活性测定注意事项：不合宜人群：长期服用阿司匹林的人群。

检查前禁忌：检查前一天不吃过于油腻、高蛋白食物，避免大量饮酒。

血液中的酒精成分会直接影响检验结果。

体检前一天的晚八时以后，应禁食。

禁止服用阿司匹林，检查前禁止服用各种药物，以免造成影响。

检查时要求：抽血时应放松心情，避免因恐惧造成血管的收缩、增加采血的困难。

凝血因子活性测定检查过程：取标准品，用生理盐水配制成效价(U/mL)分别为5、6、7、8、9、10的标准品溶液。

另取1×10 cm的塑料试管6支，各加入0.1 %纤维蛋白原溶液450 μl，置37℃水浴预热5 min，再分别取已37℃预热的上述6个浓度的标准品溶液各50 μl，迅速加入上述各试管中，立即计时并摇匀，记录凝固时间。

人凝血因子效价检验标准操作规程人凝血因子ⅷ效价检验标准操作规程1目的严苛规范操作者的检测方法，并使操作者能快速有效率和安全精确地顺利完成检验操作方式，特制订本操作规程。

2适用范围本操作规程适用于冷沉淀、人凝血因子ⅷ洗脱原液、原液、半成品、冻干及成品等含有人凝血因子ⅷ的供试品效价检测。

3制定依据《中华人民共和国药典》（2021年版）三部，第三章3521人凝血因子ⅷ效价测定法（一期法）。

4职责4.1检验人员按本sop对供试品进行检验和计算。

4.2复核人对检验中的计算进行复核。

4.3证实人按本sop对检验过程及结果展开适当证实和认定。

5仪器及器具5.1仪器5.1.1凝血仪5.1.2电子天平5.1.3电子分析天平5.1.4漩涡混匀器5.2器具5.2.1微量移液器5.2.2吸头5.2.3移液管5.2.4洗耳球5.2.5试管5.2.6试管架5.2.7砂轮5.2.8凝血仪耗材（比色盘、供试品杯等）6试剂及试液6.1试剂6.1.1人凝血因子viii国家标准品6.1.2人凝血因子viii比较品6.2试液6.2.1人凝血因子ⅷ缺乏血浆6.2.2稀释液（咪唑稀释液/因子稀释液/样本稀释液）6.2.3转化成的部分促发展凝血酶原激酶时间试剂6.2.4氯化钙溶液7操作步骤7.1供试品溶液、比较品溶液及标准品溶液的制备7.1.1供试品及比较品溶液的制备7.1.1.1供试品及比较品的预稀释用人凝血因子ⅷ缺少血浆将可供试品进度表吸收成约1iu/ml（冻干制品先按标示量加入水溶解；冷沉淀先取1~2g，加水溶解约为20倍。

具体稀释过程如下：人凝血因子人凝血因子ⅷ供试品区分热结晶ⅷ洗清原半成品、成品、冻干液、原液及比较品供试品1~2g100μl100μl人凝血因子ⅷ缺少血浆19~38g提纯水300μl100μl吸收倍数2042挑莲塘稀释液---50μl50μl人凝血因子ⅷ缺少血浆---450μl450μl总预吸收倍数2040207.1.1.2供试品进度表稀释液的工作吸收（供试品溶液）将上述含人凝血因子ⅷ约1iu/ml的供试品预稀释液用稀释液稀释6倍、8倍、10倍。

冻干人凝血因子Ⅷ【用法用量】用法：将装有冻干人凝血因子Ⅷ和灭菌注射用水的制剂瓶加温至25-37℃。

开启铝塑组合盖，露出橡皮塞。

用消毒剂如酒精消毒橡皮塞的暴露部分。

瓶塞上勿残留消毒剂。

取下配制用针一端的塑料套。

将配制用针短的一端插入稀释液瓶的瓶塞中央。

去掉配制用针另一端长针的塑料外套。

倒转稀释液瓶和配制用针并将配制用针的长针一端插入因子Ⅷ制剂瓶的瓶塞中央。

待稀释液完全流入因子Ⅷ制剂瓶内。

取下稀释液瓶，排气后拔去配制用针。

轻轻转动瓶子使产品完全溶解。

不得剧烈摇动以免产生泡沫及引起蛋白变性。

用注射器进行静脉注射用法如下：将过滤针头装在注射器上，通过过滤针将人凝血因子Ⅷ溶液吸入注射器。

偶尔溶液中会有微量细小蛋白颗粒，可被滤去而不影响制剂的效价。

拔去过滤针，代之以输注装置。

配制好的制剂需立即输用，并在一小时内用完。

给药速度宜慢，不要超过10ml/分。

如果病人的用药量超过一瓶，可用同一套输注装置经一次静脉穿刺给药。

配制好的溶液不可再冷藏。

使用完毕后丢弃一切输液用装置。

如静脉滴注，用于输注的输液器必须带有滤网装置以去除溶解液中可能存在的微量细小颗粒。

滴注速度一般以每分钟60滴为宜。

用量：给药剂量必须参照体重、是否存在抑制物，出血的严重程度等因素。

下列公式可用于计算剂量：所需因子Ⅷ单位(IU)/次=0.5×患者体重(kg)×需提升的因子Ⅷ活性水平（正常的%）例：所需因子Ⅷ单位(IU)/次=0.5×50(kg)×30(%)-750IU一般推荐剂量如下：1．轻度至中度出血：单一剂量10-15IU/kg体重，将因子Ⅷ水平提高到正常入水平的20-30%。

2．较严重出血或小手术：需将因子Ⅷ水平提高到正常人水平的30～50%，通常首次剂量15-25IU/kg体重。

如需要，每隔8-12小时给予维持剂量l0-15IU/kg体重。

3．大出血：危急生命的出血如口腔、泌尿系统及中枢神经系统出血或重要器官如颈、喉、腹膜后，骼腰肌附近的出血：首次剂量40IU/kg体重，然后每隔8-12小时给予维持剂量20-25IU/kg体重。