脑缺血大鼠模型具体步骤及详细说明

丁香园上面总结的方法，排版有点乱。

其实过程与大鼠近似，我的经验是：1. 材料准备；大剪刀、眼科剪、眼科镊、大镊子、滤纸、竹签等；2. 步骤：处死小鼠，取头颅；剪开皮肤，漏出颅骨；用大尖镊子夹住两侧眼眶，用眼科剪稍剪除颅骨中线；再用眼科镊夹住颅骨从内向外夹，从下向上逐步去除颅骨；当全脑露出时，再用眼科镊去除脑膜和血管；然后用竹签从嗅球处向下取出全脑，即可。

3. 注意事项：用力轻柔，否则容易弄破脑部；用剪刀剪颅骨时，一定要贴壁向上剪，否则容易剪破脑部；去除脑膜时，不能硬拉，否则容易弄破大脑；取出全脑时应把头顶朝下，用竹签轻轻取出，离桌面也不要太远、高；若留病理，建议一定要取完整无损的大脑。

做免疫组化的话，稍微麻烦一点儿，因为脑组织含水量多，要固定的好，就需要先灌注。

先麻醉小鼠剪开胸腔，找到心脏，从心尖入针，剪开右心耳先用生理盐水灌注直到从心耳流出来的水清亮了再改用固定液（一般是4%多聚甲醛）灌注至小鼠四肢僵硬小鼠只需要用注射器就行了，我做的25～35g的小鼠一般用50mLNS+30mL多聚甲醛。

具体步骤：常规麻醉小鼠，将其固定，用剪刀剪开胸部皮肤，暴露出皮下组织，剪开时注意钝性分离，以免误伤。

然后用镊子提起剑突，用剪刀剪开胸腔，剪断两侧肋骨，暴露整个胸腔，小心误伤肺及心脏、大血管。

用镊子撕开心包膜，暴露心脏，用眼科剪剪开右心耳，然后提起心尖将准备好的生理盐水注射器插入左心室，注射，注射时小心针头滑脱。

生理盐水灌流至肺和肝的颜色都变成灰白色即可。

然后用多聚甲醛灌流，针孔最好是同一个，多聚灌流时小鼠四肢会抽搐，待抽搐结束，小鼠僵硬即可。

取下小鼠，用剪刀在颈部离断头颅，用剪刀在小鼠头颅中间皮肤剪一刀，将两边皮肤向下翻用手捏住，暴露整个颅骨，用眼科剪从脊髓端插入椎孔，沿着颅正中线剪开颅骨，注意剪刀向上翘一些，以免误伤脑组织，剪开后用弯眼科镊分离颅骨，小心分离，直至暴露整个大脑，然后用弯镊伸入颅底离断颅底神经，就可以取出整个脑子了。

phenol reagent[J].J Boil Chem,1951,193:265.[4]　Chandan K S,Lester P.Antioxidant and redoxregulation ofgenetranscription[J].FASE B J,1996,10(2):109-120. [5]　Reiter R J,T ang L,G arcia JJ,et al.Pharmacological actionsof melatonin in oxygen radical pharmacology[J].Life Sci, 1997,60(25):2255-2271.[6]　Fernando A,Barclay LRC,Ing old K U,et al.On the antiox2idant activity of melatonin[J].Free Rad Bio Med,1999,36(1/2):117-128.[7]　S iesjo BK,Zhao Q,Pahlmark K,et al.G lutamate,calcium,and free radicals as mediators of ischemia brain damage[J].Ann Thorac Surg,1995,59(5):1316-1320.[8]　K otler M,R odriquez C,Sainz RM,et al.Melatonon increas2es gene expression for antioxidant enzymes in rat brain cortex [J].J Pineal Res,1998,24(2):83-89.[9]　Bettahi I,P ozo D,Osuna C,et al.Physiological concentra2tions of melatonin inhibit nitric oxide synthase activity in rat hypothalamus[J].J Pineal Res,1996,20(4):205-210.收稿日期:2000-10-26　修回日期:2001-02-15本文编辑:程春开3种大鼠全脑缺血模型定量脑电图的实验研究Ξ吴克俭,花　放,孙景玲(徐州医学院附属医院神经内科,江苏徐州221002) 摘要:目的　比较正常大鼠不同电极联接方式的脑电图的差异,并以脑电图作为判定指标,评价3种全脑缺血大鼠模型的缺血效果。

脑缺血模型分为全脑缺血和局灶性缺血模型两种。

全脑缺血对于慢性脑缺血及一些特殊领域研究具有较高的价值，但因其对全身影响较大，梗死不稳定等缺点，并且，临床上的脑缺血患者通常为局灶性缺血，因此临床应用价值相对较低，目前应用相对较少。

局灶性缺血与全脑缺血相比，可形成特定部位的脑梗死并进行再灌注，对全身影响较少，与人发病情况更相似，目前应用更为广泛。

全脑缺血模型1 两血管阻断法：Ekloef 等（Ginsberget al.,1989）首先提出这种模型, 即关闭大鼠双侧颈总动脉(CCA), 同时降低血压。

制造低血压有两种方法: 通过尾动脉放血降低血压, 使用降压药三甲噻方或酚妥拉明把血压降到50 mmHg (7.5 mmHg =1kPa)。

其优点是操作简单方便;缺点是存在侧支循环, 缺血不完全, 血压的轻微波动会影响实验结果,低血压会严重干扰其他器官和组织的供血（李月玲et al.,1989）。

该模型还不能再清醒动物进行, 无法进行神经行为的观察。

可用来进行脑缺血后脑血流、神经递质的变化以及低温神经保护等，适合慢性期研究（张拥波et al.,2007）。

在该法基础上改进可制作血管性痴呆模型，如高脂饲养加两血管阻断法（Tayebatis et al.,2004），两血管阻断加尾端放血降压法，两血管阻断加硝普钠降压法（Willams et al.,2007）。

2 三血管阻断法:最初由Kameyama 等（Kameyama et al.,1985）建立，方法为电凝切断基底动脉，并通过阻断与开放双侧颈总动脉，实现全脑－缺血再灌流。

该法稳定性好，可通过阻断CCA 的时间长短来控制缺血程度，再灌注血流恢复迅速，模型成功率高，适合用于急性全脑缺血性损伤的研究。

其缺点是手术难度稍大，且对周围组织牵拉严重，操作不当易造成动物死亡。

被认为是迄今为止最理想的全脑缺血－再灌注动物模型。

Yanamoto 等（Yanamoto et al.,2003）采用改良的三支动脉阻断法制作正常血压大鼠大脑皮层脑梗死模型，通过比较术后动物的生理参数，梗死灶体积等指标确定缺血性中风程度。

大鼠脑缺血模型制作大鼠脑缺血是一种神经病理学状态，常用于研究脑缺血和再灌注相关的疾病，如中风和心脑血管疾病。

制作大鼠脑缺血模型可以帮助研究者深入了解脑缺血的机制，并探索治疗方法。

下面将介绍一种常用的大鼠脑缺血模型制作方法。

材料准备：1.正常健康的大鼠（约250-300g）2.异氟醚（用于麻醉大鼠）3.氧化氮（用于麻醉大鼠）4.0.9%氯化钠溶液（生理盐水，用于预先裂解血栓）5.弹簧夹（用于阻断大脑供血）6.血管夹（用于再灌注）7.生理盐水或PBS（用于清洗伤口和冲洗大脑）操作步骤：1.麻醉大鼠-以适当的浓度向氧化氮罩中送气，让大鼠吸入异氟醚麻醉。

-确定大鼠是否处于麻醉状态，如失去帕金森反射。

-为了确保大鼠的安全性和麻醉质量，要定期监测大鼠的许多生理参数，如呼吸频率、血氧饱和度和体温。

2.颅窗手术-将大鼠固定在手术台上，用5%碘伏消毒实验区域的皮肤。

-在头部进行剃发和消毒。

- 用手术刀在头部切开皮肤，在颅骨上切开一个直径约 1 cm的圆洞。

-清除头骨上的组织，暴露出颅骨。

-用电动开骨钻在颅骨上进行微抖动，直到打开一个圆洞。

通过控制速度和钻头的压力来避免损伤脑组织。

-用细钳将头皮撕开，暴露出脑膜。

3.制作脑缺血-用生理盐水或PBS洗涤脑膜，以确保大脑的清洁。

-用弹簧夹仔细阻断大脑的供血。

通常选择大脑的前动脉（MCA）或双侧MCA，使大脑区域发生缺血。

-检查大鼠是否出现神经功能缺陷，如软瘫、不对称性和意识丧失等。

-记录缺血时间，通常在20-30分钟之间。

-选择再灌注时间，通常是60分钟。

4.再灌注-在再灌注前，用生理盐水或PBS冲洗大脑。

通过防止缺血时间和再灌注时间的太长，以减少实验操作引起的伤害。

-用血管夹将阻断的血管解除，实现再灌注。

-观察大鼠是否恢复神经功能，例如排尿、动作和体位等。

-保持大鼠体温适宜，定期监测大鼠身体参数。

5.实验后处理-在实验结束后，用生理盐水或PBS冲洗伤口。

-给大鼠提供足够的水和食物，让其恢复。

第一部分 线栓模型制作1、实验器材（从左到右）：第一行：干棉球、酒精棉球、10％水合氯醛＋注射器、碘伏＋棉签第二行：三种不同粗细的鱼线（鱼线最好在2.0、2.5mm处各用记号笔作好标记，便于观察进入距离）、弯盘内为手术器材第三行：记号笔、自制拉钩（皮筋+曲别针＋大头针）2、麻醉：可用饮料瓶自制捕鼠器（适用于不敢手抓大鼠的），用于打麻药，根据大鼠的重量选择不同粗细的饮料瓶（太粗了大鼠可在瓶中回头）。

效果图3、麻倒后绑在手术台上。

4、剪去颈前的鼠毛，碘伏消毒。

5、沿经部正中切开皮肤。

说明：切开皮肤前最好将结扎动脉的线事先剪好（后面会用到）。

6、钝性分离皮下组织。

如图：大鼠腹侧可见事先剪好的结扎线。

7、分离到气管前肌后，沿右侧胸锁乳突肌腱向下分离，见到颈动脉鞘后可上拉钩。

8、分离动脉鞘。

如图：分离好后见光滑的颈总动脉。

9、分离出颈总、颈外、颈内动脉，结扎颈总、颈外动脉，注意中间那根线不要系紧，用来插鱼线时防止出血的。

10、夹闭颈内动脉，用眼科剪将颈总动脉剪一小口。

11、插入鱼线，鱼线进入颈内动脉后按图中注释方法插（成功率在90%以上）。

说明：（1）这一步鱼线选择是关键，根据大鼠重量（作的多了后根据动脉粗细就可选择了）选鱼线。

我们的经验是：250g以下的选0.26mm的线，250-300g的选0.26mm蘸腊的或0.28的都可以。

（2）如果遇到鱼线怎么也查不进去的情况，可让大鼠休息一会，换细点的鱼线再试，这种情况不一定都是进到翼腭动脉了，我曾解剖过4例这种情况的大鼠，有三例都是在如颅的地方卡住了，可惜我们手里没有0.24mm的鱼线。

（3）通过实践，我们认为结扎或夹闭翼腭动脉没有必要，按我们的方法，熟练的话，从切开到缝合完毕也就是15分钟，算上准备工作（如麻醉、消毒等）半小时也可以搞定了，这样一上午两人作10只大鼠不成问题。

（4）我们体会最好用蘸腊的鱼线作模型，好处是进线深度控制的好，不容易出现蛛网膜下腔出血。

《丁苯酞预处理对脑缺血再灌注损伤大鼠的神经保护作用及机制研究》篇一一、引言脑缺血再灌注损伤是临床常见的神经系统疾病，其发病机制复杂，治疗难度大。

近年来，丁苯酞作为一种具有广泛药理活性的药物，在脑缺血再灌注损伤的治疗中显示出良好的应用前景。

本文旨在研究丁苯酞预处理对脑缺血再灌注损伤大鼠的神经保护作用及潜在机制。

二、材料与方法1. 实验材料实验选用的材料包括：SD大鼠、丁苯酞药物、脑缺血再灌注模型、各种检测试剂和仪器等。

2. 实验方法（1）动物分组：将SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、丁苯酞预处理组及不同剂量丁苯酞干预组。

（2）模型建立：采用结扎大鼠双侧颈总动脉法建立脑缺血再灌注模型。

（3）药物干预：在模型建立前，对丁苯酞预处理组和各剂量干预组进行丁苯酞药物预处理或不同剂量干预。

（4）指标检测：通过神经功能评分、脑组织病理学检查、免疫组化、Western Blot等方法，观察各组大鼠的神经功能恢复情况、脑组织损伤程度及相关蛋白表达水平。

三、实验结果1. 神经功能恢复情况实验结果显示，丁苯酞预处理组及各剂量干预组的大鼠神经功能恢复情况明显优于模型组，其中，高剂量丁苯酞干预组的神经功能恢复情况最佳。

2. 脑组织损伤程度脑组织病理学检查结果表明，丁苯酞预处理和各剂量干预能够有效减轻脑缺血再灌注损伤大鼠的脑组织损伤程度，减少梗死面积和炎症反应。

3. 相关蛋白表达水平通过Western Blot等方法检测相关蛋白表达水平，发现丁苯酞预处理和干预能够上调抗凋亡蛋白Bcl-2的表达，下调促凋亡蛋白Bax的表达，同时能够调节其他与神经保护相关的蛋白表达。

四、讨论实验结果表明，丁苯酞预处理和不同剂量的干预对脑缺血再灌注损伤大鼠具有显著的神经保护作用。

其机制可能与以下几个方面有关：1. 抗炎作用：丁苯酞能够抑制炎症反应，减少炎症因子的释放，从而减轻脑组织损伤。

2. 抗凋亡作用：丁苯酞能够上调抗凋亡蛋白Bcl-2的表达，下调促凋亡蛋白Bax的表达，从而抑制细胞凋亡。

线栓法制备大鼠脑缺血再灌注模型的方法研究马贤德1孙宏伟1 柴纪严1 赵金茹1（1 辽宁中医药大学，辽宁沈阳 110032；）摘要①目的建立一种比较系统，操作简单，成功率高的大鼠大脑中动脉缺血(MCAO)再灌注动物模型，达到只要读者根据本文所述的方法操作就能制作出MCAO再灌注模型的目的。

②方法成年健康雄性 SD大鼠40只，参照Longa法并适当改进建立MCAO模型20只，假手术组20只。

本文将详细叙述手术过程以及再灌注时间点的合理选择。

最后利用行为学测试、四氮唑(TTC)染色对模型成功与否进行判定。

③结论线栓法是一种操作简单的制备MCAO 再灌注动物模型的方法，并且此方法的再灌注效果较为明显。

关键词动物模型；脑缺血；再灌注；线栓法Establishment a model of rat ischemia-reperfusion injury with intraluminal sutureMa Xian-de1 Sun Hong-wei1 Chai Ji-yan1 Zhao Jin-ru1(1.Liaoning University of Chinese Traditional Medicine, Shenyang, 110032) Abstract: Objective To establish a model of rat ischemia-reperfusion injury, in terms of the model, the operation will be simple, and the achievement ratio will be high. Methods: 40 Male Sprague-Dawley ( SD ) rats were separated into two groups randomly: 20 were model of rat ischemia-reperfusion injury based on Longa method, and the other 20 were sham-operated group. The process of the operation and the selection of different time point following ischemic-reperfusion were discussed in the paper. What’s more , the model was appraised by behavioral test and Triphenyl Tetrazolium Choloride（TTC）Staining. Conclusion: The operation of intraluminal suture method is very simple for the establishment of model of rat ischemia-reperfusion, what’s more, the effect of reperfusion is very obvious.Key words: Animal Model, ischemia, reperfusion, intraluminal suture脑缺血再灌注动物模型是研究缺血性脑血管病的一条重要途径，因为脑缺血再灌注动物模型具有很好的重复性并能最大程度模拟人类缺血性卒中的发生。

新生儿缺氧缺血脑损伤大鼠模型的制备庞炜;曹帅帅;李树祎;田雨光;顾为望【摘要】目的：在高原低压环境模拟仓内，模拟新生儿在高原环境下缺氧缺血脑损伤的过程，制备不同海拔高度下高原脑损伤大鼠模型。

方法10日龄的SD新生大鼠32只，随机分为4组，即A组（对照组）和3个实验组：B组（2000 m 组）、C组（4000 m组）、D组（6000 m组）。

对照组大鼠在屏障环境中饲养，实验组大鼠置于高原低压环境模拟仓结合运动的方法制作新生儿高原脑缺氧缺血模型，运动方式为在舱内游泳槽进行60 min／d的游泳运动，且在高原低压环境模拟仓内生活时间每天不得少于20 h。

每组大鼠分别在第3、7、11、15天用Zea Longa 5分制评分标准进行行为学评分并且于第15天采集静脉血，在扫描电镜下观察红细胞形态。

每组处死后取脑组织进行HE染色和TTC染色。

结果（1）神经病学评分：实验组B组、C组、D组行为学评分与对照组大鼠相比，行为学评分差异显著（P＜0�05），D组与对照组相比差异非常显著（P＜0�01）。

（2）HE染色结果显示：与对照组大鼠相比，实验组大鼠均有炎症细胞浸润，且炎症细胞浸润程度与海拔高度成正相关。

（3） TTC染色表明：在高原环境下大鼠的大脑皮质缺血明显。

（4）电镜下观察红细胞形态显示：实验组B组呈帽状结构；C组呈不规则形；D组呈锯齿状。

结论本研究采用高原低压环境模拟仓结合运动模拟高原环境制作新生儿缺氧缺血性脑病（ HIE）的模型，该模型稳定、可靠，比其他方法更符合缺血缺氧脑损伤的发病机理，与临床贴近，可用于相关研究。

%Objective To simulate the process of hypoxic⁃ischemic brain injury at high altitude in a simulated cabin with plateau low pressure environment, and to prepare a rat model of cerebral injuries at different high altitudes. Method Thirty⁃two 0⁃day⁃old neonatal SD rats were divided into fourgroups, namely group A ( control group) and three test groups:group B (2000 m group), group C (4000 m group), and group D (6000 m group). The rats of control group were reared in a barrier environment. The rats of test groups were placed in a simulated cabin with plateau low pressure environment, and to prepare neonatal cerebral ischemia⁃hypoxia model by sport activities. The sport movements were carried out in the cabin in a swimming groove 60 min/d, and not less than 20 hours a day at high altitude low pressure&nbsp;environment. Zea Longa 5 point scale standard was used to determine the behavioral scores at the 3 th 7 th 11 th 15 th days, and samples were collected on the 15th day to observe red blood cell morphology using HE and 2, 3, 5⁃triphenyltetrazolium chloride ( TTC ) staining and ultrastructure by scanning electron microscopy. Result ( 1 ) The neurological scores of the test groups A, B, C were significantly different from that of the control group (P<0�05), and the scores of test group D and control group were very significantly different ( P <0�01 ) . ( 2 ) The histopathological examination using HE staining showed inflammatory cell infiltration in all rats of the test groups, and the extent of inflammatory cell infiltration was positively correlated with the increase of altitude. ( 3 ) The histopathology with TTC staining revealed prominent ischemia in the cerebral cortex of rats in the plateau hypoxic environment. ( 4 ) Scanning electron microscopy showed that the rat erythrocytes were cap⁃like in the group B, irregular in the group C, and zigzag shape in the group D. Conclusions In this study, a rat model of neonatalhypoxic⁃ischemic encephalopathy ( HIE) is successfully established byhypoxic cabin combined with sport activity. This model is stable, reliable, more closely mimicking the pathogenesis and clinical manifestation of neonatal HIE than models prepared with other methods, therefore, may be used in related research.【期刊名称】《中国比较医学杂志》【年(卷),期】2016(026)006【总页数】7页(P61-66,74)【关键词】新生儿脑缺氧缺血性脑病;TTC染色;扫描电镜;大鼠【作者】庞炜;曹帅帅;李树祎;田雨光;顾为望【作者单位】南方医科大学实验动物中心，广州 510515;广州医科大学口腔教研室，广州 510182;广州医科大学口腔教研室，广州 510182;南方医科大学实验动物中心，广州 510515;南方医科大学实验动物中心，广州 510515【正文语种】中文【中图分类】R-33缺氧缺血性脑损伤（hypoxic-ischemic brain damage.HIBD）是因脑组织部分或完全缺氧、脑血流量减少或暂停导致的脑损伤，最终可造成神经细胞的凋亡和坏死。