连 续 电 泳
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几种常用的层析法
吸附层析 分配层析 离子交换层析 凝胶过滤层析 亲和层析
柱层析
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离子交换层析法
此法是利用离子交换树脂作为柱层析支持物, 将带有不同电荷的蛋白质进行分离的方法。
蛋 白 质 的
离子交换树脂可以分为阳离子交换纤维素,如 羧甲基纤维素(CM纤维素)等,阴离子交换 纤维素,如二乙基氨基乙基纤维素(DEAE纤 维素)等。
蛋
白
质 的 纯 化
在外加电场作用下,带电的蛋白质颗 粒在电场中移动的速度(v)取决于 电场强度(E),所带的净电荷(q),蛋
方 白质的分子量、分子形状以及与介质
法 的摩擦系数(f)。
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几种常用的电泳
纸电泳
醋酸纤维薄膜电泳
聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)
(可分为圆盘电泳和垂直平板电泳)
琼脂糖凝胶电泳
可以用适当的配体洗脱液洗脱。
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亲和层析法
常用的配基有抗体、抗原、激素或受体蛋 白、酶的底物和抑制剂等。层析柱载体为琼
蛋 脂糖凝胶等。 白 质 的 纯 化 方 法
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蛋白质纯度等的测定
纯度和分子量的测定:采用电泳 (如聚丙烯酰胺凝胶电泳)、分子 筛层析、高速离心、高效液相色谱 等技术测定。
用已知分子量的蛋白质作为标准,则
可以估算出不同蛋白质的分子量。
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5
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等电聚焦
将两性电解质(eg:pH3-9,pH5-7)
同蛋白质样品一起加入到已经灌好
蛋 白 质
的凝胶中,在电场下,两性电解质 首先达到它的等电点而平衡,蛋白
的 质样品根据它自身的等电点分别向