小鼠单克隆抗体的制备

单克隆抗体的流程单克隆抗体的那些事儿。

一、免疫动物。

要得到单克隆抗体呀，得先找个合适的小动物来进行免疫。

一般会选择小鼠之类的小可爱哦。

为啥选小鼠呢？因为它们好养呀，而且繁殖快，成本也比较低呢。

就像我们出门旅行会选择性价比高的酒店一样，选小鼠做这个事儿也是图个实惠又好用。

把抗原，也就是我们想要让小鼠身体识别产生抗体的东西，注射到小鼠体内。

这个过程就像是给小鼠一个小挑战，让它的免疫系统开始工作起来，就像我们被小石子硌了一下脚，身体会做出反应来保护自己一样。

二、细胞融合。

等小鼠的免疫系统被抗原刺激得差不多了，就到了一个超神奇的步骤啦，那就是细胞融合。

我们要从免疫后的小鼠脾脏里取出能产生抗体的B淋巴细胞，再找个小伙伴，这个小伙伴就是骨髓瘤细胞。

这两种细胞就像两个不同的小团队，要把它们融合在一起呢。

这个融合的过程有点像小朋友们玩拼图，把两个不同的部分拼在一起，组成一个新的东西。

这个新的细胞就叫做杂交瘤细胞啦。

不过这个融合可不容易，就像要让两个性格不太一样的人突然变得很默契一样难呢。

所以呀，还得加一些特殊的试剂来帮忙，就像给它们之间加点小魔法一样。

三、筛选杂交瘤细胞。

融合完了之后，可不是所有的细胞都是我们想要的杂交瘤细胞哦。

里面还有好多其他的细胞在捣乱呢。

这时候就得进行筛选啦。

这个筛选的过程就像是在一堆沙子里找珍珠一样。

我们会用一种特殊的培养基，这种培养基就像一个魔法筛子。

在这个培养基里，只有杂交瘤细胞才能生长，其他的细胞就会被淘汰掉啦。

这一步可重要了呢，要是没筛选好，后面得到的单克隆抗体可就不纯啦，就像我们炒菜要是调料没选对，菜的味道就不对了。

四、克隆化培养。

筛选出杂交瘤细胞之后呢，还得把它们单个单个地分开来培养，这就是克隆化培养啦。

这一步就像是把一群小伙伴分成一个个单独的小房间，让它们各自成长。

这个过程有好几种方法呢，比如说有限稀释法。

就像把一杯浓浓的果汁一点点地稀释，最后让每个小杯子里只有一个细胞。

这样每个细胞就可以独立地繁殖，变成一个小的细胞群体啦。

单抗制备流程1975年,Kohler和Milstein发现将小鼠骨髓瘤细胞和绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞进行融合，形成的杂交细胞既可产生抗体,又可无限增殖，从而创立了单克隆抗体杂交瘤技术.这一技术上的突破不仅为医学与生物学基础研究开创了新纪元，也为临床疾病的诊、防、治提供了新的工具。

制备单克隆抗体包括动物免疫、细胞融合、选择杂交瘤、检测抗体、杂交瘤细胞的克隆化、冻存以及单克隆抗体的大量生产，要经过几个月的一系列实验步骤，下面按照制备单克隆抗体的流程顺序，逐一介绍其实验方法。

一、细胞融合前准备（一) 免疫方案选择合适的免疫方案对于细胞融合杂交的成功，获得高质量的McAb至关重要。

一般要在融合前两个月左右确立免疫方案开始初次免疫，免疫方案应根据抗原的特性不同而定.1.颗粒性抗原免疫性较强，不加佐剂就可获得很好的免疫效果。

下面以细胞性抗原为例的免疫方案:初次免疫1×10７／0.5ml ip （腹腔内注射)↓2～3周后第二次免疫1×10７／0。

5ml ip↓3周后加强免疫（融合前三天）1×10７／0.5ml ip或iv（静脉内注射）↓取脾融合2.可溶性抗原免疫原性弱，一般要加佐剂,常用佐剂：福氏完全佐剂，福氏不完全佐剂.要求抗原和佐剂等体积混合在一起，研磨成油包水的乳糜状，放一滴在水面上不易马上扩散呈小滴状表明已达到油包水的状态。

商品化福氏完全佐剂在使用前须振摇,使沉淀的分枝杆菌充分混匀。

初次免疫 Ag 1~50μg 加福氏完全佐剂皮下多点注射│(一般0.8～1ml 0.2ml／点)↓3周后第二次免疫剂量同上，加福氏不完全佐剂皮下或ip│(ip剂量不宜超过0.5ml)↓3周后第三次免疫剂量同上，不加佐剂,ip│（5～7天后采血测其效价,检测免疫效果）↓2～3周后加强免疫，剂量50～500μg为宜，ip或iv↓3天后取脾融合目前,用于可溶性抗原（特别是一些弱抗原）的免疫方案也不断有所更新，如①将可溶性抗原颗粒化或固相化，一方面增强了抗原的免疫原性,另一方面可降低抗原的使用量。

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单克隆抗体制备技术单克隆抗体制备标准化操作方案（McAb—sop）第一章：小鼠免疫第二章：细胞融合第三章: 细胞建株第四章：细胞株鉴定第五章：腹水制备第六章：抗体纯化和鉴定(略）第一章. 小鼠免疫（BALB/c）小鼠免疫是单抗制备的关键一环,质控小鼠免疫是制备优质单抗的唯一保证.一.小鼠免疫分两程方案：根据免疫学原理小鼠免疫方案设计如下:1.短程免疫方案:第一次: 1d 100ug（可溶性Ag)+等体积完全佐剂。

腹腔注射。

0.4ml/只第二次: 7d 100ug+等体积不完全佐剂腹腔注射。

0.4ml/只第三次: 12d 50ug IV 0.3ml/只(强化）第四次：15d 20ug IV 0。

3ml/只第17 d~24d内融合2长程免疫方案:第一次: 1d 100ug+等体积完全佐剂腹腔注射（IP）0。

4ml/只第二次: 14d 100ug+等体积不完全佐剂IP 0。

4ml/只第三次：21d 100ug IP或IV 0.4ml/只第四次: 25d 50ug IV 0.3ml/只(强化）第五次: 28d 20ug IV 0.3ml/只第30d~37d内融合。

注意:a。

在融合前(即加强免疫前)必须测定免疫鼠血清滴度,短程免疫滴度必须≥1:8000,长程免疫≥1：32000,方可做融合。

b。

免疫周期完成后所有小鼠需在一周内做完融合. 否则不能保证融合质量.二．小鼠免疫质控标准1．免疫鼠血清滴度短程≥1:8000，长程≥1：32000；2．小鼠免疫后需在一周内做完融合；3．免疫鼠脾脏明显大于空白鼠脾脏并且较粘连。

免疫鼠选择：免疫种类为：balb/c小鼠；性别。

雌性佳；大小:6—7周龄：体重：20g;健壮。

活泼。

第二章．细胞融合一．融合前准备1．脾细胞：取符合免疫质控标准的鼠在无菌条件下取出其脾脏,并制成单个脾细胞悬液,每只鼠的脾细胞约1～3亿.在制备过程中严格保证无菌。

制备脾细胞可选择研磨器+筛网或用无菌注射器吹吸。

小鼠单克隆抗体制备的原理
嘿，朋友们！今天咱们就来聊聊小鼠单克隆抗体制备的原理，这可真是个超级有趣的事儿呀！
你看哈，就像我们盖房子需要砖头一样，制备单克隆抗体也得有它的“基石”呀。

这其中的关键就是小鼠啦！我们先把特定的抗原注射到小鼠体内，哎呀，这就好比给小鼠一个特别的“任务”。

小鼠收到这个“任务”后，它的免疫系统就开始行动啦！它的身体里就会产生各种各样针对这个抗原的抗体。

这时候就像是一场热闹的“派对”在小鼠体内举行呢！
然后呢，我们把小鼠的脾脏细胞取出来，和骨髓瘤细胞融合在一起。

哇塞，这融合的过程就好像是两个小伙伴手牵手一起去冒险！融合后的细胞就有了既能产生抗体，又能无限增殖的能力，多厉害呀！
接着就是筛选啦，就像在一堆苹果中找出最甜的那一个一样，我们要找出能产生我们想要的单克隆抗体的细胞。

这可不是一件容易的事儿呀，但也正因为不容易，才更有意思呢，对吧？
经过一系列的培养和筛选，最终我们就得到了纯化的小鼠单克隆抗体啦！这抗体就如同是小鼠送给我们的一份超级珍贵的“礼物”。

想想看，通过这么一系列神奇的步骤，我们就能得到这么厉害的单克隆
抗体，这多让人兴奋啊！这就是小鼠单克隆抗体制备的原理呀，是不是超级有趣？让我们一起为这个神奇的科学而感叹，为科学家们的智慧点赞吧！
结论：小鼠单克隆抗体制备原理就是通过一系列巧妙的操作，让小鼠的
免疫系统和细胞融合等技术相结合，最终制备出具有特定功能的单克隆抗体，这真的是非常了不起的科学成就！。

小鼠单克隆抗体的制备过程嘿，朋友们！今天咱就来唠唠小鼠单克隆抗体的制备过程，这可有意思啦！你想想啊，就好像要盖一座特别的房子。

首先呢，得选好“地皮”，也就是要选一只健康的小鼠。

这小鼠可不能随随便便找一只，得是那种身强体壮、精神头十足的。

然后呢，给这小鼠来点特别的“刺激”，把咱要研究的抗原注射到它身体里。

这就好比给它一个任务，让它记住这个抗原长啥样。

小鼠呢，也不含糊，身体就开始有反应啦。

过一段时间后，把小鼠体内产生抗体的细胞取出来，这些细胞就像是一个个小战士，它们知道怎么对付那个抗原呢。

但是光有这些小战士还不行啊，咱得给它们找个好地方培养。

接下来，把这些细胞和一种叫骨髓瘤细胞的家伙放到一起。

这骨髓瘤细胞就像是个好伙伴，能和那些小战士一起成长。

然后在一些特殊条件下，让它们融合在一起，变成杂交瘤细胞。

这杂交瘤细胞可厉害啦，既有小战士的本事，又有骨髓瘤细胞的特点。

然后呢，就把这些杂交瘤细胞一个一个地分开培养，就像种一棵棵小树苗一样。

这可得细心着点，别让它们长坏了。

培养好了后，就得看看哪些小树苗是最棒的，能长出我们想要的单克隆抗体。

这就好比挑将军，得挑出最厉害的那个。

最后，把这些厉害的杂交瘤细胞扩大培养，让它们大量生产单克隆抗体。

哇，就像收获了满满的果实一样让人开心！你说这过程是不是很神奇？就像一场奇妙的冒险！从选小鼠到得到单克隆抗体，每一步都充满了挑战和惊喜。

这可不是随便谁都能搞定的事儿，得有耐心，有技术，还得有点运气呢！咱再想想，如果没有这小鼠单克隆抗体，那好多医学研究和疾病治疗不就没办法进行啦？所以说啊，这小小的制备过程，可有着大大的意义呢！总之，小鼠单克隆抗体的制备过程就像是一场精彩的演出，每一个角色都很重要，每一个步骤都不能马虎。

咱得好好对待，才能让这场演出圆满成功呀！。

单克隆抗体制备步骤及注意事项一、脾细胞的准备：1.将Balb/c小鼠拉颈脱臼处死，浸泡于75%酒精3～5min。

无菌操作取出脾脏，置于盛有5mL不完全培养液的平皿中，洗涤3次去除脾脏表面的脂肪和结缔组织。

2.将洗好的脾脏用剪刀剪成3～5个小块，然后将脾脏研碎，过细胞筛，收集细胞。

3.将脾脏细胞悬液在1000r/min条件下，离心5min，弃上清。

再以同样的方法洗涤离心一次。

4.将沉淀细胞重新悬浮于10mL不完全培养液中，计活细胞数，取108个脾淋巴细胞悬液备用。

注意事项：➢免疫脾细胞一般取最后一次加强免疫3天以后的脾脏，制备成细胞悬液，因为此时B淋巴母细胞比例较大，融合的成功率较高。

二、骨髓瘤细胞的准备：1.选好骨髓瘤细胞株，取体外培养对数生长期细胞或体内生长的肿瘤分离骨髓瘤细胞。

2.取对数生长骨髓瘤细胞离心，用无血清培养液洗2次。

3.制备细胞悬液，计活细胞数。

4.调整细胞浓度，取107细胞悬液备用。

注意事项：➢常用的骨髓瘤细胞系有：NS1、SP2/0、X63、Ag8.653等。

➢骨髓瘤细胞系应和免疫动物属于同一品系，这样杂交融合率高，也便于接种杂交瘤细胞在同一品系小鼠腹腔内生产大量McAb。

➢骨髓瘤细胞的培养适合于一般的培养液，如RPMI-1640基础培养液，DMEM培养基。

小牛血清的浓度一般在10～20%。

细胞的最大密度不得超过106个/mL。

➢一般扩大培养以1:10稀释传代，每3～5天传代一次。

细胞的倍增时间为16～20小时。

➢一般准备融合前的两周就应开始复苏骨髓瘤细胞，为确保该细胞对HA T的敏感性，每3～6个月应用8～AG（8氮杂鸟嘌呤）筛选一次，以防止细胞的突变。

➢保证骨髓瘤细胞处于对数生长期，良好的形态，活细胞计数高于95%，也是决定细胞融合的关键。

三、细胞融合：1.将骨髓瘤细胞与脾细胞按1:10 或1:5的比例混合，加入20～50mL RPMI-1640培养液。

2.在1000r/min条件下离心8min，弃上清，用滴管轻轻吸净残留液体。

单克隆抗体合成方法哎呀，说起单克隆抗体，这可是个技术活儿，得慢慢来。

首先，咱们得聊聊啥是单克隆抗体。

简单来说，就是实验室里制造出来的，能针对特定抗原的抗体。

这玩意儿在医学上可有大用，比如治疗癌症、自身免疫疾病等等。

好了，咱们开始吧。

首先得有个小鼠，为啥是小鼠呢？因为它们能产生我们需要的抗体。

然后，我们得给小鼠注射特定的抗原，让它的免疫系统产生反应。

这就像是给小鼠打疫苗，只不过我们不是为了预防疾病，而是为了让它产生我们想要的抗体。

接下来，就是等待。

小鼠的免疫系统会开始工作，产生针对那个抗原的抗体。

这个过程可能需要几周时间，你得有耐心。

等小鼠产生足够的抗体后，我们就得从它的脾脏中提取B细胞。

B细胞是免疫系统中产生抗体的细胞。

我们得用一种特殊的技术，叫做“融合”，把B细胞和一种叫做骨髓瘤细胞的癌细胞结合起来。

这样，我们就能得到一种新的细胞，既能无限繁殖，又能产生我们想要的抗体。

然后，就是筛选。

我们得从这些融合细胞中找出能产生特定抗体的细胞。

这就像是在一大堆豆子里找出一颗红豆，得慢慢来。

找到能产生特定抗体的细胞后，我们就可以开始大规模培养了。

这些细胞会不断繁殖，产生大量的单克隆抗体。

最后，就是提取和纯化。

我们得从培养液中提取出抗体，然后通过一系列的步骤，把抗体从其他物质中分离出来，得到纯净的单克隆抗体。

这就是单克隆抗体的合成方法。

听起来挺复杂的，但其实就是一步步来，耐心点，细心点，就能成功。

这玩意儿虽然小，但作用可不小，能帮我们治疗好多疾病呢。

单克隆抗体制备的具体步骤
嘿，咱今儿就来唠唠单克隆抗体制备的那些事儿！
你想啊，要制备单克隆抗体，就像盖一座特别的房子。

第一步呢，
得选好材料呀，这就好比选建房子的砖头和瓦片。

咱得先找到合适的
抗原，这抗原就像是房子的基石，得稳稳当当的呢。

然后呢，就该让免疫细胞出马啦！把抗原注射到小鼠体内，让小鼠
的免疫系统动起来，产生抗体。

这小鼠啊，就像个勤劳的小工匠，努
力地工作着。

接着，等小鼠的免疫系统被激发得差不多了，就把它的脾脏取出来。

这脾脏就像是个藏宝库，里面有好多我们需要的宝贝细胞呢。

把脾脏
细胞弄出来后，再和骨髓瘤细胞融合在一起，这融合的过程就好像两
种不同的材料要完美结合在一起，变成一种全新的、更厉害的东西。

融合之后，可不是所有的细胞都能用哦，得经过筛选才行。

这就好
比在一堆沙子里找金子，得仔细挑挑拣拣呢。

把那些能产生我们想要
的抗体的细胞选出来，其他的就淘汰掉。

选出来的细胞还得培养呀，给它们提供一个舒适的环境，让它们好
好长大，多多生产抗体。

这就像照顾小树苗，得给它浇水、施肥，让
它茁壮成长。

最后，经过一系列的步骤，我们就能得到我们心心念念的单克隆抗体啦！这抗体就像是我们盖房子最后的成品，坚固又好用。

你说这单克隆抗体制备是不是很神奇？它就像是一个魔法的过程，把一些看似普通的东西，通过一系列复杂的操作，变成了非常有用的宝贝！这过程虽然有点复杂，但每一步都充满了惊喜和挑战呢。

咱要是能把这单克隆抗体给制备出来，那可真是了不起呀！你难道不想试试吗？。