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实验24 蛙的早期发育观察一、实验目的1．了解生殖的基础理论，学习蛙的人工催产和受精技术。
2．通过对蛙早期发育的观察，认识动物个体发育的一般过程，从而加深对动物系统演化的理解。
3．学会自己查阅文献、设计实验、分析处理实验数据及实验结果的报告。
二、实验材料1．性成熟的牛蛙、虎纹蛙等人工养殖的蛙类。
或在繁殖时期，同学自己在野外采集性成熟的蛙类，如泽蛙等。
2．或性成熟的鱼类。
三、实验器具与药品1．实验器具由同学根据实验设计自行准备。
2．药品丙酮、无水酒精、蛙类脑下垂体（PG）、绒毛膜促性腺激素（HCG）、促黄体生成素释放激素类似物（LRH-A）、生理盐水、蒸馏水等。
四、实验操作实验前同学查阅文献资料，做出实验方案设计，完成实验内容。
1．人工催产（1）不同催产剂组合催产效果的比较。
（2）不同条件催产效果的比较。
2．受精卵的获得（1）精子悬浮液的制备杀死或麻醉一只雄性亲蛙，解剖取出精巢，将精巢轻轻地在吸水纸上滚动，除去粘附其上的血液及肠系膜等。
将干净的精巢放入小烧杯或培养皿中，捣碎。
加入10 mL左右的生理盐水，制成精子悬浮。
将乳状悬浮液静置15分钟，激活精子。
（2）采卵抓住待产雌蛙，使其背部对着手心，手指部分圈住蛙体，并刚好在前肢的后面，手指尖搁在蛙的腹部；另一手抓住并伸展蛙的两后肢（图24-1）。
握蛙手指自蛙体前部开始轻微加压，然后向泄殖腔方向逐渐捏握，卵即可由泄殖孔流出。
由于开始时通常会流出泄殖腔液，因此丢弃最初排出的卵粒，擦干泄殖孔周围后，再收集卵于培养皿中。
图24-1 采集蛙卵（自Leland）（3）受精向盛卵培养皿中加入已制备好的精子悬浮液，摇匀，使精子与卵子充分接触。
10-15分钟后倒出精子悬浮液并加入清水，完成受精，得到受精卵。
将受精卵移入盛有清水的培养皿中，并供给充足氧气，观察发育过程。
也可将催产后的雌、雄蛙一起放入水簇箱中，让它们自行抱对产卵。
但此方法需密切注意观察抱对行为，以便及时采得受精卵。
蛙的早期胚胎发育一、两栖动物的繁殖两栖动物的繁殖类型是多种多样的。
1．体外受精体外发育绝大多数的两栖动物营这种繁殖方式，我们经常见到的黑斑蛙Rananigromaculata）、中华蟾蜍（Bufo gargarizans）等都是以这种方式进行，这些动物一般将卵产于水中，受精卵在水中完成其胚胎发育。
另有一些产于陆上，胚胎发育完成后，孵出蝌蚪进入水中生活，如树蛙科（Rhacophoridae）的种类。
2．体外受精体内发育营这种繁殖方式的两栖动物通常将体外受精的卵置于身体中的某一位置（除雌性生殖道外）完成胚胎发育，这样亲蛙就可以更好地保护这些受精卵。
产于南美的负子蟾（Pipa pipa）在繁殖期间，雌蟾背部皮肤变得很柔软，增厚成海绵状组织，受精后，雄蟾用后肢将受精卵挟置雌蟾背部皮肤的“育囊”中，并在其中完成发育。
产于南美智利的尖吻达蛙（Rhinoderma darwinii）声囊很大，繁殖时会将受精卵吞入声囊中发育至雏蛙后才从声囊中出来。
而澳大利亚胃育溪蟾（Rheobactrachus sibus）雌蟾则将受精卵吞入胃中进行孵化，雌蛙在繁殖期间停止进食，由卵胶膜及后来蝌蚪所分泌的类生长素物质E）阻止了盐酸和胃蛋白酶的产生，使胃由一种消化器官临时转变为一种保护（前列腺素2性的怀孕囊。
3．体内受精体外发育这种繁殖类型在蝾螈科的种类中普遍存在，这些种类没有交配器，但它们90%是行体内受精的，交配时，雄体将精子团或精包排入水中，雌体则用泄殖腔唇纳入其中：另外还有北美山溪中生活的尾蟾（Ascaphus trnei），其雄体从泄殖腔中伸出一种尾状突出物作为交配器，而真蚓科（Caeciliidae）的种类，其雄体以泄殖腔外翻成为一突起作为交配器。
因此，这些种类都是在雌体生殖道内受精后，将受精卵排出体外完成发育的。
4．体内受精体内发育这是一种类似于哺乳动物的繁殖方式，即卵在体内受精后，在输卵管内继续发育，直接产出幼体在水中生活。
一、实验目的通过本次实验，了解青蛙的形态结构特点，掌握青蛙内部器官的分布和功能，为后续生物学学习和研究打下基础。
二、实验材料1. 青蛙尸体2. 解剖器械：解剖剪、解剖镊、解剖针、解剖盘、解剖刀、解剖针、解剖钩等3. 显微镜及配套玻片、载玻片、盖玻片等4. 生理盐水、酒精、甲醛等试剂三、实验步骤1. 青蛙外部形态观察（1）观察青蛙整体形态：青蛙身体呈扁平状，分为头部、躯干部和尾部三部分。
头部较宽，躯干部较长，尾部细长。
（2）观察青蛙皮肤：青蛙皮肤光滑，具有丰富的粘液腺，有利于在水中游泳。
（3）观察青蛙四肢：青蛙具有四肢，后肢发达，适于跳跃。
前肢较短，主要用于抓握和攀爬。
2. 青蛙内部器官观察（1）解剖青蛙：将青蛙尸体放在解剖盘上，用解剖剪剪开腹部皮肤，暴露出内部器官。
（2）观察消化系统：消化系统包括口腔、咽、食道、胃、小肠、大肠和肛门。
口腔内有牙齿，胃呈囊状，小肠较长，大肠较短。
（3）观察呼吸系统：呼吸系统包括鼻腔、咽、喉、气管、支气管和肺。
青蛙的肺较小，但肺泡数量较多，有利于气体交换。
（4）观察循环系统：循环系统包括心脏、血管和血液。
青蛙的心脏为一心房一心室，动脉血和静脉血混合。
（5）观察泌尿系统：泌尿系统包括肾脏、输尿管和膀胱。
肾脏呈红色，具有滤过功能，输尿管将尿液输送到膀胱。
（6）观察生殖系统：生殖系统包括卵巢、输卵管、子宫、睾丸和附睾。
卵巢和睾丸分别产生卵子和精子，通过输卵管和子宫进行受精。
（7）观察神经系统：神经系统包括大脑、脊髓和神经。
大脑分为左右两个半球，脊髓连接大脑和身体各部位。
3. 青蛙内部器官显微镜观察（1）制作切片：将青蛙内部器官切成薄片，用生理盐水浸泡，制成玻片。
（2）显微镜观察：观察切片，观察细胞结构和组织结构。
四、实验结果与分析1. 青蛙具有扁平的身体形态，有利于在水中游泳。
2. 青蛙皮肤光滑，具有丰富的粘液腺，有利于在水中游泳。
3. 青蛙具有四肢，后肢发达，适于跳跃。
一、实验目的1. 了解青蛙的生物学特征和生态习性。
2. 观察青蛙的外部形态和内部结构。
3. 掌握青蛙的生殖发育过程。
二、实验材料与工具1. 实验材料：青蛙（青蛙种类不限）、解剖工具（解剖剪、解剖镊、解剖针等）、培养皿、解剖盘、显微镜、载玻片、盖玻片、生理盐水等。
2. 实验工具：放大镜、量筒、显微镜、解剖镜、数码相机等。
三、实验方法与步骤1. 观察青蛙的外部形态（1）观察青蛙的整体形态，包括体型、体色、皮肤、四肢等。
（2）观察青蛙的眼睛、鼻子、嘴巴、四肢、尾巴等部位。
（3）记录观察到的特征。
2. 解剖青蛙（1）将青蛙放置在解剖盘上，用解剖剪剪开青蛙的腹部。
（2）用解剖镊取出内脏器官，观察心脏、肝脏、肺、胃、肠、肾脏等器官。
（3）观察青蛙的生殖系统，包括卵巢、睾丸、输卵管、输精管等。
（4）记录解剖过程中的观察结果。
3. 观察青蛙的生殖发育过程（1）观察青蛙的卵细胞、精子、胚胎等发育阶段。
（2）观察青蛙的孵化过程。
（3）记录观察到的生殖发育过程。
4. 制作青蛙的玻片标本（1）将青蛙的器官或组织切片。
（2）将切片放在载玻片上，滴加生理盐水。
（3）盖上盖玻片，用显微镜观察。
（4）记录显微镜下的观察结果。
四、实验结果与分析1. 外部形态观察结果（1）青蛙的整体形态呈椭圆形，四肢细长，皮肤光滑，体色多样。
（2）青蛙的眼睛大而突出，鼻子位于头部前端，嘴巴位于鼻孔下方。
（3）青蛙的四肢发达，适合跳跃和游泳。
2. 解剖观察结果（1）青蛙的心脏为一心房一心室结构，心脏位置位于胸腔。
（2）肝脏位于腹腔，呈绿色。
（3）肺位于胸腔，呈粉红色。
（4）胃位于腹腔，呈粉红色。
（5）肠位于腹腔，呈粉红色。
（6）肾脏位于腹腔，呈粉红色。
（7）生殖系统包括卵巢、睾丸、输卵管、输精管等。
3. 生殖发育过程观察结果（1）青蛙的卵细胞呈球形，透明。
（2）精子呈椭圆形，有鞭毛。
（3）胚胎发育过程分为卵裂期、囊胚期、原肠期、神经胚期、器官形成期等阶段。
高等动物（青蛙）的个体发育蛙的胚胎发育概括
（1）卵裂期这时期弱端黄卵进行不均等分裂。
经过几次分裂，形成一团细胞，动、植物极细胞大小悬殊。
（2）囊胚期在继续分裂过程中，细胞数目增多，细胞产生的液态代谢产物集中在中心，细胞向四周飘移，围成一个空心的球体，这时的胚体叫囊胚，囊胚内部出现偏于动物极、充满流体的囊胚腔。
（3）原肠胚期囊胚后期，在赤道线下出现一条月牙形的浅沟，浅沟的背缘叫背唇。
背唇出现以后，动物极细胞分裂卷入囊胚腔。
与此同时，植物极细胞也由背唇下卷入囊胚腔。
先前出现的浅沟两端继续向下延伸，最终形成一个环状裂隙，称为胚孔（原口）。
胚孔外周的细胞继续内卷，而胚孔中心始终堵塞着一团原来植物极的细胞，称为卵黄栓。
那些内卷的细胞在原来囊胚腔处围成一个新的空腔，叫原肠腔。
这时的胚体称为原肠胚。
原肠胚早期的特点是胚体出现了两层细胞，围绕原肠腔的一层，称为内胚层，包围胚体体表的一层称为外胚层。
原肠胚进一步发育，开始三胚层分化：即原肠腔顶壁的细胞分化为中胚层，中胚层包围着全部由内胚层细胞构成的原肠。
（4）神经胚期外胚层形成一片神经板，进而围成一条神经管。
神经营前端膨大发育成脑，其余发育成脊髓。
同时，在神经管下方，中胚层细胞形成一条棒状实心结构，即脊索。
在中胚层不断发育过程中，中胚层又分化出脏壁中胚层和体壁中胚层，它们两者之间的空腔，即为体腔。
蛙的个体发育在形态结构上有变态的特征。
各种动物在胚胎发育过程中都要形成内、中、外三胚层，再由这三胚层发育成动物的各种组织、器官和系统。
实验1 动物的细胞和四大组织一、实验目的1、了解动物细胞的基本结构；2、了解四大类组织的结构与功能；3、了解细胞有丝分裂各期的特点；4、掌握临时装片的制作方法。
二、实验材料人口腔上皮、疏松结缔组织、血液组织（活蛙或蟾蜍）、横纹肌（蝗虫浸制标本）、有丝分裂永久制片、复层扁平上皮、透明软骨、平滑肌及神经组织4种组织的切片。
0.1%及1%的亚甲蓝、0.7%及0.9%的NaCl溶液。
三、操作及观察1、人口腔上皮细胞：2、疏松结缔组织：胶原纤维束，弯曲成波浪状；弹性纤维细而具分枝，不成束，无波浪状弯曲。
3、血液组织：红细胞呈扁椭圆形，单个细胞为黄色，但血液组织为何呈红色？红细胞侧面呈何形状？4、肌肉组织：四、示范1、细胞的有丝分裂观察：2、复层扁平上皮组织的观察：3、软骨组织观察：4、平滑肌的观察：5、神经组织的观察五、注意事项1、做口腔上皮细胞临时装片时，注意必须将从颊部刮下的细胞在载玻片上涂得薄而均匀。
滴加0.9%的氯化钠液不宜过多，恰在盖波片之下为宜。
2、做疏松结缔组织装片时，用解剖针将取下的组织必须在一小滴生理盐水将其展开成薄片。
3、做横纹肌装片时，将取下的一小束肌肉放在载玻片上加一滴水，必须在水中用解剖针顺着肌纤维仔细分离，分得越细越好。
4、在做临时装片时，必须用镊子铗着盖玻片放置。
六、作业1、绘人口腔上皮细胞（2~3个，其中1个详绘）图。
实验2草履虫一、实验目的1、通过草履虫的形态结构与各种细胞器的观察，了解原生动物的主要特征；2、掌握临时装片的制作方法；3、了解草履虫的无性生殖和有性生殖。
二、实验材料草履虫培养液、显微镜、5%的冰醋酸、载玻片、盖玻片、镊子、棉花和吸水纸等。
三、实验操作及观察1、草履虫临时装片的制作：2、观察内容：外形、纤毛、前后端、运动方式、内质与外质、刺丝泡、表膜、口沟、胞口与胞咽、食物泡与伸缩泡、大小核等。
四、示范1、草履虫无性生殖的观察：2、草履虫接合生殖的观察：五、注意事项1、作临时装片时，棉花应使纤维之间的孔隙大小较均匀，棉花的量要少；2、观察纤毛、刺丝泡、和伸缩泡时，光线应暗些。
实验24 蛙的早期发育观察两栖类的胚胎发育作为脊椎动物早期发育模式的研究已有近100年的历史,在胚胎学、发育生物学及细胞生物学的研究中占有重要的位置，是研究发育生物学、进化生物学、功能基因组学和蛋白质组学等前沿学科的模式动物，因而关于无尾两栖类早期胚胎发育的研究,国内外均早有报导.Pol.ster和Moore(1937)首先发表了蛙的正常发育时间表,将早期的胚胎发育划分为23个时期,开始对这方面的研究工作提供了一定的帮助。
蛙类动物是脊椎动物进化历程中的一个重要类群,由于蛙类动物必须在水中繁育,对水源和水质环境的改变特别敏感,如果失去水源和良好的水质坏境, 它们的生存将会受到严重威胁。
因此以蛙类动物生存质量作为检测水质环境恶化程度的探针,为探讨全球变化对生命系统的影响提供了良好的实验材料。
两栖类在脊椎动物发生中占有重要地位,在系统发生方面是水生和陆栖脊椎动物的联系动物。
观察蛙的胚胎发育,也可以看到胚胎发生中从简单到复杂的过程。
一、实验目的通过对蛙早期发育的观察，认识动物个体发育的一般过程，从而加深对动物系统演化的理解。
二、实验原理绝大多数的两栖动物营体外受精体外发育的繁殖方式，这些动物一般将卵产于水中，受精卵在水中完成其受精发育（如黑斑蛙，中华蛙等）。
也有很少的一些产卵于陆上，胚胎发育完成后，孵出蝌蚪进入水中生活（如树蛙）。
蛙类早期胚胎发育的分期通常以胚胎发育过程中的形态变化为标准。
不同的学者在研究不同蛙类的早期胚胎发育时，划分的时期不尽相同，但大同小异，大多数种类，从受精卵开始至胚胎发育完成可分为24~25个时期。
（各时期的划分及特点见附录）三、材料用具1、实验材料：青蛙的早期胚胎——蛙卵2、实验器材：手术剪、镊子、培养皿、载玻片、解剖镜（或低倍显微镜）：四、实验操作1、用镊子夹取小块蛙卵于培养皿中，用剪刀剪取一个卵放载玻片上，置于显微镜下观察。
2、连续观察一周，记录各时期蛙卵及蝌蚪的形态特点并记录与下表。
第1篇一、实验目的1. 了解蛙细胞的基本结构和功能。
2. 掌握使用高倍显微镜观察细胞的方法。
3. 学习细胞形态学的基本知识。
二、实验原理蛙细胞作为动物细胞，具有典型的真核细胞结构。
通过高倍显微镜观察蛙细胞，可以了解其细胞核、细胞质、细胞膜等结构，以及细胞分裂和细胞器的功能。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：蛙胚胎、生理盐水、盖玻片、载玻片、镊子、滴管、酒精灯、剪刀、解剖刀、显微镜、高倍物镜、低倍物镜、滤光片等。
2. 实验试剂：生理盐水、0.9%NaCl溶液、1%盐酸、1%醋酸、1%酒精、1%甲醛等。
四、实验步骤1. 取蛙胚胎，用剪刀剪开蛙胚胎，取出蛙胚胎细胞。
2. 将蛙胚胎细胞放入生理盐水中，用镊子轻轻搅拌，使细胞悬浮。
3. 取盖玻片，滴一滴生理盐水于盖玻片上，用滴管将蛙胚胎细胞悬浮液滴于生理盐水滴中。
4. 用镊子轻轻将盖玻片盖上，使细胞均匀分布在盖玻片上。
5. 将载玻片放置于显微镜载物台上，调整低倍物镜，观察蛙细胞形态。
6. 调整高倍物镜，观察蛙细胞核、细胞质、细胞膜等结构。
7. 重复步骤5和6，观察细胞分裂和细胞器的功能。
五、实验结果与分析1. 观察到蛙细胞具有典型的真核细胞结构，包括细胞核、细胞质、细胞膜等。
2. 细胞核较大，具有明显的核仁，染色质分布均匀。
3. 细胞质中分布有细胞器，如线粒体、内质网、高尔基体等。
4. 观察到细胞分裂现象，包括有丝分裂和无丝分裂。
5. 通过观察细胞器的功能，了解细胞代谢和能量供应过程。
六、实验讨论1. 蛙细胞具有高度分化的特点，不同细胞具有不同的功能。
2. 细胞分裂是生物体生长发育的基础，有丝分裂和无丝分裂在细胞分裂过程中发挥着重要作用。
3. 细胞器是细胞内的重要功能单位，线粒体、内质网、高尔基体等细胞器在细胞代谢和能量供应过程中具有重要作用。
七、实验总结本次实验通过观察蛙细胞，了解了蛙细胞的基本结构和功能，掌握了使用高倍显微镜观察细胞的方法。
在实验过程中，我们学会了如何操作显微镜，如何观察细胞形态，以及如何分析细胞结构和功能。
