下载文档原格式
沉默TRIM31基因表达通过调控Wnt/β-catenin信号通路抑制膀胱癌细胞的迁移与侵袭①徐兵李勇②刘明刘永辉（南华大学附属第三医院泌尿外科，衡阳421900）中图分类号R737.14文献标志码A文章编号1000-484X（2021）15-1836-05［摘要］目的：观察沉默TRIM31基因表达对膀胱癌细胞迁移与侵袭的影响，并探讨其作用机制。
方法：将膀胱癌T24和5637细胞分为对照组、siRNA-NC组和siRNA-TRIM31组。
采用siRNA技术沉默细胞中TRIM31基因表达，qRT-PCR和Wes-tern blot检测细胞中TRIM31mRNA和蛋白表达水平，Transwell实验观察细胞迁移与侵袭能力的变化，免疫荧光染色观察细胞中β-catenin核转位情况；Western blot检测细胞中β-catenin、MMP-2、MMP-9、Vimentin、E-cadherin及Snail1的表达水平。
结果：成功获得TRIM31基因沉默的T24和5637细胞株。
与对照组相比，siRNA-TRIM31组T24和5637细胞的迁移与侵袭能力减弱，β-catenin蛋白核转位水平降低，细胞中β-catenin、Snail1、MMP-2、MMP-9和Vimentin蛋白表达水平均降低（P<0.01），E-cadherin 蛋白表达水平升高（P<0.01）。
结论：沉默TRIM31基因表达可抑制膀胱癌细胞的迁移和侵袭，其机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路活化有关。
［关键词］膀胱癌；TRIM31；Wnt/β-catenin信号通路；迁移；侵袭Silencing TRIM31gene expression suppresses bladder cancer cells migration and invasion by regulating Wnt/β-catenin signaling pathwayXU Bing，LI Yong，LIU Ming，LIU Yong-Hui.Urology Surgery，the Third Affiliated Hospital of South China Univer⁃sity，Hengyang421900，China［Abstract］Objective：To observe the effect of silencing TRIM31gene expression on migration and invasion of bladder cancer cells and to explore its mechanism.Methods：Bladder cancer cell lines T24and5637were divided into control group，siRNA-NC group and siRNA-TRIM31group.Gene expression of TRIM31in bladder cancer cells was blocked by siRNA.mRNA and protein ex‑pression levels of TRIM31gene were detected by qRT-PCR and Western bolt.Abilities of cell migration and invasion were observed by Transwell method.Nuclear transposition ofβ-catenin protein was detected by immunofluorescence assay.Protein expression levels of β-catenin，Snail1，MMP-2，MMP-9，Vimentin and E-cadherin were evaluated by Western blot.Results：T24and5637cell lines with TRIM31gene silence were successfully pared with control group，T24and5637cells in siRNA-TRIM31group showed attenuated abilities of cell migration and invasion，decreased nuclear transposition level ofβ-catenin protein，decreased protein ex‑pression levels ofβ-catenin，Snail1，MMP-2，MMP-9and Vimentin（P<0.01），and increased protein expression level of E-cadherin （P<0.01）.Conclusion：TRIM31silencing can inhibit migration and invasion of bladder cancer cells，its mechanism may be related to the inhibition of Wnt/β-catenin signaling pathway.［Key words］Bladder cancer；TRIM31；Wnt/β-catenin signaling pathway；Migration；Invasion膀胱癌是一种泌尿系统肿瘤，位居全球男性最常见癌症的第7位，四分之三的病例发生于男性，但近年来，其在女性中的发病率和死亡率也呈明显上升趋势［1-2］。
黏蛋白-4在膀胱癌中的表达及作用机制刘远;劳辉恒;李宇同【期刊名称】《分子影像学杂志》【年(卷),期】2018(041)003【摘要】目的探讨黏蛋白-4(mucin-4)在膀胱癌中的表达及作用机制.方法选取广东省两家三甲医院2016年1月～2017年6月期间收集的膀胱癌标本115例,同时选取距离肿瘤边缘>2 cm的癌旁组织作为对照.SYBR green实时荧光定量PCR 法和Western blot检测mucin-4在膀胱癌、癌旁组织中的相对表达量,并分析mucin-4与临床相关参数的关系,同时观察mucin-4过对T24细胞(膀胱癌细胞系)增殖、凋亡的影响.结果膀胱癌组织mucin-4的相对表达水平高于正常膀胱组织,差异具有统计学意义(P<0.05).mucin-4的表达水平与膀胱癌的肿瘤大小、有无淋巴结转移以及TNM分期有关(P<0.05);肿瘤直径大于5 cm组mucin-4的表达水平高于肿瘤直径小于5 cm组;有淋巴结转移的膀胱癌组mucin-4的表达水平高于无淋巴结转移的膀胱癌组;Ⅲ+Ⅳ期膀胱癌组mucin-4的表达水平明显高于Ⅰ+Ⅱ期膀胱癌,差异具有统计学意义(P<0.05).mucin-4的表达水平与膀胱癌患者的年龄、性别无关(P>0.05).上调mucin-4的表达,可以诱导膀胱癌细胞(T24细胞系)的增殖,抑制凋亡;下调mucin-4的表达,可以诱导膀胱癌细胞(T24细胞系)的凋亡,抑制增殖.结论 mucin-4在膀胱癌的发生发展中起着重要作用,其表达水平对膀胱癌的严重程度及预后情况具有一定的参考价值.【总页数】4页(P354-357)【作者】刘远;劳辉恒;李宇同【作者单位】广东省开平市中心医院泌尿外科,广东开平 529300;广东省开平市中心医院泌尿外科,广东开平 529300;暨南大学附属第一医院泌尿外科,广东广州510507【正文语种】中文【相关文献】1.MCP－1与VEGF在膀胱癌组织中的表达及作用机制 [J], 卢炳新;孙二琳;王丽宁2.黏蛋白MUC1/Y在膀胱癌中的表达及其意义 [J], 罗刚;周四维;曹正国;鲁雄兵;孙凯;宋晓东;叶章群3.缺氧诱导因子-1α与上皮型钙黏蛋白在膀胱癌中的表达及相关性研究 [J], 王保军;张旭;马金;李宏召;郑涛;叶章群4.miR-429在膀胱癌中的表达及作用机制 [J], 吴斌;房杰群;温似春5.长链非编码RNA结肠癌相关转录物2(CCAT2)在膀胱癌中的表达及作用机制 [J], 刘明;陶思行;谭九峰;陈晓亮;晋学飞;王传芳;那万里因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
沉默Robo基因对人膀胱移形上皮癌细胞T24增殖的影响王晗;姚狮章;朱朝阳;程晓晖;田素民;李国营【摘要】[目的]研究Robo蛋白在人膀胱移形上皮癌细胞(T24)中的表达及沉默Robo基因对T24细胞增殖的影响.[方法]实验分为两组,对照组(不转染载体)和转染组(转染复合载体),每组20例.对照组体外培养T24细胞,用免疫组织化学、免疫荧光和蛋白质印迹检测是否有Robo蛋白的表达及其表达亚型;转染组利用RNA干扰技术,寻找表达基因的沉默位点,构建合理的表达载体,转染T24细胞,免疫荧光化学观察细胞转染结果,蛋白质印迹来检测该表达基因沉默后蛋白表达的变化,MTT检测该表达基因沉默后细胞存活率变化.[结果]①免疫组化和免疫荧光检测显示T24细胞中有Robo1和Robo4表达,且表达差异无统计学意义(P=0.363和P=0.241),而正常膀胱移行上皮细胞中无表达,蛋白质印迹证实了免疫组化结果(P=0.205).②沉默Robo基因后,T24细胞中Robo1和Robo4的表达受到抑制,尤其是Robo1的表达几乎受到全部抑制(免疫荧光P=0.002,蛋白印迹P=0.0001),MTT法检测显示Robo1干扰组细胞的存活率明显下降,与对照组及Robo4组相比差异有显著性(分别为P=0.012和P=0.023).[结论]T24细胞中存在Robo1和Robo4两种蛋白受体,沉默Robo基因后,Robo1的表达和T24细胞的存活率明显下降.【期刊名称】《中山大学学报（医学科学版）》【年(卷),期】2016(037)004【总页数】8页(P514-521)【关键词】人膀胱形上癌T24细胞;Robo蛋白;免疫荧光;免疫组化;蛋白质印迹;RNA干扰【作者】王晗;姚狮章;朱朝阳;程晓晖;田素民;李国营【作者单位】广东药科大学基础学院,广东广州510006;佛山市南海区第四人民医院泌尿外科,广东佛山528211;河南大学附属淮河医院泌尿外科,河南开封475000;广东药科大学基础学院,广东广州510006;广东药科大学基础学院,广东广州510006;广东药科大学基础学院,广东广州510006【正文语种】中文【中图分类】R737.14膀胱癌是泌尿外科常见的恶性肿瘤，病因不明。
免疫球蛋白G在膀胱癌细胞中的表达及其抗体诱导肿瘤细胞凋亡的研究李浩勇;梁培育;朱孝峰;郑克立;戴宇平【期刊名称】《中国病理生理杂志》【年(卷),期】2007(023)006【摘要】目的:研究免疫球蛋白G在膀胱癌细胞中的表达以及其抗体诱导肿瘤细胞凋亡的效应.方法:免疫组织化学法检测56例临床膀胱癌组织和11例正常膀胱黏膜中以及T24和BIU-87细胞中IgG蛋白表达;对体外培养的膀胱癌细胞系T24和BIU-87采用Western blotting、ELISA法和流式细胞术(FCM)检测IgG蛋白的表达,原位杂交法和RT-PCR检测IgG1 mRNA的表达,MTT法检测羊抗人IgG抗体对肿瘤细胞的生长抑制的影响,FCM检测羊抗人IgG抗体诱导肿瘤细胞凋亡效应.结果:免疫组化显示临床膀胱癌组织中IgG表达率为91.1%(51/56),正常膀胱移行上皮细胞IgG的表达为45.4%(5/11);T24和BIU-87细胞浆中IgG明显阳性表达.RT-PCR和原位杂交显示IgG mRNA在T24和BIU-87细胞中明显表达.Western blotting显示T24和BIU-87细胞中均有IgG表达.FCM则表明IgG 蛋白主要在细胞质内表达,细胞膜上则小部分表达.ELISA法未能在T24和BIU-87细胞培养液的上清液中检测到IgG.MTT显示羊IgG和羊抗人IgG抗体在25mg/L时对T24和BIU-87细胞的生长抑制率分别为(4.73±3.73)%、(24.98±3.81)% 和(5.36±1.53)%、(22.70±3.72)%,(P＜0.05).FCM 显示羊IgG和羊抗人IgG抗体在25 mg/L时对T24和BIU-87细胞的凋亡率分别为2.3%、20.7%和1.3%、15.3%.结论:膀胱癌细胞能够表达IgG,但其为非分泌型IgG.IgG的抗体体外对膀胱肿瘤细胞的生长具有一定抑制作用,且具有促进肿瘤细胞凋亡的效应,这可能对膀胱肿瘤的治疗提供一个新的靶点.【总页数】6页(P1068-1073)【作者】李浩勇;梁培育;朱孝峰;郑克立;戴宇平【作者单位】中山大学附属第一医院泌尿外科,广东,广州,510080;海南医学院附属医院泌尿外科,海南,海口,570102;中山大学附属肿瘤医院实验研究部,华南肿瘤学国家重点实验室,广东,广州,510060;中山大学附属第一医院泌尿外科,广东,广州,510080;中山大学附属第一医院泌尿外科,广东,广州,510080【正文语种】中文【中图分类】R363【相关文献】1.FasL、抗人DR5单克隆抗体诱导肿瘤细胞凋亡的研究 [J], 宋玉国;李文珠;李迎;陈彩霞;庄国洪2.CD147抗体诱导乳腺癌细胞中MMP-7蛋白的表达及意义 [J], 李欢;马立人3.阿司匹林诱导肿瘤细胞凋亡促进钙网蛋白表达的研究 [J], 王镀津;赵菁4.Bcl-2基因在人膀胱癌细胞中表达对CTL凋亡诱导作用的影响 [J], 时京;孔垂泽;刘贤奎;刘奔;张莹;孙志熙5.4-羟苯维胺酯抑制大鼠膀胱癌的COX-2的表达和诱导肿瘤细胞凋亡的实验研究[J], 沈群山;黄后宝;潘彩明;薛珺;蔡张愉;王啸;姜书传因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
《miR-204-5p调控作用促进膀胱癌细胞迁移、侵袭的分子机制研究》摘要：本研究旨在探讨miR-204-5p在膀胱癌细胞迁移和侵袭过程中的调控作用及其潜在的分子机制。
通过生物信息学分析、细胞实验及分子生物学技术，揭示了miR-204-5p对膀胱癌细胞迁移和侵袭的关键影响及其相关的信号通路。
本研究不仅有助于理解膀胱癌的进展机制，也为膀胱癌的治疗提供了新的思路和靶点。
一、引言膀胱癌是一种常见的泌尿系统恶性肿瘤，其发生和发展与多种基因和分子异常密切相关。
近年来，微小RNA（miRNA）在癌症发生发展中的作用逐渐受到关注。
miR-204-5p作为一种重要的miRNA，在多种癌症中表现出调控作用。
本研究旨在探讨miR-204-5p在膀胱癌细胞迁移和侵袭中的调控作用及其分子机制。
二、材料与方法1. 材料：选取膀胱癌细胞系及正常膀胱上皮细胞系。
实验所用试剂、抗体等均为高质量产品。
2. 方法：生物信息学分析、细胞培养、转染实验、实时荧光定量PCR（qRT-PCR）、Western blot、划痕实验、Transwell小室迁移和侵袭实验等。
三、实验结果1. miR-204-5p在膀胱癌细胞中的表达情况：通过qRT-PCR 实验，我们发现膀胱癌细胞中miR-204-5p的表达水平显著高于正常膀胱上皮细胞。
2. miR-204-5p对膀胱癌细胞迁移和侵袭的影响：通过转染实验，下调或过表达miR-204-5p后，我们发现膀胱癌细胞的迁移和侵袭能力受到显著影响。
具体来说，过表达miR-204-5p可促进膀胱癌细胞的迁移和侵袭，而下调miR-204-5p则抑制这一过程。
3. 分子机制研究：通过Western blot等实验，我们发现miR-204-5p主要通过调控基质金属蛋白酶（MMPs）家族的表达来影响膀胱癌细胞的迁移和侵袭。
具体而言，miR-204-5p可抑制MMPs的抑制因子表达，从而促进MMPs的活性，进而促进细胞的迁移和侵袭。
TRPV3在膀胱癌细胞中的表达及其对膀胱癌细胞增殖迁移能力的影响卢彦欣;岳续朋;蔡树春;张巨峰【摘要】目的探讨瞬时感受器电位香草酸受体3离子通道蛋白(TRPV3)在膀胱癌细胞中的mRNA表达水平,以及TR-PV3激动剂Thymol对膀胱癌细胞增殖和迁移能力的影响.方法采用实时荧光定量PCR检测TRPV3 mRNA在膀胱癌细胞系RT4,UM-UC-3.SW780,J82,TCC-SUP,T24和人膀胱上皮永生化细胞系SV-HUC-1中的表达;利用Thymol激活膀胱癌细胞TRPV3通道,并用WST-1和细胞划痕实验分别检测Thymol激活TRPV3后膀胱癌细胞的增殖和迁移能力变化.结果相较于正常人膀胱上皮细胞SV-HUC-1,各种膀胱癌细胞系的TRPV3 mRNA表达水平均明显下调(P＜0.0001).与不加激动剂的DMSO对照组比较,加入Thymol激活膀胱癌细胞TRPV3通道后,膀胱癌细胞的增殖和迁移能力明显降低(P＜0.01).结论TRPV3基因在膀胱癌细胞中表达明显降低,激活TRPV3通道后可明显减慢膀胱癌细胞增殖和迁移速度.【期刊名称】《遵义医学院学报》【年(卷),期】2014(037)005【总页数】5页(P508-511,516)【关键词】膀胱癌;TRPV3;细胞生长;迁移【作者】卢彦欣;岳续朋;蔡树春;张巨峰【作者单位】遵义医学院珠海校区,广东珠海519041;遵义医学院珠海校区,广东珠海519041;遵义医学院珠海校区,广东珠海519041;广东药学院生命科学与生物制药学院,广东广州510006【正文语种】中文【中图分类】R737.14膀胱癌为男性第4大肿瘤疾病，是我国泌尿生殖系统高发肿瘤之一，并且发病率呈逐年升高趋势[1-4]。
对膀胱癌发病机制以及疾病发生过程中体内各蛋白表达变化的研究有助于临床膀胱癌诊断，治疗和新药的研发[5]。
瞬时受体电位香草酸亚型(transient receptor potential vanilloid,TRPV)为非选择性阳离子通道，主要通透钙离子 [6-7]。
靶向敲低NEDD4对膀胱癌辐射耐受T24/R细胞增殖和凋亡的影响发布时间：2022-07-24T07:48:48.194Z 来源：《医师在线》2022年3月5期作者：王利霞杨传来[导读]王利霞杨传来*通讯作者（苏州大学附属第二医院泌尿外科；江苏苏州215004）摘要目的：研究靶向敲低NEDD4对人膀胱癌辐射耐受T24/R细胞增殖和凋亡的影响。
方法：利用脂质体（lipofectamine3000）转染技术将两组合成的NEDD4小干扰RNA转染至膀胱癌辐射耐受细胞T24/R，采用Real-time 荧光定量PCR技术检测转染效率，筛选出干扰效率最高的小干扰RNA（Small interfering RNA；siRNA）；CCK8和凋亡实验分别检测敲低NEDD4对辐射耐受细胞增殖和凋亡的影响。
结果：定量结果表明siRNA#2干扰效率较高，此外，敲低NEDD4明显抑制T24/R细胞的增殖并促进其凋亡。
结论：靶向敲低NEDD4抑制膀胱癌辐射耐受T24/R细胞增殖并促进其凋亡。
关键词：NEDD4；膀胱癌辐射耐受；细胞增殖；细胞凋亡前言膀胱癌（bladder cancer）作为全身十大常见肿瘤之一，是泌尿系统最常见的恶性肿瘤，其发病率居泌尿系统恶性肿瘤的首位，并且预后极差。
随着近年来肿瘤治疗手段的极大发展，虽然明显提高了膀胱癌患者的生存率，但其发病率和死亡率仍居高不下，并呈逐年上升趋势[1]。
膀胱癌严重威胁人类健康，手术切除目前是临床上治疗膀胱癌的标准方法[2]。
根治性膀胱切除术需要完全切除膀胱及其周围器官，虽然手术治疗可以提高患者生存率，但由于丧失泌尿功能和性功能，患者生活质量指数明显降低。
放射治疗是治疗膀胱癌的有效手段之一，是一种局部的、无创技术，可以保护膀胱和周围的器官，提高患者生活质量指数[3]。
多项基础研究发现膀胱癌会对放射治疗产生抵抗，需要较大放射剂量才能抑制或杀死肿瘤细胞。
辐射抵抗是导致膀胱癌局部复发的主要原因，严重影响放疗疗效。
牛蒡子苷元对人膀胱癌T24细胞增殖、侵袭转移的影响冯思嘉;吕晓红;杨树才;杨慧科;袁颖;马晶;张雅芳【期刊名称】《解剖学杂志》【年(卷),期】2012(035)006【摘要】目的:研究牛蒡子苷元在体外对人膀胱癌细胞系T24细胞增殖、侵袭转移能力的影响.方法:培养T24细胞,采用不同浓度牛蒡子苷元处理,通过MTT、Transwell及划痕法观察牛蒡子苷元在不同时间点对T24细胞增殖、粘附、侵袭、迁移能力的影响；免疫印迹检测基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白的表达.结果:随着药物浓度升高(0～100μmol/L)和作用时间的延长(12～48 h),牛蒡子苷元抑制细胞增殖能力增强.牛蒡子苷元(40～100μmol/L)能明显抑制T24细胞的粘附能力.同时,牛蒡子苷元能够降低T24细胞的侵袭和迁移能力.随着作用浓度的增加,T24细胞的MMP-9蛋白表达明显降低.结论:牛蒡子苷元具有抑制人膀胱癌T24细胞增殖、粘附、侵袭和迁移的作用,且呈剂量依赖性,其作用可能与MMP-9的表达降低有关.【总页数】5页(P729-732,791)【作者】冯思嘉;吕晓红;杨树才;杨慧科;袁颖;马晶;张雅芳【作者单位】哈尔滨医科大学解剖学教研室,哈尔滨150081;哈尔滨医科大学解剖学教研室,哈尔滨150081;哈尔滨医科大学解剖学教研室,哈尔滨150081;哈尔滨医科大学解剖学教研室,哈尔滨150081;哈尔滨医科大学解剖学教研室,哈尔滨150081;哈尔滨医科大学解剖学教研室,哈尔滨150081;哈尔滨医科大学解剖学教研室,哈尔滨150081【正文语种】中文【相关文献】1.ABCE1基因沉默对人膀胱癌 T24细胞增殖和迁移能力的影响 [J], 李强;王九江;罗水发;朱俊杰2.大蒜提取物二烯丙基化三硫对人膀胱癌T24细胞侵袭转移的影响 [J], 王云彬;谢立平;秦杰;郑祥毅;白宇;杨凯3.SOCS1基因沉默对人膀胱癌T24细胞增殖、侵袭及化疗敏感性的影响 [J], 闫骏;朱小军;斯钦布和;王国强;陈利刚;黄勇4.去甲氧基姜黄素对人膀胱癌T24细胞增殖及凋亡的影响研究 [J], 倪晓辰;陈砚凝;武新慧;张爱莉;赵志红5.茶多酚联合表柔比星对人膀胱癌T24细胞增殖和凋亡的影响及机制 [J], 杨帆;何卫阳;朱鑫;刘关羽;苟欣因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
【AbMole科研】泛素特异性蛋白酶4通过增加TGF-β信号传导诱导的上皮-间质转化促进肝癌的转移AbMole精研抑制剂十年，最新的科研动态不断与您分享。
本期与您分享的是：泛素特异性蛋白酶4通过增加TGF-β信号传导诱导的上皮-间质转化促进肝癌的转移。
侵袭和转移是晚期肝细胞癌（HCC）复发和死亡的主要原因。
揭示HCC转移的机制对于开发新的治疗方法和降低患者死亡率很重要。
泛素特异性蛋白酶4（USP4）通过去泛素化一些重要的致癌蛋白并影响其降解而参与肿瘤发生。
在本研究中，我们发现USP4在HCC肿瘤组织中显着上调，并且USP4的高表达与远处转移和患者生存不良有关。
使用基因干扰，我们证明了USP4敲低显着抑制体外HCC细胞迁移和侵袭，而USP4的过表达则相反。
在体内，我们还发现USP4敲低明显阻断了HCC细胞的转移。
从机理上讲，我们发现USP4直接与I型TGF-β受体（TGFR-1）相互作用并去泛素化以激活TGF-β信号通路，并随后在HCC 细胞中诱导上皮-间质转化（EMT）。
综上所述，我们的结果阐明了USP4在HCC中高表达并促进了肿瘤的侵袭和转移，其潜在机制是USP4直接与TGFR-1相互作用并去泛素化以增加TGF-β信号传导诱导的EMT。
这些结果可为肝癌的治疗提供新的靶点。
Cycloheximide（AbMole，M4879）用于环己酰亚胺（CHX）大通检测，以检查TGFR-1的半衰期。
Figure 6. USP4 directly interacted with and deubiquitinated TGFR-1 in HCC cell.将SK-Hep1-shRNA / USP4细胞或SK-Hep1-USP4细胞用蛋白质合成抑制剂CHX（100 µg / mL）处理指定的时间。
USP4是USP家族的成员，它抑制依赖于泛素蛋白酶体途径的靶蛋白的降解。
因此，研究评估了USP4表达对内源性TGFR-1蛋白稳定性的影响，环己酰亚胺（CHX）追踪分析表明，USP4敲低后，SK-Hep1细胞中TGFR-1蛋白的半衰期降低了鸣谢：Chan Qiu, et al. Aging (Albany NY). 2018 Oct 18;10(10):2783-2799.。
・基础论著・ 敲低卷曲螺旋结构域蛋白34表达对膀胱癌T24细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响巩艳青宁向辉李学松周利群郭应禄【摘要】 目的研究应用慢病毒介导的RNA干扰（RNA interference）技术敲低卷曲螺旋结构域蛋白34（CCDC34）的表达，分析其对膀胱癌T24细胞生物学行为的影响。
方法选取膀胱癌T24细胞分别同时感染阴性对照siRNA（阴性对照组）和CCDC34-siRNA（CCDC34干扰组）慢病毒载体，荧光显微镜下观察慢病毒感染效率；实时定量PCR和Western blot验证CCDC34的干扰效率；BrdU掺入实验、流式细胞术、划痕实验和Transwell小室侵袭实验检测干扰CCDC34表达对T24细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭能力的影响。
结果与阴性对照组相比，感染CCDC34-siRNA的T24细胞中CCDC34 mRNA及蛋白表达水平均显著下降。
BrdU实验显示CCDC34干扰组的细胞增殖能力较阴性对照组受到显著抑制（P＜0.05），且细胞凋亡显著增加[（8.77±0.38）% vs.（3.91±0.08）%，P＜0.01]。
划痕实验显示，慢病毒感染24 h后CCDC34干扰组的细胞迁移率显著低于阴性对照组（0.40±0.04 vs. 0.79±0.01，P＜0.01）。
Transwell侵袭实验同时显示CCDC34干扰组膀胱癌T24细胞的侵袭率也显著低于阴性对照组（1.44±0.03 vs. 1.63±0.05，P＜0.05）。
结论慢病毒介导的RNA干扰技术可下调CCDC34蛋白在T24细胞中的表达，显著抑制了膀胱癌T24细胞的增殖、迁移和侵袭能力，并促进了肿瘤细胞的凋亡。
CCDC34有望成为膀胱癌生物标记物和治疗的潜在新靶点。
【关键词】 膀胱肿瘤；卷曲螺旋结构域蛋白34；细胞增殖；迁移；侵袭Impact of CCDC34 down-regulation on the proliferation, migration and invasion of bladder cancercell Gong Yanqing, Ning Xianghui, Li Xuesong, Zhou Liqun, Guo Yinglu. National Urological CancerCenter; Institute of Urology, Peking University; Department of Urology, Peking University First Hospital,Beijing 100034, ChinaCorresponding author: Gong Yanqing, Email: yqgong@【Abstract】 Objective To evaluate the impact of CCDC34 down-regulation on the proliferation,apoptosis, migration and invasion of human bladder cancer cell lines. Methods T24 cells were infectedwith lentivirus-mediated CCDC34 negative control siRNA (negative control group) and CCDC34 siRNA(CCDC34-siRNA group) respectively. Fluorescence microscopy was used to observe the infectionefficiency. qPCR and Western blot was used to confirm the interfering efficiency of CCDC34. The cellproliferation, apoptosis, migration and invasion ability were analyzed by BrdU incorporation assay, flowcytometry, wound healing assay and transwell experiments. Results The lentivirus infection efficiencywas above 85% for both CCDC34-siRNA group and negative control group. The mRNA level and proteinexpression of CCDC34 in the CCDC34-siRNA group were greatly reduced. Compared with negativecontrol group, cell proliferation was significantly inhibited in the CCDC34-siRNA group (P<0.05); thepercentage of T24 cells in apoptosis phase was also significantly increased in the CCDC34-siRNA group[(8.77±0.38)% vs. (3.91±0.08)%, P<0.01]. The migration rate of CCDC34-siRNA group was significantlylower than the negative control group (0.40±0.04 vs. 0.79±0.01, P<0.01). The cell invasion rate ofDOI:10.3877/cma.j.issn.1674-0785.2017.03.021基金项目：北京市自然科学基金面上项目（7172219）作者单位：100034 北京大学第一医院泌尿外科北京大学泌尿外科研究所国家泌尿男生殖系肿瘤研究中心通信作者：巩艳青，Email: yqgong@CCDC34-siRNA group was also significantly lower than the negative control group (1.44±0.03 vs.1.63±0.05, P<0.05). Conclusions Down-regulation of CCDC34 in bladder cancer cell line T24 via lentivirus-mediated siRNA can inhibit the cell proliferation, migration and invasion; and induce cell apoptosis. CCDC34 may serve as a biomarker or even a therapeutic target for bladder cancer.【Key words】 Urinary bladder neoplasms; CCDC34; Cell proliferation; Migration; Invasion膀胱癌又称膀胱尿路上皮癌，是泌尿系统最常见的恶性肿瘤之一。
膀胱癌的发生及进展是一个多因素涉及、多基因参与、多步骤形成以及多途径变化的过程，异常基因型的基础在外在高危因素的作用下逐渐积累，最终出现恶性表型。
欧洲地区每年新发病例约180 500例，死亡人数为38 200例[1]；2017年美国预计膀胱癌的新发病例和死亡人数分别约为79 030例和16 870例[2]。
随着我国的工业化进程，其发病率和复发率呈逐年上升的趋势，严重威胁人类健康。
局部膀胱癌虽然可以通过手术切除，但其复发和进展率较高；放疗或化疗治疗晚期膀胱癌的效果亦不能令人满意；同时由于膀胱癌具有高复发性，也是世界范围内人均治疗成本较高的恶性肿瘤，有待于进一步研究膀胱癌发生及进展的分子机制和寻找新的有效的治疗靶点。
卷曲螺旋结构域蛋白具有许多重要的生物学功能，如调控的基因表达，细胞分裂，膜融合，药物控释等[3]；其表达的异常，与肿瘤细胞侵袭、迁移和转移表性的获得有着直接的关系[4]。
前期工作中，本研究组利用基因表达谱芯片技术筛选膀胱癌差异显著基因，发现卷曲螺旋结构域蛋白（coiled-coil domain containing protein，CCDC）34在膀胱癌组织中表达上调；同时，在膀胱癌5637细胞敲低CCDC34表达后可以显著抑制肿瘤细胞的增殖和侵袭[5]。
为了进一步证实CCDC34对膀胱癌细胞生物学行为的影响，本研究同样应用慢病毒介导的RNA 干扰技术敲低了膀胱癌T24细胞系中CCDC34的表达，观察其对膀胱癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭能力的影响，为探讨CCDC34在膀胱癌发病机制中的功能作用和作为膀胱癌临床治疗靶点的可能性提供前期实验数据。
材料与方法一、材料人膀胱癌细胞株T24由北京大学泌尿外科研究所保存。
人CCDC34基因shRNA表达结构克隆至pGCSIL-GFP载体（CCDC34 shRNA序列：5'-TGAA GATGCCCATGATTCA-3'）及其后续慢病毒包装由上海吉凯基因化学技术有限公司完成。
阴性对照慢病毒载体（序列：5'-TTCTCCGAACGTGTCACGT-3'）由上海吉凯基因化学技术有限公司提供，与任何已知的人类基因没有同源性。
CCDC34兔抗人多克隆抗体、GAPDH鼠抗人单克隆抗体和辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔IgG抗体均购于北京中原领先科技有限公司。
Trizol、cDNA合成试剂盒和SYBR Green 荧光定量PCR试剂盒购自北京天根公司。
BCA蛋白定量试剂盒和ECL化学发光试剂盒购自美国Thermo公司。
BrdU试剂盒购自德国Roche公司。
Annexin V-APC凋亡检测试剂盒购自美国ebioscience 公司。
细胞侵袭试剂盒购自美国Corning公司。
二、方法1. 细胞培养：人膀胱癌细胞株T24用含有10% FBS、100 U/ml青霉素和100 mg/L链霉素的RPMI1640培养液培养于37 ℃、5% CO2饱和湿度的培养箱内；当细胞生长融合成单层时，用0.25%胰蛋白酶消化并传代培养。
2. 实验分组及慢病毒感染：T24细胞分别感染含有CCDC34 siRNA（CCDC34干扰组）和阴性对照siRNA（阴性对照组）的慢病毒；感染72 h后进行相关功能实验。
