土壤中分解尿素的细菌的分离和计数ppt课件

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土壤中分解尿素的细菌的分离与计数(共20张PPT)

耐高温菌种提取耐高温酶。
启示：根据它对生存条件的要求，到相应的环境中去寻找
（二）实验室中目的菌株筛选
原理：人为提供有利于目的菌株生长的条件（包
括营养、温度、PH等），同时抑制或阻止
回答：其他微生物生长。
1、在该配方中，为微生物生长提供碳源和氮源的是什么物质？葡只有萄能糖够、以尿尿素素
作为氮源的微生
C半固体培养基
D天然培养基
放在显微镜下进行计数。根据在显微镜下观察到的微生物数目来计算出单位体积内的微生物总数。
优点：设备简单、能观察微生物的形态特征。缺点：不能区分死菌和活菌；
难以计数微小的细菌。一般用于纯培养悬浮液中各种单细胞菌体的计数。
2．间接计数法：最常用稀释平板计数法。
原理： 1个活菌→1个菌落
统计原则 ①选 30~300 个菌落的平板统计 ②每个稀释度取3个平板取其平均值
关注菌落的形态、大小、边缘、突起、颜色、质地等等，都是区分细菌的重要手段。
4、鉴定：筛选后必鉴定鉴别培养基：不影响微生物的生存
酚红培养基：鉴定分解尿素的细菌。原理：脲酶催化尿素分解成氨→培养基碱性增强→ 酚红变红→脲酶阳性
五、实验过程注意
1）取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用前都要灭菌。
2）应在火焰旁称取土壤 10 g。将称好的土样倒入盛有90mL无菌水的锥形瓶中，塞好棉塞。
3）在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁进行。
4）实验时要对培养皿作好标记。注明培养基类型、培养时间、稀释度、培养物等。 5）为了提高效率，在操作时更加有条不紊，应当
事先规划时间。
六、结果分析与评价
注意：菌落计数偏差
1、统计的菌落数比活菌的实际数目低。这是因为当两个或多个细胞在一起时，每平克板样上品中观的察菌到株的数只是一个

土壤中分解尿素的细菌的分离和计数_课件

实验组
尿素唯一氮源牛肉膏蛋白胨
对照组
生长多种微生物
选择培养基：在微生物学中，将允许特定种类的微
生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。
㈡.统计菌落数目：
1、显微镜直接计数：血球计数板，在显微镜下计算一定容积里样品中微生物的数量。
2. 稀释涂布平板法（活菌计数法）（1）原理：
培养不同微生物往往需要不同培养温度。细菌：30～37℃培养1～2d 放线菌：25～28℃培养5～7d 霉菌：25～28℃的温度下培养3～4d。在菌落计数时，每隔24h统计一次菌落数目。选取菌落数目稳定时的记录作为结果，以防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目。
微生物的培养与观察
三.结果分析与评价
测定土壤中细菌的总量和测定土壤中能分解尿素的细菌的数量，选用的稀释范围相同吗？
/v_show/id_XMjY3NDM3 MTg0.html
/v_show/id_XMTc3Mjg3OTU2.html
NaH2PO4 MgSO4`7H2O 葡萄糖尿素
1.4g
2.1g 0.2g 10.0g 1.0g
琼脂
15.0g
①从物理性质看属于哪类？从功能上属于哪类培养基？
固体培养基
选择培养基氮源：尿素
②在此培养基中哪些作为碳源、氮源？碳源：葡萄糖、尿素
4、怎样证明此培养基具有选择性呢？
培养基类型
结果
只生长分解尿素细菌
◆分离不同的微生物采用不同的稀释度
测定土壤中细菌的数量，一般选用 104 105 106 测定放线菌的数量，一般选用103 104 105 测定真菌的数量，一般选用102 103 104
为什么分离不同的微生物要采用不同的稀释度？

土壤中分解尿素的细菌的分离与计数ppt课件

培养基的种类情况
培养基
稀释倍数
103
104
105
106
平板1
242
210
202
102
选
择
平板2
250
240
86
98
培
养
平板3
310
250
198
120
基
平均数
162
106
牛肉膏蛋白胨平板4
培养基
（对照）
菌落计数方法
例不同浓度的平均菌落数
次 101
102
103
1 1365 164
20
2 2760 296
例：46（103）和296 （102）均在30～300之间，
则：46×103÷296×102≈1.6，
应取二者的平均值。
46×103÷296×102
(
0.1(ml)
) ÷2=3.775×105
3. 若所有稀释度的平均菌落数均大于300个，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见表中例4)。
培养基配方三
1.4g 0.2g
Na2HPO4 葡萄糖
1.0g
琼脂
2.1g 10.0g 15.0g
（一）筛选菌株——尿素细菌的分离
1.原理：根据某种微生物的特殊营养要求或其对物理、化学因素（营养、温度、pH等）的抗性而设计的。
2.功能：使混合菌群中的目的菌株变为优势菌，从而提高该菌的筛选效果。
3.方法：利用选择培养基来实现。
105
106
107
101
10g土壤
9ml
无菌水
9ml 无菌水
104
105
106

土壤中分解尿素的细菌的分离与计数人教版选修PPT课件

课题 2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
关于菌种的筛选和计数 1．菌株的筛选 (1)自然界中目的菌株的筛选 ①根据它对___生__存__环__境___的要求到相应的环境中去寻找。 ②从土壤中分离出目的菌株。 (2)实验室目的菌株的筛选原理：人为提供有利于___目__的___菌株生长的条件(包括营养、温度、pH 值等)，同时抑制或阻止其他微生物生长。
测定真菌：选用稀释 102、103、104倍
细菌：30～37 ℃；1～2 d 培养与观察放线菌：25～28 ℃；5～7 d
真菌：25～28 ℃；3～4 d
计数
每克样品中的菌株数＝(C/V)×M， C——某一稀释液浓度下平板上生长的平均菌落数；
V——涂布平板所用稀释液体积(ml)；M——稀释倍数
5
土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 1．关于选择培养基 (1)概念：在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称作选择培养基。 (2)举例：以纤维素作唯一碳源的选择性培养基，可以分离到分解纤维素的微生物；缺氮培养基可以分离到固氮微生物等。
答案：A
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分离能分解尿素的细菌
【例 2】选择土壤中分解尿素的微生物，所用氮源为( )
A．硝酸
B．氨
C．尿素
D．蛋白胨
【名师点拨】：只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，缺
乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生长发育
繁殖，从而受到抑制，所以，以尿素为唯一氮源的培养基能够
选择出分解尿素的微生物。
1
2．统计菌落数目的方法 (1)____直__接______计数法 ①过程：利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在_显__微__镜___ 下计算一定容积里样品中微生物的数量。 ②缺点：不能区分死菌和活菌。 (2)间接计数法(活菌计数法) 根据微生物在固体培养基上所形成的一个菌落是由一个 ___单__细__胞_____繁殖而成，按比例稀释样品后，将稀释液接种培养，统计___菌__落___的数目。

土壤中分解尿素的细菌分离和计数ppt课件

A 土壤取样，应选取肥沃、湿润的土壤 B 先铲去表层土3-8cm左右，再取样 C 取样用的小铁铲和信封在使用前不用灭菌 D 应在火焰旁称取土壤
2、下列关于“土壤中分解尿素的细菌的分离”实验步骤排列
正确的是 ①土壤取样
C
②称取10g土壤加入盛有90ml无菌水的锥形瓶中
③吸取0.1ml进行平板涂布
④依次稀释至101、102、103、104、105、106、107 稀释度
不正确的是（D）
A 用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨，高温、高压灭菌后道平板 B 取104、105、106 倍土壤稀释液和无菌水各0.1ml涂布不同平板 C 将实验组和对照组平板倒置，37℃恒温培养24h-48h D 确定对照组无菌后，选择菌落数在300以上的平板进行计数。
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利用选择培养基进行尿素分解菌的分离过程中，从对应稀释倍数为106的培养基中，A、B两同学分别得到以下两种统计结果。
稀释倍数：测细菌数：一般用104、105、106稀释液
测放线菌：一般用103、104、105稀释液测真菌数：一般用102、103、104稀释液
思考：为什么分离不同的微生物要用不同的稀释度？
土壤中各类微生物的数量不同
如果是第一次做这个实验，稀释倍数的范围
可以放宽103-107.
20
1 、关于土壤取样的叙述，错误的是（ C ）
是
。
(3)示意图A和B中,
表示的是用稀释涂布平
板法接种培养后得到的结果。
(4)该小组将得到的菌株接种到液体培养基中并混匀，一部
分进行静置培养，另一部分进行振荡培养。结果发现:振
荡培养的细菌比静置培养的细菌生长速度快。分析其原因
是：振荡培养能提高培养液中
的含量，同时可

2.2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数(共63张PPT)

跟踪练习 1. 分析下列培养基配方，回答有关问题。 MgSO4 KH2PO · 青霉素琼脂蒸馏水 FeSO4 NaNO3 成分葡萄糖 4 7H2O 0.1万 1g 0.01 g 3g 0.5 g 15 g 1L 含量 30 g 单位 (1)根据物理性质，该培养基属于________ 固体培养基；根据用途划选择培养基。根据培养基成分，所培养微生物的同化分，则属于________ 作用的类型是________ 异养。 (2)不论何种培养基，在各种成分溶化后，分装前，要进行的是 ________________ 。调节pH
2．结果分析与评价 (1)在细菌分解尿素的化学反应中，细菌合成的脲酶将尿素分解成了氨。氨会使培养基的碱性增强，pH 升高。因此，我们可以通过检测培养基 pH 的变化来判断该化学反应是否发生。 (2)在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，培养某种细菌后，如果该细菌能够分解尿素，则 p严格厌氧型：短时间的有氧也会造成生长停滞或死亡，如某些甲烷杆菌兼性厌氧型：无氧时进行无氧呼吸，有氧时进行有氧呼吸，如酵母菌一般厌氧型：有、无氧都进行无氧呼吸，如某些链球菌
典例精析 (多选)依据不同的划分标准，培养基的类型不同，作用也不同。下表中划分培养基的依据和培养基的类型及作用，正确的匹配是 ( ) 为了筛选土壤中能够降解某除草剂的细菌(目的菌)。有人做了如下图实验：
3．对分解尿素细菌的鉴定 (1)原理脲酶 CO2＋2NH3 CO(NH2)2＋H2O――→ 可通过检测pH的变化来判断该化学反应是否发生。 (2)方法在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，培养某种细菌，若指示剂变红，则pH升高，说明该种细菌能分解尿素。
许多细菌如变形杆菌、沙门氏菌和葡萄球菌，可将尿中的尿素分解成氨，其代谢类型大都属于异养厌氧型；大肠杆菌可将大便中的尿素分解成氨，其代谢类型属于异养、兼性厌氧型。

土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 PPT课件

25mL全营养LB固体培养基： 0.25g蛋白胨，0.12g酵母提取物，0.25g氯化钠和0.25g琼脂糖，水25mL，灭菌。
方法步骤
❖ 土壤取样：从富含有机物、潮湿、PH≈7的土壤中取样。铲去表层土，在距地表约3～8cm的土壤层取样。
❖ 制备培养基：准备牛肉膏蛋白胨培养基和选择培养基。牛肉膏蛋白胨培养基作为对照，用来判断选择培养基是否起到了选择作用。
❖ 为什么分离不同的微生物要采用不同的稀释度？测定土壤中细菌的总量和测定土壤中能分解尿素的细菌的数量，选用的稀释范围相同吗？
附答案
❖ 统计某一稀释度下平板上的菌落数，最好能统计3个平板，计算出平板菌落数的平均值，然后按课本旁栏的公式进行计算。
❖ 这是因为土壤中各类微生物的数量(单位：株 /kg)是不同的，例如在干旱土壤中的上层样本中：好氧及兼性厌氧细菌数约为2185万，放线菌数约为477万，霉菌数约为23.1万。因此，为获得不同类型的微生物，就需要按不同的稀释度进行分离，同时还应当有针对性地提供选择培养的条件。
土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
实验重点:
❖ 筛选菌株 ❖ 统计菌落数目
目录
❖ 实验原理 ❖ 目的要求 ❖ 材料用具 ❖ 试剂配制 ❖ 方法步骤 ❖ 结果分析与讨论 ❖ 思考题 ❖ 附答案
一、
原理
分离
使用专一培养基（含有尿素）可从土壤中分离出分解尿素的细菌。
统计菌落数目
稀释涂布法常用来统计样品中活菌的数目。
设置对照以LB全营养培养基做为以尿素为唯一氮源的选择性培养基的对照，来证明专一培养基的选择作用。
筛选菌株
❖ 实验室中微生物的筛选应用的原理
➢ 人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、PH值等)，同时抑制或阻止其他微生物生长。

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同的稀释度进行分离，同时还应当有针对性地提供选择培养的条件。
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㈣.取样涂布
◆实验时要对培养皿作好标记。注明培养基类型、培养时间、稀释度、培养物等。
◆如果得到了2个或2个以上菌落数目在30——300的平板，
则说明稀释操作比较成功，并能够进行菌落的计数，如
果同一稀释倍数的三个重复的菌落数相差较大，表明试
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注意事项
①为了保证结果准确，一般选择菌落数在30— —300的平板上进行计数。
②为使结果接近真实值可将同一稀释度加到三个或三个以上的平皿中，经涂布，培养计算出菌落平均数。
③统计的菌落往往比活菌的实际数目低。
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计数法
直接计数法、
活菌平板计数法、
比浊法（原理是在一定范围内，菌的悬
一.研究思路
㈠.筛选菌株㈡.统计菌落数目㈢.设置对照
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启示?
（一）筛选菌株
水生耐热细菌Taq 耐高温的Taq DNA聚合酶
选择培养基
在微生物学中，将允
许点此播放教学视频特定种类的微生物
4
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思考：
KH2PO4 NaH2PO4 MgSO4`7H2O
葡萄糖
尿素
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方案一：由其他同学用与A同学相同土样进行实验
结果预测：如果结果与A同学一致，则证明A无误；如果结果不同，则证明A同学存在操作失误或培养基的配制有问题。
方案二：将A同学配制的培养基在不加土样的情况下进行培养，作为空白对照，以证明培养基是否受到污染。
小结：通过这个事例可以看出，实验结果要有说服力，对照的设置是必不可少的。
目的：保证获得菌落数在30～300之间、适于计
数的平板
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思考：为什么分离不同的微生物要采用不同的稀释度？测定土壤中细菌的总量和测定土壤中能分解尿素的细菌的数量，选用的稀释范围相同吗？
原因：土壤中各类微生物的数量（单位：株
/kg）是不同的。
结论：为获得不同类型的微生物，就需要按不
课题2 土壤中分解尿素的细菌的
分离与计数
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课题背景
1、尿素的利用:
尿素是一种重要的农业氮肥。尿素不能直接被农作物吸收。土壤中的细菌将尿素分解成氨之后才能被植物利用。
2、细菌利用尿素的原因:
CO（NH2）2+H2O 脲酶 CO2+2NH3
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3、课题目的 ①从土壤中分离出能够分解尿素的细菌 ②统计每克土壤样品中究竟含有多少这样的细菌
2、是否获得了某一稀释度下，菌落数目在
30——300的平板。在这稀释度下，是否至少
有两个平板的菌落数相近？
2、显微镜直接计数：
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思考书本22页问题：
说明设置重复组的重要性。
第一位同学只涂布了一个平板，没有设置重复组，因此结
果不具有说服力。第二位同学考虑到设置重复组的问题，
涂布了3个平板，但是，其中1个平板的计数结果与另2个
相差太远，说明在操作过程中可能出现了错误，因此，不
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二.实验的具体操作
㈠.土壤取样㈡.制备培养基：制备以尿素为唯一氮源的选择培养基。
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[三]样品的稀释
◆应在火焰旁称取土壤10g。 ◆在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁进行
◆分离不同的微生物采用不同的稀释度
原因：不同微生物在土壤中含量不同
琼脂
1.4g 2.1g 0.2g 10.0g 1.0g 15.0g
①从物理性质看此培养基属于哪类？
固体培养基
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②在此培养基中哪些作为碳源、氮源？碳源：葡萄糖、尿素氮源：尿素
3、培养基选择分解尿素的微生物的原理？
培养基的氮源为尿素，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，以尿素作为氮源。缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生长发育繁殖，而受到抑制，所以用此培养基就能够选择出分解尿素的微生物。
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实验设计步骤：
1、土壤取样 2、制备培养基： 3、样品的稀释 4、取样涂布 5、微生物的培养与观察
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微生物的培养与观察
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三.结果分析与评价
对照的培养皿在培养中无菌落生长，说明培养基没有被杂菌污染。牛肉膏蛋白胨培养基的菌落数目 1、结合对照明，显分培大析养于培基选养具择物有培中养选是择基否作，有用说杂。明菌选择污染以及选择培养基是否筛选出一些菌落。
验不精确，需要重新实验。点此播放教学视频 16
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㈤.微生物的培养与观察
培养不同微生物往往需要不同培养温度。细菌：30～37℃培养1～2d 放线菌：25～28℃培养5～7d 霉菌：25～28℃的温度下培养3～4d。
在菌落计数时，每隔24h统计一次菌落数目。选取菌落数目稳定时的记录作为结果，以防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目。
液中细胞浓度与混浊度成正比，即与光密度成正比，菌越多，光密度越大。因此可以借助于分光光度计，在一定波长下，测定菌悬液的光密度，以光密度表示菌量。）
膜过滤法（当样品中菌数很低时，可以
将一定体积的湖水海水或饮用水等样品通过膜过滤器。然后将滤膜干燥、染色，并经处理使膜透明，再在显微镜下计算膜上 ( 或一定面积中 ) 的细菌数）
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㈡.统计菌落数目：
1.间接计数法（活菌计数法） ⑴原理：在稀释度足够高时，微生物在固体培养基上所形成的一个菌落是由一个单细胞繁殖而成的，即一个菌落代表原先的一个单细胞。
每克样品中的菌落数＝(C÷V)×M
其中，C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(ml)，M代表稀释倍数。
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㈢.设置对照：
设置对照的主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。
实例：在做分解尿素的细菌的筛选与统计菌落数目的实验时，A同学从对应的106倍稀释的培养基中筛选出大约150个菌落，但是其他同学在同样的稀释度下只选择出大约50个菌落。分析其原因。
原因：⑴土样不同，⑵培养基污染或操作失误(或者是混入了其他的含氮物质)