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附录蜜蜂检疫规程实验室检测方法1.美洲蜜蜂幼虫腐臭病从蜂群中抽取部分封盖子脾,挑取其中的死幼虫5 10条,置研钵中,加2 3ml无菌水研碎后制成悬浮液㊁涂片,经革兰氏染色,在1000 1500倍的显微镜下进行检查,发现大量革兰氏阳性的游离状的杆菌芽孢,培养出的单菌落经PCR扩增后测序鉴定,判定为美洲幼虫腐臭病㊂实验室PCR鉴定方法:挑取培养的单菌落至20μL0．2M的NaOH,消化8min;取上述2μL消化液至98μL无菌水,制备PCR模板;扩增16S rRNA,PCR 扩增体系为:㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀DNA模板㊀㊀㊀4μL㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀27F2．5μL㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀1492R2．5μL㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀聚合酶Mix25μL㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀ddH2O16μL扩增条件为:94ħ,10min;30个循环(94ħ,30s;Tm-5ħ,30s; 72ħ,45s;);72ħ,10min㊂66引物序列:27F:AGAGTTTGATCCTGGCTCAG1492R:TACGGCTACCTTGTTACGACTT电泳:1%琼脂糖凝胶电泳,出现1．5kbp条带,则送测序公司测序,与幼虫芽孢杆菌的序列相似性大于97%,即可判断为幼虫芽孢杆菌㊂2.欧洲蜜蜂幼虫腐臭病从蜂群中抽取部分未封盖2 4日龄幼虫脾,挑取其中的死幼虫5 10条,置研钵中,加2 3ml无菌水研碎后制成悬浮液㊁涂片,经革兰氏染色后,在1000 1500倍的显微镜下进行检查,发现0．5ˑ1．0μm呈革兰氏阳性的单个㊁短链或呈簇状排列的披针形球菌,同时有许多杆菌和芽孢杆菌等多种微生物,培养出的单菌落经PCR扩增后测序鉴定,判定为欧洲幼虫腐臭病㊂实验室PCR鉴定方法同美洲幼虫腐臭病㊂3.蜜蜂孢子虫病在蜂箱门口与蜂箱上梁处避光收集8日龄以下的成年工蜂60只,取出30只(另30只备用)消化系统,置研钵中,加2 3ml无菌水研碎后制成悬浮液,置干净载玻片上,在400 600倍的显微镜下进行检查,若发现卵圆近米粒形,边缘灰暗,具有蓝色折光的孢子,判定为蜜蜂孢子虫病㊂76。
蜜蜂检疫技术在我们平时开展的动物检疫中，主要进行家畜家禽的检疫，蜜蜂的检疫国家没有一定的检疫规范，致使放蜂兄弟的经济利益受损 , 同时也降低了对各种农作物、果树孕蕊结果也起到很好的授粉作用。
现将蜜蜂检疫技术在临床上的应用予以推广。
1 蜜蜂的疫病根据《中华人民共和国农业部公告》第 96 号规定 , 蜜蜂二类病有 :美洲蚴虫腐臭病、欧洲蚴虫腐臭病、蜜蜂孢子虫病、蜜蜂螨病、大蜂螨病、白垩病。
2 蜜蜂检疫环节2.1 到达卸车检疫每年4月底5月初，蜂农由南向北来我区放蜂 , 卸车后我们立即到场(货场) 检疫。
首先查验有无放蜂许可证、运输检疫证和消毒证 ,并对所有蜂群进行全面检疫。
目的是及时发现在装车地和运输途中蜜蜂有无被染疫 ,便以就地控制 ,防止扩散 ,保证蜂群、蜜源不被污染。
2.2 放养期间监督观察蜂农选择好周围蜜源丰富的地方驻扎后 ,蜜蜂开始正常采集工作。
由于蜜蜂误采有毒、有害的寄生虫的花粉、花密 , 可导致疾病发生。
因此 , 检疫人员定期跟踪监督检查 , 有情况及时通报 , 发现病情立即指导救治 , 确保蜂势强劲和蜂蜜的质量。
2.3转运发送检疫在装车前对所有的蜜蜂开箱检疫 ,蜂箱外消毒 ,合格后装运。
主要是检出病蜂、控制病蜂外流、带入其他目的地。
3 蜂检疫方法3.1 向蜂农了解蜜蜂疫情在有关证件齐全时 , 为了掌握蜜蜂全面情况 , 向蜂农了解转来前的采集地、当地的气候、有无疫情、路途时间等 , 蜜蜂有无病史、采蜜量、防治用过何种药物、喂过何种蜂粮。
3.2 全群检查(1)根据蜜蜂生物学特性和生活习性，做到稳、准、细、快接触蜂群时，站在蜂箱侧面，视力集中。
对可疑病蜂仔细检查，找出典型症状进行辨别分析，量后确诊2)检查病蜂：病蜂一般被健康驱赶到果门口或者附近地面上，所以检疫时把准巢门附近的蜂多查细看，病蜂一般出现抖、跳跃，行动失调等现象，也有的胸、部绒毛脱躯体颜色异常，翅的形状不完整或者发育不完全。
(3)检查死蜂：死蜂大都集中在蜂箱周围，应仔细观察死蜂的日始、数量、姿态、颜色，的完整性及是否伸出等。
养蜜蜂场的蜜蜂疫病预防与控制随着人们对于蜜蜂产品的需求不断增加，养蜜蜂场也日益兴盛。
然而，在养蜜蜂过程中，疫病的预防与控制成为了重要且必要的环节。
本文将详细探讨养蜜蜂场的蜜蜂疫病预防与控制，在不涉及政治的前提下，提供有益的指导意见。
一、提高蜜蜂场的卫生条件1.保持蜜蜂场的干燥- 在养蜜蜂场中，保持蜜蜂巢箱的干燥非常重要。
湿度增加会成为细菌和真菌生长的温床，容易导致疫病爆发。
因此，蜜蜂巢箱的设计应考虑透气性，并注意巢箱内的通风和排水。
- 定期清理巢箱底板上的废物，避免积水和污物。
2.定期清理道具和设备- 道具和设备是疫病传播的常见途径之一。
因此，养蜜蜂场应定期清理和消毒所有道具和设备，特别是与蜜蜂直接接触的工具。
- 蜜蜂巢箱和其他设备应使用清洁剂彻底清洁，并用消毒液进行消毒，确保没有留下感染病原体的残余。
3.管理蜜蜂场周围的植被- 养蜜蜂场周围的植被也可能成为蜜蜂疫病的源头。
控制蜜蜂场周围的杂草和野花生长，避免蜜蜂通过采集受感染植物的花蜜而受到感染。
二、饲养健康的蜜蜂种群1.选择适合当地环境的蜜蜂品种- 不同地区的气候和环境条件对蜜蜂的适应性有所不同。
在选择种蜂时，应考虑当地的气候、植被和疫病情况，并选择适合当地环境的蜜蜂品种。
2.定期进行健康检查- 定期对蜜蜂种群进行健康检查，可以及早发现疫病的迹象，并采取措施进行预防和控制。
- 检查蜜蜂巢箱是否存在异常，如蜂蛹变黑或出现异常的蜜蜂蛹。
- 定期观察蜜蜂的行为，如食欲、采蜜能力和群体之间的相互作用，异常情况应引起警惕。
3.合理饲养和管理- 合理饲养和管理蜜蜂，是预防疫病的重要一环。
注意蜜蜂的营养摄入和合理饲喂蜜源，提高蜜蜂的免疫力。
- 饲喂蜂糖浆时，应确保糖浆的质量和卫生，防止污染引发疫病。
三、采取有效的疫病预防措施1.疫苗接种- 在某些情况下，针对特定疫病的疫苗接种可以有效预防疫病的爆发。
- 可以向动物卫生机构咨询当地的疫苗接种计划和相关政策。
2.隔离新引进的蜜蜂- 引进新的种蜂或蜜蜂群体时，应将其隔离一段时间以观察其健康状况。
进出境蜜蜂现场检疫监管规程1 范围本标准规定了进出境蜜蜂现场检疫监管的内容和措施。
本标准适用于进出境蜜蜂（包括整群蜜蜂、蜂王）的现场检疫和监督管理。
2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。
凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。
凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T18088 出入境动物检疫采样GB/T19168 蜜蜂病虫害综合防治规范SN/T2123 出入境动物检疫实验样品采集、运输和保存规范NY5027 无公害食品畜禽饮用水水质国家质检总局令第25号进境动植物检疫审批管理办法国家质检总局令第122号进境动物隔离检疫场使用监督管理办法3 术语和定义下列术语和定义适用于本标准。
3.1蜜蜂honeybee蜜蜂总科，蜜蜂科中能筑造带六菱柱柱形巢房的巢脾并在其中育子、贮存蜂蜜和蜂花粉的一个属，是呈群体性生活的社会性昆虫，包括很多种、亚种、小种及亚小种，能适应不同环境。
3.2蜂群honeybee colony蜜蜂的社会性群体，是蜜蜂自然生存和蜂场饲养管理的基本单位。
3.3全面检查overall inspection对蜂巢内巢脾及蜂箱四壁、巢框、箱底等逐一检查，全面了解蜂群内的蜂王、幼虫发育、蜜粉储存和病虫害等情况。
3.4巢脾comb由蜜蜂筑造，双面布满巢房的脾状腊质结构，是蜂巢的组成部分。
3.5核群nucleus colony指一般由1只蜂王、不多于5张巢脾和约1000只工蜂组成的小蜂群。
4 进境检疫4.1 风险分析首次从某个国家或地区进境蜜蜂，或首次引进某个蜜蜂蜂种时，要组织专家进行风险分析，评估应涵盖蜜蜂疾病、拟引进蜜蜂对本地蜂群的影响以及可能因花粉传入植物病害和转基因等风险因子，根据风险评估结果采取相应的检疫管理措施。
输出国家或地区发生蜜蜂疫情时，应组织专家重新进行风险评估并调整检疫监管措施。
4.2 隔离场使用批准在蜜蜂进境前，货主或其代理人应准备好隔离场，隔离场建设应符合附录A《进出境蜜蜂隔离检疫场动物卫生条件》要求，隔离场使用批准按照《进境动物隔离检疫场使用监督管理办法》及相关配套文件的要求办理。
蜜蜂检疫是指国家有关部门为防止蜜蜂某些危险性疾病传入或传出而采取的一系列防御措施。
通常分对内检疫和对外检疫两种。
对内检疫主要包括三个方面。
第一，根据各省、市、自治区所规定的检疫对象，禁止其传入或传出。
第二，对在局部地区已发生的某种危险性疾病划出疫区和保护区，控制其传播蔓延（“疫区”是指某种传染病正在流行的地区；“保护区”是指未发生某种传染病的一定区域）。
第三，一旦发现新的危险性疾病，立即封锁疫区，控制病害。
对内检疫对象，由各省、市、自治区根据本地区蜂群已发现和尚未发现的某些危险性疾病的种类确定。
对外检疫主要包括两个方面的工作。
第一，根据本国所规定的检疫对象，禁止其从其他国家传入。
第二，根据其他国家的要求和规定，禁止本国的某些检疫对象传出。
根据国际上蜜蜂疾病发生的种类和我国尚未发现的疾病种类，检疫部门规定美洲幼虫腐臭病、孢子虫病、武氏蜂盾螨（气管壁虱）、蜂虱及白垩病作为对外检疫对象。
国家法定的行政机构按法定程序行使检疫权，养蜂者应主动申请报告，并配合检疫部门做好工作，主管部门按照有关规定做出相应处理。
1986年原农牧渔业部颁发了《养蜂管理暂行规定》，规定中第七条对蜜蜂检疫做了明确规定。
规定指出：“对出省放蜂的蜂群，在出省前要检疫。
蜜蜂检疫由县级以上主管部门或由其委托单位负责进行，并将检疫情况如实填写在养蜂证的…检疫记事‟栏内，检疫有效期为3个月。
凡在省内放养的蜂群一般不检疫。
检出患有检疫对象疾病的蜂群，就地治愈后方可出境。
检疫对象为欧洲幼虫腐臭病、美洲幼虫腐臭病、中蜂囊状幼虫病、麻痹病、蜂螨等。
实行现场检疫办法，可按蜂场的实际蜂群数量核收检疫费。
”防止传染病传播的紧急措施隔离与封锁隔离病群和可疑感染的蜂群是控制传染病传播的重要措施之一。
为此，在传染病流行时，应首先查明蜂群的感染程度，然后将蜂群分为健康群、病群和疑似病群。
病群应集中隔离于蜂场2000米之外，进行消毒和治疗。
养蜂员要减少在蜂场与隔离区两地来回活动的次数，隔离区内的蜂具与杂物，未经彻底消毒处理，不可带回蜂场；未发现任何症状，但与病群曾有过密切接触的蜂群，属于疑似病群。
附件9蜜蜂产地检疫规程1.适用范围本规程规定了蜜蜂产地检疫的检疫对象㊁检疫合格标准㊁检疫程序㊁检疫结果处理和检疫记录㊂本规程适用于中华人民共和国境内蜜蜂的产地检疫㊂2.术语和定义下列术语和定义适用于本规程㊂2．1蜂群蜜蜂的社会性群体,是蜜蜂自然生存和蜂场饲养管理的基本单位,由蜂王㊁雄蜂和工蜂组成㊂2．2蜜粉源地能提供花蜜㊁花粉,进行养蜂生产的蜜㊁粉源植物生长地㊂2．3巢房由蜜蜂修造的,供蜜蜂栖息㊁育虫㊁贮存食物的六角形蜡质结构,是构成巢脾的基本单位㊂2．4巢脾是蜂巢的组成部分,由蜜蜂筑造㊁双面布满巢房的蜡质结构㊂2．5子脾存在蜜蜂卵㊁幼虫或蛹的巢脾㊂2．6花子现象蜜蜂子脾因蜂病造成卵㊁幼虫㊁蛹㊁空房间杂乱排列的现象㊂063.检疫对象美洲蜜蜂幼虫腐臭病㊁欧洲蜜蜂幼虫腐臭病㊁蜜蜂孢子虫病㊁白垩病㊁瓦螨病㊁亮热厉螨病㊂4.检疫合格标准4．1蜂场所在地区域内未发生本规程规定的动物疫病㊂4．2申报材料符合本规程规定㊂4．3蜂群临床检查健康,蜂螨平均寄生密度(螨数/检查蜂数)在0．1以下㊂4．4需要进行实验室疫病检测的,检测结果合格㊂5.检疫程序5．1申报检疫蜂群自原驻地和自最远蜜粉源地启运前,货主应当提前3天向所在地动物卫生监督机构申报检疫,并提供以下材料: 5．1．1检疫申报单㊂5．1．2自最远蜜粉源地启运前,还需提供原始检疫证明㊂鼓励使用动物检疫管理信息化系统申报检疫㊂5．2申报受理动物卫生监督机构在接到检疫申报后,应当及时对申报材料进行审查,根据申报材料审查情况和当地动物疫病发生状况,决定是否予以受理㊂受理的,应当及时指派官方兽医或协检人员到现场或指定地点核实信息,开展临床健康检查;不予受理的,应当说16明理由㊂5．3查验材料5．3．1查验申报主体身份信息是否与检疫申报单相符㊂5．3．2自最远蜜粉源地启运的,查验原始检疫证明㊂5．4临床检查5．4．1检查方法5．4．1．1蜂群检查5．4．1．1．1箱外观察了解蜂群来源㊁转场㊁蜜源㊁发病及治疗等情况,观察全场蜂群活动状况㊁核对蜂群箱数,观察蜂箱门口和附近场地蜜蜂飞行及活动情况,有无爬蜂㊁死蜂和蜂翅残缺不全的幼蜂㊂5．4．1．1．2抽样检查按照至少5%(不少于5箱)的比例抽查蜂箱,依次打开蜂箱盖㊁副盖,检查巢脾㊁巢框㊁箱壁和箱底的蜜蜂有无异常行为;查看箱底有无死蜂;子脾上卵虫排列是否整齐,色泽是否正常㊂5．4．1．2个体检查对成年蜂和子脾进行检查㊂5．4．1．2．1成年蜂主要检查蜂箱门口和附近场地上蜜蜂的状况㊂5．4．1．2．2子脾每群蜂取封盖或未封盖子脾2张以上,主要检查子脾上的未封盖幼虫或封盖幼虫和蛹的状况㊂5．4．2检查内容265．4．2．1子脾上出现幼虫日龄极不一致,出现 花子现象 ,在封盖子脾上,巢房封盖出现发黑,湿润下陷,并有针头大的穿孔,腐烂后的幼虫(9 11日龄)尸体呈黑褐色并具有粘性,挑取时能拉出2 5cm的丝;或干枯成脆质鳞片状的干尸,有难闻的腥臭味,怀疑感染美洲蜜蜂幼虫腐臭病㊂5．4．2．2在未封盖子脾上,出现虫卵相间的 花子现象 ,死亡的小幼虫(2 4日龄)呈淡黄色或黑褐色,无粘性,且发现大量空巢房,有酸臭味,怀疑感染欧洲蜜蜂幼虫腐臭病㊂5．4．2．3在巢框上或巢门口发现黄棕色粪迹,蜂箱附近场地上出现腹部膨大㊁腹泻㊁失去飞翔能力的蜜蜂,怀疑感染蜜蜂孢子虫病㊂5．4．2．4在箱底或巢门口发现大量体表布满菌丝或孢子囊,质地紧密的白垩状幼虫或近黑色的幼虫尸体时,判定为白垩病㊂5．4．2．5在巢门口或附近场地上出现蜂翅残缺不全或无翅的幼蜂爬行,以及死蛹被工蜂拖出等情况时,怀疑感染瓦螨病或亮热厉螨病㊂从2个以上子脾中随机挑取50个封盖房,逐个检查封盖幼虫或蜂蛹体表有无蜂螨寄生㊂其中一个蜂群的狄斯瓦螨平均寄生密度达到0．1以上,判定为瓦螨病;其中一个蜂群的梅氏热厉螨平均寄生密度达到0．1以上,判定为亮热厉螨病㊂5．5实验室疫病检测对怀疑患有本规程规定疫病及临床检查发现其他异常情况36的,应当进行实验室检测(‘蜜蜂检疫规程实验室检测方法“见附录)㊂6.检疫结果处理6．1检疫合格的,出具动物检疫证明,有效期为6个月,且从原驻地至最远蜜粉源地或从最远蜜粉源地至原驻地单程有效,同时在备注栏中标明运输路线㊂官方兽医应当及时将动物检疫证明有关信息上传至动物检疫管理信息化系统㊂6．2检疫不合格的,出具检疫处理通知单,并按照下列规定处理㊂6．2．1发现申报主体信息与检疫申报单不符的,要求货主重新申报检疫㊂6．2．2发现患有本规程规定动物疫病的,向农业农村部门或者动物疫病预防控制机构报告,货主应当按照有关规定处理,临床症状消失7天后,无新发病例方可再次申报检疫㊂6．2．3发现患有本规程规定检疫对象以外动物疫病的,向农业农村部门或者动物疫病预防控制机构报告,按规定采取相应防疫措施㊂6．2．4发现不明原因死亡或怀疑为重大动物疫情的,应当按照‘中华人民共和国动物防疫法“㊁‘重大动物疫情应急条例“和‘农业农村部关于做好动物疫情报告等有关工作的通知“(农医发 2018 22号)的有关规定处理㊂466．2．5发现病死动物的,按照‘病死及病害动物无害化处理技术规范“等规定处理㊂6．2．6发现货主提供虚假申报材料等不符合规定等涉嫌违反有关法律法规情形的,应当及时向农业农村部门报告,由农业农村部门按照规定处理㊂7.检疫记录7．1官方兽医应当及时填写检疫工作记录,详细登记货主姓名㊁地址㊁申报检疫时间㊁检疫时间㊁检疫地点㊁检疫动物种类㊁数量及用途㊁检疫处理㊁检疫证明编号等㊂7．2检疫申报单和检疫工作记录保存期限不得少于12个月㊂7．3电子记录与纸质记录具有同等效力㊂附录:蜜蜂检疫规程实验室检测方法56。
蜜蜂检疫是指国家有关部门为防止蜜蜂某些危险性疾病传入或传出而采取的一系列防御措施。
通常分对内检疫和对外检疫两种。
对内检疫主要包括三个方面。
第一，根据各省、市、自治区所规定的检疫对象，禁止其传入或传出。
第二，对在局部地区已发生的某种危险性疾病划出疫区和保护区，控制其传播蔓延（“疫区”是指某种传染病正在流行的地区；“保护区”是指未发生某种传染病的一定区域）。
第三，一旦发现新的危险性疾病，立即封锁疫区，控制病害。
对内检疫对象，由各省、市、自治区根据本地区蜂群已发现和尚未发现的某些危险性疾病的种类确定。
对外检疫主要包括两个方面的工作。
第一，根据本国所规定的检疫对象，禁止其从其他国家传入。
第二，根据其他国家的要求和规定，禁止本国的某些检疫对象传出。
根据国际上蜜蜂疾病发生的种类和我国尚未发现的疾病种类，检疫部门规定美洲幼虫腐臭病、孢子虫病、武氏蜂盾螨（气管壁虱）、蜂虱及白垩病作为对外检疫对象。
国家法定的行政机构按法定程序行使检疫权，养蜂者应主动申请报告，并配合检疫部门做好工作，主管部门按照有关规定做出相应处理。
1986年原农牧渔业部颁发了《养蜂管理暂行规定》，规定中第七条对蜜蜂检疫做了明确规定。
规定指出：“对出省放蜂的蜂群，在出省前要检疫。
蜜蜂检疫由县级以上主管部门或由其委托单位负责进行，并将检疫情况如实填写在养蜂证的‘检疫记事’栏内，检疫有效期为3个月。
凡在省内放养的蜂群一般不检疫。
检出患有检疫对象疾病的蜂群，就地治愈后方可出境。
检疫对象为欧洲幼虫腐臭病、美洲幼虫腐臭病、中蜂囊状幼虫病、麻痹病、蜂螨等。
实行现场检疫办法，可按蜂场的实际蜂群数量核收检疫费。
”防止传染病传播的紧急措施隔离与封锁隔离病群和可疑感染的蜂群是控制传染病传播的重要措施之一。
为此，在传染病流行时，应首先查明蜂群的感染程度，然后将蜂群分为健康群、病群和疑似病群。
病群应集中隔离于蜂场2000米之外，进行消毒和治疗。
养蜂员要减少在蜂场与隔离区两地来回活动的次数，隔离区内的蜂具与杂物，未经彻底消毒处理，不可带回蜂场；未发现任何症状，但与病群曾有过密切接触的蜂群，属于疑似病群。
