磁珠法核酸提取概述 ppt课件
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核酸提取磁珠法原理
核酸提取磁珠法是一种利用磁珠上的亲和基团与核酸靶分子特异性结合的原理来纯化和提取核酸的方法。
该方法基于磁珠具有磁性的特性,使其能够通过磁力吸附和分离。
核酸提取磁珠法的原理如下:
1. 表面修饰:磁珠表面通常会修饰上与核酸分子相互吸附的功能性基团,如亲和基团、融合蛋白或短链引物。
这些亲和基团具有特异性和高亲和力,可以与目标核酸的特定序列或结构相结合。
2. 样品处理:将待提取的核酸样品加入到磁珠悬浮液中,样品中的核酸分子会与磁珠表面的亲和基团发生特异性结合。
同时,通过调节条件(如pH、盐浓度和温度),可以优化核酸与磁
珠之间的结合效果。
3. 磁性分离:使用外部磁场或磁力装置,将磁珠定位于管壁或底部,使其与其余液相分离。
磁珠的磁性能够快速地在磁力作用下聚集,使得磁珠能够被方便地沉淀在容器的底部,而上清液相中残余的杂质则会被分离。
4. 洗脱和回收:通过改变溶液条件,如改变pH或盐浓度,可
以解离核酸与磁珠的结合。
这样,纯化的核酸分子可以从磁珠上洗脱下来,从而得到目标核酸的纯度较高的样品。
核酸提取磁珠法具有高度的选择性和特异性,能够有效去除样
品中的杂质,并获取较高纯度的核酸样本。
此外,磁珠法还具有操作简单、高通量和自动化的优点,因此在分子生物学、遗传学和临床诊断等领域广泛应用。
磁珠法提取核酸的原理磁珠法(Magnetic bead method)是一种常用的核酸提取方法,其原理是利用磁珠的磁性在外加磁场的作用下迅速沉降和聚集,实现目标核酸在复杂样品中的高效分离和纯化。
核酸是一种带有负电荷的大分子,其在磁场中的行为受到库伦力的影响,故而磁性细胞和磁珠质粒对核酸的吸附选择性较差。
为了提高核酸的选择性捕获,经常将磁珠表面修饰上特异性的亲合分子,如抗体、寡核苷酸或亲核基团(如硅胶),以与目标核酸特异配对并进行捕获。
根据核酸提取的目的,可选择修饰与RNA或DNA特异结合的磁珠,例如与多聚T的磁珠用于RNA的富集,而与多聚A的磁珠则用于mRNA的纯化。
第一步:样品处理。
根据实验的需要,将样品采集后,加入适量的裂解缓冲液,破坏细胞结构,使核酸裸露于裂解液中。
通常,核酸裂解需要使用蛋白酶和离心来去除细胞蛋白和细胞碎片,使裂解液中只包含核酸和其他溶性物质。
第二步:磁珠结合。
加入相应的磁珠悬浮液到样品中,使磁珠与目标核酸特异性结合。
根据核酸的类型和目的,选择不同的磁珠表面修饰,以实现特异性的核酸结合。
在特定的pH、离子浓度和温度下,磁珠上的修饰物结合到核酸上,形成稳定的结合。
第三步:磁珠分离。
将含有磁珠的样品置于磁场中,通过磁场的作用,磁珠在磁力的驱动下沉降到管底。
随后,用试管架等工具将液相去除,并保持磁珠在磁场中。
第四步:洗涤。
多次加入洗涤缓冲液,使非特异性结合的物质从磁珠上洗脱。
洗涤缓冲液中一般含有高盐浓度或洗涤剂,以去除与磁珠非特异性结合的蛋白、杂质等。
第五步:洗涤液去除。
将洗涤液去除,此时仍然保持磁珠在磁场中。
第六步:核酸洗脱。
加入洗脱液解离磁珠与核酸的结合,使核酸从磁珠上洗脱下来。
洗脱液的化学成分一般可以改变溶液的PH值或离子浓度,从而破坏核酸与磁珠的结合。
第七步:纯化和浓缩。
通过离心等方式,获得纯化后的核酸溶液,并将其浓缩到较小的体积。
总的来说,磁珠法提取核酸的原理是利用磁珠的磁性以及磁珠表面修饰物与目标核酸的特异性结合,通过磁场的作用实现核酸的分离和纯化。
磁珠法提取DNA试剂盒磁珠法提取DNA试剂盒,它是生物科学和纳米材料科学二者合一的高新技术产品,是我国DNA提取技术和纯化技术的一次大的突破,它彻底的解决了我国DNA的提取与纯化长期依赖进口的局面,其价格只有进口产品的1/3。
中文名磁珠法提取DNA试剂盒属性高新技术产品学科生物科学和纳米材料科学二者合一贡献一次大的突破价格进口产品的1/3技术现状两个问题1背景2DNA提取技术现状3发展历程4适用范围5优势背景众所周知,DNA提取技术是分子生物学研究的基础技术。
提取DNA的纯度及结构的实验,是进行基因工程各项研究所必须的条件,DNA提取技术是DNA检验的第一步骤,也是最关键的步骤。
能否成功地进行DNA检验,完全取决于能否从生物检材中获得纯量的DNA。
DNA提取技术的优劣,将直接关系下游实验的安全与成败。
DNA提取技术现状就我国的DNA提取技术现状来讲,主要存在以下两个问题:1,技术发展滞后。
现在采用的DNA提取技术仍然停留chelex—100法。
有机提取法等常规方法上,存在着提取DNA不纯、耗时、效率低,不能定量提取和DNA提取后扩增成功率低等诸多缺陷。
2,缺少自主的知识产权。
美国、德国、挪威、芬兰等国家的生物公司,这些年来相继开发的新的DNA提取试剂盒,成功的解决了DNA提取纯化和定量提取等很多的难题,尤其是磁珠法可以实现自动化提取的技术更加的诱人。
但由于这些试剂盒基于专利技术,价格昂贵,不可能在国内推广使用。
应用于建立DNA数据库所需大量的生物样本的提取,更是可望不可及的事情。
发展历程2005年7月25日,磁珠法提取DNA试剂盒在公安部第三期法医物证检验技术推广班上受到参会百余名专家学者的一致认可。
2005年11月30日,磁珠法提取DNA试剂盒通过公安部刑事技术产品质量监督检验中心检验。
2005年8月12日,磁珠法提取DNA试剂盒在教育部、初高中生物实验课经验交流会议上受到来自生物实验课知道老师的一致认可和好评。