依托咪酯乳剂对老年大鼠海马神经元凋亡及突触素表达的影响(新)

【关键词】依托咪酯；海马；脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺１３末端标记法；突触素；天冬氨酸特异性半胱
氨酸蛋白酶
Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｅｔｏｍｉｄａｔｅ ｅｍｕｌｓｉｏｎ
ｏｕ
ｎｅｕｒｏｎａｌ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ａｎｄ ｓｙｎａｐｔｏｐｈｙｓｉｎ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ａｇｅｄ ｒａｔ Ｍｐｐｏｃａｍｐ吣屁凡ｇ Ｓｈｕｙｕｎ，
３
ｒａｔ
ｇｒｏｕｐｓ（Ｐ＞Ｏ．０５）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎｓ
ｈｉｐｐｏｃａｍｐｕｓ．
Ｅｔｏｍｉｄａｔｅ（２０ ｍｓ／ｋｓ）ｄｏｅｓ
ａｆｆｅｃｔ ｔｈｅ ｎｅｕｒｏｎａｌ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ａｎｄ ｓｙｎａｐｔｏｐｈｙｓｉｎ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ａｇｅｄ
【Ｋｅｙ
ｗｏｒｄｓ】
Ｅｔｏｍｉｄａｔｅ；Ｈｉｐｐｏｃａｍｐｕａ；Ｔｅｒｍｉｎａｌ
ｔｈｅ ４ｔｈ ｄａｙ，ａｌｌ ｏｆ ｔｈｅ ａｎｉｍａｌｓ ｗｅｒｅ ｋｉｌｌｅｄ ａｎｄ ｔｈｅ ｂｒａｉｎｓ
ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ
ｗｅｒｅ
ｖｏｌｕｍｅ ＮＳ ｄｅｐｅｎｄｉｎｇ ｇｒｏｕｐ ｄｉｖｉｓｉｏｎ
ｄａｙ ｆｏｒ ３ ｄ．Ｏｎ
ａｐｏｐｔｏｓｉｓ
ｉｍｍｅｄｉａｔｅｌｙ ｒｅｍｏｖｅｄ ｆｏｒ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｎｕｍｂｅｒｓ ｏｆ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｃｅｌｌｓ
各组海马ＣＡｌ区神经元均见突触素表达，与Ｎ 组、Ｌ组比较，Ｅ组海马含突触素的神经元个数无明 显减少，差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５，表２）。
表１ 依托眯酯乳剂对大鼠海马神经元的影响（；虹）
注：Ｎ组：生理盐水组；Ｅ组：依托咪酯组；Ｌ组：脂肪乳组；ＡＩ：凋 亡指数
ＸＱ，Ｌｉ ｙ膏Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ａ
ＬＣｌ Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ ａｕｔｈｏｒ：Ｙａｎｇ
ｎｅｓｔｈｅｓｉｏｌｏｇｙ，Ｆｏｓｈａｎ Ｍｕｎｉｃｉｐａｌ Ｈｏｓｐｉｔａｌ
ｏｆ
Ｔｒａｄｉｔｉｏｎｄ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｆｏｓｈａｎ ５２８０００，Ｃｈｉｎａ（Ｃｈｅｎ
Ｃｈｅｎｇｘｉａｎｇ，Ｅｍａｉｌ：ｙｃｘｉａｎｇ＠ｆｓｙｙｙ．ｃｏｍ
Ｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｅｔｏｍｉｄａｔｅ ｅｍｕｌｓｉｏｎ
ｏｎ
【Ａｂｓｔｒａｃｔ】Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ
ｉｎ ｌ
ｎｅｕｒｏｎａｌ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ａｎｄ ｓｙｎａｐｔｏｐｈｙｓｉｎ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ
ａｇｅｄ ｒａｔ
ｈｉｐｐｏｃａｍｐｕｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ
Ｆｏｒｔｙ－ｆｉｖｅ ｍａｌｅ ａｎｄ ｆｅｍａｌｅ ＳＤ ｒａｔｓ ａｇｅｄ １ ８ ｍｏｎｔｈｓ ｗｅｒｅ ｒａｎｄｏｍｌｙ ｄｉｖｉｄｅｄ ｉｎｔｏ ３ ｇｒｏｕｐｓ ｆｎ２
都有可能导致神经元损伤，最终导致认知功能的损
细胞）来反映各组海马ＣＡｌ区神经元凋亡状况。 １．４突触素免疫组化检测 海马标本制作及石蜡切片同上。滴加一抗，一 抗分别为兔抗大鼠的突触素受体（美国Ｓａｎｔａ
Ｃｒｕｚ
害｜『，其机制可能与诱发炎性细胞因子的释放使脑 部神经元的凋亡增强有关１÷依托咪酯比。作为一种 非巴比妥类静脉短效催眠药，麻醉诱导时循环波动
１．５
高龄患者尤其适用。本实验从分子生物学水平上研 究了腹腔注射单剂量依托咪酯对老年大鼠海马神
经元的影响，为临床提供客观依据： ｌ资料与方法 ¨实验方法 本研究已｜＝｝ｉ医院伦理委员会讨论并获得通过＝｝
ｃａｓｐａｓｅ－３蛋白电泳
在冰板上断头处死，取出完整海马组织，迅速 转移至冷柜中冷藏备用（一８０℃）。①裂解；②配制 １２％聚丙烯酰胺凝胶；③上样；④电泳；⑤转膜； ⑥封闭后，洗膜及ｃａｓｐａａｓｅ－３ Ｐ１７一抗孵育（兔抗人 单克隆抗体，美国Ｓｉｇｍａ公司）一抗稀释浓度为１：
１．３
较，Ｅ组凋亡指数无明显增加、差异无统计学意义
（Ｐ＞０．０５，表１）。 ２．１．２海马ＣＡｌ区神经元ｃａｓｐａｓｅ－３表达
ＴＵＮＥＬ法检测海马神经元凋亡 滴加ＴＵＮＥＬ一抗（兔抗大鼠、美围Ｐｒｏｍｅｇａ公
司产品，ｌ：２００），在３７℃水育箱中孵育２０
ｍｉｎ，
ＰＢＳ冲洗３次，滴加二抗，二抗分别为生物素标记的
围匾壁醛堂皇复菱苤圭！Ｑ！§笙２旦筮≥！鲞箜！塑！坐』△！！！虫堕！！坐：』！！Ｙ ２Ｑ！§：ｙ！！：≥！：盟！：１
６１３
论著・
依托咪酯乳剂对老年大鼠海马神经元凋亡及突触素
表达的影响
冯舒韵杨承祥赵伟成 陈立成郑雪琴李云
５２８０００，佛山市第一人民医院麻醉科（冯舒韵、杨承祥、赵伟成、郑雪琴、李云）；５２８０００，佛山市中医院麻醉科
（陈立成） 通信作者：杨承祥，Ｅｍａｉ：ｙｃｘｉａｎｇ＠ｆｓｙｙｙ．ＣＯＢ
ＤＯＩ：１０．３７６０／ｃｍａ．ｊ．ｉｓｓｎ．１６７３－４３７８．２０１６．０７．００８
【摘要】
目的观察腹腔注射依托咪酯乳剂对老年大鼠海马神经元突触素表达的影响。
方法选择１８月龄的ｓＤ大
鼠４５只，用完全随机分组法分为３组（每组１５只）：生理盐水组（Ｎ组）、依托咪酯组（Ｅ组）、脂肪乳组（Ｌ组）。实验第ｌ一３天，Ｅ 组腹腔注射依托咪酯（乳剂）２０ ｍｇ／ｋｇ，Ｌ组腹腔注射２０％脂肪乳２０ ｍｓ／ｋｓ，Ｎ组腹腔注射同等体积的生理盐水，每天１次，连续
ｄｅｏｘｙｎｖｕｃｌｅｏｔｉｄｙｌ
ｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ
ｄＵＴＰ
ｎｉｃｋ
ｅｎｄ
ｌａｂｅｌｉｎｇ；
ｓｙｎａｐｔｏｐｈｙｓｉｎ；
Ｃｙｓｔｅｉｎｙｌ ａｓｐａｒｔａｔｅ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ
万方数据
６１４
幽隧盎醛堂』簋菱苤查！！！！芏！』！笙！！鲞箜２塑！坐』垒！！！！！昼！型！！且！Ｙ！！！！！ｙ！！：≥！：塑！：！
２４～４８
２．１依托咪酯乳剂对大鼠海马神经元凋亡的影响
２．１．１各组大鼠的ＴＵＮＥＬ结果
各组海马ＣＡｌ区均见神经元凋亡；与Ｎ组、Ｌ 组比较，Ｅ组海马神经元凋亡细胞个数无明显增
加，差异无统计学意义（Ｐ＞Ｏ．０５）；与Ｎ组、Ｌ组比
ｈ：标本经系列乙醇脱水、二甲苯透明、石蜡
包埋，采用Ｆｉｎｅｓｓｅ ３２５型石蜡切片机（Ｓｈａｎｄｏｎ公 司）将海马组织制成３～４¨ｍ的石蜡切片。
与Ｎ组、Ｌ组比较，Ｅ组海马神经元活化ｃａｓｐａｓｅ－ ３表达无明显增加，差异无统计学意义（尸如．０５，图１）。
万方数据
崮匪壁醛堂皇复蒸盈查！Ｑ！§生！旦笠！！鲞箜！塑！也』△！型ｂ旦！！坐：』！垃！Ｑ！§：ｙ！！：３１：盟！：１
６１５
２．２依托咪酯乳剂对大鼠海马神经元突触素表达
的影响
到充分消除，而且有利于监测敏感神经细胞凋亡的 情况。本实验发现，注射依托咪酯２０ ｍｇ／ｋｇ后，不 增加实验大鼠海马神经元凋亡细胞产生，不增加活 化ｃａｓｐａｓｅ．３的表达量，提示依托咪酯２０ ｍ以ｇ不 增加老年大鼠海马神经元凋亡发生，机制可能与依 托咪酯对乙酰胆碱及谷氨酸影响较小，不增加炎性 反应有关。 突触素∞１是一种突触小泡外侧膜上的特异性蛋 白，属于钙离子结合蛋白，在海马的神经毡区中呈 颗粒状或点状均匀分布，由于其部位及功能的特异
近年来，社会老龄化水平愈来愈高，高龄患者
羊抗兔血清（美国Ｒ＆Ｄ公司产品，ｌ：５００），封片。 细胞核中含有棕黄色颗粒者为ＴＵＮＥＬ阳性细胞。
就医愈来愈多。而高龄患者全身麻醉手术后的认知 功能改变也受到广泛关注？认知功能受损的神经系
统病理生理基础在于微观结构上的改变，而神经细 胞凋亡及神经递质的变化尤为重要。突触是神经信
Ｙａｎｇ Ｃｈｅｎｇｘｉａｎｇ，Ｚｈａｏ Ｗｅｉｃｈｅｎｇ，Ｃｈｅｎ Ｌｉｃｈｅｎｇ，Ｚｈｅｎｇ Ｘｕｅｑｉｎ，Ｌｉ Ｙｕｎ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ
ｏｆＡｎｅｓｔｈｅｓｉｏｌｏｇｙ，Ｆｏｓｈａｎ
Ｍｕｎｉｃｉｐａｌ Ｆｉｒｓｔ Ｐｅｏｐｌｅ
７５
Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｆｏｓｈａｎ ５２８０００，Ｃｈｉｎａ（Ｆｅｎｇ ＳＹ，Ｙａｎｇ ＣＸ，Ｚｈａｏ ＷＣ，Ｚｈｅｎｇ
１
ｓｔ
５）：ＮＳ ｇｒｏｕｐ（Ｎ ｇｒｏｕｐ），Ｅｔｏｍｉｄａｔｅ ｇｒｏｕｐ（Ｅ ｇｒｏｕｐ），Ｌｉｐｉｄ ｇｒｏｕｐ（Ｌ ｇｒｏｕｐ）．Ｏｎ ｔｈｅ
ｓａｍｅ
ｄａｙ
ｔｏ
３ｒｄ ｄａｙ，ａｎｉｍａｌ ｒｅｃｅｉｖｅｄ ｉｎｔｒａｐｅｒｉｔｏｎｅａｌ
ｏｎｃｅ ａ
（ＩＰ）ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｅｉｔｈｅｒ ｅｔｏｍｉｄａｔｅ ２０ ｍｇ／ｋｇ，ｏｒ ｌｉｐｉｄ ２０ ｍｇ／ｋｇ，ｏｒ
注射２０％脂肪乳２０
Ｅｘｃｅｌ软件制图，所有数据均采用均数±标准差（元±ｓ） 表示。组间比较采用单因素方差分析，两两比较采
用ｔ检验，Ｐ＜０．０５为差异有统计学意义。 ２结果
ｍ矶ｇ，Ｎ组腹腔注射同等体积
的生理盐水．每天１次，连续３ ｃｌ：实验第４天，处死 大鼠，取右侧脑海马组织，同定，石蜡切片。 １．２海马标本制作 大鼠断头处死，取出完整大脑组织，用４％甲醛 浸没同定。３ ｈ后取ｍ脑组织置于滤纸上，分离海马 组织。冠状切取右侧海马组织２～５ ｍｍ，继续同定
Ｉｍａｇｅ
ｍｇ／ｋｇ依托咪酯（２∥Ｌ）（生产批号：８３６ｌＣ３４，德国
Ｊ软件进行活化ｃａｓｐａｓｅ－３蛋白半定量分析。
贝朗公司）：单剂量腹腔注射，连续３ ｄ，每天注射１
１．６统计学分析 采用ＳＰＳＳ １３．０统计软件进行数据处理和
次，成功制作大鼠全身麻醉状态模型。实验第１～３ 天，Ｅ组腹腔注射依托咪酯（乳剂）２０ Ｉｌｌｇ／ｋｇ．Ｌ组腹腔
小、对呼吸影响较轻，其ＥＤ。／半数致死量（ｎｅｄｉａｎ
ｌｅｔｈａｌ
公司，１：１５０）在３７ ｃＣ水育箱中孵育２０ ｍｉｎ，ＰＢＳ冲
洗３次，滴加二抗，二抗分别为生物素标记的羊抗
兔Ｉｇ－Ｇ血清（美国Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ公司１：５００），显色。
ｄｏｓｅ，ＬＤ，，）比值为２６．４，安全界限较大，对于