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产壳聚糖酶菌株的筛选、鉴定及发酵条件优化刘阳;赵华;郑雅元;田梁;李燕【期刊名称】《中国食品添加剂》【年(卷),期】2017(000)002【摘要】以壳聚糖为唯一碳源利用透明圈法,从养殖虾的池塘污泥中分离出8株产壳聚糖酶酶活较高的菌种.经过进一步的复筛,最终得到一株产非诱导型壳聚糖酶的菌株,确定该菌株TCCC150018为试验菌株,其酶活为2.48U/mL.经过形态特征观察以及16S rDNA序列分析对菌株进行鉴定,确定TCCC150018为蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus).在单因素试验的基础上,通过响应面分析法确定在酵母浸粉16g/L,葡萄糖11.5g/L,吐温-80 1.2g/L条件下酶活力可达到4.92 U/mL,是优化前的1.98倍,在工业生产方面具有良好的应用前景.【总页数】6页(P106-111)【作者】刘阳;赵华;郑雅元;田梁;李燕【作者单位】天津科技大学生物工程学院,工业微生物教育部重点实验室,天津300457;天津科技大学生物工程学院,工业微生物教育部重点实验室,天津300457;天津科技大学生物工程学院,工业微生物教育部重点实验室,天津300457;天津科技大学生物工程学院,工业微生物教育部重点实验室,天津300457;天津科技大学生物工程学院,工业微生物教育部重点实验室,天津300457【正文语种】中文【中图分类】Q53;Q55【相关文献】1.产壳聚糖酶菌株的筛选、鉴定及其产酶条件研究 [J], 谢宇;尚晓娴;胡立明;胡金刚;蒋丰兴2.产壳聚糖酶土壤微生物的筛选鉴定及发酵条件优化 [J], 毛贵珠;章晔敏;邵一凡;熊妍妍;陈小娥;方旭波3.产壳聚糖酶菌株发酵条件优化及壳聚糖酶的分离纯化研究 [J], 段妍;韩宝芹;董文;杨艳;常菁;刘万顺4.产壳聚糖酶菌株的分离、鉴定及发酵条件优化 [J], 王艳君;陈盛;杨谦;谢建忠5.淡紫紫孢菌的筛选、鉴定及产壳聚糖酶固体发酵条件优化 [J], 张馨月;岳晓洁;李铮峥;刘倩;黄茜;马美湖;付星因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
壳聚糖酶高产菌株发酵条件的优化郑岚;马耀宏;杨俊慧;张利群【摘要】优化了一株壳聚糖酶高产菌株的碳源、氮源、装瓶量、接种量和初始pH 值等产酶发酵条件,并进行了正交实验.实验结果表明,最佳发酵条件为:几丁质2.5%,(NH4)2SO40.4%,酵母粉0.7%,pH值为5.5.优化后酶活由原来的454.03U/mL提高至604.60 U/mL,提高量为优化前的33.16%.【期刊名称】《山东科学》【年(卷),期】2010(023)005【总页数】5页(P10-14)【关键词】壳聚糖;壳寡糖;发酵条件;优化【作者】郑岚;马耀宏;杨俊慧;张利群【作者单位】山东轻工业学院,山东,济南,250353;山东省科学院生物研究所,山东省生物传感器重点实验室,山东,济南,250014;山东省科学院生物研究所,山东省生物传感器重点实验室,山东,济南,250014;山东省科学院生物研究所,山东省生物传感器重点实验室,山东,济南,250014;山东省科学院生物研究所,山东省生物传感器重点实验室,山东,济南,250014【正文语种】中文【中图分类】Q815Abstract:We optimized such fer mentation conditions of a chitosanase high-production strain as carbon sources,nitrogen sources,bottlingvolume,inoculum size,initialpH value and perfor med an orthogonal experiment. Experi mental results show that the optimum fer mentation conditions are Chitin of 2.5%,(NH4)2SO2of 0.4%,yeast extract of 0.7%and pH value of 5.5.Enzyme activity is increased from 454.03 U/mL to 604.60U/mL(increment rate of 33.16%)after such opti mization.Key words:chitosan;chitosan oligosaccharide;fer mentationconditions;optimization壳寡糖以其独特的功能和性质,在工业、农业、医药、化妆品、食品等领域具有广泛的用途[1-3]。
产壳聚糖酶菌株选育及培养条件优化王艳;周培根;俞剑燊;王平平;戚晓玉;陶圣诞【期刊名称】《中国海洋大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2005(035)002【摘要】以假单胞菌Y8.0为出发菌株,分别通过亚硝基胍(NTG),Co60,UV(紫外)诱变,采用透明圈法筛选,获得了产壳聚糖酶较好的突变菌株假单胞菌Y8,其所产酶活力达到3.0U/mL,酶活力提高近6倍,并具有较好的遗传稳定性.3种诱变方法中,UV 诱变效果最好.对假单胞菌Y8产壳聚糖酶培养条件进行研究,得到1个比较优化的培养条件为:pH值6.5,温度32℃,壳聚糖3g/L,酵母膏0.3%,培养时间3d.不同金属离子及不同诱导物对酶合成的影响表明:Fe2+,Mg2+激活作用显著,而Zn2+,Mn2+则具有一定的抑制作用,壳聚糖和氨基葡萄糖对壳聚糖酶的产生都有较好的诱导作用.【总页数】5页(P293-296,231)【作者】王艳;周培根;俞剑燊;王平平;戚晓玉;陶圣诞【作者单位】上海水产大学,上海,200090;上海水产大学,上海,200090;上海水产大学,上海,200090;上海水产大学,上海,200090;上海水产大学,上海,200090;上海水产大学,上海,200090【正文语种】中文【中图分类】Q939.11+2【相关文献】1.一株产壳聚糖酶菌株的培养条件优化 [J], 赵玉巧;徐娜;杜云建2.壳聚糖酶高产菌株选育及发酵条件研究 [J], 陈小娥;夏文水;余晓斌3.高产壳聚糖酶菌株选育 [J], 袁建平;李洁;王利敏4.产壳聚糖酶菌株发酵条件优化及壳聚糖酶的分离纯化研究 [J], 段妍;韩宝芹;董文;杨艳;常菁;刘万顺5.高产壳聚糖酶菌株选育 [J], 袁建平;李洁;王利敏因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
壳聚糖酶制剂制备工艺及其在壳寡糖生产中的应用摘要：利用紫外诱变产壳聚糖酶菌种，选择高产菌株进行发酵培养，同时改变发酵条件对产酶条件进行优化。
结果表明：紫外照射5分钟诱变致死率为87.29%，这是最佳诱变剂量。
最适发酵条件为：氮源为(NH4)2SO4，碳源为可溶性淀粉，发酵装液量为容器的35%，发酵最适温度为36摄氏度。
关键词：壳聚糖酶；壳寡糖；紫外诱变；优化Chitosanase Preparation Method and Its Application in The Production of ChitooligosaccharidesAbstract:Use of the UV mutagenesis production chitosanase strains, and select high-yielding strains for the fermentation, while changing the fermentation conditions to optimize the conditions for enzyme production. The results show that: the UV irradiated for 5 minutes mutagenesis lethality rate of 87.29%, which is the preferred mutagenesis dose. The optimal fermentation conditions were: nitrogen source (NH4)2SO4carbon source for soluble starch fermentation medium volume to 35% of the container, fermentation optimum temperature of 32 degrees Celsius.Key words: chitosanase; chitooligosaccharides; ultraviolet mutagenesis; optimization壳聚糖（chitosanase）是由D-氨基葡萄糖通过β-1,4糖苷键连接起来的生物多糖，可在酸性溶液中溶解，反应活性比甲壳素和纤维素都高[1]。
壳聚糖酶产生菌的育种、发酵条件优化和壳寡糖的
酶解制备的开题报告
一、研究背景和目的
壳寡糖是一种天然抗菌物质，具有广泛的生物活性及重要的应用价值，受到了广泛的关注。
壳聚糖酶是壳寡糖酶解的关键酶，本研究的目
的是通过菌种育种和发酵条件优化的方法，提高壳聚糖酶的产量和活性，并探究壳聚糖酶在制备壳寡糖过程中的应用。
二、研究方法和步骤
1. 筛选壳聚糖酶高产菌株：从土壤中筛选出可能具有壳聚糖酶活性
的菌株，通过液体培养发酵进行初步筛选，利用壳聚糖酶测定仪测量不
同菌株的壳聚糖酶活性，选出产酶能力较强的菌株。
2. 优化发酵条件：对筛选出来的菌株进行发酵条件的优化，包括碳源、氮源、pH值、温度、接种量等条件进行优化，从而提高壳聚糖酶的
产量和活性。
3. 酶解制备壳寡糖：利用优化条件培养出的壳聚糖酶进行壳寡糖的
酶解制备，通过高效液相色谱仪进行分离纯化，并进行壳寡糖结构的分析。
三、预期结果
通过筛选出高产壳聚糖酶菌株和优化发酵条件，预期可获得高产壳
聚糖酶，并通过其进行壳寡糖的酶解制备。
同时，分析壳寡糖的结构及
特性，探究其在生物医学和农业领域的应用前景。
四、意义和应用
本研究将对壳聚糖酶的产量提高及壳寡糖的制备和应用进行深入探讨，可为生物医学、农业领域的壳寡糖应用提供基础和方法，为壳聚糖酶产业的发展做出贡献。
壳聚糖酶生产菌筛选、鉴定及其酶学性质阎贺静，周念波，涂邵勇，梅双喜，王海波，李佳（武汉生物工程学院生物工程系，湖北武汉430415）摘要：以壳聚糖为唯一碳源，筛选获得壳聚糖酶活力较高的菌株，根据菌株菌落形态及ITS 序列分析，初步鉴定该菌株为烟曲霉(Aspergillus fumigatus )。
该壳聚糖酶的最适反应温度为55℃，最适pH 值为5.6，在45~60℃和pH 值4.0~8.0范围内稳定，Mn 2+对酶有明显的促进作用，Ag +、Cu 2+、Zn 2+对酶有明显的抑制作用，其酶学特征表明该壳聚糖酶在壳聚糖降解方面具有应用潜力。
关键词：壳聚糖酶；筛选；鉴定；酶学特性中图分类号：Q814.1文献标识码：A文章编号：1004-874X （2012）24-0161-04Isolation,identification and enzyme characteristics ofa strain producing chitosanaseYAN He-jing,ZHOU Nian-bo,TU Shao-yong,MEI Shuang-xi,WANG Hai-bo,LI Jia(Bioengineering Department,Wuhan Bioengineering Institute,Wuhan 430415,China )Abstract:The aim of this paper was to screen chitosanase producing strain and to investigate the characteristics of the chitosanase produced by this strain.Chitsoan was used as the sole carbon source for the acclimatization and screening of strain.A strain with a higher chitosanase activity was isolated from soil.It was identified as Aspergillus fumigatus by its morphology in solid medium and by analyzing the sequence of ITS.The optimum temperature and pH were 55℃and 5.6,respectively.And the chitosanase is stable at 45~60℃and pH 4.0~8.0,respectively.The activity of the enzyme is strongly promoted by Mn 2+and inhibited by Ag +,Cu 2+and Zn 2+.The properties of chitosanase indicated that it has a great potential application in chitosan degradation.Key words:chitosanase;isolation;identification;enzyme characteristics壳聚糖酶(chitosanase ，EC.3.2.1.132)又称壳聚糖-N-乙酰-氨基葡糖苷水解酶(chitosan N-acetylglucosaminohydr-olase)，是一种对线性壳聚糖具有水解专一性的酶。
一株产木聚糖酶菌株的筛选鉴定及产酶条件优化【摘要】本研究旨在筛选和鉴定一株产木聚糖酶的菌株，并优化其产酶条件。
首先采用特定方法筛选出目标菌株，然后利用鉴定技术确认其身份。
接着通过优化产酶条件，包括培养基成分、温度、pH值等因素，最大化提高木聚糖酶的产量。
通过酶活测定和条件优化结果的比对分析，可以评估产酶效果并得出结论。
本研究结果有望为生物制药和生物质转化领域提供具有潜在应用前景的菌株和技术支持。
未来的研究可以进一步探讨优化条件对酶活性的影响，并拓展该菌株在其他领域的应用前景。
【关键词】产木聚糖酶菌株、筛选、鉴定、产酶条件优化、酶活测定、效果分析、成果总结、未来展望。
1. 引言1.1 研究背景目前，虽然已经有许多研究报道了不同菌株的木聚糖酶产生情况，但是为了提高木聚糖酶的产量和活性，仍然需要进一步深入研究。
通过筛选与优化得到高效的产木聚糖酶菌株，并确定最佳的产酶条件，对于提高木聚糖降解效率和生物质资源的利用率具有重要意义。
本研究旨在针对一株潜在的产木聚糖酶菌株进行鉴定和产酶条件优化，为木聚糖酶的应用和产业化提供理论基础和实验支持。
1.2 研究意义产木聚糖酶（xylanase）是一种能够降解木质纤维素中木聚糖的酶类，具有在生物质资源转化、饲料添加剂、食品工业等领域广泛应用的潜力。
随着全球对可再生能源和绿色化工的需求不断增长，发掘和利用高效产木聚糖酶的菌株成为研究的热点。
筛选出高产木聚糖酶的菌株并优化其产酶条件，不仅可以提高木聚糖酶的产量和活性，同时也可以降低生产成本，推动相关产业的发展。
1.3 研究目的研究目的：本研究旨在筛选出一株产木聚糖酶活性较高的菌株，并通过鉴定和优化产酶条件，提高其木聚糖酶产量。
通过对产酶条件进行优化，探索最适合该菌株生长和酶活性表达的环境参数，为提高木聚糖酶的产量提供理论依据。
本研究旨在分析优化后的产酶条件对木聚糖酶酶活的影响，评价优化效果，为进一步应用该菌株生产木聚糖酶提供参考。
毕业设计（论文）开题报告理工类题目:壳聚糖酶产生菌产酶条件优化研究学院：专业班级：学生姓名：指导教师：淮海工学院毕业设计（论文）开题报告1.课题研究的意义，国内外研究现状、水平和发展趋势1.课题的研究意义：壳聚糖酶可以专一性地降解壳聚糖，生产壳寡糖。
壳寡糖具有水溶性好、生物活性高、功能作用大、应用领域广、易被人体吸收等突出特点，因此被广泛地应用于医药卫生、保健食品、食品加工、化妆品、纺织、环保、农业、饲料、环保等领域。
但物理降解和化学降解生产壳寡糖由于污染较大，效率低，收率低，逐渐被淘汰。
利用专一性的壳聚糖酶来制备壳聚糖，由于反应条件温和，得率高，以及可以结合一些过程工程的技术，从而可实现经济的大规模壳聚糖的连续生产，以此成为最有前途的方法。
2.国内外研究现状、水平：国外对壳聚糖酶的研究已深入到分子水平，侧重于研究不同来源的壳聚糖酶的晶体结构与催化作用机理，并与已知壳聚糖酶的核苷酸序列进行对比，分析同源性，寻找酶分子中发挥催化功能的少数几个必需氨基酸，探索它们在催化壳聚糖水解过程中的作用。
国内对壳聚糖酶的研究日益增多，主要是从自然界中筛选产酶活性较高的微生物菌种，进行诱变选育，优化发酵工艺与酶解条件，以期获得产酶量较大的菌种和活性较高的壳聚糖酶；而酶的氨基酸序列测定、重组壳聚糖酶基因的异源表达等方面的研究则相对较少。
3.问题与展望虽然壳聚糖酶已经得到了商业化的应用，但是由于原始的菌株产壳聚糖酶能力仍然较低，使得壳聚糖酶的来源有限，生产成本较高，这些均成为限制壳寡糖在应用中不可避免的问题。
同时，现在商品壳聚糖酶在热稳定性等方面还不能满足大规模降解壳聚糖工业化生产的需求。
因此，一方面须要继续寻找不同微生物来源的壳聚糖酶，另一方面须要对现有的壳聚糖酶菌株进行改造，以及培养条件的优化，以期获得高产壳聚糖酶菌株。
淮海工学院毕业设计（论文）开题报告2.课题的基本内容，可能遇到的困难，提出解决问题的方法和措施(1) 课题的基本内容：①调查并充分查阅资料②设计实验方案③活化菌种④优化发酵培养基的碳、氮源以及碳氮比，提高壳聚糖酶产量⑤研究不同接种量、装液量对壳聚糖酶产量的影响⑥通过加入某些特殊添加物来提高壳聚糖酶产量⑦研究不同温度、pH以及培养时间对壳聚糖酶产量的影响(2) 可能遇到的困难：①微生物操作技术不熟练②拿到的菌可能不是单菌③该菌是否具有产酶活力(3) 提出解决问题的方法和措施：①调查和搜集各方面资料，咨询老师，调整不同的培养基。
文章篇号:1007-2764(2006)03-0021-006壳聚糖酶高产菌株的筛选、产酶条件的优化及壳聚糖酶的分离纯化孙菲，陈山岭，李宜海，郑孝贤，梁智群（广西大学生命科学与技术学院，广西南宁530004）摘要：从采集的土样中分离到3株产壳聚糖酶的菌株,经摇瓶复筛,菌株JH01产酶能力最强。
对其发酵产酶条件的研究结果表明其产酶最适培养基组分为: 壳聚糖2.0% ， NaCl 0.05% ，MgSO40.05% ，KH2PO4 0.075% ，FeSO4 0.001% ，牛肉膏 0.3%，pH 5.5。
最适产酶培养条件为:4 0℃、180r/min培养48ｈ。
在最适产酶培养条件下，48ｈ时菌株JH01发酵液中壳聚糖酶活力可达到26.03U/mL，产酶能力为国内已报道的最高值。
经DEAE Cellulose 52柱层析，壳聚糖酶被纯化了11.70倍。
经SDS-PAGE鉴定，纯化后酶已达到电泳纯的程度，分子量为30kD。
关键词：壳聚糖酶；筛选；发酵条件；纯化；Screening, Optimization of Fermentation Conditions of Chitosanase Producing Strain and Purification of ChitosanaseSun Fei, Chen Shan-ling, Li Yi-hai, Zheng Xiao-xian, Liang Zhi-qun(Life science and technology college of Guang Xi University, Nanning530004, China) Abstract: Three strains producing chitosanase were isolated from soil samples. Shaking cultivation demonstrated that the strain named JH01 possessed the highest chitosanase activity. The optimal composition of medium for JH01 producing chitosanase was as follow: chitosan 2.0% , NaCl 0.05% , MgSO40.05% , KH2PO4 0.075% , FeSO4 0.001% , beef extract 0.3% , and pH 5.5. The optimal cultivation conditions for JH01 producing chitosanase were 40℃ incubating temperature and shaking cultivation at 180r/min for 48 hours. The maximal chitosanase activity could reach 26.03U/mL when JH01 was incubated in flask under the optimal cultural conditions. Chitosanase from JH01 was purified about 11.70 fold by DEAE Cellulose 52. The purified enzyme is demonstrated by SDS-PAGE to be a hormogenous protein. The molecular is determined as about 30 kDa by SDS-PAGE.Keywords: Chitosanase; Screening; Fermentation conditions; Purification壳聚糖由氨基葡萄糖通过β-1,4-糖苷键连接而成，其水解产物壳寡糖具有独特的生理活性和功能，如抑制肿瘤的生长[1]、抗真菌[2]、抗细菌[3]等。
在医药品、保健品、农业、食品方面具有广泛的应用前景，其应用引起了国内外的广泛关注。
目前国内制备壳寡糖的方法主要有酸水解法和混合酶水解法。
这两种方法寡糖得率低、水解产物混杂、分离困难，且对环境污染严重。
而壳聚糖酶能特异性作用于GlcN-GlcN、GlcNAc-GlcN 、GlcN-GlcNAc 糖苷键，将壳聚糖水解成聚合度为2~8的寡糖，条件温和、产率高、污染小，因此研究壳聚糖酶成为目前壳聚糖降解发展的方向。
收稿日期：2006-2-22作者简介：孙菲，在读研究生。
通讯联系人：梁智群教授国外对产壳聚糖酶的Bacillus属和Streptomyces 属的许多菌株已经作了较多的研究，在酶的纯化方法，作用机理，理化性质等方面有了许多报道。
国内关于壳聚糖酶的研究较少，只有关于球孢白僵菌Beauveria bassiana [4]、细菌属假单孢菌Pseudomonas sp.ＶⅢＴ39[5]、青霉菌[6]和Aspergillus sp.CJ22-326[7]产壳聚糖酶的分离、纯化和性质研究报道。
本文报道了壳聚糖酶产生菌的筛选、产酶条件的优化及壳聚糖酶的分离纯化。
1 实验材料和方法1.1 实验材料DEAE Cellulose 52为whatman公司产品；电泳用的相对分子质量标准蛋白质为Pharmacia公司产品；21壳聚糖 ( 脱乙酰度为80% )为北海文珂海洋生物科技开发公司提供；其它试剂均为国产分析纯。
1.2 土样：从广西省采集供菌种分离1.3 培养基初筛培养基(平板分离培养基)：壳聚糖 1.0%，NaCl 0.05%，MgSO40.05%，KH2PO4 0.075%，FeSO4 0.001% , (NH4)2SO4 0.3% , 琼脂2％，pH 6.5。
复筛培养基(液体筛选培养基)：壳聚糖 1.0% , NaCl 0.05% , MgSO40.05%，KH2PO4 0.075% , FeSO4 0.001% , 蛋白胨 0.3%，pH 6.5。
斜面种子培养基：马铃薯20%，蔗糖2%，琼脂2%，pH自然。
液体种子培养基：马铃薯20%, 蔗糖2%，pH 自然。
1.4 产酶菌株的筛选1.4.1 初筛方法将采集的土样稀释后涂布于初筛平板，挑选生长情况良好、透明圈较大的菌落作为复筛对象。
1.4.2 复筛方法将初筛菌种接至PDA斜面28℃培养2d，环接至液体筛选培养基中，28℃振荡培养2d后，测各发酵液中的酶活力，取酶活力最高的作为进一步的产酶试验菌。
1.5 壳聚糖酶的浓缩与纯化1.5.1 发酵液的浓缩将菌种接种于PDA斜面培养基37℃培养1.5d，环接至种子培养基40℃,180r/min培养2d，按接种量15%接至发酵培养基40℃,180r/min培养2d。
发酵液经真空抽滤收集上清液。
上清液放于透析袋中,埋入蔗糖，4℃过夜。
1.5.2 DEAE Cellulose 52离子交换层析将浓缩后的发酵液上样于用0.05mol/L醋酸钠缓冲液(pH5.0)预平衡的DEAE Cellulose 52离子交换层析柱(2.8×20cm)，用0~0.5 mol/L NaCl溶液进行梯度洗脱，流速为1.5mL/min，收集有酶活力的组分进行蔗糖浓缩。
1.6 壳聚糖酶活力的测定取0.1 mL粗酶液与5 mL pH 5.0的2.5％的壳聚糖溶液混和，60℃保温30min，沸水浴5min灭酶活。
以6mol/L NaOH溶液调反应液pH>10.0，离心除去未反应的底物。
3,5 二硝基水杨酸(DNS)法测定酶解液中的还原糖(以氨基葡萄糖计), 在本实验条件下,每分钟产生相当于1µmol氨基葡萄糖的还原糖所需的酶量定义为一个酶活单位。
1.7 蛋白质含量测定采用Bradford法[8]，以牛血清蛋白质作标准蛋白质。
1.8 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳：按文献[9]的方法进行。
2 结果与分析2.1 菌株初筛结果平板培养2d后，筛选到3株菌株可以在以胶体壳聚糖为唯一碳源的固体培养基上生长，并产生透明圈，编号分别为JH01，JH02，JH03。
2.2 菌株复筛结果对培养2d后的菌株的D/d值（透明圈直径/菌落直径）进行了测定，并进行摇瓶复筛。
结果表明JH01在液体培养基中的产酶能力最强(见表1)。
表1 摇瓶复筛结果编号D/d d(cm)酶活力（U/mL）JH01JH02JH032.381.031.121.061.011.126.810.0020.0112.3 产酶条件优化结果2.3.1 壳聚糖浓度对产酶的影响在壳聚糖浓度分别为0.5%、1.0%、1.5%、2.0%、2.5%的液体培养基中，28℃、180r/min培养2d，结果见图1。
发现当壳聚糖浓度在2.5%以上时，反而抑制壳聚糖酶的产生，当壳聚糖浓度为2.0%时，酶活最高。
图1 壳聚糖浓度对产酶的影响2.3.2 氮源对产酶的影响壳聚糖浓度2%时，在原复筛培养基中除去氮源，分别考察以0.3％的(NH4)2SO4、KNO3、NH4NO3、尿素、牛肉膏、蛋白胨为氮源时的产酶能力。
实验表明以牛肉膏为氮源效果最好（见表2）。
表2 氮源对产酶的影响氮源种类(NH4)2SO4KNO3NH4NO3尿素牛肉膏蛋白胨酶活(U/mL) 5.33 2.172.08 4.2910.479.4 2.3.3 温度对产酶的影响(如图2)发酵培养基壳聚糖浓度为2%，以0.3%牛肉膏为氮源。
设定培养温度为24℃、28℃、32℃、36℃、40℃、44℃、180 r/min下培养2d后取样检测酶活力，结果如图2。
随着温度升高而上升，36℃~40℃酶活较高，40℃达到最大值，但超过40℃时酶活力下降。
因此产2223酶最适宜的培养温度为40℃。
源于60h 、72h ｈ达2.3.5 图4 发酵起始pH 对产酶的影响把发酵培养基的pH 值分别调为4.5、5.0、5.5、6.0、6.5，接入同量菌种，40℃下振荡培养2ｄ后测定酶活力，结果如图4。
pH 为5.0~5.5时酶活力较高, pH 为5.5时该菌产酶能力最强，酶活力最高。
当起始pH 值高于5.5时，产酶能力明显下降。
2.4 DEAE Cellulose 52柱层析壳聚糖酶经浓缩、DEAE Cellulose 52柱层析纯化后，结果见表3。
表3知纯化后壳聚糖酶比活力提高至361.30U·mg -1，纯化倍数为11.70倍，酶回收率为66.3%。
由图5，6可以看出经过DEAE Cellulose 52柱除去了两个较大的杂蛋白峰。
纯化后的壳聚糖酶在SDS-PAGE 下只有一条蛋白质谱带，这表明酶纯化后达到了电泳纯的程度。
