毛霉高产蛋白酶菌株产酶条件的优化

大庆师范学院本科生毕业论文蛋白酶产生菌培养条件的条件优化院(部)、专业生命科学学院生物技术研究方向微生物学学生姓名朱琳学号200901122598指导教师姓名张亦婷2013年06月01日摘要采用大庆师范学院生命科学学院花园附近土壤、农田土壤及体育场附近土壤作为样品，并从中筛选分离并得到产蛋白酶能力较高的菌株，经过初步鉴定该菌株属芽孢杆菌。

通过对其产酶条件进行优化，结果显示该菌产酶最佳碳源为质量浓度15g/L的乳糖，最佳氮源为质量浓度20g/L的尿素，最适初始pH值为6.5，最适发酵温度为35℃。

关键词：菌种筛选；鉴定；蛋白酶；条件优化AbstractThe sewage treatment plant soil near east institute, soil and soil samples near farms .Using milk hydrolysis circle screening model separating screening in high ability get protease whr1 strains. Preliminary appraisal of the fungus belong to bacillus. After the optimization of the condition, the capability of whr1 was improved, the optimal condition is: carbon source is sucrose 15g/L; nitrogen source is Yeast extract 20g/L, the pH is 6.5; fermentation temperature is 35℃.Key words：Screening；Identified；Protease；Conditions optimization目录摘要 (1)Abstract (2)1 引言 ...........................................................................................................................................................2 材料与方法 (3)2.2.2 实验材料 (3)2.2.1 菌株筛选 (3)3.1 菌株筛选 (6)3.1.1 菌株的分离筛选 (6)2.3 条件优化 (7)2.3.1 不同碳源对产酶的影响 (7)2.3.3不同氮源对产酶的影响 (8)2.3.4 培养基不同初始pH值对产酶的影响 (9)2.3.5 不同温度对产酶的影响 (10)4 结论 (10)11 引言蛋白酶是催化蛋白质中肽键水解的酶，是一类广泛应用于皮革、毛皮、丝绸、医药、食品、酿造等方面的重要工业用酶，也是目前世界上产销量最大的商业酶，其市场占有率约占整个商品酶销售量的60％，微生物蛋白酶从微生物中提取，不受资源、环境和空间的限制，具有动物蛋白酶和植物蛋白酶所不可比拟的优越性。

蛋白酶生产菌的产酶条件研究摘要：本文研究了蛋白酶生产菌的产酶条件，包括培养基、温度、pH值、氮源、碳源、微量元素等因素对蛋白酶产量的影响。

结果表明，较佳的产酶条件为：培养基为牛肉膏蛋白培养基，温度为30℃，pH值为7.0，氮源为酵母粉，碳源为葡萄糖，微量元素为FeSO4·7H2O、ZnSO4·7H2O和MnSO4·4H2O。

关键词：蛋白酶生产菌；产酶条件；培养基；温度；pH值；氮源；碳源；微量元素一、引言蛋白酶是一类水解蛋白质的酶，广泛应用于食品、医药、化妆品等领域。

目前，蛋白酶的生产主要依靠微生物发酵。

因此，研究蛋白酶生产菌的产酶条件对于提高蛋白酶产量具有重要意义。

二、实验材料和方法2.1 实验材料实验菌株为产酶能力较强的芽孢杆菌；培养基为牛肉膏蛋白培养基；氮源包括酵母粉、尿素、胰蛋白胨和硝酸铵；碳源包括葡萄糖、麦芽糖、玉米粉和淀粉；微量元素包括FeSO4·7H2O、ZnSO4·7H2O 和MnSO4·4H2O。

2.2 实验方法2.2.1 培养条件所有菌株均在37℃下保存，实验前取出，接种到液体牛肉膏蛋白培养基中，培养24小时后进行实验。

2.2.2 测定酶活力取培养液进行离心，取上清液作为酶液，用凝胶电泳法测定酶活力。

2.3 实验设计本实验采用单因素试验设计，探讨培养基、温度、pH值、氮源、碳源、微量元素等因素对蛋白酶产量的影响。

三、结果与分析3.1 培养基对蛋白酶产量的影响本实验选用了牛肉膏蛋白培养基、脱脂牛奶、酵母提取物、玉米粉和淀粉等5种培养基进行对比。

结果表明，牛肉膏蛋白培养基的蛋白酶产量最高，为1.63 U/mL，而脱脂牛奶、酵母提取物、玉米粉和淀粉的蛋白酶产量分别为0.84 U/mL、1.22 U/mL、1.09 U/mL和1.05 U/mL。

因此，牛肉膏蛋白培养基是较优的培养基。

3.2 温度对蛋白酶产量的影响本实验选用了25℃、30℃、35℃、40℃和45℃等5种温度进行对比。

毛霉ZG-2菌株产蛋白酶条件优化巩晓芳;张宗舟;薛林贵;张红光;李琳;赵燕【摘要】对毛霉ZG-2菌株的产蛋白酶条件进行优化,以便于生抽大曲的大规模生产.结果表明,在大豆粉40％、麸皮60％、加水100％(V/m)、温度40℃条件下,制成的大曲蛋白酶活性最高,其中酸性蛋白酶酶活2 314 U/g、中性蛋白酶酶活4 602 U/g、碱性蛋白酶酶活1 352 U/g;加120 g/L食盐水溶液进行稀醪发酵60 d,原料蛋白质转化率最高,达79.3％.【期刊名称】《河南农业科学》【年(卷),期】2013(042)004【总页数】4页(P164-167)【关键词】蛋白酶;毛霉ZG-2;稀醪发酵【作者】巩晓芳;张宗舟;薛林贵;张红光;李琳;赵燕【作者单位】兰州交通大学化学与生物工程学院,甘肃兰州730070;天水师范学院生命科学与化学学院,甘肃天水741001;兰州交通大学化学与生物工程学院,甘肃兰州730070;兰州交通大学化学与生物工程学院,甘肃兰州730070;兰州交通大学化学与生物工程学院,甘肃兰州730070;兰州交通大学化学与生物工程学院,甘肃兰州730070【正文语种】中文【中图分类】TS201.25酱类是开门七件事之一，在中国人日常生活中具有重要的作用。

随着生活水平的不断提高，人们对酱类的质量要求也越来越高。

随着科学的发展，酱类的发酵技术也在不断提高，先后经历了大曲高盐稀醪发酵、无盐固态发酵、低盐固态发酵、低盐固态混菌共酵。

几十年来，研究人员一直追求蛋白酶活性的提高、原料转化率的提高、多菌共酵［1］、多酶互作［2］、产品色香味体具佳［3］。

太空育种是当前开发和培育新的优良菌种的有效研究方法之一［4－5］，从神舟6号飞船搭载的大曲中，筛选出8个优良的毛霉属菌株，其蛋白酶活性远高于出发菌株，将蛋白酶活性较高的毛霉ZG－2菌株，与曲霉属的米曲霉相配套，进行了生抽生产的中试，取得了良好的结果［6－7］，其产品的色、香、味、体经过模糊综合评价均达到较满意的水平，各项质量指标均高于国家标准，原料转化率也有所提高。

角蛋白酶工程菌株产酶条件的优化研究角蛋白酶是一种重要的酶类蛋白，在食品、医药、皮革等领域具有广泛的应用价值。

为了提高角蛋白酶的产量和活性，角蛋白酶工程菌株的酶条件需要进行优化研究。

本文将从菌株选择、培养基组成、培养条件等方面探讨角蛋白酶工程菌株产酶条件的优化研究。

首先，选择适合的菌株是进行角蛋白酶产酶条件优化的基础。

目前常用的工程菌株有大肠杆菌（Escherichia coli）、酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）等。

这些菌株具有较高的生长速度和较好的表达能力，但也存在着一些问题，如蛋白质形成包涵体、酶活性低等。

因此，选择适合目标酶表达和活性的菌株是十分重要的。

其次，培养基组成对角蛋白酶产酶条件的优化也起到了至关重要的作用。

培养基的主要组成包括碳源、氮源、微量元素等。

在选择碳源方面，常用的有葡萄糖、麦芽糖等，但不同碳源对菌株的生长和酶的产量有不同的影响，因此需要进行筛选和优化。

氮源的选择包括无机氮源和有机氮源，如氨基酸和蛋白质等。

微量元素的添加也对角蛋白酶的产量和活性有影响，如金属离子（如镁离子、锰离子）和维生素等。

因此，合理选择培养基组成是进行角蛋白酶产酶条件优化的关键。

最后，培养条件的优化也对角蛋白酶的产量和活性具有重要影响。

培养条件包括温度、pH值、发酵时间等方面。

温度的选择主要取决于菌株的最适生长温度，一般在菌株的最适生长温度附近进行发酵。

pH值的选择也对角蛋白酶的产量和活性有影响，一般在菌株最适生长pH值附近进行发酵。

此外，发酵时间的选择也需要根据菌株的生长速度和目标酶的表达和积累情况来进行调整。

综上所述，角蛋白酶工程菌株产酶条件的优化研究包括菌株选择、培养基组成和培养条件的优化。

通过合理选择菌株、优化培养基组成和调整培养条件，可以提高角蛋白酶的产量和活性，为其在食品、医药、皮革等领域的应用提供技术支持。

当然，由于研究深度有限，仍然需要进一步探索和优化。

产酶条件优化实验
产酶条件优化实验是一种常用的方法，用于确定最佳的培养条件以提高酶的产量。

以下是一些常见的优化实验方法：
1. 培养基成分优化：通过调整培养基中的碳源、氮源、无机盐等成分的浓度和比例，来寻找最适合酶产量的组合。

2. 培养条件调控：包括温度、pH值、培养时间、初始菌液浓度等的调节，以找到适合酶活性和细胞生长的最佳条件。

3. 添加辅助物质：有些辅助物质如酶诱导剂、共诱导剂等可以促进酶的合成和分泌，通过添加适当的浓度来增加酶的产量。

4. 营养补充：通过添加适量的酵母提取物、维生素、微量元素等来增加细胞代谢活性，从而提高酶的产量。

5. 发酵工艺优化：对发酵参数如搅拌速度、通气量、发酵方式等进行调整，以提高产酶效果。

需要根据具体的产酶菌株和酶的类型进行实验设计和优化，建议在科学研究机构或者相关实验室进行操作以确保安全和可靠性。

角蛋白酶工程菌株产酶条件的优化研究角蛋白酶是一种重要的酶类，广泛应用于食品、制药、皮肤护理等领域。

角蛋白酶工程菌株产酶条件的优化是提高酶产量和活性的关键。

本文将从培养基成分、培养条件、酶诱导物、温度和pH值等方面，探讨角蛋白酶工程菌株产酶条件的优化研究。

首先，培养基成分对角蛋白酶产酶起着重要的影响。

常见的培养基成分包括碳源、氮源、无机盐和添加剂等。

碳源的选择是影响菌株产酶的关键因素之一。

大部分角蛋白酶工程菌株对简单碳源如葡萄糖、果糖和麦芽糖具有较高的利用率。

氮源对菌株生长和酶产量也有显著影响。

常用的氮源包括氨基酸、尿素和酵母粉等。

无机盐和添加剂的加入可以满足菌株生长的微量营养需求，例如磷酸盐、镁盐和微量元素等。

其次，培养条件对角蛋白酶产酶也有重要影响。

温度是一个关键因素，常见的菌株产酶温度适宜范围为35-40摄氏度。

在菌株产酶初期，培养温度较低有利于菌株生长，而在后期，提高温度可以增强角蛋白酶的产量。

pH值是另一个重要因素，菌株产酶的适宜pH范围通常在7-8之间。

过高或过低的pH值都会影响菌株的生长和酶活性。

酶诱导物也是优化角蛋白酶产酶条件的关键因素之一。

常用的酶诱导物包括激素、金属离子和特定的诱导剂等。

激素能够通过激活转录因子的作用而促进酶的产生。

金属离子如钙离子和锌离子可以作为酶的辅因子参与酶的活化和稳定作用。

特定的诱导剂能够诱导菌株产生更高产量的角蛋白酶。

选择适当的酶诱导物能够提高酶产量和活性。

最后，温度和pH值是影响角蛋白酶产酶的重要条件。

温度的选择要考虑到菌株生长的最适温度，过高或过低的温度都会影响菌株的生长和酶活性。

在角蛋白酶产酶的过程中，温度的变化可以影响到酶的合成速率和空间结构。

而pH值的变化也会影响到酶的酸碱性质和稳定性。

因此，在角蛋白酶产酶过程中要选择适宜的温度和pH值条件。

综上所述，角蛋白酶工程菌株产酶条件的优化研究包括培养基成分的优化、培养条件的优化、酶诱导物的选择和温度、pH值的调节。

土壤中高产蛋白酶菌株的筛选鉴定及发酵条件优化耿芳;杨绍青;闫巧娟;刘军;龚思怡;江正强【摘要】从海南土壤中筛选得到一株高产蛋白酶的菌株,并对其进行菌种鉴定、产蛋白酶发酵条件优化及蛋白酶分子质量测定.经筛选,得到一株高产蛋白酶的菌株,编号为CAUH83,蛋白酶活力达到126 U/mL.通过形态观察、生理生化试验及16S rDNA序列分析,鉴定菌株CAUH83为粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens).通过单因素试验优化,确定该菌株产蛋白酶的最优发酵条件:大豆粉3.0％、蔗糖3.0％、初始pH 6.0、培养温度30 ℃、培养时间48 h.在此优化发酵条件下,该菌株产蛋白酶酶活力达到1 932.3 U/mL,较优化前提高15.3倍.通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和酶谱分析表明该蛋白酶分子质量约51 kDa.%A strain with high yield protease was isolated from soil sample of Hainan. The identification, fermentation conditions optimization and molecular mass of the strain were determined. After screening, a strain CAUH83 with high yield protease was obtained and the enzyme activity was 126 U/ml. Through morphological observation, physiological and biochemical tests and 16S rDNA sequence analysis, strain CAUH83 was identified asSerratia marcescens. The optimal fermentation conditions were optimized by single factor experiments as follows: soybean flour 3.0％, sucrose 3.0％, initial pH 6.0, culture temperature 30 ℃ and time 48 h. Under the optimal conditions, the highest protease activity of the strain was 1 932.3 U/ml, which increased 15.3 times higher than that of before optimization. The molecular mass of the protease was about 51 kDa by SDS-PAGE and protease zymogram analysis.【期刊名称】《中国酿造》【年(卷),期】2018(037)004【总页数】6页(P66-71)【关键词】粘质沙雷氏菌;筛选鉴定;蛋白酶;发酵条件优化【作者】耿芳;杨绍青;闫巧娟;刘军;龚思怡;江正强【作者单位】中国农业大学食品科学与营养工程学院,北京 100083;中国农业大学食品科学与营养工程学院,北京 100083;中国农业大学工学院,北京 100083;中国农业大学食品科学与营养工程学院,北京 100083;中国农业大学食品科学与营养工程学院,北京 100083;中国农业大学食品科学与营养工程学院,北京 100083【正文语种】中文【中图分类】TS201.3蛋白酶(protelytic enzymes,EC 3.4)是催化肽键水解的一类酶,在食品、饲料、医药、化工等行业有着广泛的应用［1］。