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蝮蛇和五步蛇排毒量的研究
谢占泰;黄美华;胡步青
【期刊名称】《浙江大学学报：医学版》
【年(卷),期】1982(0)S1
【摘要】蝮蛇Agkistrodon halys(pallas)和五步蛇Agkistrodon
acutus(Guenther)是我国传统的良好中药材,早在明代李时珍所著的《本草纲目》中已有详细的记载。
近年来对蝮蛇毒和五步蛇毒又有了进一步研究的报道。
如蝮蛇毒对小白鼠肉癌的抑癌率高于30％,蝮蛇毒中含有神经毒等20余种成分,而神经毒具有良好的镇痛作用。
五步蛇毒中含有凝血酶样酶(thrombin-likeenzyme)等成分,这种酶的制剂可用于治疗血栓病等疾患。
这两种毒蛇在我国分布较广,危害较大。
【总页数】1页(P7-7)
【关键词】蝮蛇毒;平均;五步蛇毒;排毒量
【作者】谢占泰;黄美华;胡步青
【作者单位】浙江医科大学生物学教研室
【正文语种】中文
【中图分类】R2
【相关文献】
1.解毒排毒泄毒消肿法内外合治蝮蛇咬伤的临床研究 [J], 阙华发;张臻;唐汉钧;王云飞;邢捷;向寰宇;刘晓鸫;徐杰男;沈亮;单玮
2.乌苏里蝮蛇采毒周期对排毒量的影响 [J], 李建立;刁扬
3.五步蛇主要数量性状与排毒量的相关分析 [J], 焦端贵
4.断毒消肿、解毒排毒治疗蝮蛇咬伤基础和临床研究 [J], 喻文球;王万春;刁军成;龚丽萍;李金娥;谌莉媚;邱桂荣;王丹
5.感染肠道病毒71型手足口病患儿粪便排毒时间及病毒载量的相关因素研究 [J], 黎梅花;黄延风;朱朝敏;苏薇
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五步蛇毒蛋白C激活剂的纯化与活性分析张根葆;张毅;孔岩;许敏;李曙【期刊名称】《蛇志》【年(卷),期】2008(20)4【摘要】目的研究五步蛇毒蛋白C激活剂(PCA)组分的分离纯化及其抗凝活性.方法借助DEAE-Cellulose、CM-Sephadex C-50和Sephadex C-75柱层析,以离子交换和凝胶过滤法从皖南产五步蛇粗毒中分离纯化PCA组分;以SDS-PAGE凝胶电泳检测其纯度和分子量,发色底物法(Chromogenic Substrate Assay)测定PCA组分的生色反应能力;测定PCA对正常血浆KPTT和PT的影响.结果从五步蛇粗毒中纯化的PCA组分经SDS-PAGE测定为单一区带,相对分子质量约为18.5 kD,等电点pH 4.9;发色底物法显示其具有生色反应能力;该PCA 1 mg/L在体外明显延长KPTT,但PT不受影响.结论采用离子交换和凝胶过滤法,可从皖南产五步蛇毒中分离纯化出高纯度的PCA组分,该组分可抑制内凝途径影响血液凝固过程.【总页数】3页(P249-251)【作者】张根葆;张毅;孔岩;许敏;李曙【作者单位】皖南医学院蛇毒研究室,安徽芜湖,241002;河南工业大学国际学院,河南郑州,450000;皖南医学院蛇毒研究室,安徽芜湖,241002;皖南医学院蛇毒研究室,安徽芜湖,241002;皖南医学院蛇毒研究室,安徽芜湖,241002【正文语种】中文【中图分类】R996.3【相关文献】1.抗自溶烟草蚀纹病毒蛋白酶的原核表达和纯化及活性分析 [J], 陈鹏;石小青2.蛇毒蛋白C激活剂实验条件及稳定性的探讨 [J], 侯力强;赵路宁;黄韶玲;何泉华;江中喜;孔天翰;管锦霞3.影响五步蛇毒蛋白C激活剂酰胺酶活性的实验因素 [J], 孙瑶;张根葆;包鹏举;吴娟;李曙4.毛细管区带电泳分析五步蛇毒蛋白C激活剂和蛋白C的相互作用 [J], 孙瑶;包鹏举;张根葆5.五步蛇毒蛋白C激活剂在脓毒症大鼠早期适应性免疫应答中的作用 [J], 孙瑶;包鹏举;张根葆;王海华;王国栋因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
热点解析CNS研究也会画蛇添足作者：解螺旋.大厨如需转载请注明来源：解螺旋·医生科研助手导语画蛇添足的故事大家耳熟能详。
还记得当年老师给的解释是：凡事都要遵循自然规律，不要多此一举，否则会弄巧成拙。
然而，事实真的如此，蛇真的没有足么？本期的Cell告诉你，蛇原来是有四肢的，只是在进化的过程中失去了它们而已。
原文标题：Progressive Loss of Function in a Limb Enhancer during Snake Evolution回复“1024”可下载此文献摘要体型的变化被认为与调控序列的变化紧密偶联在一起，但是与脊椎动物主要形态转变向关联的特定分子时间却一直难以弄清。
在本文中，作者发现了在其他动物中高度保守，但是在蛇里面却发生变异的特殊序列，这就是长片段四肢增强子Sonic hedgehog（Shh）。
转基因小鼠报告实验表明这一片段的体内活性在多数哺乳动物中是保守的，包括鱼，但不包括蛇。
将小鼠的增强子更换为人或鱼的同源序列，并不会改变小鼠的四肢发育。
然而，一旦将小鼠中的这一序列替换为蛇的同源序列，便会引起严重的四肢发育缺陷；重新整合相关通路中的活性转录因子，可以逆转这一现象。
综上数据表明调控序列的变化在控制体型转变的过程中以及增强子在形态学进化中发挥至关重要的作用。
原文解析第一步，通过对不同哺乳动物，包括低等蛇类（具有小腿骨残留的蟒蛇和巨蛇等，真心不知道还有这一现象）和高等蛇类（完全失去四肢的眼镜蛇）的基因组测序，发现Shh的调控因子片段，即ZRS存在差异。
第二步，利用CRISPR技术，将小鼠中的ZRS片段更换为蛇的同源片段，小鼠的四肢发生严重退化，几乎出现了“无四肢的鼠”，真心的蛇鼠一窝！最后，通过在上述缺陷小鼠中加入控制这一关键序列的因子，将小鼠的四肢拯救回来，完美的rescue实验啊。
大厨点评一二1、不要再用“画蛇添足”说别人多此一举啦，只能说不懂科学真心可怕，呵呵！家里小孩下次再上这篇文章的语文课，可以带着这篇论文去跟老师叫板啦！同时也顺便教育他们什么叫不服从权威，哈哈！2、本文的数据十分完整，唯一的不足就是没有将蛇里的关键调控序列更改为其他哺乳动物的序列，这样的话，理论上就应该出现真正的“画蛇添足”现象，应该更完美，更令人信服。
人蛇化实验过程文章
【实用版】
目录
1.人蛇化实验的背景和目的
2.实验过程的概述
3.实验中的关键步骤和难点
4.实验结果及其分析
5.实验的意义和影响
正文
人蛇化实验，顾名思义，是指将人类转化为蛇形的生物。
这个概念最早源于神话和传说，但在近年来，一些科学家开始尝试将这个想象变为现实，旨在探究生物形态的变化和基因编辑的极限。
本文将详细阐述人蛇化实验的过程和结果。
实验的背景和目的是出于对生物形态变化的好奇心和探索精神。
科学家们希望通过这个实验，能够深入了解基因编辑技术的潜力，以及生物形态变化的极限。
同时，他们也希望能够通过这个实验，寻找到治疗一些疾病的新方法。
实验过程的概述如下：首先，科学家们选取了一名自愿参与实验的志愿者，并对其进行了全面的身体检查，以确保其身体状况适合进行实验。
然后，科学家们利用基因编辑技术，将志愿者的基因进行修改，使其逐渐具备蛇的生物特性。
在这个过程中，科学家们需要克服许多关键步骤和难点，比如如何确保基因编辑的准确性，如何让志愿者的身体适应新的生物特性等。
实验结果显示，志愿者的身体逐渐出现了蛇的特征，比如皮肤变得更加粗糙，身体变得更加灵活等。
然而，由于实验的难度和风险较大，科学
家们并没有让志愿者完全转化为蛇形生物。
他们表示，这个实验的目的并不是要让志愿者完全变成蛇，而是希望通过这个实验，了解生物形态变化的可能性和基因编辑技术的潜力。
人蛇化实验的意义和影响深远。
它不仅让我们看到了基因编辑技术的巨大潜力，也为我们提供了一个思考生物形态变化和进化的新视角。
五步蛇假类圆线虫病变脏器及虫体形态初报吴家斌1,陈良菊2,刘立恒1*(1.江西农业大学动物科学技术学院,江西南昌330045;2.江西农业大学特种动物蛇类养殖示范基地)文章编号:1004-2342(2014)01-0058-02中图分类号:S851.34+7.4文献标识码:B五步蛇又名尖吻蝮、祁蛇。
常活动在潮湿的岩壁、灌木丛和农宅等地。
喜食鼠类、鸟类、蛙类、蟾蜍和蜥蜴。
随着畜牧业和特种经济动物养殖业的兴起,蛇作为一种肉用和药用价值极大的经济动物被人工养殖。
蛇病与人类的关系越来越密切,蛇体内外寄生虫病是蛇的常见病。
蛇体内寄生虫有球虫、隐孢子虫、绦虫(裂头蚴病)、线虫、鞭节舌虫等,其中线虫感染率较高[1],蛇线虫主要有蛔虫、棒线虫、假类圆线虫、泡翼线虫和似丽尾线虫等。
笔者查阅资料,目前未曾发现有关蛇假类圆线虫形态及其生活史的报道,本文旨在为更多人了解蛇假类圆线虫,深入研究假类圆线虫提供参考依据。
1材料与方法1.1患假类圆线虫病的五步蛇由江西农业大学特种动物蛇类养殖示范基地提供。
1.2器具解剖用具(实验室提供),数码相机,显微镜。
1.3试剂无水乙醇,甘油,乳酸,石炭酸。
1.4蛇的解剖将蛇及蟾蜍腹面朝上放在搪瓷方盘内,手术剪沿腹中线由后至前剪开,露出脏器并检查脏器表面有无黄豆或更大结节,照相并摘下有结节脏器于方盘,收集虫体于平皿中。
1.5乳酚的配制虫体染色及透明均按孔繁瑶主编《家畜寄生虫学》[2]方法操作。
1.6虫种类鉴定比对劳伯勋主编《蛇类的养殖及利用》及顾学玲《怎样办好一个养蛇场》资料[3,4]对假类圆线虫形态描述,初步确定虫种。
2结果2.1虫种确定观察病变脏器及虫体,比对有关资料,虫体是蛇假类圆线虫。
2.2蛇假类圆线虫病变肝脏形态观察五步蛇体内的浆膜组织及肝脏表面有多个大似黄豆或更大的白色或淡黄色包囊结节,尤以肝脏表面为多(图1),每结节内有1或数条活动虫体(图2);包囊结节内出现炎性病灶(图3),肝脏实质内无发现虫体。
第15卷第5期1999年10月中国生物化学与分子生物学报Chinese Journal of Bio chemistry and M olecular Biolo gyV o l.15,N o.5O ct.,1999* 中国科学院九五重大项目(KY951-Al-301-02),aculysin l前体的cDNA序列已经申报到EM BL核酸数据库,登录号为:AJ223284**联系人 T el:(021)64700892-371;Fax:(021)64700244E-m ail:ygon g@server.s 范春阳,1969年11月生,男,博士研究生收稿日期:1998-09-30,修回日期:1998-12-30五步蛇蛇毒金属蛋白酶cDNA的克隆和序列分析*范春阳 钱友存 杨胜利 龚 毅**(中国科学院上海生物工程研究中心,上海 200233)摘要 抽提五步蛇毒腺总RNA,通过反转录PCR(RT-PCR)扩增出五步蛇毒腺中一种低分子量金属蛋白酶(aculysinl)的cDNA,克隆到pGM T-vector并测定了全序列.推导其编码的蛋白质序列,发现aculy sinl是以酶原形式合成的分泌蛋白,酶原包括信号肽、前肽、金属蛋白酶成熟肽和间隔肽4个部分.金属蛋白酶成熟肽与其它蛇毒金属蛋白酶相比,蛋白质一级结构具有一定的同源性,有一个保守的Zn2+结合位点:HEXXHXXGXXH.Aculysinl含有6个半胱氨酸,推测形成3对链内二硫键.五步蛇低分子量金属蛋白酶cDNA的克隆,为研究蛇毒金属蛋白酶结构与功能的关系,以及开发治疗血栓药物打下了良好的基础.关键词 五步蛇,金属蛋白酶,克隆,序列分析Molecular Cloning and Sequence Analysis of the cDNAfor Metalloproteinase from the Venom of Agkistrodon AcutusFAN Chunyang,QIAN Yo ucun,YANG Sheng li,GONG Yi(S hang hai Re sear ch Center of B iotechnology,Chinese A cademy of S ciences,S hanghai 200233)Abstract T otal RN A was ex tracted from the veno m glands of Agk istrodon acutus.T he cDNA for one ty pe of lo w m olecular w eig ht metalloproteinase(aculysinl)was am plified by RT-PCR and clo ned into the pGEM T-v ecto r.Its cDNA sequence w as determ ined.T he cDNA sequence w ith 1290bp encodes an open reading fr ame(ORF)of417amino acids,w hich included a signal peptide of18amino acids,a proposed propeptide o f171amino acids,a m ature protein of203am ino acids and a spacer of25amino acids.Aculysinl w as synthesized as a pr ozym ogen w hich w as modified po st-translationally.T he aculysinl propeptide had a“cysteine sw itch”mo tif(HKICGVT)w hich w as differ ent from that(PKM CGVT)involved in the activation of metallo pro teinase prozy mo-gens.Aculysinl ex hibited a definite amino acid homology(49%-63%)to other metallopro-teinases from the snake veno ms.Like other metalloproteinases,it also had a conserved zinc-bindng do main(HEXXHXXGXXH).T here are6cy steine residues in aculy sinl w hich forms3disulfide bo nds.T he successful cloning o f the cDNA for the m etalloproteinase from A gkistr odon acutus lay sa go od foundation fo r the study o f structur e-function relationships of snake venom metallopro-teinases and fo r the development of the clinical medicines to cure the thr ombotic diseases.Key words A gkistrodon acutus,Metalloproteinase,Cloning,Sequence analysis 蝮亚科、蝰亚科毒蛇的蛇毒中含有丰富的与血液凝固和纤溶作用有关的蛋白水解酶,根据其结构不同,主要可分为丝氨酸蛋白酶和金属蛋白酶[1].蛇毒金属蛋白酶的特点是含有一个结合锌离子的保守区.蛇毒金属蛋白酶按照分子量大小可以分成三类:低分子量(20～30kD)、中分子量(30～60kD)和高分子量金属蛋白酶(60～90kD).目前,已报道的蛇毒金属蛋白酶至少有102种,来源于36种毒蛇,它们大部分引起出血作用,属于出血毒素;小部分属于非出血毒素[2].同一种蛇毒中可能含有几种金属蛋白酶,西部菱斑响尾蛇毒中已经分离出13种金属蛋白酶[3].分子量不同的蛇毒金属蛋白酶是由一系列蛇毒金属蛋白酶酶原加工而得来,这些酶原的共同特征都含有4个部分:信号肽、前肽、金属蛋白酶和间隔肽区,中、高分子量金属蛋白酶还有血小板聚集抑制因子区、富含半胱氨酸区或外源凝集素结合区[3].由于非出血金属蛋白酶可以直接降解纤维蛋白和纤维蛋白原,有可能成为临床上治疗栓塞性疾病的药物.五步蛇,又称尖吻蝮蛇、祁蛇、百步蛇,分布于我国华南地区和台湾省.国内外学者对五步蛇蛇毒金属蛋白酶进行了广泛研究.徐洵等从皖南产五步蛇蛇毒中分离出3种低分子量出血毒素AaHⅠ、AaH Ⅱ和AaHⅢ[5];朱中良等从皖南产五步蛇中分离出一中分子量出血毒素AaHⅣ[6];M ori等从台湾产五步蛇蛇毒中分离出5种出血毒素AC1-5,其中AC1、AC2和AC5属于低分子量出血毒素,AC3和AC4属中分子量出血毒素[7].目前,对五步蛇蛇毒金属蛋白酶的研究主要集中于酶的分离纯化和理化性质等方面,而从基因水平上的研究很少.本文通过比较几种蛇毒低分子量金属蛋白酶的cDNA序列,发现它们的非编码区和信号肽区同源性较高,设计了PCR兼并引物,利用RT-PCR方法克隆了一种低分子量金属蛋白酶cDNA,将推导的低分子量金属蛋白酶称为aculy sin1.1 材料和方法1.1 材料五步蛇产地为江西省南昌;大肠杆菌DH5A由本实验室保存;焦碳酸二乙酯(DEPC)、MOPS为AM RESCO公司产品;低熔点琼脂糖为Sigm a公司产品;各种限制性内切酶,IPT G,X-g al,pGEM T-vector载体,总RNA抽提试剂盒,M-MLV反转录酶均购自Prom eg a公司;T aq DNA聚合酶为加拿大AGCT公司产品;其余试剂均国产分析纯;引物由本中心合成.1.2 方法1.2.1 五步蛇毒腺总RNA的抽提:剪下蛇头,迅速取出毒腺,取50mg左右的毒腺于液氮中研磨成粉末,总RNA的抽提按照Pro mega总RNA抽提试剂盒说明进行.其余毒腺立即用液氮冷冻,置于-70℃低温冰箱备用.通过甲醛变性电泳和紫外分光仪检测抽提的总RNA的质量和浓度.1.2.2 cDNA第一条链的合成:取Olig od(T)251 L l(1L g/L l),总RNA样品2L l,加DEPC处理的水13L l,70℃,水浴5m in破坏RNA的二级结构,冰浴冷却以防止二级结构的生成.然后加入5×反转录缓冲液5L l,10mm ol/L dNTP混合物2L l,RNA 酶抑制剂(40U/L l)1L l,M-M LV反转录酶(200 U/L l)1L l至总体积25L l.42℃,水浴60min.95℃, 5min灭活反转录酶.反转录产物置于-20℃保存.1.2.3 PCR扩增金属蛋白酶cDNA:以反转录的第一条cDNA链作为模板,PCR条件:首先,94℃变性4min,然后按照94℃变性1min,55℃退火1 m in,72℃延伸2min,进行35个循环,最后72℃延伸10min.取5L l反应产物电泳检测,其余用Prom eg a公司PCR回收试剂盒纯化,溶于30L l无菌水备用.1.2.4 cDNA的克隆:DNA的连接反应,大肠杆菌的转化,质粒的抽提,限制性酶切反应等均按照常规方法进行.1.2.5 cDNA全序列的测定:在A BI373(Applied Biosy stem Inc.)荧光自动测序仪上完成.1.2.6 cDNA和蛋白质序列分析:采用PC/GENE 6.8软件.2 结果与讨论2.1 cDNA的扩增和克隆比较已报道的蛇毒低分子量金属蛋白酶cDNA 序列[8～10],其中5′,3′非翻译区和信号肽编码区保守性很强.5′端引物设计在起始密码子ATG附近,引物中有一处兼并位点;3′端引物设计在终止密码子T AA附近,引物中4个位置兼并.兼并引物设计的目地是为了有效的扩增出五步蛇低分子量金属蛋白酶cDNA,两条引物序列如下:5′Pr im er:5′-CCA AAT CCA G(C/T)C T CC AAA AT G-3′3′-Pr im er:5′-TT C CA(T/G)CTC C(T/A)(T/C) T GT TG(T/G/C)T TA-3′抽提得到的五步蛇毒腺总RNA通过1%甲醛变性琼脂糖电泳分析(Fig.1),28S和18S两条r RNA条带完整,说明m RNA未降解.紫外分光仪检测,D260/280=1.82,D260/230=2.0,浓度为0.8L g/ L l.以上结果表明RNA的质量和浓度符合反转录的要求.PCR产物电泳分析在1.3kb和1.5kb处有两条特异的DNA条带(Fig.2),推测由于五步蛇蛇毒688中国生物化学与分子生物学报15卷中含多种金属蛋白酶,可能一对兼并引物同时扩增出了两种金属蛋白酶的cDNA 序列.低熔点琼脂糖回收1.3kb DNA 条带,克隆到pGEMT -vector ,转化大肠杆菌DH5A ,经过蓝白斑筛选,在X-gal 平板上挑取白色菌落抽提质粒,通过PCR 和酶切反应鉴定重组子.Fig .1 Electrophoretic analysis of to-tal RNA from the venom glands of A gkistrod on acutusFig .2 Electrophoresis of RT -PCR product 1:1kb ladder ;2:PCR p roduct2.2 cDNA 序列分析测序结果表明,aculy sinl 的cDN A 全长1290bp,编码417个氨基酸的金属蛋白酶酶原.通过和其它金属蛋白酶比较,推测酶原包括18个氨基酸的信号肽,171个氨基酸的前肽,203个氨基酸的金属蛋白酶成熟肽和羧基端25个氨基酸的间隔肽(Fig.3). 酶原的信号肽符合信号肽的一般特征,中心富含长侧链疏水性氨基酸(Leu ),终止于短链亲水性氨基酸(Gly ).前肽中有一序列H KICGVT ,与其它金属蛋白酶酶原中称为半胱氨酸开关结构(cysteine sw itch motif )的序列PKM CGVT 略有差别,它的功能可能是半胱氨酸的巯基结合锌离子,从而抑制酶原的水解活性[11].Aculy sinl 与其它蛇毒金属蛋白酶相比,氨基酸序列具有一定的同源性(Fig .4):与西部菱斑响尾蛇(Crotalus atrox )出血毒素HT E [8]同源性63%,与西部菱斑响尾蛇非出血毒素Atrox -ase [12]同源性51%,与地中海东部蝰蛇(V ip era le -betina )金属蛋白酶Lebetase [10]同源性54%,与南部铜头蝮蛇(A gkistr odon contortrix contor itrix )非出血毒素Fibrolase [13]同源性55%,与台湾烙铁头(Trimeresur us mucrosquamatus )金属蛋白酶T M 3[9]同源性49%.Aculy sinl 成熟肽有一结合锌离子的保守区域HEXXHXXGXXH ,是金属蛋白酶的活性中心.Aculysinl 有6个半胱氨酸,形成3对二硫键:689第5期范春阳等:五步蛇蛇毒金属蛋白酶cDN A 的克隆和序列分析 Fig .3 cDNA sequen ce and deduced amino acid s sequ ence of the precurs or of aculys inl fr om the venom of A gkistrod on acutus Signal peptide:1-18;propep tide:19-189;mature protein:190-392(underlin ed);s pacer peptide:393-417.T he positions for PC R primers are underlined.Zinc b inding domain:333-343Fig .4 Amino acids sequ ence comparison of aculysinl w ith other sn ak e venom metalloproteinases(*)show s the identical amin o acids and (・)s how s th e sim ilar amino acids690中国生物化学与分子生物学报15卷Cys119-Cys198、Cys160-Cys182、Cys162-Cys165.推测成熟肽等电点为8.3,为碱性蛋白质,分子量约为23kD. Aculysinl与五步蛇蛇毒中已分离的出血毒素A c1、Ac2、Ac5、AaHⅠ和AaHⅡ分子量十分接近,但是,上述5种出血毒素都是酸性蛋白质.Aculysinl只是与AaHⅢ的分子量和等电点(>9)都比较接近.由于中国大陆五步蛇蛇毒金属蛋白酶的氨基酸序列未见报道,因此,还不能判断我们克隆的金属蛋白酶cDNA是否编码AaHⅢ毒素.Hite等[3]根据已报道的蛇毒金属蛋白酶cDNA 序列和蛋白质的结构,将蛇毒金属蛋白酶分成4类.本文报道的aculy sinl属于第一类,酶原在翻译后加工过程中,切除信号肽、前肽和间隔肽而成为成熟蛋白.我们将RT-PCR中扩增的1.5kb片段也进行了克隆和序列测定,推导的金属蛋白酶成熟肽与ac-uly sinl同源性为45%,属于第二类蛇毒金属蛋白酶,酶原羧基端还有一个血小板聚集抑制因子区域(序列未列出),这一结果进一步证实了蛇毒金属蛋白酶和血小板聚集抑制因子来源于一个共同的金属蛋白酶酶原前体.References1 Th edor I,Pirkle H.Thr om bin-lik e en zyme from snake venoms.In:Tu A T ed.H and book of Natural T ox in,Vol5.New York: M arcel Dekker,1991:225～2522 Bjarn as on J B,Fox J W.S nak e venom metallopend op eptidase.In:Barr ett A J ed.M ethod s in E nzymology,Vol248.New York: Academic Press,1995:345～3673 Hite L A,Jia L G,Bjarnason J B,Fox J W.cDNA s equences for fou r s nake venom,metalloproteinase:structure,class ification an d their r elationsh ips to mammalian r eproductive proteins,A rch Biochem Biophys,1994,308:182～1914 Bjarn as on J B,Fox J W.Hem or rhagic metalloproteinases from snake venom.J P harmac Th er,1994,62:325～3725 Xu X,W an g C,Liu J,Lu Z S.Purification and characterization of hemorrh agic com pon ents from A g kistrodon acutu s(hundred pace sn ake)venom.Toxic on,1981,19:633～6446 朱中良,龚为民,牛立文,滕脉坤.皖南尖吻蝮蛇毒出血毒素Ⅳ纯化和初步鉴定.生物化学杂志(Zhu Zhonglian g,Gong W eimin,Niu Liw en,T eng M aikun.Purification and char acteri-zation of hemorrhaginⅣfrom sn ak e venom of A gkistrod on acu-tus.Ch in B iochem J),1996,12(3):357～3597 M or i N,Nikar T,S ugihara H.Purification of a proteinas e(Ac5-proteinas e)and characterization of hemorrhagic toxins from the venom of th e hundred pace s nake(Ag kistr odon acu tus).T ox i-con,1984,22:451～4618 Hite L A,S hanon J D,Bjarnason J B,Fox J W.Sequence of a cDNA clone encoding the zinc metalloproteinas hem or rhag ic toxin e from Crotalus atr ox:eviden ce for s ignal,zymogen and dis integrin-like s tructures.B ioc hemistry,1992,31:6203～6211 9 Huang K F,Hun g C C,Pan F M,Chow L P,Ts ugita A,Chiou SH.Characterization of m ultiple metalloproteinases w ith fib-rinogenolytic activity from the venom of Taiw an habu (T rimer esu rus mucr osqu amatus):protein microsequ encing cou-pled w ith cDNA s equence analysis.B ioche m Bio p hys Re s Com-mun,1995,216:223～23310 Siigu r E,Aaspollu A,T u A T,Siig ru J.cDNA cloning and de-duced amino acid sequen ce of fibrinolytic enz yme(lebetas e)from Vip er a lebetina s nak e ven om.Biochem B iop hy s R es C ommun, 1996,224:229～23611 Jia L G,Shimokaw a K I,Bjarnason J B,Fox J W.Snake venom metalloproteinas es:structure,fun ction an d relationsh ip to the adams fam ily of proteins.Toxicon,1996,34:1269～127612 Baker B J,W on gvibuls ins S,Nybong J,T u A T.Nu cleotide se-qu ence encoding th e s nak e venom fibrin olytic enzyme atroxase obtained from a Cr otalus atr ox venom gland cDNA library.Ar ch Biochem Biophys,1995,317:357～36413 Randolph A,Chamberlain S H,C hu H L,Retzios A D,M ar klandF S Jr,M asiarz F R.Amin o acids sequ ence of fibrolas e,a direct-actin g fibrin olytic enzyme from A g kistrocon contr otr ix controtrix v enom.P rotein S ci,1992,1:590～600691第5期范春阳等:五步蛇蛇毒金属蛋白酶cDN A的克隆和序列分析 。
桂北五步蛇金属蛋白酶原基因800bp片段的克隆和序列分析樊晓晖;杨海波;何先保;黄企光;黎肇炎【期刊名称】《广西医科大学学报》【年(卷),期】2001(18)6【摘要】目的:扩增桂北五步蛇金属蛋白酶原基因,并对其进行序列分析.方法:从广西桂北山区五步蛇毒腺中抽提蛇毒总RNA,采用一步法(RT-PCR和PCR在同一试管内进行)扩增金属蛋白酶原基因,对其进行电泳检测,得到3条特异的DNA条带,大小分别为1.5kb、1.3kb和800 bp,利用平端连接方法将800 bp克隆至pGEM-T 载体,挑选白色菌落,用酶切和PCR法对其进行鉴定.提取阳性菌落进行测序并推导编码的氨基酸序列.结果:信号肽和前肽和已报道的皖南五步蛇金属蛋白酶很相似,同源性为97.9%,但仅含有部分金属蛋白酶成熟肽的氨基酸序列.结论:推测此800 bp 片段为广西五步蛇金属蛋白酶原基因的一部分.【总页数】4页(P785-788)【作者】樊晓晖;杨海波;何先保;黄企光;黎肇炎【作者单位】广西医科大学微生物及免疫学教研室,;广西医科大学微生物及免疫学教研室,;广西医科大学微生物及免疫学教研室,;广西医科大学微生物及免疫学教研室,;广西医科大学微生物及免疫学教研室,【正文语种】中文【中图分类】Q78【相关文献】1.桂北五步蛇金属蛋白酶原基因1137bp片段的克隆和序列分析 [J], 杨海波;樊晓晖;侯小琼;黄企光;黎肇炎2.桂北五步蛇纤溶酶金属蛋白酶基因的克隆和序列分析 [J], 樊晓军;Guben,F3.桂北五步蛇纤溶酶金属蛋白酶原基因的初步研究 [J], 杨海波;樊晓晖4.椰心叶甲蛹酚氧化酶原cDNA片段的克隆与序列分析 [J], 刘奎;林健荣;符悦冠;彭正强;金启安5.五步蛇蛇毒金属蛋白酶cDNA的克隆和序列分析 [J], 范春阳;钱友存;杨胜利;龚毅因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
蕲蛇蛇毒的研究进展刘宇翔;刘瑶;冯露雅;郭德志;刘明芳【摘要】蕲蛇具有抗炎镇痛、抗肿瘤的药理作用,主要物质成分为蛋白质、氨基酸类成分、磷脂类成分以及核苷类成分。
蛇毒的主要成分是蛋白和多肽,其酶类的作用和应用广泛。
因此,蛇类生物制品药理作用和药效物质值得深入研究。
本文通过查阅国内外相关文献和2015年版《中国药典》(简称ChP2015),对蕲蛇蛇毒成分及蕲蛇的药理活性研究进展进行总结概括。
【期刊名称】《生物化工》【年(卷),期】2018(004)006【总页数】5页(P137-141)【关键词】蕲蛇;蛇毒;研究进展【作者】刘宇翔;刘瑶;冯露雅;郭德志;刘明芳【作者单位】[1]湖南省永州市第一中学,湖南永州425100;[2]永州市异蛇科技实业有限公司,湖南永州425199;[2]永州市异蛇科技实业有限公司,湖南永州425199;[2]永州市异蛇科技实业有限公司,湖南永州425199;[1]湖南省永州市第一中学,湖南永州425100;【正文语种】中文【中图分类】R996.3蕲蛇又名五步蛇，学名尖吻蝮（Agkistrodonacutus），在我国分布较广，是我国十大剧毒蛇之一，其中又以武夷山山区和皖南山区储量最多，其毒液主要作用于血液系统，引起出血、肿胀与局部组织坏死。
蕲蛇为蝰科动物五步蛇除去内脏的干燥体，味甘咸、性温；有毒。
归肝经。
功效为祛风，通络，止痉。
用于风湿顽痹，麻木拘挛，中风口眼㖞斜，半身不遂，抽搐痉挛，破伤风，麻风，疥癣[1]。
蕲蛇蛇毒是从蕲蛇的毒腺中分泌的一种毒液，它是一种生物毒素（Biotoxin）。
蛇毒的主要生物学功能是帮助蛇捕食和消化食物，毒蛇分泌的毒液能快速使猎物死亡。
一般蛇毒的新鲜毒液呈粘稠的半透明液体，有特殊的腥味[2]，摇晃时易起泡沫，呈弱酸性，平均每条蛇咬物一次排出的毒液量222.2 mg，毒液中固形物含量为26.2%，含水量为65%～80%，常温下易失活，置冰箱中一周会有部分失去活力[3]。
五步蛇咬伤临床研究进展
李清平;周文忠;刘治昆
【期刊名称】《蛇志》
【年(卷),期】2012(24)1
【摘要】@@ 五步蛇是我国特有蛇种,是我国常见的剧毒蛇之一.五步蛇毒属血循毒,中医称火毒.被其咬伤后患者除有全身中毒症状外,咬伤局部可出现沿患侧肢体向上肿胀、疼痛、压痛等症状,严重者可致患肢坏死.患肢一旦出现坏死,难以痊愈,严重影响患肢功能,导致患者生活质量下降.
【总页数】4页(P58-61)
【作者】李清平;周文忠;刘治昆
【作者单位】广西桂林市中医医院外科,广西桂林,541002;广西桂林市中医医院外科,广西桂林,541002;广西桂林市中医医院外科,广西桂林,541002
【正文语种】中文
【中图分类】R646
【相关文献】
1.双黄蛇药散治疗五步蛇咬伤的临床观察 [J], 莫玉霞;熊广;王丹英
2.蛇伤饮治疗五步蛇咬伤的临床观察与护理体会 [J], 陈红艳;全秋艳
3.中西医结合治疗五步蛇咬伤患肢肿胀的临床观察 [J], 周丽;李清平;周文忠
4.血小板计数在五步蛇咬伤中的临床意义 [J], 乐冬友;徐自强;王志英
5.蛇伤散外敷联合艾灸治疗五步蛇咬伤的临床观察与护理 [J], 夏瑜;俞利霞;袁丞达;张彩云;刘冰
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一种新的五步蛇蛇毒类凝血酶Cdna的克隆和序列分析梁宁生;刘滔滔;贺海平;谢裕安;蒙子卿;梁安民【期刊名称】《广西医科大学学报》【年(卷),期】2002(019)001【摘要】目的:克隆出五步蛇的类凝血酶cDNA,为研究其结构和功能的关系,并为下一步基因表达开发抗血栓药物提供依据和基础.方法:从五步蛇蛇腺中提取了总RNA,通过反转录合成第一链cDNA,经PCR 扩增出五步蛇毒腺中类凝血酶TLE1的cDNA片段,并将其连接到质粒载体扩增,然后进行DNA测序.结果:成功克隆出一种新的五步蛇类凝血酶的cDNA片段.此片段全长794bp,包括编码部分的全长为777bp.推导其编码的蛋白质序列为258个氨基酸,其中包括18个氨基酸的信号肽,6个氨基酸的前肽和234个氨基酸的成熟氨基酸顺序.TLE1成熟肽与其它蛇毒类凝血酶相比,蛋白质一级结构具有较高的同源性.结论:从五步蛇中成功克隆出一种新的类凝血酶cDNA,并确定了它的DNA顺序.【总页数】4页(P27-30)【作者】梁宁生;刘滔滔;贺海平;谢裕安;蒙子卿;梁安民【作者单位】广西肿瘤研究所,南宁,530021;广西肿瘤研究所,南宁,530021;广西肿瘤研究所,南宁,530021;广西肿瘤研究所,南宁,530021;广西肿瘤研究所,南宁,530021;广西肿瘤研究所,南宁,530021【正文语种】中文【中图分类】R991【相关文献】1.一种新HDM2剪接变异体的cDNA克隆与序列分析 [J], 梁爱华;张国强;张志云2.岩栖蝮蛇类凝血酶纯化、cDNA克隆和序列分析 [J], 孙德军;杨春伟;杨同书;颜炜群;王伟3.蛇毒类凝血酶Calobin cDNA的设计合成与克隆 [J], 袁盛凌;段海清;张兆山4.五步蛇蛇毒金属蛋白酶cDNA的克隆和序列分析 [J], 范春阳;钱友存;杨胜利;龚毅5.白唇竹叶青蛇毒类凝血酶基因的克隆和序列分析 [J], 宋锡迅;余晓东;林奕心;和七一;李恒因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
