标准的-定量Q-PCR仪器的具体使用步骤和操作方法

荧光定量PCR仪操作规程1．开机程序（1）打开电脑，进入桌面。

（2）打开PCR仪器的电源开关（注：该仪器有两个电源开关，一个控制PCR 仪，一个控制光源系统）。

（3）双击桌面上的软件图标，点击“yes”,进入软件的主菜单。

(4)或打开开关，视窗上显示“SELF TEST”，显示10秒中后，显示RUN-ENTER 菜单：“RUN ENTER PROGRAM”准备执行程序。

2．关机程序(1) 保存数据，退出软件的主菜单。

(2) 关掉电脑，关闭PCR仪器的电源开关。

3.程序文件的设置及打开(1)实验程序已预先设定点击软件左方主目录中的“Library”，进入该界面后。

选择“ViewProtocol(查看协议)”页面，根据路径，找到预存的程序文件。

放入样本管，关紧盖子。

运行已经编好的程序，则直接按《Proceed》，用箭头键选择已储存的程序，按《Proceed》，则屏幕显示：“-ENABLE DISABLE HEATED LID” 按《Proceed》选择ENABLE，则开始执行程序。

(2)创建新的程序文件点击软件左方主目录中的“Workshop”，进入该界面。

选择“Edit Prot ocol”页面，输入相应的温度、时间、重复的循环数（Repeats），增加或删除步骤（Cycle和Step），在“Select data collection step（s）”中选择需要进行荧光收集的步骤。

完成后，在“Protocol Filename”中输入程序的文件名，点击“Save this protocol”。

如果要输入新的程序，则在RUN-ENTER菜单上用箭头键选择ENTER PROGRAM，按《Proceed》，屏幕显示“ -NEW LIST EDIT DELET”，按《Proceed》，1）选择NEW，命名新的程序，最多8个字母，输入后按《Proceed》确认。

输入程序步骤：名字输入后，显示“ STEP1TEMP GOTO OPITON END”，按《Proceed》则可以输入温度（0～100℃），按《Proceed》确认后，则可以输入孵育时间，用《Select》键移动光标，输入数字，完成后按《Proceed》确认，跳到下一步，输入方式同上。

pCR仪操作流程PCR（聚合酶链反应）仪是一种广泛应用于分子生物学实验室的设备，用于扩增和复制DNA序列。

正确的操作流程对于获得准确的实验结果至关重要。

本文将介绍pCR仪的基本操作流程，以确保您能够正确操作和利用该设备。

1. 准备实验材料和试剂在进行pCR实验之前，确保准备齐全所需的实验材料和试剂。

这些包括DNA模板、引物、dNTPs（脱氧核苷酸三磷酸盐）、聚合酶、反应缓冲液、电泳试剂等。

确保所使用的试剂和材料都在保质期内，并按照实验要求进行储存。

2. 设定PCR参数根据实验需要，设置PCR参数，包括温度和时间控制。

一般来说，PCR反应需要进行一系列的循环，每个循环包括三个主要的步骤：变性、退火和延伸。

根据模板DNA的GC含量和引物的特异性，可以确定合适的变性温度和时间，引物的退火温度和延伸温度。

确保参数的设定符合实验要求。

3. 加入试剂和混合根据PCR反应的体积要求，将所需试剂和混合物精确配制。

通常情况下，将DNA模板、引物、dNTPs、聚合酶和反应缓冲液组合在一起，并轻轻混合。

通过离心操作，使反应混合物沉淀在管底，减少液面上的气泡。

4. 加热反应混合物将反应混合物置于已预热的PCR仪中。

确保反应管的盖子紧闭，以防止外界的污染和蒸发。

根据设定的PCR参数，在仪器中进行加热和循环操作。

确保温度的变化符合实验要求，以保证DNA的扩增和复制过程能够进行顺利。

5. 检测PCR产物PCR反应完成后，取出反应管，并将反应产物进行检测。

最常用的方法是利用琼脂糖凝胶电泳，将PCR产物在电泳仪中进行分离。

通过比较PCR产物与分子量标准品之间的迁移距离，可以确定扩增的目标DNA片段的大小。

6. 结果分析和记录根据电泳结果，分析PCR反应的结果。

正常情况下，目标DNA片段应该有明确的条带出现。

记录结果，并进行数据分析和解读。

如果实验结果不符合预期，可能需要重新优化PCR反应的条件或调整试剂的浓度。

总结：pCR仪操作流程涉及到实验前的准备、PCR参数的设定、试剂的加入和混合、反应体系的加热、PCR产物的检测、结果分析和记录等步骤。

荧光定量PCR仪使用方法
（1）开机：荧光定量PCR仪、与之相连的电脑
（2）放样：点击PCR仪上的“Eject”，放入已离心过的八连管样品，再缓慢关闭接样台。

（3）点击电脑上的“E盘”，找到“qRT-PCR“文件夹，找到相对应的应用程序，如做蓝耳，就选择”PRRSV”文件夹中的程序；腹泻则为“PEDV”.
（4）编辑：点开任一程序后，点击“Sample Editor“编辑所放样品的地址以及信息。

（5）存档：点击“File“选择”Saveas“，存到相对应的文件夹；务必修改名称（日期、时间）。

（6）传出：打开编辑好的程序，点击“T ool”→“Instrument Manager”，待灯变绿后（5-7s），再点击“Send/Receive Experiment”，找到要运行的程序，再点击＞，便传到荧光定量PCR仪上。

（7）运行：选中荧光定量PCR仪上要工作的程序，点击“Start”开始工作。

（8）传入：待PCR结束后，打开运行程序，点击“T ool”→“Instrument Manager”，待灯变绿后（5-7s），再点击“Send/Receive Experiment”，选中相对应的文件夹，找到已结束程序，再点击＜，便传到电脑上。

（9）实验结果分析：点击已保存已完成的程序，点击“Analysis”，便可进行实验结果的分析。

（10）关机：点击PCR仪上“Eject”，取出八连管；点“Exit”→”YES’退出，关闭电源，拔下插头即可。

另用专用塑料袋套上，以免灰尘侵入缩短使用寿命。

Q-PCR仪器使用具体步骤1.首先将Mx3000P电源打开，大约1min，将会听到启动的声音。

然后打开桌面上的“Mx3000P软件”，确定软件界面右下面的联机标志呈绿色。

如果不是绿色而是红色，软件会提示Instrument to PC communications have failed ,这时只需稍等片刻，待仪器自检完成，会自动连接计算机；2.在“Mx3000P软件”的“New Experiment type”弹出框中选择需要的实验类型：通常选择“SYBR? Green(with dissociationcurve),点击“OK键”；3.确定“Mx3000P软件”界面上面（Selection命令下）的卤钨灯已经打开。

绿色说明已经打开，黄色说明正在预热，红色说明没有打开；4.最好在仪器与光源预热20min后开始实验；5.在“Plate Setup”里，对96孔板的各空进行设定。

设定Standard(标准品)、NTC（阴性对照）、Unknown(样品)等，并选择正确的通道（FAM,HEX,ROX,Cy5）.对于标准品，设定其模板浓度，还需要对不同的样品进行编号。

或者点击“Import”,导入以前使用的96孔板设定。

具体为：●首先选择Welltype中的Unknown，然后选择下方的ROX、SYBR;●选择Reference dye的ROX●用Replicate symbol对每个样品进行标记（1,2,3，XXX等）6. 切换至“Thermol pro ”界面,进行PCR 循环的设定。

可以改变各者点击“Import ”， 一步结束时采集荧光信号，采集荧光信号，一般用作溶解曲线分析。

7. “ Thermol pro ”设定结束后，点击软件界面右上方的“Run ”,软件界面右下方会出现运行状态显示框“Run Status ”, 可以选择“Turn lamp off at end of run ”,点击“start ”开始实验，弹出“保存文件的对话框”，选择后保存，弹出另外一个对话框，选择第二个（预热之后跑），另外在运行过程中可通过点击“Add cycles ”来增加扩增的循环数，在PCR 运行结束后软件将自动关闭卤钨灯。

PCR仪操作规程一、PCR仪的准备工作1.将PCR仪放置在坚固平稳的工作台上。

2.确保PCR仪能够正常通电，并连接稳定的电源。

3.检查PCR仪是否有足够的耗材，如：PCR试剂盒、PCR板、PCR管等。

4.确保PCR仪的外壳干净整洁，无尘。

5.检查PCR仪的温控系统是否正常运作，温度探头是否正确连接。

二、程序设置1.打开PCR仪的电源，等待仪器启动。

2.进入PCR仪的操作界面，在设置中选择需要运行的PCR程序。

3.设置PCR程序的相关参数，包括：反应体系、产物大小、温控方式、梯度设置等。

4.确认无误后，保存设置。

三、样本处理1.根据实验需求，准备所需的样本和试剂。

2.将待测样本和控制样本分别加入PCR管中，并按照试剂盒说明书的要求，分别加入PCR试剂。

3.小心混匀，避免产生气泡。

4.使用电动移液器，将样品转移到PCR板的相应孔中。

5.确保试管盖扣紧并密封，避免蒸发和污染。

四、样品放置1.使用PCR板架，将PCR板放入PCR仪中。

2.确保PCR板放置稳定，不晃动。

3.在关闭仪器时，检查所有的孔位是否已经满。

4.根据实验要求选择合适的PCR模式。

五、运行PCR程序1.确保PCR仪处于关机状态，将PCR板放入PCR仪中。

2.关闭PCR仪的盖子，并轻轻按下，确保盖子紧密贴合。

3.打开PCR仪的电源，启动PCR程序。

4.开始运行程序后，定期检查PCR仪的运行状态，确保温度的稳定和反应的正常进行。

5.在PCR反应过程中不要移动或震动PCR仪。

6.必要时对PCR反应进行监测，可使用实时荧光PCR功能。

六、PCR反应后处理1.PCR反应结束后，停止PCR程序运行。

2.打开PCR仪盖子，取出PCR板。

3.将PCR板置于洗涤台上，进行样本的后续处理。

4.根据实验要求，可以选择对PCR产物进行凝胶电泳分析或进一步测序。

七、清洁和维护1.每次使用后，将PCR仪的工作台面、盖子等部位用75%乙醇擦拭干净。

2.定期清洁PCR仪的内部，检查温控系统的工作情况。

PCR仪操作指南
引言：
PCR（聚合酶链反应）是一种常用的分子生物学技术，用于检测和扩
增特定DNA序列。

PCR仪是进行PCR实验的必备设备之一，本操作指南将
详细介绍PCR仪的使用流程和操作注意事项，旨在帮助使用者正确操作PCR仪，提高实验的成功率。

一、实验前的准备工作：
1.根据实验需要，选择合适的引物，设计PCR反应体系。

2.准备好PCR反应物，包括DNA模板、引物、核酸酶、脱氧核苷酸三
磷酸、聚合酶等。

3.根据PCR仪的使用手册，检查设备的工作状态，保证设备正常运行。

4.准备PCR反应管，确保干净无污染。

二、操作步骤：
1.打开PCR仪电源，启动设备。

根据使用手册，设置合适的温度和时
间参数，并选择合适的热启动模式（立即开始或延迟开始）。

2. 调整PCR仪的温度设置。

根据PCR实验需要，设置热循环的温度
范围和时间参数，包括Denaturation（变性）、Annealing（退火）和Extension（延伸）步骤的温度和时间。

3. 预热PCR仪至所需的初始温度。

根据实验需要，将PCR仪的温度
调整至Denaturation步骤所需的温度（通常为95℃）。

4.添加PCR反应物至PCR反应管中。

按照预先设计的PCR反应体系，
将DNA模板、引物、核酸酶、脱氧核苷酸三磷酸、聚合酶等加入PCR反应
管中。

5.将PCR反应管放置在PCR仪的样品架中。

确保PCR反应管放置稳定，避免管内反应物溢出。

6.关闭PCR仪的上盖。

一、总RNA提取流程适量超低温冻结的动物组织，研钵内加液氮研磨，至粉末状♓加入适量（100mg组织加1ml）RNAiso Plus，将研磨成粉末状的样品完全覆盖♓室温静置，直至样品完全融化，再用研杵继续研磨至裂解液呈透明状♓将匀浆液转移至离心管，室温静置5min，12000g 4℃离心5min♓小心吸取上清液，移入新的离心管中（切勿吸取沉淀）♓加入氯仿（为RNAiso Plus 的1/5 体积量），盖紧离心管盖，用手剧烈震荡15s♓室温静置5min，12000g 4℃离心15min♓匀浆液分为3层，吸取无色上清液至新离心管中♓上清液中加入等体积的异丙醇，上下颠倒离心管充分混匀，在15-30℃下静置10min♓12000g 4℃离心10min，离心后，底部会出现沉淀，即为RNA♓小心弃去上清，沿管壁加入1ml 75%乙醇，轻轻上下颠倒洗涤离心管管壁♓12000g 4℃离心15min，小心弃去乙醇，超净台内干燥2-5min♓加入适量（一般40-50ul试沉淀大小）DEPC处理水中，必要时可用移液枪轻轻吹打沉淀♓待RNA沉淀完全溶解后于-80℃保存二、RT-PCR1、冰上在一个管子中制备如下反应混合物：2、轻柔混合，微量离心机离心3-5秒。

70°C孵育混合物5min，冰冷却，短暂离心，收集沉淀。

3、管子置于冰上，按指定顺序加入以下成份：1. 合成适合PCR 扩增的第一链cDNA①冰上在一个管子中制备如下反应混合物：模板RNA*：总RNA 0.1-5μg或poly(A)+ RNA 10ng- 0.5μg或特异RNA 0.01pg - 0.5μg引物：oligo(dT)18引物(0.5μg/μl) 1μl或随机六聚物引物(0.2μg/μl) 1μl或序列特异性引物15–20pmolDEPC处理过的水to 12μl轻柔混合，微量离心机离心3-5秒。

②70°C孵育混合物5min，冰冷却，短暂离心，收集沉淀。

QS7 实时荧光定量PCR仪操作规程及注意事项
操作程序
1．开机顺序：先开电脑，待电脑完全启动后再开启仪器。

等到仪器自检完成进入菜单界面后（约三分钟），即可打开QS7软件,进行实验。

2．开启QS7软件：双击QS7软件icon，点击instrument console，将net work 上仪器add to My Instrument。

3．当软件开启后，按培训规范设定软件,plate, run method。

结果保存在D:/q-PCR data 文件夹中。

否则仪器维护过程中丢失，平台概不负责。

4．实验结果必须刻录在自备光盘中，严禁使用U盘。

5．关机顺序：确认实验结束后，点击instrument console，将My Instrument上仪器remove from 到net work。

然后关闭QS7软件，在关掉仪器电源，关闭电脑。

6．实验结束后带走自己的样品板，清理实验台。

注意事项：仪器使用者必须预约使用。

1.使用正确的Block, Heated Cover和Tray Adapter：
QS7可以使用96wells（0.2ml）和384wells两种模块，按照培训操作正确更换模块。

2.使用正确的实验耗材：
QS7可以使用：96孔板（0.2ml）；0.2ml光学反应板；0.2ml八联管；384孔板。

3.在样品制备和配置反应液过程以及仪器操作过程中，必须戴无粉手套。

4.按照正确的开关机顺序操作，有助于延长仪器使用寿命，减少仪器故障频率。

范围和适用性本实验适用于使用StepOnePlus™实时PCR仪对DNA PE、DNA PE Index、SE 文库以及Exon Capture组、转录组、表达谱、Small RNA组、表观遗传组等制备的文库进行上机前的精确定量。

摘要荧光定量PCR实验是以Agilent 2100 Bioanalyzer对文库的检测结果为参照, 使用StepOnePlus™实时PCR仪对文库进行定量,得出待测文库浓度，为之后的Cluster制备提供浓度依据。

该实验的主要内容包括：（1）梯度稀释标准品；（2）按实验要求稀释样品；（3）配制反应预混液；（4）加样；（5）设置反应程序；（6）运行实验；（7）分析实验结果，计算待测样品浓度。

整个流程需要3-4小时。

缩写词和SOP中专业术语的解释实验材料及方法1 实验试剂和耗材1.1试剂表1-1 实验所需试剂1.2 耗材表1-2 实验所需耗材2 实验仪器设备表2-1 实验所需仪器设备3 实验操作流程3.1 填写Q-PCR实验登记表样品的交接按照《质控组样品交接管理规程》执行。

实验前，先在“表单准备区”将要检测的样品在《Q-PCR实验登记表》中填写好，并根据“文库交接检测”文件夹中《____组文库检测结果》中的待测样品的顺序按顺序填到《Q-PCR 实验登记表》上，并在右上角注明批次后打印出来。

然后将需要检测的样品的样品名和文库号按照《Q-PCR实验登记表》上的顺序粘贴到“文库核对&存放位置”文件夹中的《文库检测前核对表》Excel表中，等待核对样品信息。

3.2 稀释标准品开始实验前，到-20℃冰箱和冰柜中将实验所需的标准品和样品取出，并按Q-PCR实验登记表上的顺序排好，并到表单准备区，用扫描枪将样品的文库号扫描到“文库核对&存放位置”文件夹中的《文库检测前核对表》Excel表中进行核对，核对结果为“错错错错”，则样品不正确需重新找取样品信息相同的样品；核对结果为“对”，则样品正确。

PCR仪的使用步骤及原理引言聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction，简称PCR）是一种在分子生物学研究中广泛应用的技术。

PCR仪作为PCR操作的关键工具，能够快速无误地扩增目标DNA 序列，为科学研究和临床诊断提供了重要的支持。

本文将介绍PCR仪的使用步骤及原理。

PCR仪的使用步骤以下是PCR仪的使用步骤：步骤一：准备反应体系1.准备PCR反应液，包括DNA模板、引物、核酸酶、缓冲液等。

2.将反应液分配到PCR试管中，确保每个试管的反应体系一致。

3.在一个试管中加入水作为空白对照。

步骤二：设置PCR仪的程序1.打开PCR仪，确保仪器处于正常工作状态。

2.设置PCR仪的反应程序，包括温度、时间等参数。

根据不同的PCR实验设计，设置合适的程序。

步骤三：装载样品1.将准备好的PCR试管放置在PCR仪的样品架上。

2.检查样品架是否放置正确，确保试管紧密接触PCR仪的加热块。

步骤四：运行PCR程序1.关闭PCR仪的盖子，启动程序运行。

2.PCR仪将根据设定的程序依次进行加热、变性、退火和延伸等反应步骤。

3.在PCR反应结束后，PCR仪会保持在设定温度，以保持PCR产物的稳定。

步骤五：PCR产物分析1.关闭PCR仪的电源，打开PCR试管。

2.可通过凝胶电泳、PCR产物可视化试剂等方法对PCR产物进行分析。

3.根据实验需求，进一步处理PCR产物。

PCR仪的原理PCR仪采用了温度循环技术，利用特定的酶（聚合酶）和核酸引物来引导DNA链的复制。

其原理主要包括以下三个步骤：1.变性（Denaturation）：通过升高温度（通常为95℃），使DNA双链分离成两条单链DNA。

2.引物结合（Annealing）：降低温度（通常为55-60℃），使引物与目标序列的单链DNA互补结合。

3.延伸（Extension）：增加温度（通常为72℃），使聚合酶在引物的引导下合成新的DNA链。

通过不断重复这三个步骤，PCR仪可以在短时间内扩增特定的DNA序列。