大鼠FMS样酪氨酸激酶3(Flt3)检测ELISA试剂盒kit
- 格式:doc
- 大小:87.50 KB
- 文档页数:2
急性淋巴细胞白血病FLT3基因突变的发现及临床意义赵欣;唐克晶;田征;陈礼平;秘营昌;王建祥【期刊名称】《中国医学科学院学报》【年(卷),期】2009(031)005【摘要】目的研究急性淋巴细胞白血病(ALL)患者fms样酪氨酸激酶3(FLT3)基因突变情况.方法采用PCR方法检测61例ALL患者的FLT3基因内部串联重复突变(FLF3-ITD)与ASP835突变(FLT3-TKD),并以7名健康志愿者为对照,对检测结果进行分析并探讨其临床意义.结果 61例ALL患者中,2例出现FLT3-ITD,1例出现FLT3-TKD.结论少数ALL患者体内存在FLT3突变.【总页数】5页(P522-526)【作者】赵欣;唐克晶;田征;陈礼平;秘营昌;王建祥【作者单位】中国医学科学院,北京协和医学院,血液学研究所,血液病医院实验血液学国家重点实验室,天津,300020;中国医学科学院,北京协和医学院,血液学研究所,血液病医院实验血液学国家重点实验室,天津,300020;中国医学科学院,北京协和医学院,血液学研究所,血液病医院实验血液学国家重点实验室,天津,300020;中国医学科学院,北京协和医学院,血液学研究所,血液病医院实验血液学国家重点实验室,天津,300020;中国医学科学院,北京协和医学院,血液学研究所,血液病医院实验血液学国家重点实验室,天津,300020;中国医学科学院,北京协和医学院,血液学研究所,血液病医院实验血液学国家重点实验室,天津,300020【正文语种】中文【中图分类】R733.71【相关文献】1.PCR-SSCP分析急性淋巴细胞白血病患者FLT3基因及FLT3/ITD基因突变及意义 [J], 徐兵;李琳;唐家宏;周淑芸2.老年急性非早幼粒细胞白血病NPM1及FLT3-ITD基因突变特征及临床意义 [J], 肖蓉;王晓冬;姜涛;万纯黔;李慧;李成龙;车菲菲;陈姣;黄晓兵;王春森3.FLT3基因突变在急性早幼粒细胞白血病中的表达及临床意义 [J], 张娜; 肖敏4.FLT3基因在成人急性淋巴细胞白血病中突变的特征及临床意义 [J], 张雪楠;李威;郭荣群;李文文;徐婷婷;姜中兴5.急性淋巴细胞白血病患者FLT3基因及FLT3/ITD基因突变的检测及临床意义 [J], 徐兵;李冰;唐家宏因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
急性髓系白血病FLT3-ITD基因突变分析陈姣;王晓冬;贾永前【摘要】AIM:To investigate the mutation of FLT3-ITD gene in the patients with newly diagnosed acute myeloid leukemia (AML). METHODS:From March 1, 2015 to June 1, 2017, 207 patients with AML admitted to de-partment of hematology, sichuan provincial people′s hospital were enrolled in this study. The bone marrow samples were collected from the patients. PCR was used to detect the mutation of FLT3-ITD gene. After the corresponding chromosome was obtained by R-banding, the cells were made into strips and banding. Twenty karyotypes with relatively cleavage were automatically selected from each specimen to complete karyotyping. By analysis of the clinical data and following-up the prognosis, the FLT3-ITD gene mutation in diagnostic and evaluative values for AML were performed. RESULTS:FLT3-ITD gene mutation was found in 42 cases of 207 AML patients, the positive rate was 20. 29 % . FLT3-ITD positive patients showed 3 bands. FLT3-ITD gene mutation in 42 patients with positive results showed that FLT3-ITD gene mutations in turn met the end to end, and insert a number of nucleotides, but all the mutations were in-frame mutations. According to the FAB and WHO standard, in 42 cases of FLT3-ITD positive positive patients, M0 accounted for 0.00% , M1 accounted for 2.38% (1/42), M2 accounted for 23.81% (10/42), M3 accounted for 0.00% , M4 accounted for 2.38% (1/42), M5 accounted for 69.05% (29/42), M6 accounted for 0.00% , M7 accounted for 2.38% (1/42). The white blood cell( WBC) level and complete response (CR) rate in FLT3-ITD positive patients were lower than those in FLT3-ITD negative patients (P<0.05). CONCLUSION:The WBC level and CR rate, which are lower in FLT3-ITD positive patients than those in negative patients, are the clinical risk factors. It will be helpful to determine the prognosis evaluation for AML pa-tients.%目的:探讨初发急性髓系白血病(AML)患者FLT3-ITD基因突变情况.方法:选择2015年3月1日~2017年6月1日四川省人民医院血液科收治的初发急性髓系白血病患者207例,取入组患者骨髓标本.采用PCR法检测FLT3-ITD基因的突变情况;采用染色体R显带技术在获得相应染色体后制片、显带,每份标本自动挑选出20个分裂相对清晰的核型完成核型分析,并结合临床资料、随访及预后等进行分析,评价FLT3-ITD基因突变在急性髓系白血病患者中的价值.结果:207 例 AML 患者的标本中42 例存在 FLT3-ITD 基因突变,阳性率为20.29 % . FLT3-ITD阳性患者中有3条显示带;42例FLT3-ITD基因突变阳性患者结果表明FLT3-ITD基因突变多依次首尾相接,并且其中插入多个核苷酸,但是所有的突变均为框内突变;根据FAB标准及WHO标准分级,42例FLT3-ITD阳性患者中M0占0. 00% ,M1 占2. 38%(1/42)、M2 占23. 81% (10/42)、M3 占0. 00% 、M4 占2. 38% (1/42)、M5占69.05%(29/42)、M6占0.00%、M7占2.38%(1/42);FLT3-ITD阳性患者的白细胞(WBC)水平和完全缓解(CR)率均低于FLT3-ITD阴性患者(P<0. 05).结论:FLT3-ITD基因突变阳性患者的WBC水平和CR率低于阴性患者,能作为临床危险因素用于AML患者预后的判断.【期刊名称】《中国病理生理杂志》【年(卷),期】2018(034)006【总页数】4页(P1115-1118)【关键词】FLT3-ITD基因;急性髓系白血病;预后评估【作者】陈姣;王晓冬;贾永前【作者单位】四川省人民医院血液科,四川成都610072;四川省人民医院血液科,四川成都610072;四川大学华西医院血液科,四川成都610041【正文语种】中文【中图分类】R557+.2;R363急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)是临床上常见的疾病,具有发病率高、死亡率高和治愈率低等特点,而基因突变是AML发生、发展的重要遗传性特性[1]。
FLT3基因及其与白血病的关系FLT3 基因即FMS样酪氨酸激酶3(Fms-like tyrosine kinase 3)也称为胎肝激酶2(fetal liver kinase-2)或人干细胞激酶1(human stem cell kinase-1 , STK-1),与集落刺激因子1受体(CSF1R或 FMS)、血小板衍化生长因子(PDGFR)、干细胞因子受体(KIT)等同属于Ⅲ型受体酪氨酸激酶 (class Ⅲ receptor tyrosine kinase , RTKⅢ)家族。
近年研究发现,FLT3基因突变与急性髓系白血病(AML)的发生、预后有关,本文就FLT3基因及其与白血病的关系作一综述。
1 FLT3的结构与表达人FLT3基因位于染色体13q12上,全长约100kb,共包含24个外显子。
其结构由胞外区、跨膜区和胞内区三部分组成,胞外区有5个免疫球蛋白样功能区,跨膜区有不连续的激酶作用位点,胞内区为氨基酸激酶催化域。
正常情况下FLT3表达于肝、脾、淋巴结、胸腺、性腺、脑等各种组织。
FLT3表达于多种人和鼠髓系及B 淋系细胞株。
在骨髓中,FLT3表达限于CD34+干/祖细胞。
小鼠骨髓移植实验显示缺乏FLT3干细胞重建T淋系及髓系的功能降低,说明FLT3在多能干细胞发生分化过程中起重要作用。
FLT3配体(FLT3 ligand,FL)为Ⅰ型跨膜蛋白,并可自膜释出成为可溶性同二聚体蛋白,表达于骨髓造血微环境组织,以及髓系、B淋系、T淋系造血细胞。
FLT3与FL在造血干/祖细胞的增殖和分化中起重要的调节作用。
当FL与FLT3的细胞外结构域结合时,FLT3二聚体化,使激酶结构域的活化环(activation loop,A loop)构象发生改变,酪氨酸残基磷酸化,从而与多种胞浆蛋白作用,介导一系列细胞内信号传导,导致细胞增殖和活化。
2 FLT3基因突变与白血病的关系正常情况下,FLT3的表达只限于CD34+细胞,而AML和ALL细胞中FLT3的表达与CD34表达并不同步,说明其为异常表达。
FLT3基因突变在急性早幼粒细胞白血病中的临床意义徐晓燕【摘要】(046探讨急性早幼粒细胞白血病发生中FMS样酪氨酸激酶3(FLT3)基因突变的临床意义。
方《取36例急性早幼粒细胞白血病患者,对其骨髓标本采用相应方法和技术检测FLT3基因D835位点基因突变和该基因内部串联重复(FLT3-ITD)情况,并分析FLT3-ITD、FLT3-D835基因突变和临床特点、疗效的关系。
锫*FLT3-ITD突变型外周血高WBC、骨髓低B、出血BB、疗效DCR者构成比均明显高于FLT3-ITD野生型(P<0.05);FLT3-D835突变型外周血高WBC者构成比远高于FLT3-D835野生型(P<0_05)。
砝铪FLT3-ITD基因突变情况与外周血WBC、骨髓、出血分级和临床疗效均存在有一定关联,而FLT3-D835基因突变情况仅与单纯外周血WBC有关,可根据基因突变情况评估此类患者的病情严重程度和有效性。
【期刊名称】《临床研究》【年(卷),期】2017(025)012【总页数】2页(P3-4)【关键词】FMS样酪氨酸激酶3;急性早幼粒细胞白血病;临床效果;临床意义【作者】徐晓燕【作者单位】[1]郑州大学附属洛阳中心医院血液内科,河南洛阳471000【正文语种】中文【中图分类】R733急性早幼粒细胞白血病属于急性髓系白血病患者中一种比较特殊的亚型,其主要临床表现为弥漫性血管内凝血、纤溶亢进导致较高出血倾向[1]。
此类患者的病情凶险,临床治疗难度较大且死亡率高。
目前临床上针对急性早幼粒细胞白血病患者尝试是维甲酸、蒽环类抗生素和砷剂药物联合应用方法,长期生存率有所改善[2-3]。
但是关于此类患者的发生机制、临床效果的影响因素等研究尚少,认识也尚浅。
鉴于此,本研究特选取36例急性早幼粒细胞白血病患者展开临床试验,详情如下。
1.1 临床资料选取医院2015年4月~2016年7月收治的急性早幼粒细胞白血病患者36例展开临床研究,纳入标准:均符合急性早幼粒细胞白血病相关诊断标准,均有新鲜的骨髓标本,均签署同意书;排除标准:存在有严重的并发症者,未接受常规治疗者,存在有可能影响本研究结果者,存在精神障碍或难以配合本次研究者。
・632・WET3在急性髓-幺itl胞白fin_病中的研究进展夏炳森1付娜娜1任翠爱1△[关键词]白血病,髓细胞性,急性;基因突变;FLT3[中图分类号]R733.71[文献标志码]A[文章编号]1004—2806(2009)11-0632—03急性髓细胞白血病(AML)是一组具有不同生物学特性的恶性血液肿瘤。
近年来,分子遗传学研究的进展使得大多数AML可以检出基因水平的异常,其中FLT3基因突变在AML发生及预后中起重要作用,并为自血病的靶向治疗提供了新的目标。
本文对此作一综述。
lFLT3FLT3(FM孓liketyrosinekinase-3)即FMS样酪氨酸激酶3,与c-kit、c-fms和PDGFR同属于Ⅲ型受体酪氨酸激酶(RTK)家族成员,其蛋白结构包括5个免疫球蛋白(Ig)样结构域组成的胞外区,1个跨膜区,1个近膜区(JM),以及胞内由激酶插入区分隔而成的2个酪氨酸激酶(TK)区n3。
FLT3基因位于染色体13q12,全长约100000bp,有24个外显子,编码993个氨基酸的蛋白质,是近年来发现的早期造血生长因子受体基因,FLT3的正常表达要早于c-kit、c-fms,仅限于早期祖细胞,主要调控早期造血,并与其配体(FLT31igand,FL)在造血干/祖细胞的增殖分化过程中起重要的调节作用‘豹。
2FLT3基因突变1996年首先在AML细胞中发现了FLT3突变,其突变类型是内部串联重复(FLT3/ITD)。
随后又发现了激酶区D835残基的错义突变(FLT3/KDM)。
另外在D835残基周围的编码区发现了点突变、缺失和插入等,FLT3高度保守激活环内FLT3一Y842C突变∞3。
FLT3突变在AML中最常见的形式有2种:一是FLT3近膜区内部串联重复突变(FLT3internaltandemduplication,FLT3-ITD),另一是累及激酶区活化环内的点突变(FLT3ryrosinekinasedomainmutation,FLT3一TKD)。
FLT3 突变的临床意义FLT3(Fms-like tyrosine kinase, FMS样的酪氨酸激酶3)属于III型受体酪氨酸激酶(receptor tyrosine kinase III, RTK III)家族成员,近年来,许多大样本研究已经证实FLT3的激活突变在AML的发生及疾病的进展中起到十分重要的病理作用。
具有FLT3/ITD激活突变的AML患者通常具有外周血白细胞计数高,临床预后较差,易复发等独特的临床特征,并且由于FLT3激活突变的检测方法简单易行,故有越来越多的研究者致力于将FLT3发展成为AML患者常规的检测手段用来指导AML患者的治疗和预后的判断以及作为微小残留白血病的检测手段,并将其作为白血病患者化疗药物的又一新的靶点(目前已经有针对FLT3-ITD突变进行治疗的药物。
)现已证实FLT3的激活突变主要有两种:内部串联重复(internal tandem duplication, ITD),在AML和MDS患者中的发生率分别为15~35%和5~10%,在ALL中的发生率﹤1%,且主要见于双表型的ALL病例;活化环中的点突变(point mutation in the activation loop,TKD点突变),在AML、MDS和ALL患者中的发生率分别为5~10%、2~5%和1~3%。
FLT3的这两种激活突变均能引起FLT3发生自动磷酸化进而导致FLT3发生配体非依赖性的组成性激活,进一步激活其下游异常的信号转导,从而起到促进增殖和抑制凋亡的作用,使得具有此突变表型的白血病患者临床预后较差。
由于FLT3/TKD的发生率较低,且与其相关的临床特征尚不明确,但FLT3/ITD的临床特征却很明确,以下从几个方面介绍一下FLT3/ITD的临床特征:1. 突变率与疾病类型:以AML患者中最高,为15%—35%;MDS 为5%—10%( 包括由MDS转变而来的AML和治疗相关性AML均要高于MDS);更高于ALL(﹤1%,且主要见于双表型的ALL病例)、CML危象,在CML慢性期、CLL、MM(multiple myeloma,多发性骨髓瘤)、恶性淋巴瘤和MPD(myeloproliferative disease,骨髓增殖性疾病)中均没有发现;其突变率与年龄有关:FLT3/ITD在AML中的发生率从高到低的顺序为:老人(大于55岁),成人,儿童,婴儿(一岁以下);与FAB分型的关系:虽然FLT3/ITD在成人AML的FAB各型中均有发现,但大多数研究发现:FLT3/ITD在M3和M5中有较高的发生率,而在M6和M7中的发生率较低;与染色体核型的关系:据染色体检查显示,FLT3 的两种激活突变在核型正常患者中的发生率要高于异常核型的患者,但需要特别指出的是,FLT3/ITD在t(15;17)的AML患者中的比例较高,在具有t(15;17)染色体易位的M3患者中的发生率近50%,而在t(8;21)和inv(16)等核结合因子(core-binding factor)异位和低危组染色体核型的AML中比例较低;与疾病进展的关系:复发的AML患者FLT3/ITD的发生率高于初治AML患者,且84%具有FLT3/ITD突变的患者复发时仍然存在FLT3/ITD突变,初发时不具有此种突变的患者复发时仍有可能发生此突变。
doi:10.3969/j.issn.1002-7386.2020.23.032·综述与讲座·急性髓系白血病预后基因的研究进展任毅飞 吴隼 吕国庆 刘宪凯 陶贞 张肖肖项目来源:河南省卫生和计划生育委员会基金资助项目(编号:Wjlx2017084);河南省科技厅科技攻关项目(编号:182102311141);新乡医学院第一附属医院博士启动基金项目(编号:xyyfy2015BS 005)作者单位:453100 河南省新乡市,新乡医学院第一附属医院 【摘要】 急性髓系白血病是一种异质性血液系统恶性肿瘤,死亡率高,预后较差。
目前越来越来越多的临床研究致力于基因突变对预后的影响。
本文将根据国内外研究进展描述基因突变对急性髓系白血病患者预后的影响。
【关键词】 急性髓系白血病,基因突变,预后【中图分类号】 R733.71 【文献标识码】 A 【文章编号】 1002-7386(2020)23-3645-06Researchprogressofprognosticgenesinpatientswithacutemyeloidleukemia RENYifei,WUSun,LVGuoqing,etal.TheFirstHospitalAffiliatedtoXinxiangMedicalCollege,Henan,Xinxiang453100,China【Abstract】 Acutemyeloidleukemiaisakindofheterogeneoushematologicalmalignancywithhighmortalityandpoorprognosis.Moreandmoreclinicalresearchesarecurrentlyfocusingontheeffectsofgeneticmutationsontheprognosisofpatients.Thisarticlewilldescribetheeffectsofgenemutationsontheprognosisofpatientswithacutemyeloidleukemiabasedondomesticandforeignresearchprogress.【Keywords】 acutemyeloidleukemia;genemutation;prognosis 急性髓系白血病(acutemyeloidleukemia,Aml)是一种高度异质性克隆性疾病,虽然越来越多的药物应用于Aml,但患者的预后并未得到明显改善,预后较差,长期生存时间较短,复发率及死亡率较高。
FLT3抑制剂对急性髓系白血病的靶向治疗及其耐药机制【摘要】近年来,尽管在破译治疗急性髓系白血病的分子和细胞遗传学途径方面取得了重大进展,但治疗策略和临床结果的改善是有限的。
发现FLT3该途径及其在白血病发生中的潜在作用引起了人们的高度关注,为药物的开发提供了潜在的靶点。
寻找最优的FLT 3抑制剂与克服阻力的治疗策略和药物组合、FLT3抑制剂在AML治疗中的应用前景的研究成为时下热点。
本综述对FLT 3抑制剂的发展现状、靶向治疗急性髓系白血病的作用机理和其耐药机制的研究现状进行总结。
【关键词】急性髓系白血病FLT3抑制剂耐药机制靶向治疗新出现的急性髓性白血病治疗模式主要是基于对其广泛的细胞遗传学和分子特征及其对预后和预后的影响的深入了解。
随着白血病发生过程中反复突变基因的发现,个性化医学在AML中的应用蓬勃发展,为新的靶向治疗的发展铺平了道路。
1.急性髓系白血病(AML)介绍AML是成人最常见的急性白血病,是一种异质性造血干细胞疾病,主要影响老年人。
其特点是髓系前体细胞不受控制地克隆增殖,导致正常血细胞的产生受损;如果不治疗,AML是普遍致命的。
老年AML患者预后较差,细胞遗传学不良,有较高的前血液病性AML的机会,所有这些都会导致更坏的预后。
细胞毒性药物的新剂型,即CPX-351和吉图祖马阿佐米星,改善了明确的亚类患者的预后。
在FLT3突变的AML中,中星星加入到强化化疗中是被批准的。
更有选择性的FLT 3抑制剂和IDH抑制剂enasidenib和ivosidenib在复发环境中表现出显著的单一药物活性,联合策略的初步结果令人鼓舞。
BCL2抑制剂的加入对催乳剂的效果有明显的改善作用。
目前AML的治疗药物包括新的细胞毒性药物、针对复发癌基因的药物或白血病细胞的功能脆弱性。
2.FLT3抑制剂简介以及主要的几种FLT3抑制剂Ⅲ类受体酪氨酸激酶(RTK)FMS样酪氨酸激酶3(FLT3)在骨髓发生中起关键作用。
小鼠(Mouse) FMS样酪氨酸激酶3(Flt-3)ELISA 检测试剂盒本试剂仅供研究使用标本:血清或血浆试验原理:Flt-3试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验(ELISA).已知Flt-3浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。
先将Flt-3和生物素标记的抗体同时温育。
洗涤后,加入亲和素标记过的HRP。
再经过温育和洗涤,去除未结合的酶结合物,然后加入底物A、B,和酶结合物同时作用。
产生颜色。
颜色的深浅和样品中Flt-3的浓度呈比例关系。
试剂盒内容及其配制自备材料<!--[if !supportLists]-->1. <!--[endif]-->蒸馏水。
<!--[if !supportLists]-->2. <!--[endif]-->加样器:5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。
<!--[if !supportLists]-->3. <!--[endif]-->振荡器及磁力搅拌器等。
安全性<!--[if !supportLists]-->1. <!--[endif]-->避免直接接触终止液和底物A、B。
一旦接触到这些液体,请尽快用水冲洗。
<!--[if !supportLists]-->2. <!--[endif]-->实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。
<!--[if !supportLists]-->3. <!--[endif]-->不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。
操作注意事项<!--[if !supportLists]-->1. <!--[endif]-->试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温。
稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。
<!--[if !supportLists]-->2. <!--[endif]-->实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。
大鼠FMS样酪氨酸激酶3(Flt3)检测ELISA试剂盒kit
存储条件:2-8℃(频繁使用时);-20℃(较长时间不用时)
适用范围:仅用于科研实验,禁用于临床
大鼠试剂盒说明
1.试剂盒保存:-20℃(较长时间不用时);2-8℃(频繁使用时)。
2.浓洗涤液低温保存会有盐析出,稀释时可在水浴中加温助溶。
3.中、英文说明书可能会有不一致之处,请以英文说明书为准。
4.刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质,此为正常现象,不会对实验结果造成任何影响。
大鼠FMS样酪氨酸激酶3(Flt3)检测ELISA试剂盒kit(一)原理ELISA是以免疫学反应为基础,将抗原、牽9体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合起来的一种敏感性很高的试验技术。
由于抗原、抗体的反应在一种固相载体──聚苯乙烯微量滴定板的孔中进行,每加入一种试剂孵育后,可通过洗涤除去多余的游离反应物,从而保证试验结果的特异性与稳定性。
在实际应用中,通过不同的设计,具体的方法步骤可有多种。
即:用于检测抗体的间接法(图a)、用于检测抗原的双抗体夹心法(图b)以及用于检测小分子抗原或半抗原的抗原竞争法等等。
比较常用的是ELISA双抗体夹心法及ELISA 间接法。
?
阴性对照及阳性对照解析
Elisa试剂盒阴性对照及阳性对照:阴、阳性对照若有正确的结果,对试剂盒操作的结果可以有粗略的判断。
空白对照:对ELISA试剂来说,空白对照实际上是不加标本不加酶做对照。
空白对照主要测系统的吸光率。
空白对照在单波长测量时显得尤其重要
我司代理几千种ELISA试剂盒,数万种抗体,并代理世界级产品近万种,涉及分子生物学、分子免疫学、细胞生物学等生命科学研究的各个领域。
为了节省您的时间,我们还可以提供代检测服务
大鼠FMS样酪氨酸激酶3(Flt3)检测ELISA试剂盒kit技术原理及自备设备:ELISA技术原理是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。
结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性,酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性,又保留酶的活性。
在测定时,受检标本与固相载体表面的抗原或抗体起反应。
自备设备有,蒸馏水,加样器,振荡器及磁力搅拌器,酶标仪,量筒,烧杯,吸水纸,坐标纸,温育箱,洗瓶,一次性试剂管,微移液及其吸嘴等。
试剂盒的操作程序:
①加抗体包被→4℃?,洗涤三次、抛干
②加待检抗原→37℃30?分钟,洗涤三次、抛干
③加酶标抗体→37℃30?分钟,洗涤三次、抛干
④?底物液→37℃15?分钟,加终止液
⑤用ELISA检测仪测定?OD?值
人ELISA试剂盒大鼠ELISA试剂盒小鼠ELISA试剂盒犬ELISA试剂盒。