山楂中黄酮的提取

一７２一　・中药园地・　山楂红曲胶囊中总黄　闰春风，刘井利　，李君，朱磊　（颈复康药业集团有限公司，河北承德　■０　０　的研究　０６７０００；河北省中药新辅料工程技术研究　，河北承德０６７０００）　。　≮　－－　ｌ　＿＿Ｒ　一。　喜　，　’　关键词：山楂红曲胶囊；总黄酮；提取条件　中图分类号：Ｒ２８４．２　．，　文献标识码：Ａ　．　文章编号；　１０００－０７０４（２０１３）１Ｏｈ＿ｏｏ７２　Ｑ２　・　。：、　山楂红曲胶囊是颈复康药业新上市的保健品≥是由山楂提　取物和红曲组成；具有降血脂的保健功能，其中总黄酮的含量为　其中一个重要功效指标　，但是在《保健食品检验与评价粳米规　范》中总黄酮测定的方法在实际裣ｌ钡ｉ过程中遇到　些问题　如　测定结果误差大，测定结果不平行，测定结果因人而异等。本文　参考有关文献［１—６］研究了山楂红曲胶囊中总黄酮的提取方法　的最佳条件，结果令人满意。　．．’，　．，　㈡　．　。　１材料与方法　１．Ｉ　试剂与材料　．、　■。　ｌＩｌｌ　舅√　。ｌ＿一，－　．’保健品：（批号：ｌ３ｏｌｏｌ、ｌ３ｏｌ０２、ｌｉ３ＯｔＯ３￣楂红曲腰囊　颈复　康药业集团有限公司提供　蒜准品声予｛鲡度　．　ｌｓ％　ｌ批粤　１０００８０—２００７０７，中国药　醅生物锏靠　薪　莱为　沃蒸　永；　．。　．　．．．．．，．　－“．　＿ｌ，＿　０　ｔ　ｉ■。一ｌ＿　。　其它试剂均　析纯。　。　一　、　’　０　．　曩。　㈡一　．ｃ　’　｜ｌ　０　：　１．２仪器与设备　ｌ　ｌ　。　÷Ｉ．．　紫外可见分光光度计（ｕＶ一２５０ｔ‘）：日本岛。淬公　；　７００ＤＥ型超声波清洗器（昆　市超声仪器有限公司　数字式电　热恒温水浴锅。　。　－－　。　；囊　。　Ｉｌｌ　。。　＇　２方法与结果　。一　。　２．１　芦丁标准溶液鸽蘸帝ｊ’　｜ｌｌ　．１　。　。。。　：　＋　。　精确称取ｏ．００５０ｇ　１甲　蟹　毒耷亨　１００　ｍ　ｌＬ耷錾　瓶中，即得５０１ｘｇ．／ｍＬ—ｌ芦丁标准溶液。　。　．　ｒ　０　２．２标准曲线绘制　一－．　｜ｌ　｜＝　．．　Ｉ｜・　．　分别准确移取芦丁标准溶液（５０ｉ，￣ｇ／ｍＬ－１）０、１．ｈ０　、２：０、３．０　ｌｌ　｝　、４．Ｏ、５．０　ｍＬ于１Ｏ　ｍＬ比色管　加甲醇至刻度，摇匀。于波长　３６０　ｎｍ比色，以吸光度（Ａ）对芦丁标准溶液体积（ｍ　Ｌ）进行线性　回归，得到标准曲线。　２。３　；样品含量的测定ｔ¨＝Ｉ｜。　一尊　：　。一．　。一　一　准确称取适量样品，加乙醇；骞旃并移童　容量瓶　申　ｌｌ　用乙醇定容摇匀后，超声提取２０ｍｉｎ，放置。吸取上清液１　：　０ｍＬ　ｌＩｈ　：¨　、ｊ　一Ｚ　：　≯　一　、　于蒸发血中Ｊｏ加ｌｇ聚酰胺粉　，搅拌吸附，于水浴上挥去乙醇，然　ｊ薯　∥　０‘．　‘　．　热　曩“　ｌｌ　ｌｌ　后转入层　。　用２　０．　．ｍ　Ｌｚ　游（葶遮事　毒　然后用甲醇洗膊　、　。　ｌ　ｊ　‘　ｆ　ｌ　Ｊ　｝’　ｌｌ・．　、　一　Ｊ。。　、Ｌ‘　’　尊酮，　窟寄罩？ｊＪ】．　；　＿＝ｆ乏　３６　０，：ｒｉ，ｍ　钡４定吸　摩傅。一　２－４样品　违萄　的遗　：…ｌ＿　一　。一　本实验分别对《保健食品检验与评价技术规范》中总黄酮测　定的方法；中样品处理的几个因索进行单因素考察，　以　黄酮的　含量为指标进行优选　．。。　＾　；一・　．　“Ｌ　ｒ　＾　’起专功辜　逸蒜　别害察】了在１００、２＿５　ｌ７ｏｏ　条件　直簧面　量　０ｊ结集　葫　枭存　梓蠢　意交　的　亨警　亭　Ｉ　、。．．　ｉ　叠　。　＿　ｌ＿　２．１　ｚｌ　的警蟹　謦　ａ￣ｔ￣－ｉ　（　ｌＯ　ｍｉｎ　，　２　０ｍ．　ｉｒａ　，　３０ｒａｉｎ、４０嗡　）逃　考　锗悬毒　翅声２　０　．　ｒａ　ｉｎ后榉品中　橡黄酮　已基本提取完全。　２　４　１３　鲠附剂粒度、用量及层析牲　内径韵选择　分别考察吸附　剂聚酰胺螃粒裎（３０　－６—０画ｊ　‰　、画、１５ｏ　２耐、自）　用量　６　５ｇ、１．Ｏｇ、１．５ｇ、２．Ｏｇ、２．５　及玻璃　析柱内径（Ｉ　ｃｍ、１．５　ｃｍ、２　蠹　＃　譬　，ｌ浸簪繁警　。≥　＿　－－　：．．－－　．　２．　４ｌ　一专枣零　尊援童男虿　６　ｏ，－９ｏ￣．　．　等举行　脱毒零质　ｌ；棼　结昂奏明！　黄醐的畲蕈秀明显的变ｌｆ七§　．．　２。　洗脱速度　的选择　ｌ獭４控制用博洗脱速度（　５ｍＬ￣ｍｉｍ　一１、１ｍＬ／ｍｉｍ一１、０．５ｍＬ／ｍｉｍ一１），结果表明，洗脱速度为０．５　ｍ／－，／ｍｉｍ一１时洗脱比较完全，效果最好。　件　０条　取　≮提　０　

石榴皮中黄酮类化合物的提取

摘要

此文献综述总结了石榴皮黄酮类化合物提取方法, 黄酮的提取方法有微波提取法、有机溶剂提取法、超临界萃取法、超声波辅助提取法等。现代研究证明, 黄酮类化合物是重要的抗氧化剂, 其生理作用是多种多样的, 超临界萃取法速度快、操作简单, 产品无溶剂残留; 超声波辅助提取无需加热, 对有效成分具有保护作用。在提取某些黄酮类成分时, 可以将二者合理地结合利用。对黄酮类化合物的提取方法进行研究, 为开发利用黄酮类化合物提供了一定的科学借鉴依据。

【关键词】 石榴皮；黄酮类化合物；提取方法

前言

石榴（Punica grunatum L. ）属安石榴科植物，中国各地均有分布，种质资源丰富。石榴皮性温、涩，具止泻、止血、杀菌、驱虫等功能。近年来报道，石榴皮具有抑制细胞内病毒增殖、抑制体外淋球菌生长、直接杀死病毒和阻止病毒吸附细胞等作用[1 ～ 2]。此外，近来研究还发现石榴皮具有一定的抗氧化性。其内含多种化学成分，黄酮是其中一类较为重要的化合物[3]。黄酮类化合物广泛存在于植物界，几乎分布于所有的绿色植物中[4]。黄酮类化合物的生理活性较广泛，具有抗肿瘤，延缓衰老，增强心血管功能，增强免疫力，调节内分泌系统，抗炎，抗过敏，抗病毒等功能。近年来对其研究较多，然而对石榴中黄酮物质的研究较少。

目前，黄酮类化合物的提取方法很多，本文主要选取常用的提取方法来提取石榴皮中黄酮类物质，比较了不同提取方法对石榴皮总黄酮含量测定的影响，为更好的开发石榴皮总黄酮奠定了基础。

主题

1.1黄酮类化合物的提取方法

黄酮类化合物种类多，性质差异较大，在植物体内因存在部位不同，结合状态也不同，在花、果和叶等组织中一般以苷的形式存在，而在木部坚硬组织中，则以游离状态存在，在皮、根茎、根等部位也曾发现有苷的结合形式[5]，所以要根据其存在部位、结合形式等来选择适合的提取方法。 1.1.1微波提取法

微波加热是透入内部的能量被物料吸收置换成热能对物料的加热, 形成独特的物料受热方式, 具有均匀性的特点, 同时具有反应高效性和强选择性等特点, 而且具有操作简便、副产物少、提取率高等优点。本法多用在药材的浸出, 在黄酮类化合物的提取上取得了良好的效果。李姣娟等人对微波法提取川桂叶总黄酮工艺条件进行研究[6], 以65 %乙醇按照固液比1∶20, 在85 ℃条件下提取9

薄荷中黄酮的提取工艺研究

实验设计

1 材料与试剂

1.1 材料

薄荷(是莎车的薄荷），取一部分薄荷置于50℃干燥箱进行烘干，粉碎过筛，得到薄荷样粉，产地为喀什。

1.2仪器

紫外- 可见分光光度计 ，循环水式多用真空泵, 恒温水浴锅，电子天平，干燥箱，旋转蒸发仪，研钵, 电炉，试管，容量瓶，滤纸，pH纸。

1.3 药品及试剂

芦丁标准品，无水乙醇,亚硝酸钠，硫酸铝，氢氧化钠，硫化钠，蒸馏水，过氧化氢，硝酸铝(Al(NO3)3) , 95%乙醇, 石油醚

2方法

2.1样品的制备

对薄荷采用热风干燥方法制备样粉，取一部分薄荷置于50℃干燥箱进行烘干，粉碎过筛，得到的薄荷样粉备用。

2.2总黄酮的提取

精密称取2.00g薄荷粉末，滤纸包好后放入脂肪测定仪，加入55%乙醇溶液75ml，室温侵泡30分钟，在90℃的水浴中回流提取1.5小时后将提取液取出，再用加入55%乙醇溶液75ml提取1.5小时合并提取液，备用。

2.3黄铜的定性分析

在样品液中加入5%亚硝酸钠溶液摇匀，旋转6分钟后，加入等体积10%硝酸铝溶液6分钟后再加入4%氢氧化钠溶液，混匀，用30%乙醇稀释，观察结果呈浅红色说明具有黄酮。

2.4总黄酮含量测定

采用亚硝酸钠-硝酸铝分光光度法测定黄酮含量标准曲线的绘制：精密称取在120干燥至质量恒定的芦丁对照品5mg ，置于50 ml 容量瓶，加适量体积分数60%乙醇溶液，在温水中溶解，放冷后加60%的乙醇溶液定容为质量浓度为0.1 mg/ml的标准品溶液。精确量取上上述储备标准品溶液0.0, 1.0， 2.0， 3.0，

4.0，5.0分别置于25mg 容量瓶，加入质量分数5%亚硝酸钠溶液0.8mg，摇匀，放置6min，在加入质量分数10%的硝酸铝0.8mg，摇匀，放置6min，在加入质量分数4%NAOH溶液10ml，用体积分数60%乙醇溶液定容，摇匀，放置12min后，在510nm波长处测定其吸光度。所以吸光度为从坐Y=5.6071X-0.0002(2R=0.997)

山楂中总黄酮的提取及含量测定

（吕培银）

一、实验目的

1.掌握黄酮类物质的提取方法。

2.掌握分光光度法测定黄酮含量的原理。

二、实验原理

山楂富含黄酮类化合物，具有重要的生理活性和药效。黄酮化合物的母核由C6-C3-C6即A-C-B三个环组成，A环和B环具有芳香化合物的性质，C环具有黄酮化合物的独特性质。母核中某些位置如C3和C5上含有羟基或具有邻二酚羟基时能与铝、铅等金属离子形成稳定的络合物，这些络合物在光谱上产生明显变化。黄酮与金属离子的这种作用不仅可以用于鉴别这类成分中羟基的位置，还可以作为进行定量分析的基础。本实验利用碱性条件下，在亚硝酸盐存在时，硝酸铝与黄酮进行络合反应，生成红色络合物，且在500 nm左右有最大吸收，可利用分光光度法进行测定。因此，本实验采用索氏提取法提取山楂中的总黄酮，并采用分光光度法对其含量进行测定。

三、实验用品

1、仪器：索氏提取器、平底烧瓶、电热套、量筒、试管、容量瓶、移液管、玻璃比色皿、可见分光光度计等。

2、药品：山楂粉末、 无水乙醇、芦丁标准品、硝酸铝、亚硝酸钠、氢氧化钠等。

四、实验内容

1、山楂总黄酮的提取 精密称取山楂粉末6 g,滤纸包好后置于250 mL索氏提取器中，加60%乙醇150 mL，连续回流提取1-1.5h, 冷却，将提取液转移至250 mL的容量瓶中，将圆底烧瓶润洗3次，60%乙醇定容至刻度线，摇匀，过滤。取1 mL滤液稀释至10mL,摇匀，即为样品待测溶液。

2、芦丁标准溶液的配制

精密称取芦丁20 mg，加入60 mL无水乙醇超声使其溶解后，以蒸馏水定容至100mL，摇匀，即得0.2 mg/mL的芦丁标准液。

3、芦丁标准曲线的制定

分别精密吸取芦丁标准液5mL、6mL、7mL、8mL、9mL至10mL容量瓶中，60%乙醇定容后得到浓度为0.10 mg/mL、0.12 mg/mL、0.14 mg/mL、0.16mg/mL和0.18mg/mL的芦丁系列浓度梯度溶液。精密移取各浓度梯度溶液2 mL于试管中，再分别加入5%的亚硝酸钠溶液0.3mL，摇匀，放置6 min；然后分别加入10%硝酸铝溶液0.3 mL，摇匀，放置6min；最后加入1 mol/L氢氧化钠溶液4 mL，摇匀，放置15 min。以60%乙醇替代标准品溶液作空白，校正基线。在500 nm处测定吸光度，并记录数据。以芦丁浓度为横坐标( mg/mL)，吸光度为纵坐标绘制标准曲线。