绿色木霉菌LTR-2对小麦纹枯病菌的作用机制
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木霉菌LTR-2可湿性粉剂对6种蔬菜灰霉病的田间防治效果戴宝;扈进冬;李纪顺;杨合同【摘要】在田间用木霉菌LTR-2可湿性粉剂1 500 g/hm2喷雾,防治番茄、茄子、五彩椒、辣椒、扁豆和黄瓜6种蔬菜叶部灰霉病的效果分别为77.96%、64.45%、71.43%、70.24%、72.71%、75.41%,对照药剂40%嘧霉胺悬浮剂480g/hm2的防治效果为71%~81%.木霉菌可湿性粉剂的施药时期应掌握在发病初期,以后每隔7d用1次药,连续用药2~3次.使用剂量1 500 g/hm2,可有效地防治蔬菜灰霉病的发生.【期刊名称】《山东科学》【年(卷),期】2014(027)005【总页数】6页(P22-27)【关键词】木霉菌;灰霉病;可湿性粉剂;药效【作者】戴宝;扈进冬;李纪顺;杨合同【作者单位】山东泰诺药业有限公司,山东诸城262200;山东省科学院生物研究所,山东济南250014;山东省科学院生物研究所,山东济南250014;山东省科学院生物研究所,山东济南250014【正文语种】中文【中图分类】S182灰霉病是由半知菌亚门灰葡萄孢属灰葡萄孢(Botrytis cinerea)引起的一种世界性真菌病害,灰葡萄孢病原菌可使瓜类、茄科类等多种作物受害。
随着我国蔬菜生产的快速发展,并且重茬增多,蔬菜灰霉病发病日趋加重,一般减产20%~30%,严重时可达50%以上。
目前,灰霉病的防治主要依靠化学杀菌剂,如异菌脲和腐霉利(二甲酰亚胺类)、嘧霉胺和嘧菌环胺(嘧啶类)、啶酰菌胺(吡啶类)、啶菌恶唑(恶唑类)以及百菌清(腈类)等。
但由于防治过程中不合理的用药,以及蔬菜生产过程常常连续重茬,使灰霉病菌通过遗传变异,不断适应环境,造成抗药性灰霉病菌不断积累,目前已报道灰霉病菌对多种杀菌剂产生了抗药性[1-5]。
木霉菌有产生抗生素、营养竞争、重寄生、胞壁降解酶以及诱导植物产生抗性等机制,木霉菌杀菌剂对于多种植物病原菌具有拮抗作用,尤其在防治灰霉病上效果明显,已广为认可,得到越来越多的关注[6-8]。
利用绿色木霉防治小麦纹枯病的研究的开题报告一、选题背景小麦纹枯病是由真菌侵染引起的一种病害,已经成为制约小麦产量和质量的主要因素之一。
单纯使用化学农药的防治效果并不理想,而且会对环境和生态造成不良影响。
因此,采用绿色环保的生物防治方法防治小麦纹枯病成为重要研究方向。
二、研究目的本研究旨在探究绿色木霉的防治效果及其机理,为小麦纹枯病的生物防治提供理论依据和实践经验,同时也为推广绿色生物农药作出贡献。
三、研究内容及方法研究内容:本研究将从以下三个方面展开:1.筛选适宜的绿色木霉材料在实验室条件下,筛选适宜的绿色木霉株材料,并分别制备其发酵物和培养液。
2.评估绿色木霉的防治效果在人工感染小麦纹枯病病菌的条件下,评估绿色木霉防治小麦纹枯病的效果。
采用田间试验和室内试验相结合的方法来评估其防治效果。
3.分析防治机理分析绿色木霉防治小麦纹枯病的机理,并通过分子生物学方法和激光共聚焦显微镜等技术进行验证。
研究方法:1.利用系统发育学的方法来筛选适宜的绿色木霉材料。
2.采用田间试验和室内试验相结合的方法,评估绿色木霉防治小麦纹枯病的效果。
3.采用分子生物学和激光共聚焦显微镜等技术来分析防治机理。
四、预期成果1.筛选出适宜的绿色木霉材料,并制备出其发酵物和培养液。
2.证明绿色木霉对小麦纹枯病有一定的防治效果,并确定最佳防治方案。
3.分析绿色木霉防治小麦纹枯病的机理,并提出有针对性的防治策略。
五、研究意义1.增加了小麦纹枯病的防治途径,降低化学农药的使用量,保护生态环境。
2.提高农业生产效率,增加农民收入。
3.为推广绿色农业、绿色生物农药在农业中的应用提供理论依据和实践经验。
六、研究进度本研究已经完成了绿色木霉株材料的系统发育学筛选和培养液的制备工作,正在进行防治效果的评估和防治机理的分析。
预计将在2022年完成本研究的所有工作并取得预期成果。
七、参考文献[1] 付明方, 张秀梅.用生物农药防治作物病害的研究进展.中国农学通报,2016(14):136-139.[2] 杨芳芳, 吴峰, 马晓晓.绿色木霉菌(Bjerkandera adusta)生长条件研究. 微生物科学, 2017, 44(8): 1320-1325.[3] 张静, 王贵花, 王道杰等. 绿色木霉防治葡萄灰霉病效果研究. 植物病理学报, 2019, 49(1): 117-123.。
杨合同,唐文华。
1998。
绿色木霉菌和摩西球囊霉菌的相互作用及其对小麦纹枯病的防治。
植物病害研究与防治,Pp508-511.主编刘仪,中国农业科技出版社,北京绿色木霉菌和摩西球囊霉菌的相互作用及其对小麦纹枯病的防治杨合同,唐文华(中国农业大学植保系植病生防室)摘要绿色木霉菌LTR-2(Trichoderma viride)处理小麦种子能提高土壤中土著VAM真菌厚垣孢子的含量43.3%,以及土著VAM真菌对小麦根系的侵染率13.9%;LTR-2处理小麦种子可以提高摩西球囊霉菌(Glomus mosseae)V7厚垣孢子含量29.9%及对小麦根的侵染率33.3%.V7能提高LTR-2防治小麦纹枯病的效果;在灭菌土壤中,LTR-2能提高小麦干物重7.4%,与V7混用时提高151.8%.表明V7和LTR-2间是相互促进的关系.关键词: 绿色木霉菌;VAM真菌;小麦纹枯病利用木霉菌防治植物病害的研究工作现在已经达到了商品化阶段,而泡囊丛枝状真菌(VAM真菌)也在某些病害的防治上达到了商业化水平(Fravel et al ,1996).有关VAM真菌和植物根际微生物的关系研究也有较多的报道,但是多数研究局限于筛选的细菌与VAM真菌混合接种以提高作物的产量,而较少考虑到与病害防治的关系,即使涉及到植物病原菌时,也多数集中在病原真菌与VAM真菌的相互作用方面,而较少研究生防菌,VAM真菌和植物病原真菌三者的关系,只有最近McAllister等(1994)发表了有关研究报告.木霉菌是土壤中的重要腐生真菌,与其他土壤微生物的关系错综复杂,包括抗生作用(Cook and Baker, 1983),重复寄生作用等,它们与VAM真菌的关系也同样复杂多样,如发现对VAM真菌既有拮抗作用(Cook and Baker, 1983; Wyss et al., 1992)又有促进作用(Calvet et al., 1993).植物病害的生物防治除了减少病害外,同时提高作物的产量是近年来受到重视的策略,合理地利用木霉菌和VAM真菌,是达到防病增产双重效果的途径之一,本研究的目的即在于研究木霉菌和VAM真菌之间的关系及其对小麦纹枯病和小麦生长量的影响,探讨混用木霉菌和VAM真菌防治小麦纹枯病,增加小麦产量的可能性.1.材料与方法1.1菌株:绿色木霉菌(Trichoderma viride)LTR-2,摩西球囊霉菌(Glomus mosseae)V7,小麦纹枯病菌(Rhizoctonia cerealis)H-1.1.2小麦品种:鲁麦7号.1.3试验菌株的培养木霉菌的培养:于PDA平板上接种LTR-2,30℃培养96小时至大量产生分生孢子,用灭菌水洗下分生孢子,制成孢子悬浮液备用.小麦纹枯病菌的培养:麦麸中加入自来水至含水量为60%(W/W),蒸汽灭菌后接种H-1,于28℃下培养7天,风干后粉碎至40目,备用.摩西球囊霉的培养:在无菌条件下培育小麦幼苗,接种V7的单个厚垣孢子于幼苗的种子根上,栽植于灭菌土壤中,小麦生长至拔节期时用湿筛法分离出土壤中的厚垣孢子,将厚垣孢子进行表面消毒后储存于4℃冰箱中备用.1.4LTR-2对土壤中土著VAM真菌的影响取天然小麦田土于花盆内,小麦种子以LTR-2分生孢子悬浮液接种,使每粒种子的孢子量达到106个,用同量清水作为对照,2个月后以湿筛法计数土壤中的VAM真菌厚垣孢子数,根的侵染情况以棉蓝乳油染色法检查(清色剂:10%KOH;酸化剂:2%HCl;染色剂:苯酚11.2ml,水8.8ml,甘油10ml,棉蓝0.02克;包埋剂:聚乙烯醇1.7克,水10ml,乳酸10ml,甘油10ml)。
绿木霉菌株TY009防治纹枯病等水稻主要真菌病害的潜力刘路宁;屠艳拉;张敬泽【期刊名称】《中国农业科学》【年(卷),期】2010(043)010【摘要】[目的]研究绿木霉(Trichoderms virens)菌株TY009对水稻纹枯病、稻瘟病和稻曲病菌作用效果,以及其代谢产物胶霉毒素在不同温度和pH条件下的活性稳定性,评价菌株TY009防治水稻纹枯病和其它水稻主要真菌病害的生防潜力.[方法]用色谱法从绿木霉菌株TY009培养液中分离、纯化出胶霉毒素;采用对峙培养方法测定菌株TY009对水稻纹枯病菌的拮抗作用;采用常规抑制方法测定其代谢产物胶霉毒素对水稻纹枯病菌菌丝生长、菌核萌发的抑制作用,以及对稻瘟病菌孢子萌发、附着胞形成和稻曲病菌孢子萌发和次生孢子形成的影响;在不同温度、pH条件下测定胶霉毒素生物活性的变化.[结果]菌株TY009对水稻纹枯病菌有显著的拮抗作用.150 μg·mL-1胶霉毒素完全抑制水稻纹枯病菌的菌丝生长;160μg·mL-1胶霉毒素处理菌核4 h后,完全抑制了水稻纹枯病菌菌核的萌发;50和10 μg·mL-1胶霉毒素分别完全抑制稻瘟病菌分生孢子萌发和附着胞的形成;1.0μg·mL-1胶霉毒素完全抑制稻曲病菌分生孢子萌发和次生孢子的形成.胶霉毒素在100℃处理60 min后,其对水稻纹枯病菌菌丝的生物活性没有改变;在pH值大于6.0时,0.5 μg·mL-1胶霉毒素对稻曲病分生孢子没有明显的生物活性,但低的pH孢子悬浮液中,胶霉毒素显著抑制分生孢子萌发和次生孢子的形成.[结论]绿木霉(T.virens)菌株TY009拥有多种生防机制,是一个潜在的、有效的生防菌株,具有应用防治水稻纹枯病并兼防稻瘟病和稻曲病的潜力.【总页数】8页(P2031-2038)【作者】刘路宁;屠艳拉;张敬泽【作者单位】浙江大学农业与生物技术学院生物技术研究所,杭州,310029;浙江大学农业与生物技术学院生物技术研究所,杭州,310029;浙江大学农业与生物技术学院生物技术研究所,杭州,310029【正文语种】中文【相关文献】1.木霉生防菌T150对烟草主要土传真菌病害的防治效果 [J], 陈小均;何海永;喻会平;吴石平;何永福;杨学辉;孙希文;袁洁2.应用绿木霉(Trichoderma viride Pers.ex Fr.)防治水稻纹枯病试验初报 [J], 沈永安;周柏明3.土壤中绿木霉分离,扩繁培养及培养物抑制水稻纹枯病菌丝生产… [J], 周柏明;沈永安4.粉锈宁防治水稻纹枯病及后期真菌病害效果好 [J], 何忠全;何明5.用木霉、类木霉对水稻纹枯病进行生物防治的研究 [J], 唐家斌;马炳田;王玲霞;李平;郑爱萍;陈红因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
绿色木霉RW-2纤维素酶的酶学性质研究
武秀琴
【期刊名称】《中国酿造》
【年(卷),期】2009(000)011
【摘要】对由绿色木霉RW-2固态发酵产生的纤维素酶的主要酶学性质进行了研究.结果表明:纤维素酶在40℃和50℃时稳定性较好,当温度高于50℃后,酶的热稳定性显著降低:表面活性剂吐温-80在一定的范围内对纤维素酶有激活作用,最佳作用浓度为0.05%;金属离子K+、Ca2+纤维素酶呈现抑制作用:Cu2+、Zn2+对纤维素酶有激活作用;阴离子I-、CH3COO-对纤维素酶有明显的抑制作用.
【总页数】4页(P68-71)
【作者】武秀琴
【作者单位】河南工程学院,河南,郑州,451191
【正文语种】中文
【中图分类】Q556
【相关文献】
1.绿色木霉产纤维素酶菌种的优化及酶学性质研究 [J], 秦涛;李忠玲;张强;马齐
2.里氏木霉产纤维素酶的条件优化及酶学性质研究 [J], 钟桂芳;翟莉莉;樊攀;杨雪鹏
3.绿色木霉F-UV264产纤维素酶酶学性质研究 [J], 林英;曹松屹;曹冬煦;曹慧颖
4.黑曲霉Ⅲ与绿色木霉Ⅰ混合发酵产纤维素酶的分离纯化及酶学性质研究 [J], 侯
红萍;杨盛
5.康氏木霉B—7纤维素酶的产生条件及酶学性质研究 [J], 王景林;吴东林
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哈茨木霉拌种对冬小麦生长、土传病害及根际真菌群落的影响作者:扈进冬杨在东吴远征魏艳丽杨合同卢德鹏李纪顺来源:《植物保护》2021年第05期摘要為了明确哈茨木霉LTR-2拌种处理冬小麦的田间效果,为木霉拌种剂的推广应用提供依据,本试验于2016年-2018年连续3年,研究了哈茨木霉LTR-2拌种对小麦出苗率、幼苗生长、小麦纹枯病和茎基腐病发生情况和产量的影响,通过高通量测序和FUNGuild预测分析了木霉拌种对小麦根际土壤中真菌群落组成的影响。
结果表明,哈茨木霉LTR-2拌种可以提高小麦的出苗率和冬前分蘖数;对小麦纹枯病的平均防效60%以上;对小麦茎基腐病的平均防效65%以上,优于6%戊唑醇悬浮种衣剂;与不拌种对照相比,哈茨木霉LTR-2拌种处理增产4.3%~634%,增产效果略高于6%戊唑醇悬浮种衣剂;木霉拌种可以降低小麦根际土壤中病原真菌的相对丰度,特别是土壤中镰孢属真菌的相对丰度。
因此,哈茨木霉LTR-2可以作为化学拌种剂的绿色替代产品用于小麦生产。
关键词哈茨木霉; 拌种; 冬小麦; 根际真菌群落中图分类号: S 473文献标识码: ADOI: 10.16688/j.zwbh.2020409Effects of seed dressing treatment with Trichoderma harzianum on the growth of winter wheat seedlings, soil borne diseases and rhizosphere fungal communityHU Jindong1, YANG Zaidong2, WU Yuanzheng1, WEI Yanli1, YANG Hetong1, LU Depeng3, LI Jishun1*(1. Shandong Provincial Key Laboratory of Applied Microbiology, Institute of Ecology,Qilu University of Technology(Shandong Academy of Sciences), Jinan 250103, China; 2. Shandong Luyan Quality Breeds Co., Ltd.,Jinan 250100, China; 3. Shandong Tenov Pesticides Co., Ltd., Weifang 262200, China)AbstractThis study aimed to verify the field effects of seed dressing treatment with Trichoderma harzianum LTR-2 on winter wheat, and provide a basis for the promotion and application of Trichoderma seed dressing agents. The effects on wheat emergence rate and seedling growth, the incidence of wheat sharp eyespot and crown rot and yield were studied for three consecutive years from 2016 to 2018 after T.harzianum LTR-2 seed dressing treatment. At the same time, high-throughput sequencing and FUNGuild were used to analyze the fungal communities in rhizosphere soil of wheat between T.harzianum LTR-2 seed dressing and the control. The results showed thatT.harzianum LTR-2 seed dressing could increase wheat emergence rate and tiller number before winter. The average control effects reached over 60% against wheat sharp eyespot, and over 65% against crown rot, which was better than tebuconazole 6% FSC treatment. Compared with the control, T.harzianum LTR-2 seed dressing treatment increased wheat yield by 4.3%-6.34%, which was also slightly better than tebuconazole 6% FSC treatment. Through the analysis of fungal community, we found that T.harzianum LTR-2 seed dressing could reduce the relative abundance of pathogenic fungi in wheat rhizosphere soil, especially the abundance of Fusarium spp. Therefore,T.harzianum LTR-2 can be used as a good substitute for chemical seed dressing agent in wheat production.Key wordsTrichoderma harzianum; seed dressing; winter wheat; rhizosphere fungal community种子包衣是促进农作物增产丰收的一种重要技术措施,种子包衣可以防治土传病害和地下害虫,促进植株生长发育,提高作物产量、质量,增加农民收入,是我国重点推广的一项农业高新技术[1-3]。
收稿日期:2008212229基金项目:国家“863”计划现代农业技术领域重大项目资助(编号2006AA10A211)作者简介:陈凯(1968-),女,助理研究员,主要从事农业微生物方面的研究工作。
3通讯作者,E 2mail :yanght @文章编号:100224026(2009)022*******绿色木霉菌LTR 22产生的真菌柴油———烃类物质及其衍生物陈凯,扈进冬,李纪顺,张彦杰,杨合同3(山东省科学院中日友好生物技术研究中心,山东省应用微生物重点实验室,山东济南250014)摘要:采用PDA 培养基和麸皮培养基培养绿色木霉(Trichoderma viride )菌株LTR 22,以二氯甲烷浸提法提取培养物中的代谢产物,利用气相色谱-质谱联用仪分析提取物中的化学成分,应用峰面积归一化法确定各成分的相对含量。
从PDA 培养物中共检测到39种化学成分:其中链烃类物质有17种,相对含量为20.62%;脂环烃有1种,相对含量为0.80%;芳香烃有5种,相对含量为19.94%;烃类衍生物有13种,包括醛、酮、醇、酯等,相对含量为56.07%;其它成分有3种,相对含量为2.29%。
从麸皮培养物中共检测到57种化学成分,其中链烃类物质有32种,相对含量为39.06%;脂环烃有3种,相对含量为1.29%;芳香烃有2种,相对含量为1.56%;烃类衍生物有15种,包括酮、酸、醇、烯、酯等,相对含量为55.40%;其它成分有5种,相对含量为2.37%。
绿色木霉菌LTR 22在不同培养基上产生的烃类物质及其衍生物的种类、数量和相对含量均不相同,这些代谢产物大多与化石柴油的主要成分相同。
该结果表明,利用绿色木霉生产真菌柴油具有潜在的研究和应用价值。
关键词:木霉;气相色谱2质谱;烷烃类;烷烃衍生物;真菌柴油中图分类号:Q939.5;TE626.23 文献标识码:AMyco 2diesel :Alkanes and Their Derivatives Producedby Trichoderma viride Strain L TR 22CHE N K ai ,H U Jin 2dong ,LI Ji 2shun ,ZH ANG Y an 2jie ,Y ANG He 2tong3(Biotechnology Center o f Shandong Academy o f Sciences ,K ey Laboratoryfor Applied Microbiology o f Shandong Province ,Jinan 250014,China )Abstract :Trichoderma viride is olate LTR 22was cultivated on tw o media ,PDA and wheat bran s olid matrix.Extracts were obtained by Methylene dichloride extraction from the mycelia and conidia ,the constituents of the extracts were analyzed by G as Chromatography 2Mass S pectrometry (G C 2MS ),and the relative content of each known constituent in the extracts were determined by area normalization method.There were 39com pounds found in the PDA cultured LTR 22,in which there were 17chain alkanes com prised of 20.62%,1alicyclic alkanes com prised of 0.80%,5dutrex com prised of 19.94%,13other alkane derivatives including aldehydes ,ketones ,alcohols ,esters ,com prised of 56.07%,and 3other non 2alkane com pounds com prised of 2.29%of the total ,respectively.There were 57com pounds第22卷 第2期2009年4月山东科学SH ANDONG SCIE NCEV ol.22 N o.2Apr.200941山 东 科 学 2009年found in wheat bran culture of LTR22,in which there were32chain alkanes com prised of39.06%,3alicyclic alkanes com prised of1.29%,2dutrex com prised of1.56%,15alkane derivatives includingketones,organic acids,alcohols,alkenes,esters,com prised of55.40%,and5other non2alkanecom pounds com prised of2.37%of the total,respectively.T.viride LTR22produced different varietiesand am ounts of alkanes and their derivatives when cultured on different media,and these com pounds weresimilar to the main constituents of fossil diesel.It was shown that there is a potential im portance in myco2diesel production by Trichoderma viride.K ey w ords:Trichoderma;G C2MS;alkane;alkane derivative;myco2diesel 目前世界各国,尤其是发达国家,都在致力于开发高效、无污染的生物质能利用技术,国内一些学者和专家也致力于生物柴油等新型能源的研究工作,一部分科研成果已达到国际先进水平,生物柴油等新型能源对我国农业结构调整、能源安全和生态环境综合治理有十分重大的战略意义[123]。
绿色木霉菌抗生物质的初步分离及其对植物病原真菌的抑制作用陈凯;杨合同;李纪顺;周红姿;扈进冬【期刊名称】《山东农业科学》【年(卷),期】2006(000)004【摘要】通过二氯甲烷浸提法获得绿色木霉菌(Trichoderma viride)LTR-2代谢抗生物质,并对该物质的性质及分离纯化作了初步研究.结果表明,抗生物质在PDA平板上对棉花立枯病菌(Rhizoctonia solani)有明显的抑制作用,抑菌圈半径为6.5 mm;抗生物质具广谱抗性,稀释200倍后对本室保存的11株植物病原真菌仍有抑制作用,其中对小麦纹枯病菌的抑制率达89.26%;抗生物质经100℃水浴处理30 min后,对棉花立枯病菌的平板抑制效果与对照间无显著性差异(LSR法,P=0.01),表明该抗生物质较耐热.经硅胶柱初步分离得到2个活性流分,表明提取物中至少含有两种抗生物质.【总页数】3页(P52-54)【作者】陈凯;杨合同;李纪顺;周红姿;扈进冬【作者单位】山东省科学院生物技术研究中心,山东,济南,250014;山东省科学院生物技术研究中心,山东,济南,250014;山东省科学院生物技术研究中心,山东,济南,250014;山东省科学院生物技术研究中心,山东,济南,250014;山东省科学院生物技术研究中心,山东,济南,250014【正文语种】中文【中图分类】S482.2+92【相关文献】1.链霉菌F-1013虾壳粉发酵液对3种植物病原真菌的抑制作用 [J], 林梅;张绍升2.链霉菌种内融合重组子产生新活性物质的分离和初步鉴别 [J], 段瑜侃;袁德军3.链霉菌182-2抗真菌活性物质的分离及抑菌特性的初步研究 [J], 高芬;卢赛飞;王梦亮4.根霉抗生物质产生菌的分离及其抗生物质性质的初步研究 [J], 王昌禄;路福平5.枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis (Cohen))B-903菌株抗菌物质对植物病原真菌的抑制作用 [J], 孔建;赵白鸽;王文夕;王同贵因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
2株木霉抑菌效果及其促植物生长机制作者:张晓梦田永强潘晓梅李佳佳石晓玲张建强吴康莉来源:《南方农业学报》2020年第11期摘要:【目的】探究绿色木霉(Trichoderma viride)和棘孢木霉(T. asperellum)对8种植物病原菌的抑制效果及其促植物生长机制,为木霉防治植物病害和促进植物生长等的田间应用提供理论参考。
【方法】采用平板对峙法和固体稀释法,检测2株木霉及其活性代谢产物对8种植物病原菌(棉花枯萎病菌、茄子菌核病菌、番茄链格孢病菌、茄腐镰刀病菌、尖孢镰刀病菌、枸杞炭疽病菌、番茄灰霉病菌和番茄匍柄霉病菌)的抑制率;采用平板透明圈法、Salkowski比色法及钼锑抗比色法测定2株木霉的生防因子、生长素及溶磷效果;通过辣椒盆栽试验,测定2株木霉发酵液不同稀释倍数处理对辣椒叶片叶绿素含量及3种抗性酶[过氧化物酶(POD)、多酚氧化酶(PPO)和苯丙氨酸解氨酶(PAL)]活性的影响。
【结果】平板对峙试验结果显示,2株木霉对8种植物病原菌的抑菌率均在60.00%以上;绿色木霉发酵11 d时其无菌滤液对茄子菌核病菌的抑制率达96.78%,但对其他病原菌的抑制率不高;棘孢木霉发酵11 d时无菌滤液对茄子菌核病菌、枸杞炭疽病菌和番茄链格孢病菌的抑制效果较好,抑菌率分别为99.08%、85.33%和68.65%,发酵9 d时无菌滤液对番茄灰霉病菌的抑制率為72.08%;2株木霉均可产生蛋白酶、几丁质酶、纤维素酶和铁载体4种生防因子;绿色木霉发酵9 d时分泌吲哚乙酸(IAA)量为3.389 mg/L,在PKO无机磷液体培养基培养7 d后溶磷量为67.236 μg/mL;棘孢木霉发酵11 d时分泌IAA量达11.638 mg/L,在PKO无机磷液体培养基培养7 d后溶磷量达151.905 μg/mL;盆栽试验结果表明,喷施不同稀释倍数的棘孢木霉发酵液较绿色木霉发酵液更能提高辣椒叶片叶绿素含量及3种抗性酶活性。
哈茨木霉TH-1菌株对小麦纹枯病的控制效果研究
管怀骥;陈莉
【期刊名称】《安徽农业科学》
【年(卷),期】2011(039)016
【摘要】汇编.北京:中国植物真菌学会,1990.术讨论会及论文[4]李立平,段德芳.木霉生物学特性及拮抗作用研究进展[J].植物医生,2006(4):4-6.[5]赵蕾.木霉菌的生物防治作用及其应用[J].生态农业研究,1999,7(1):66-68.[6]高克祥,刘晓光,郭润芳,等.木霉菌对五种植物病原菌的重寄生作用[J].山东农业大学学报:自然科学
版,2002,33(1):37-42.
【总页数】2页(P9664-9665)
【作者】管怀骥;陈莉
【作者单位】安徽丰乐农化有限责任公司,安徽,合肥,230031;安徽农业大学植物保护学院,安徽,合肥,230036
【正文语种】中文
【中图分类】S435.121
【相关文献】
1.哈茨木霉菌株WY-1对番茄的促生防病效果 [J], 曲薇;伍淼;王旭东;张淑梅;陈秀玲;王傲雪
2.哈茨木霉LTR-2双价基因重组菌株的构建及其防治效果 [J], 李纪顺;陈凯;王贻莲;郭凯;张广志;杨合同
3.哈茨木霉LTR-2双价基因重组菌株的构建及其防治效果 [J], 李纪顺;陈凯;王贻
莲;郭凯;张广志;杨合同;
4.哈茨木霉TH-1对棉花枯萎病菌和黄萎病菌的拮抗机制研究 [J], 高智谋;曹君;潘月敏;吴向辉;章战华
5.枯草芽孢杆菌BS菌株和哈茨木霉TH-1菌株对棉花枯黄萎病菌的拮抗作用 [J], 曹君;高智谋;潘月敏;李静;纪文飞;李秀丽
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1998 杨合同,唐文华,宋家华等。
绿色木霉菌LTR-2对小麦纹枯病菌的作用机制。
植物病害研究与防治。
Pp504-507.主编刘仪, 中国农业科技出版社,北京绿色木霉菌LTR-2对小麦纹枯病菌的作用机制杨合同1唐文华1宋家华2牛赡光3周洪友41:中国农业大学植保系植病生防室; 2:山东省科学院生物研究所; 3:山东省农业科学院植保所; 4:内蒙古农牧学院植保系摘要绿色木霉菌LTR-2对小麦纹枯病菌有强烈的拮抗作用,主要作用方式为重复寄生,位点与营养竞争,产生几丁质酶和B-1,3-葡聚糖酶消解细胞壁等.在营养竞争作用中涉及的营养物质为葡萄糖.LTR-2可能产生对小麦纹枯病菌有抗生作用的挥发性物质.关键词:绿色木霉菌;小麦纹枯病菌;作用机制;重复寄生;竞争木霉菌的作用机制多种多样,包括(1)抗生素:木霉菌产生抗真菌代谢产物至少在32种以上。
多数种类产生的抗生素不止一种,如哈茨木霉可产生12种,康氏木霉可产生9种,绿色木霉可产生10种,钩状木霉可产生7种,长枝木霉可产生3种,多孢木霉可产生2种,木素木霉(绿色木霉)可产生2种.这些抗生素的化学性质各不相同,包括了戊酮,辛酮,类萜,多肽和氨基酸衍生物等几大类(Ghisalbert等,1991; Faull等,1994)。
(2)重寄生作用:目前已发现木霉菌至少可寄生18个属的29种植物病原真菌.(3)溶菌作用:木霉菌有时不与寄主菌丝有直接接触,同样可以引起它们的解体,最终消失。
这与木霉菌的β-1,3-葡聚糖苷酶,几丁质酶和纤维素酶等有关。
通过酶的作用使真菌细胞壁遭到破坏,继而引起原生质体解体。
(Cook等, 1983, Wells等, 1988) (4)毒性蛋白:蛋白质Tricholin是核糖体钝化蛋白,能抑制R.solani生长与繁殖。
(Lin, 等,1994)(5)竞争作用: Sivan等(1989)的研究证明木霉菌的竞争在镰刀菌的防治中有重要作用.Ahamad 和Baker(1987)也有相似的报道.但是就特定的木霉菌菌株来说,对病原菌的作用机制则各具特点,防治效果的表现也不同.我们曾经得到一株绿色木霉菌LTR-2,对蔬菜灰霉病有良好的防治效果,已经登记注册(杨合同等,1996;宋家华等,1996;Tang Wenhua and Yang Hetong, 1997).后来的研究表明,该菌株对小麦纹枯病也有良好的效果(Tang Wenhua et al, 1996),因此对其作用机制进行了探讨,下面是研究结果.1.材料与方法1.1. 菌株绿色木霉菌(Trichoderma viride)LTR-2,小麦纹枯病菌(Rhizoctonia cerealis) H-1, 哈茨木霉菌(T. harzianum)TH和粉红粘帚霉菌(Gliocladium roseum)GLR.1.2. 方法1.2.1.重复寄生能力测定制备PDA平板,将LTR-2和小麦纹枯病菌H-1点接在相对的平板边缘,于28℃培养,并连续观察菌落的相互影响;LTR-2的菌落与H-1的菌落接触时,置于显微镜下观察菌丝的相互作用;另采集小麦纹枯病的病株,保湿使病部出现大量的病菌菌丝,然后喷布LTR-2的孢子悬浮液(107孢子/毫升),继续保湿,连续观察绿色孢子的产生情况,并在显微镜下观察菌丝的侵染情况.1.2.2.抗生素的产生①将LTR-2在PDA平板上培养至分生孢子产生完全,60℃15分钟杀死木霉菌,冷却后用打孔器取下直径0.6cm的培养物,置于另一个接种了小麦纹枯病菌的PDA平板上,28℃培养,观察抑菌圈的产生情况.另以氯仿熏蒸杀死LTR-2,作同上处理.②在PDA平板上对峙培养LTR-2和H-1,另设单独接种LTR-2和H-1的对照,待两菌落接触时,量取从接种点到菌落汇合点的距离,以及对照培养物从接种点到菌落边缘的距离.1.2.3.位点竞争将小麦幼茎用LTR-2的孢子悬浮液(106孢子/ml)处理,同时以灭菌水处理作为对照,在28℃保湿3-4天,取出阴干,用透明的胶带纸印下小麦表面的微生物,显微镜下观察结果;另于PDA 平板上培养表面洗涤液.另以灭菌玻片代替小麦幼果为对照.1.2.4营养竞争H-1菌丝用解剖刀切碎,以灭菌生理盐水洗涤,离心,风干,平板法检测每克活菌丝段.将LTR-2作同样处理后与H-1的菌丝段等量混合,分为两份,其中一份加入1%(W/W)的葡萄糖,于灭菌的培养皿内保湿培养2天,用PDA培养基进行稀释分离,观察病原菌和LTR-2的生长情况.对照则采用LTR-2分生孢子和H-1菌丝段,以灭菌硅藻土为分散剂,观察H-1和LTR-2的生长情况。
以对照菌数为基数计算H-1和LTR-2在两者混合情况下的死亡率.1.2.5.β-1,3-葡聚糖酶和几丁质酶活性测定1.2.5.1.β-1,3-葡聚糖酶活性测定茯苓粉中的β-1,3-葡聚糖与苯胺蓝结合呈蓝色,在β-1,3-葡聚糖酶的作用下,β-1,3-葡聚糖被水解,蓝色消失,在平板上表现为无色的水解区,由此可以判断β-1,3-葡聚糖酶的活性是否存在。
培养基的配方为:磷酸二氢钾,6.8克;磷酸氢二钾,17.98克;酵母汁,5克;茯苓粉,4克;苯胺蓝,100毫克;琼脂粉,14克。
灭菌以后制平板,接种LTR-2,以哈茨木霉菌(T. harzianum)TH 和粉红粘帚霉菌(Gliocladium roseum)GLR为对照,于27℃培养3-4天,观察结果。
1.2.5.2.几丁质酶活性测定几丁质在琼脂培养基中呈微粒悬浮状,培养基平板为云雾状半透明;在几丁质酶的水解作用下,几丁质被水解为可溶性小分子物质,在菌落的周围出现透明的水解圈,由此可以判断几丁质酶活性的有无。
测定几丁质酶活性的培养基组成为:硫酸铵,3克;磷酸二氢钾,4克;磷酸氢二钾,3克;硫酸镁,0.2克;酵母汁,0.2克,硼酸,5.6毫克;硫酸铜,0.4毫克;硫酸锌,0.5毫克;钼酸钠,1.5毫克;柠檬酸铁,1毫克;氯化钙,10毫克;几丁质,5毫克;琼脂粉,13克;水,1000毫升pH以氢氧化钠调整到7.2-7.4;平板制备完毕以后,将LTR-2,以TH和GLR接种于平板上,27℃培养3-4天,观察2.结果与分析2.1.重复寄生现象的观察在LTR-2和H-1的平板对峙培养过程中发现,接种后12小时两者均可见到明显的生长现象,表现为接种点出现白色或灰白色的菌丝.24小时后,可见LTR-2的生长速度明显高于H-1,约在36-48小时,两者菌落边缘汇合,并在24小时以内,LTR-2的菌落完全覆盖H-1的菌落,此时整个平板均为LTR-2 的深绿色分生孢子所掩盖.在两个菌落接触之前,LTR-2的菌落外缘一直呈圆弧形,而H-1的菌落与LTR-2菌落相对的边缘则呈平直且略有凹进,表现为受抑制状态.在两个菌落刚刚开始接触时,将平板置于显微镜下观察,可见在H-1菌落靠近LTR-2菌落的部分LTR-2的菌丝以各种方式寄生于H-1的菌丝上,H-1菌丝的被寄生率达到100%.喷布LTR-2孢子悬浮液的小麦纹枯病病菌霉层,2-3天时出现大量的绿色分生孢子,于显微镜下观察,可见纹枯病病菌菌丝被大量寄生,受到严重破坏.认为LTR-2对纹枯病菌的寄生作用是很明显的,是防治纹枯病的重要作用机制.LTR-2对纹枯病菌的寄生方式有:缠绕在病菌菌丝上,紧贴病菌菌丝生长,穿透病菌菌丝和穿入病菌菌丝并在菌丝内部生长;这些寄生方式的最终结果是造成病菌菌丝的彻底解体。
另外,LTR-2菌丝密集区的附近,病菌菌丝在没有接触LTR-2菌丝时也会发生消解,推测可能是LTR-2产生了大量的消解酶。
2.2.抗生素的产生在观察重复寄生现象时发现,LTR-2对H-1有一定的抑制作用,表现为H-1菌落前沿的生长受阻.用高温杀死的LTR-2培养物进行抑菌试验,发现并无抑菌现象;用氯仿杀死的LTR-2培养物也同样没有抑菌现象;说明LTR-2至少不产生能耐热或耐氯仿的抗生素.但是如2.3所述,LTR-2可能产生了挥发性的抗生物质,抑制了病原菌的生长.2.3.竞争作用2.3.1.平板检测结果与H-1和LTR-2的纯培养相比,对峙培养时两者的生长均有一定程度的下降.对峙培养到40小时,两者的菌落发生接触;H-1菌落从接种点到前沿的距离平均为1cm,LTR-1菌落从接种点到前沿的距离平均为6.8cm;在纯培养时,两者菌落从接种点到前沿的平均距离基本相同,分别为7.4cm和8.1cm;说明LTR-1的存在确能显著抑制纹枯病菌的生长.由于两者的生长速度都有下降,营养竞争应是主要原因;但相比之下,H-1所受到的抑制作用比LTR-2要大得多,单纯用营养竞争来解释并不完全,很可能LTR-2通过某种挥发性抗生素抑制了H-1的生长;但在抗生素试验中没有发现LTR-2通过抗生素来抑制病原菌的生长,这可能有两方面的原因,一是抗生素为蛋白质类物质,在抗生素试验中无论是60℃的高温还是氯仿处理,均能钝化这些蛋白质类,使之失去抗生素的活性,因而检测不出抗菌活性;二是LTR-2产生的抗生素为挥发性物质,处理过程在杀死LTR-2 的同时,挥发性抗生素也随之消失,因而不表现抗菌活性.2.3.2.小麦幼茎表面观察小麦幼茎表面以LTR-2的分生孢子接种,培养2天后用胶带纸印迹观察,发现分生孢子全部发芽,芽管的长度为孢子直径的5倍以上,约有60-70%的芽管产生分枝;无菌水处理则没有发现LTR-2的分生孢子,相反有大量的细菌微菌落。
在PDA平板上培养幼果表面的洗涤液,有大量的LTR-2菌落出现。
用灭菌的玻片作对照,于显微镜下亦可见LTR-2的分生孢子萌发,发芽率在35%左右,芽管没有分枝,长度仅为孢子直径的1-2倍,PDA平板培养也出现大量的LTR-2菌落。
这说明LTR-2在小麦幼茎表面生长旺盛,而在玻片上的生长相对较弱,很明显是小麦幼果表面的渗出物为LTR-2的分生孢子提供了营养物质。
2.3.3.LTR-2与H-1混合试验LTR-2与H-1菌丝段混合物的稀释分离结果表明,在有葡萄糖存在时,H-1的菌丝段全部被LTR-2杀死,PDA平板上找不到H-1的菌落,均为LTR-2的菌落,即H-1菌丝段的死亡率为100%,而LTR-2的死亡率为0;镜检时发现H-1菌丝细胞壁不完整,菌丝干瘪;而LTR-2分生孢子的发芽率在95-100%之间。
不加葡萄糖的对照,镜检可见LTR-2孢子的萌发率在90%以上,H-1表现为干瘪菌丝段减少;在PDA平板上,H-1的菌落出现;LTR-2的死亡率为5%,H-1菌丝段的死亡率为79%.很明显,葡萄糖在这两种菌的相互作用中有重要地位,有葡萄糖时,LTR-2对H-1的作用强,无葡萄糖时,LTR-2对H-1的作用弱;一个较为合理的解释是,葡萄糖为LTR-2和H-1提供营养,在生长发育过程中LTR-2利用葡萄糖的速度大大超过H-1,从而有效地杀灭了H-1;在无葡萄糖时,两者利用自身的贮存物质作为营养发芽和生长,LTR-2的分生孢子虽然能正常发芽,但生长显然不如有外源营养物质时强,因而对H-1的杀灭作用就小,甚至部分孢子死亡,而H-1的菌丝段死亡率也下降。