RNA提取方法汇总-2017年度

一.组织RNA提取1.最好新鲜组织，这样RNA提取的效果比较好，这是肯定的。

2. 如果不是新鲜的（最好在半年之内，-80℃或者液氮中冻存的）组织，注意不要反复冻融，从冰冻状态拿到0-4℃，注意不要拿到常温，待组织解冻后，用 DEPC泡过的剪刀剪一小块组织，称重后，放到预冷的匀浆器中，然后加入一定量的TRIZOL试剂，然后匀浆。

注意：速度不要太快，要匀一会挺一会，否则由于摩擦产热，RNA遇热会加速降解。

如果一次做多个标本的RNA提取，也要这样做，更不能急。

后面的步骤和细胞RNA提取一样。

二.培养细胞的RNA提取1.贴壁细胞，需要先用胰酶消化后，然后收集到离心管中，离心，去上清，然后用PBS多洗2-3次，以去除多余的胰酶。

悬浮细胞，直接用吸管或者加样枪吹打评壁，以使细胞基本可以被吹下来。

然后离心去上清，不需要用PBS洗。

2.然后将少量细胞悬液转移到预冷的DEPC泡过的1.5毫升EP管中，然后加入一定量的TRIZOL(细胞多的话加1毫升，细胞少的话加0.5毫升就可以)，然后用枪头吹打混匀5-10分钟。

（如果有时间就继续往下做，如果没有时间，可以把加了TRIZOL后的细胞裂解液冻存到-80℃，用的时候提取和新的提取的效果一样。

）在冰上操作。

3.上面的混匀5-10 分钟，基本可以使细胞裂解，然后可以进行下面的步骤，详细的步骤我就不介绍了。

我只介绍一些需要注意的地方。

1.一定要注意冰上操作，低温离心。

2.戴口罩和勤换手套，去任何东西都要带着手套去取。

3.每次去器材的时候都要用镊子去夹，镊子要在酒精灯上烧一下。

4.所有的器材都要经过DEPC浸泡后高压后才可以使用，所需要的氯仿，酒精，异丙醇等都保证没有被RNA 酶污染，不能用没有泡过DEPC的枪头去提取液体，一定要用DEPC浸泡过的枪头去吸，如果发现试剂有可能被污染了，要立即更换。

5. 吸取上清一定不要吸到中间层的蛋白，如果吸到蛋白一定要重新用氯仿抽提，因为，吸到的蛋白很可能会对RNA产生降解作用。

rna的提取方法
1.细胞或组织的采集：采集样品时应尽量避免RNA的降解或污染，可使用RNase-free工具和试剂，避免手套和工作表面受到RNase污染。

2. 细胞或组织的破碎：可使用机械方法、化学方法或冻融法等
方法将细胞或组织破碎，释放RNA。

3. RNA的纯化：RNA的纯化可使用酚/氯仿法、商用RNA纯化试
剂盒等方法。

其中，酚/氯仿法是最常用的RNA纯化方法。

该方法利
用酚将RNA从DNA和蛋白质中分离，然后通过氯仿的密度梯度离心分离出RNA。

4. RNA的质量检测：RNA的纯化后，需要进行质量检测，以确保RNA的完整性和纯度。

可使用紫外线吸收法、琼脂糖凝胶电泳等方法进行检测。

5. RNA的保存：RNA的保存应避免RNA降解，需使用RNase-free 的保存液，如RNAlater等，或在零下80℃的冷冻库中保存。

- 1 -。

RNA提取方法总结这篇文章主要讲的是几种常用的RNA提取方法。

1、异硫氰酸胍氯化铯超速离心法原理：使用蛋白质变性剂异硫氰酸胍有效抑制RNA酶的活性，经过起始密度为 1.78g/ml的氯化铯介质，进行密度梯度超速离心，RNA 沉淀于管底，而DNA与蛋白质在上清中。

使用这种方法，不但能得到高质量的RNA，而且能同时分离出细胞染色体DNA.本法对于冷冻时间长、细胞质和细胞核不易分离的组织标本以及富含RNA酶的组织细胞(如胰腺)的RNA提取尤其适合。

此法提取的RNA 的质量好和成功率高，已成为提取哺乳动物细胞RNA的常规方法。

其缺点是操作复杂、流程长，一次提取的样品数量有限。

2、盐酸胍-有机溶剂法本法有MacDonald 1987年在Strohman报道的方法基础上改进而成的，适用于没有超速离心及设备的情况下提取细胞总RNA。

它利用盐酸胍抑制RNA酶，匀浆裂解细胞，有机溶剂抽提去除蛋白质，通过选择性沉淀RNA分子而去除DNA，提取的RNA质量较好，但整个操作过程繁杂费时。

3、氯化锂-尿素法本法首先由Auffray报道，利用高浓度尿素变性蛋白质同时抑制RNA 酶，3mol/L LiCl选择性沉淀RNA。

其缺点是有时会存在DNA污染，LiCl 沉淀RNA会丢失一些小分子量的RNA，如5S RNA等。

优点是快速简捷，尤其适用于大量样品少量组织细胞的RNA提取，其质量可以满足Northern分析，Oligo(dT)提取mRNA，SI核酸酶或RNase保护实验等。

本法每提取107个细胞能提取总RNA约10 g。

4、热酚法本法主要用于少量细胞样品RNA提取，其产量不高，但简单易行。

5、快速提取法本法主要用于培养细胞，通过0.5%SDS裂解细胞，酚抽提去除蛋白质和DNA沉淀，快速纯化RNA。

6、细胞质RNA提取法本法主要适用于培养细胞，首先去除细胞核，然后用蛋白酶K消化蛋白质，酚/氯仿抽提去除蛋白质。

操作简单，同时能进行多个样品操作，多数步骤在室温下进行，提取的RNA质量较高，可满足体外无细胞翻译系统、cDNA合成、引物延伸以及核酸酶SI保护实验。

rna提取方法RNA提取方法。

RNA提取是分子生物学研究中的重要步骤，其质量和纯度直接影响后续实验结果的准确性和可靠性。

在进行RNA提取时，我们需要选择合适的提取方法，并严格按照操作规程进行操作，以确保提取到高质量的RNA样品。

本文将介绍常用的RNA提取方法及其操作步骤，希望能对您的实验工作有所帮助。

1. 常用的RNA提取方法。

（1）酚/氯仿法，这是最常用的RNA提取方法之一，通过酚和氯仿的相分离，将RNA从细胞裂解液中提取出来。

该方法操作简单，适用于大多数样品类型，但需要注意的是酚/氯仿对操作者和环境有一定的危害性，需要在安全通风下进行操作。

（2）硅基柱法，该方法利用硅基柱上的硅胶膜吸附RNA，通过洗脱的方式提取RNA。

该方法操作简便，提取效率高，且对DNA和蛋白质有较好的去除效果，适用于高质量RNA的提取。

（3）磁珠法，磁珠法利用磁珠载体对RNA进行特异性结合，通过磁场的作用实现RNA的分离和提取。

该方法操作简单，易于自动化，且对样品量要求较低，适用于高通量样品的提取。

2. RNA提取操作步骤。

（1）样品裂解，将待提取RNA的样品进行裂解，一般使用细胞裂解液或组织裂解液进行细胞破碎，释放RNA。

（2）酚/氯仿提取，将裂解液与酚/氯仿按比例混合，离心分离出上清液中的RNA。

（3）酒精沉淀，向上清液中加入等体积的异丙醇或乙醇，使RNA沉淀出来，再经过洗涤和干燥步骤得到RNA沉淀物。

（4）溶解RNA，用无DEPC的水或TE缓冲液溶解RNA沉淀物，得到可用于后续实验的RNA样品。

3. 注意事项。

（1）操作环境，在进行RNA提取时，需要在RNase-free的环境下进行操作，避免RNA受到RNase的污染。

（2）样品保存，裂解后的样品需要在-80℃的环境下保存，以避免RNA的降解。

（3）避免污染，在操作过程中需要避免外源RNA的污染，使用RNase-free的试剂和耗材，并注意操作规范。

（4）质量检测，提取得到的RNA样品需要进行质量检测，包括浓度、纯度和完整性的检测，以确保提取到高质量的RNA。

rna的提取方法RNA的提取是从生物样品中获取RNA的过程，这个过程通常包括以下几个步骤：1. 样品收集：根据需求选择生物样品，如细胞、组织、血液等，并采用合适的方法收集。

2. 细胞破碎：通过细胞破碎，将细胞内的RNA释放到溶液中。

破碎方法包括机械破碎、超声波破碎、化学破碎等。

3. RNA分离：分离RNA和其他分子，如DNA、蛋白质等。

4. RNA纯化：将RNA纯化，去除杂质，获得高质量RNA。

纯化方法包括硅胶柱层析、离心管基质层析等。

下面详细介绍三种常用的RNA提取方法：1. 酚-氯仿法这种方法可用于组织和细胞的RNA提取。

首先使用酚将细胞或组织破碎，然后加入等体积的氯仿，混匀，使DNA和蛋白质沉淀于底部，RNA在上层水相中得到富集。

再通过异丙醇沉淀，将RNA分离出来。

最后，通过洗涤和纯化过程，得到高质量RNA。

酚-氯仿法是一种经济、简单和高收率的提取RNA的方法。

2. 硅胶柱纯化法该方法是一种高效、快速且高纯度的RNA提取方法，适用于多样品处理。

该方法使用硅胶柱将RNA分离，并消除DNA和酶的污染。

该方法能够从各种样本中提取高品质RNA，可用于测序、杂交和原位杂交等分子生物学应用。

3. 针头粘贴法这种方法是一种快速简单的RNA提取法，特别适用于某些免疫细胞和细胞样品。

利用针头从样品中取出细胞，将其粘贴在聚丙烯酰胺凝胶上，通过离心将RNA分配到凝胶上。

该方法提取RNA量小，但可以高度升质和纯化的RNA，是一种快速且相对简单的RNA提取方法。

总之，根据不同的实验目的，可选择适用于不同的RNA提取方法。

rna提取方法RNA提取方法。

RNA提取是分子生物学研究中的重要步骤，它能够从细胞或组织中分离出RNA，并为后续的实验和分析提供可靠的样本。

在实验室中，有多种方法可以用来提取RNA，每种方法都有其特点和适用范围。

本文将针对常用的RNA提取方法进行介绍和比较，希望能为科研工作者提供一些参考和帮助。

一、酚/氯仿提取法。

酚/氯仿提取法是一种经典的RNA提取方法，它通过酚和氯仿的相分离特性来分离RNA。

首先，细胞或组织样本被加入到酚中，然后加入氯仿和异丙醇，最后进行离心分离。

这种方法简单易行，适用于大多数样本类型，但对RNA的纯度要求较高，且操作过程中需要注意避免RNA的降解。

二、硅基柱法。

硅基柱法是一种基于硅基质的RNA提取方法，它通过硅基柱的亲和吸附作用来富集RNA。

样本经过细胞裂解后，加入硅基柱柱子进行离心，然后通过洗脱步骤得到纯净的RNA。

这种方法操作简便，适用于高通量提取，但对样本量和纯度要求较高。

三、磁珠法。

磁珠法是一种利用磁珠颗粒来富集RNA的提取方法，它具有操作简便、高效快速的特点。

样本经过裂解后，加入磁珠颗粒进行混合，然后通过磁场分离得到RNA。

这种方法适用于多样本处理和自动化操作，但对磁珠颗粒的选择和配比要求较高。

四、酶法。

酶法是一种利用酶来选择性降解DNA而保留RNA的提取方法，它适用于需要高纯度RNA的实验。

通过加入DNA酶和蛋白酶K来去除DNA和蛋白质，最终得到纯净的RNA。

这种方法操作简便，适用于小样本和特定实验要求，但需要注意酶的活性和浓度控制。

五、TRIzol法。

TRIzol法是一种利用TRIzol试剂来提取RNA的方法，它通过酚-醇混合物和氯仿的相分离特性来富集RNA。

样本经过混合后，加入氯仿进行离心分离，最后得到RNA。

这种方法适用于多种样本类型，但需要注意操作过程中的酚和氯仿的使用安全。

综上所述，不同的RNA提取方法各有特点，科研工作者可以根据实验需求和样本特性选择合适的方法。

一、总的RNA的提取基础知识：(1)DEPC：中文名为焦碳酸二乙酯。

分子式为C6H10O5，分子量为162.14。

是一种强烈的RNA酶抑制剂。

它通过和RNA酶的活性基团组氨酸的咪唑环结合使蛋白质变性，从而抑制酶的活性。

DEPC水一般是指千分之一浓度的DEPC,在搅拌器上搅拌至完全溶解，即看不到“油珠”为止，DEPC气味芳香浓烈，强挥发性，有毒，需在通风橱中操作。

(2)RNA分子：哺乳动物细胞有3种rRNA：28S、18S和5S。

一个典型的哺乳动物细胞含有10-5μg RNA，其中80～85％为rRNA，其余15～20％主要由各种类型的低分子量RNA组成(tRNA、核内小分子RNA等)，这些高丰度的RNA分子具有确定的大小和核苷酸序列、并能用电泳、密度梯度离心、阴离子交换或高效液相层析等技术分离纯化。

mRNA与上述RNA不同，其含量为细胞总RNA的1～5％，大小和核苷酸序列各不相同，从数百至数千碱基不等。

..多数真核细胞mRNA在其3端均有一poly(A）尾，使得mRNA可以通过挂有oligo(dT)-纤维素的亲和层析柱分离纯化，获得的异源性分子集群的总体，可编码细胞内所有的多肽。

RNA酶变性剂RNA酶：水解RNA。

•含有链内二硫键，使其能抵抗长时间的煮沸和温和变性剂。

另外，变性后可迅速折叠，目前，尚无RNA酶失活的简易办法。

•该酶不需要二价阳离子激活，难以被金属离子鳌和剂（EDTA）失活。

——只好避免污染！用强烈变性剂，如盐酸胍或硫氰酸胍溶液能迅速溶解蛋白质，导致细胞结构破碎，核蛋白由于其二级结构的破坏而从核酸上解离下来。

..RNA酶可耐受多种处理(例如煮沸)而不失活，但却会被4 mo1/L硫氰酸胍和β-疏基乙醇等还原剂所灭活。

因此可联用上述试剂，从组织中提取完整无损的RNA实验准备工作：器具和试剂的消毒..（1）尽可能使用无菌、一次性塑料制品，已标明RNase-Free且未开封过的塑料制品，不必再进行其他处理，对于国产塑料制品，应按下列方法进行处理：在一玻璃烧杯中注入含终浓度为0.1%DEPC的去离子水，将要处理的塑料制品浸泡其中12小时以上，弃DEPC水溶液，适温烘烤干燥已处理过的塑料制品，再经103.4kPa，121℃高压灭菌15分钟，70-80℃烘烤干燥即可使用..（2）所用的玻璃器皿，置于干燥烘箱中200℃烘烤2小时以上。

rna提取方法RNA提取方法。

RNA提取是分子生物学研究中的重要步骤，它能够从细胞或组织中提取出RNA，为后续的实验分析和研究奠定基础。

本文将介绍几种常用的RNA提取方法，希望能够为实验工作者提供一些参考和帮助。

1. Trizol法。

Trizol法是一种常用的RNA提取方法，它利用Trizol试剂将细胞或组织中的RNA溶解，然后通过酚-氯仿提取的方式分离RNA。

该方法操作简单，提取效果好，适用于各种类型的样品。

但需要注意的是，在操作过程中要避免RNA的降解，尽量减少搅拌和离心的时间，以保证提取的RNA质量。

2. 氯仿-异丙醇法。

氯仿-异丙醇法是另一种常用的RNA提取方法，它通过氯仿和异丙醇的相分离作用，将RNA从其他细胞成分中提取出来。

该方法提取的RNA纯度高，适用于大规模的样品处理。

但需要注意的是，在操作过程中要避免氯仿的挥发和异丙醇的残留，以免对后续实验造成影响。

3. 磁珠法。

磁珠法是近年来发展起来的一种RNA提取方法，它利用表面修饰的磁珠与RNA特异性结合，通过磁场的作用将RNA分离出来。

该方法操作简便，提取效果稳定，适用于高通量的样品处理。

但需要注意的是，在操作过程中要避免磁珠的污染和RNA的降解，以保证提取的RNA质量。

4. 硅胶柱法。

硅胶柱法是一种经典的RNA提取方法，它利用硅胶柱的吸附作用将RNA从细胞或组织中提取出来。

该方法提取的RNA质量好，适用于对RNA纯度要求较高的实验。

但需要注意的是，在操作过程中要避免硅胶柱的交叉污染和RNA的降解，以保证提取的RNA质量。

总结。

以上介绍了几种常用的RNA提取方法，每种方法都有其特点和适用范围。

在选择合适的RNA提取方法时，需要根据样品的特性和实验的要求进行综合考虑。

同时，在操作过程中要严格控制各项操作条件，以保证提取的RNA质量。

希望本文能够对实验工作者有所帮助，谢谢阅读！。

RNA提取方法范文一、酚酸法酚酸法是最常用的RNA提取方法之一，它可以从多种生物样本中提取RNA。

这个方法的基本步骤如下：1.新鲜采集生物样本，并迅速将其转移到离心管中。

2.加入三倍体积的酸性酚：酚氯仿（5：1）溶液，对细胞进行破碎和溶解。

破碎细胞过程也可以用高压破碎机或超声波破碎器进行。

3.加入等体积的氯仿，并混匀离心。

4.收集上清液，使用等体积的异丙醇沉淀RNA。

5. 用70%乙醇洗涤RNA沉淀物，离心沉淀后空干，最后用RNase-free水重溶。

二、硅胶柱法硅胶柱法是一种基于硅胶材料的RNA提取方法，可以高效地纯化RNA。

它的基本步骤如下：1.用碱性裂解液将细胞或组织破碎，破坏蛋白质酶和其他核酸酶的活性。

2.加入等体积的酚氯仿提取混合物中的细胞碎片和其他凝固物。

3.加入等体积的异丙醇沉淀RNA。

4.将RNA沉淀物洗涤并去除DNA污染物。

5.将RNA反复吸附到硅胶柱上，去除杂质。

6.用低盐溶液洗涤硅胶柱，去除剩余的杂质。

7.用高盐洗脱RNA，收集纯化的RNA。

三、磁珠法磁珠法是一种通过磁珠将RNA与其他核酸或杂质分离的方法，它的基本步骤如下：1.用碱性裂解液将细胞或组织破碎，破坏蛋白质酶和其他核酸酶的活性。

2.加入等体积的异丙醇沉淀RNA。

3.将沉淀物沉淀，并洗涤去除DNA和其他杂质。

4.加入磁性磁珠，使其结合RNA。

5.使用磁性架将磁珠捕获，并洗涤去除杂质。

6.重新悬浮磁珠，将RNA从磁珠上洗脱。

7. 收集洗脱的RNA，用RNase-free水重溶。

需要注意的是，在RNA提取过程中应该尽量避免RNA降解和污染。

为了保证RNA的完整性和纯度，可以在提取过程中使用RNase酶抑制剂、做好境外灭菌的操作以及选择合适的材料和试剂。

综上所述，RNA提取方法有多种选择，每种方法都有其特点和适用范围。

选择适合的RNA提取方法对于分子生物学研究和基因表达分析的准确性至关重要。

RNA的提取方法RNA提取是一项关键的实验技术，用于从生物样本中分离和纯化RNA分子。

RNA的提取方法通常包括细胞破碎、RNA的溶解和纯化。

以下是几种常见的RNA提取方法：1.酚/氯仿提取法这是一种常见且经典的RNA提取方法。

首先将样品中的细胞进行破碎，然后将细胞裂解液与等体积的酚混合，并进行振荡离心。

酚可与蛋白质结合形成上清和有机相，而RNA会在有机相中沉淀。

接下来，用氯仿去除DNA等杂质，然后将上清转移到新离心管并加入异丙醇，以沉淀RNA。

最后，通过离心将RNA沉淀物收集并洗涤，最终得到纯化的RNA。

2.硅基膜或硅树脂提取法这是一种使用硅基膜或硅树脂来纯化RNA的高效方法。

在这种方法中，首先通过物理或化学方法破坏细胞膜，然后在硅基膜或硅树脂的表面上固定RNA。

接下来，通过对固定RNA进行洗涤和去除杂质的步骤，最终得到纯化的RNA。

3.列柱纯化法这是一种使用RNA捕获柱或硅膜柱等纯化RNA的方法。

在这种方法中，首先将裂解的细胞滤液加入到柱上，并经过多次洗涤，以去除杂质。

然后，通过改变柱的条件，如pH、盐浓度等，使RNA释放出来并收集。

这种方法具有高纯度、高通量和可自动化的优点。

4.磁珠提取法磁珠提取法是一种快速、高效的RNA提取方法。

在这种方法中，首先将裂解的细胞滤液与具有亲和性RNA结合能力的磁珠混合，并经过洗涤步骤去除杂质。

然后，通过改变磁场的条件，使磁珠内的RNA释放并收集。

这种方法适用于高通量的RNA提取，具有高产率和高纯度。

5.TRIZOL法TRIZOL法是一种常用的综合性RNA提取方法。

在这种方法中，样品中的细胞先与TRIZOL试剂混合，然后加入氯仿使得细胞的核酸沉淀。

接下来，将上清转移至新的离心管中，并加入异丙醇使得RNA沉淀。

最后，通过洗涤和离心将RNA沉淀物收集并纯化。

需要注意的是，不同的RNA提取方法适用于不同类型的样本和实验需求。

选择合适的RNA提取方法对于后续实验的成功与结果的准确性至关重要。

RNA提取1、动物组织从负80拿出之后要放在冰中，提前准备好枪头、镊子、匀浆器、无核酶管子（标记好）、transzol、氯仿、异丙醇、无水乙醇、无核酶水、滤纸等。

2、①组织：切组织50~100mg（多一些也可以），可以切数个小的，有利于研磨，放在管口然后用研磨棒粘着下去，然后加入1ml transzol在冰上充分碾磨，至肉眼看不到颗粒状物质。

②细胞：六孔板，用PBS洗两遍，每孔加入1ml transzol，在冰上吹打20次。

3、室温静置5-10分钟。

4、每使用1ml transzol，加0.2ml氯仿，剧烈震荡15s（这个一定要用力震荡，可以延长时间，有利用充分混合），室温孵育5~10min。

5、15000rpm，4度离心15分钟，分成三层，无色的上层，中间层，粉红色有机层下层，RNA主要存在于水相，一般可以吸出来400-500微升。

6、转移无色的水相于新的离心管，每使用1ml transzol加入0.5ml异丙醇，颠倒混匀，室温孵育10~15min。

7、15000rpm ，4度离心10分钟，去上清，在管底可以看到胶状物。

8、加入1ml 80%乙醇（无核酶水配制），剧烈震荡。

9、12000rpm ，4度离心8分钟。

10、重复8、9。

11、弃上清，倒扣EP管于滤纸之上，不能剧烈摇动，让乙醇自然流出，室温晾干沉淀10~20分钟（不宜过长因为RNA越干燥下一步用无核酶水溶解越难溶），此时可以完全看到管底有胶状物质，此时管壁可能存在一些流不出来的乙醇，将滤纸卷成圈然后吸一下，不要碰到RNA沉淀。

12、然后加入30微升溶解RNA沉淀，一般溶解5~10分钟，一般比较难容的可以轻微弹一下管壁，然后用离心机离一下。

13、然后进行定量，逆转录。

RNA提取⽅法总RNA的提取（Trizol法提取）在收集到⽣物材料之后，最好能即刻进⾏RNA制备⼯作。

若需暂时储存，则应以液氮将⽣物材料急速冷冻后，储存于-80℃冷冻柜。

在制备RNA时，将储存于冷冻柜的材料取出，⽴即以加⼊液氮研磨的⽅式打破细胞，不可以先⾏解冻，以避免RNase 的作⽤。

1.提取组织RNA时，每50～100mg组织⽤1ml Trizol试剂对组织进⾏裂解；提取细胞RNA时，先离⼼沉淀细胞，每5-10 ╳106个细胞加1ml Trizol后，反复⽤枪吹打或剧烈振荡以裂解细胞；2.将上述组织或细胞的Trizol裂解液转⼊EP管中,在室温15~30C下放臵5分钟；3.在上述EP管中，按照每1ml TRIZOL加0.2ml氯仿的量加⼊氯仿，盖上EP管盖⼦，在⼿中⽤⼒震荡15秒，在室温下（15℃～30℃）放臵2～3分钟后，12000g（2℃～8℃）离⼼15分钟；4.取上层⽔相臵于新EP管中,按照每1ml TRIZOL加0.5ml异丙醇的量加⼊异丙醇，在室温下（15℃～30℃）放臵10分钟,12000g（2℃～8℃）离⼼10分钟；5.弃上清，按照每1ml TRIZOL加1ml 75%⼄醇进⾏洗涤，涡旋混合，7500g（2℃～8℃）离⼼5分钟，弃上清；6.让沉淀的RNA在室温下⾃然⼲燥；7.⽤Rnase-free water 溶解RNA沉淀。

PCR实验室常⽤DNA聚合酶有三种：TaKaRa Taq TM，TaKaRa E X Taq TM和Pyrobest TM DNA Polymerase。

TaKaRa Taq TM 是⼀般的DNA聚合酶，保真性较差，但价钱便宜，⼀般⽤于基因表达的检测等。

TaKaRa E X Taq TM是具有Proof reading 活性的耐热性DNA聚合酶，具有⼀定的保真性，⽽且其扩增得到的PCR产物3’端附有⼀个“A”碱基，如果希望直接将产物克隆到T-vector可以⽤此酶。

RNA的提取方法RNA提取是生物学中一项非常重要的实验技术，它可以用于研究RNA在生物体内的表达以及功能调控。

RNA提取的方法有多种，下面将介绍一些常用的RNA提取方法。

1.总RNA提取：总RNA提取是最常用的RNA提取方法之一，它可以提取细胞或组织中的所有RNA种类，包括mRNA、rRNA和tRNA等。

总RNA提取的步骤包括细胞或组织的裂解、蛋白酶处理、RNA溶液的提取和纯化等。

提取时可以使用商业化的总RNA提取试剂盒，也可以自制试剂进行提取。

2.mRNA提取：mRNA是总RNA中占比相对较小的一部分，它包含了大部分的转录信息。

mRNA的提取主要是通过使用寡聚dT寡核苷酸的亲和浸润材料，富集含有poly(A)尾的RNA分子。

提取步骤包括细胞裂解、磁珠富集和纯化等。

3. miRNA提取：miRNA是一类长度较短的非编码RNA，具有多种生物学功能。

miRNA的提取相对较为复杂，步骤包括细胞裂解、蛋白酶处理、有机溶剂萃取、硅胶膜纯化和乙酸乙酯沉淀等。

商业化的miRNA提取试剂盒则简化了这一过程。

4.胚胎RNA提取：胚胎RNA提取主要适用于研究早期胚胎发育过程中的基因表达变化。

提取步骤包括选择合适的胚胎发育阶段、胚胎裂解、RNA的提取和纯化等。

在这个过程中，需要注意减少RNA的降解，因为胚胎RNA含有RNA酶。

5.组织RNA提取：组织RNA提取是为了研究不同组织中特定基因的表达差异。

提取组织RNA的步骤包括组织的裂解、蛋白酶处理、RNA的提取和纯化等。

组织RNA的含量通常较少，需要采取额外的措施来提高RNA的得率。

6.体液RNA提取：体液RNA的提取用于研究循环系统或分泌系统中的RNA信息。

体液RNA的提取步骤包括样本的离心、细胞裂解、RNA的提取和纯化等。

一般情况下，体液RNA的浓度较低，因此需要使用高敏感的RNA提取方法。

总的来说，RNA提取是RNA研究的基础，根据不同的研究目的和样本类型选择合适的RNA提取方法非常重要。

总RNA的提取方法（Trizol）
1、取1g植物材料，倒入液氮剧烈研磨，成粉（研磨成粉称重，无液氮时继续添加），转入离心管中，加入1ml Trizol混匀（除DNA）。

2、室温放置5min。

3、加200ul氯仿（1ml Trizol+0.2ml氯仿目的：除酚）剧烈震荡15s，室温放置3min（时间的控制）。

4、12000rpm，4℃,15min，取上层水相，大约600ul，下层有机相弃去。

5、加异丙醇（-20℃）混匀，室温放置10min（1ml Trizol+500ul异丙醇，目的：除盐，若盐少，可用无水乙醇）
6、12000rmp，4℃,10min，弃上清，RNA在管底和管壁形成胶状沉淀。

7、加1ml75﹪乙醇洗涤沉淀（用枪头吹打）低速离心5min，弃上清，4℃，,7500rmp，一般为7000rmp。

8、室温放置，晾干5至10min（不要过干，否则RNA难溶，另外，乙醇残留时会对RNA逆转录酶抑制）。

9、加25-30ulDEPC水，可用枪头吹打帮助溶解。

①看到沉淀时加30-50ulDEPC 水；②看不到沉淀时加20-25ulDEPC水。

注意事项：
1、DNA制备所需的水、溶液，都必须用DEPC 37℃预处理。

2、操作过程中要用到的Eppenolorf管，枪头必须经DEPC处理
3、玻璃器皿需高温干热（200℃）灭菌2-3h。

4、塑料制品和电泳槽等需要0.5mol/L的NaoH处理1-2h，然后用无菌水漂洗干净。

5、操作台和枪先用氯仿擦一遍。

6、操作中常换一次性手套，手是主要的污染源。

7、戴口罩，避免口中的RNA酶污染。

提取RNA及用DEPC去除RNase的个人总结精华RNA（核糖核酸）是一种重要的生物大分子，在生物学和分子生物学研究中起着至关重要的作用。

为了能够从生物样本中有效地提取RNA，并且保留其完整性和纯度，科学家们经过不断的探索和实践，发展出了各种提取RNA的方法。

本文将对提取RNA的常用方法进行介绍，并重点讲解如何使用DEPC来去除RNase的干扰。

1. RNA的提取方法在提取RNA之前，首先要选择合适的样本来源，常见的包括细胞、组织和体液等。

接下来，选择不同的提取方法根据样本的性质和研究目的来决定。

1.1 酚/氯仿法酚/氯仿法是一种经典的RNA提取方法。

它通过酚与细胞溶解膜的相容性，使RNA与DNA、蛋白质和其他杂质分离开来。

细胞或组织经过离心后，上清液中含有RNA，而DNA、蛋白质和其他杂质则被酚溶液中。

接着，氯仿会与酚中的DNA结合而形成沉淀，在离心过程中分离出来。

这样，我们可以获得相对较纯的RNA。

1.2 硅胶柱法硅胶柱法是一种基于RNA与硅胶的亲和性吸附原理的提取方法。

首先，样本经过蛋白酶、混悬液和酚/氯仿处理后，去除了DNA和蛋白质。

然后，将清洗后的样本溶液通过硅胶柱，RNA会在硅胶表面结合，其他杂质则被洗脱。

最后，将纯化后的RNA从硅胶上洗脱下来，即可得到较纯的RNA。

2. DEPC的使用及去除RNaseDEPC（二乙氧基甲基叔丁基苯胺）是一种常见的RNase抑制剂，可以有效地抑制RNase的活性，保护RNA的完整性。

2.1 DEPC的制备DEPC可以通过在无水环境下将其加入去离子水中进行制备。

在加入过程中要慢慢搅拌以确保彻底溶解，并进行蒸馏纯化，最终得到含有DEPC的去离子水。

需要注意的是，DEPC具有较强的致癌性和刺激性，使用时应佩戴个人防护用品，确保安全操作。

2.2 DEPC对RNase的抑制作用DEPC可以与RNase中的组氨酸残基反应，形成氨基甲酸甲酯，从而使RNase失活。

提取rna有哪些方法
提取RNA的方法有以下几种：
1. 酚/氯仿提取法：加入酚溶液和氯仿，使细胞裂解，并使RNA萃取至有机相中。

然后使用异丙醇和盐沉淀RNA，最后用乙醇洗涤和脱水。

2. 链霉亲和纯化法：利用链霉素结合特定序列（例如poly A序列）的能力，通过链霉素磁珠或石蜡树脂来纯化多聚A尾的mRNA。

3. 柱层析法：使用离子交换柱、凝胶层析柱或亲和层析柱（例如，根据RNA与硅胶柱或根据RNA酶的抗体选择性地结合）来分离和纯化RNA。

4. 总RNA提取法：将细胞或组织裂解，使用一种提取试剂（如TRIzol试剂）来提取总RNA。

总RNA中包含mRNA、rRNA和tRNA等各种类型的RNA。

5. 过滤提取法：通过使用尺寸排除膜或滤波器来去除细胞碎片和DNA，然后使用过滤盘或纤维膜纯化RNA。

需要根据实验需求和样品性质选择适合的RNA提取方法。