体内药物分析常用生物样品处理方法和方法学验证

体内药物分析中的样品预处理技术体内药物分析是指体内样品（生物体液、器官或组织）中药物及其代谢产物或内源性生物活性物质的定量分析。

通常药物进入体内后，其化学结构与存在状态就可能发生显著变化。

在体液中，药物的存在形式多样化，除游离型的原料药物或其代谢物，也有原形药物或其代谢物与葡萄糖醛酸等内源性小分子经共价结合的结合物（或缀合物），还有与蛋白质分子经氢键及其他分子间力结合的结合型药物；而且药物及其代谢物的浓度通常很低、干扰物质多。

因此，在测定时，除少数情况将体液作简单处理后可直接测定外，通常在测定前要对体内样品进行分离净化与浓集等样品前处理，从而为体内样品中药物的测定提供良好的环境和条件。

常用的样品前处理方法有：去除蛋白质、缀合物水解、化学衍生化、分离浓集及微波萃取和微透析技术等。

一、体内样品种类：体内药物分析采用的体内样品包括血液、尿液、唾液、头发、脏器组织、乳汁、精液、脑脊液、泪液、胆汁、胃液、胰液、淋巴液、粪便等样品。

这些大都具有：①采样量少；②待测物浓度低；③干扰物质多的特点。

二、体内样品预处理的目的：⑴使待测药物游离，以便测定药物或代谢物的总浓度；⑵满足测量方法的要求，纯化浓集样品；⑶保护仪器性能、改善分析环境。

三、常用生物样品预处理技术：⒈有机破坏法：湿法破坏：电热消化器法、电热板消化法、烘箱消化法干法破坏：高温电阻炉灰化法、低温等离子灰化法氧瓶燃烧法⒉去蛋白质法：溶剂解法（加入与水相混溶的有机溶剂）、加入中性盐、加入强酸、加入含锌盐或铜盐的沉淀剂、超滤法、酶水解法、加热法⒊分离、纯化和浓集法：液﹣液萃取法、固相萃取法⒋缀水物的水解法：酸水解法、酶水解法⒌化学衍生化发：硅烷化、酰化、烷基化、紫外衍生化、荧光衍生化、点化学衍生化、生成非对映异构体衍生化发四、新兴生物样品预处理技术：⒈微波消解⒉自动化固相萃取⒊固相微萃取⒋液相微萃取⒌微透析技术⒍超临界流体萃取⒎分子印迹固相萃取这里就固相微萃取技术和超临界流体萃取技术进行简单说明：⑴固相微萃取固相微萃取( Solid phase micro2-extraction,SPME) 是80年代末发展起来的样品预处理方法, 其装置简单, 操作方便, 已实现自动控制, 适用于现场分析。

体内药物分析第二章生物样品与样品制备1.体内药分的对象：人体和动物体液、组织、器官、排泄物 2．体内药物分析的特点：样品量少，不易重新获得；样品复杂，干扰杂质多；供临床用药监护的检测分析方法要求简便、快速、准确，以便迅速为临床提供设计合理的用药方案及中毒解救措施；实验室拥有多种仪器设备，可进行多项分析工作；工作量大，测定数据的处理和阐明有时不太容易。

需相关学科参与。

3．体内药物分析样品的种类：最常用且易获得的分析样品有：血样、尿样、唾液和粪便。

特殊情况下：乳汁、泪液、脊髓液、胆汁、羊水、各种组织4．血清：血清是由血液中纤维蛋白原等的影响引起血液凝结而析出的澄清黄色液体，约为全血的30%?50%5．尿液：尿液的主要成分：水、含氮化合物、盐类；体内药物清除主要通过尿液排出，药物以其原型或代谢物及其缀合物等形式排出；尿药测定主要用于药物剂量回收、尿清除率、生物利用度、药物代谢率的研究，并可推断患者是否按医嘱用药。

6．生物样品分析的前处理：是指测定生物样品中的药物及其代谢物时，对样品进行分离、纯化、浓集，必要时对待测组分进行衍生化，为测定创造良好的条件。

7．为何进行前处理？1）药物进入体内除原药外还有多种形式存在2）生物样品的介质组成比较复杂，尤其蛋白质严重影响分离效果，必须进行前处理3）除去介质中含有的大量内源性物质等杂质，提取出低浓度的被测药物，同时浓集药物或代谢物的浓度，使其在所用分析技术的检测范围内。

8．生物样品处理方法选择的一般原则：待测药物的理化性质；待测药物测定的目的与浓度范围。

9．去除蛋白质的方法：加与水相混溶的有机溶剂；加入中性盐；加入强酸；加入含锌盐及铜盐的沉淀剂；酶解法。

10．生物样品的分析由两步组成：样品的前处理（分离、纯化与浓集）和对提取物的仪器分析；提取法是应用最多的分离、纯化方法；提取的目的：从大量共存物中分离出所需要的微量组分药物及其代谢物，并通过溶剂的蒸发使样品得到浓集，以供测定；提取法分为液 -液提取法和液 - 固提取法。

体内药物分析方法(精选)体内药物分析方法(精选)随着现代医学的发展，药物在疾病治疗中起到了至关重要的作用。

对于新药物的研发、药物代谢的了解以及用药的个体化，需要使用合适的体内药物分析方法。

本文将介绍几种常用的体内药物分析方法。

一、液相色谱-质谱联用法（LC-MS）液相色谱-质谱联用法（LC-MS）是一种将液相色谱（LC）和质谱技术（MS）结合起来的分析方法。

它通过将待测样品进行分离，利用质谱技术对分离后的成分进行快速、准确的鉴定和定量。

LC-MS在药物代谢动力学研究、药物相互作用分析、药物残留检测、药物中间体的筛选等方面具有广泛的应用。

二、气相色谱-质谱联用法（GC-MS）气相色谱-质谱联用法（GC-MS）是一种将气相色谱（GC）和质谱技术（MS）结合起来的分析方法。

它通过将待测样品在高温条件下蒸发，然后在气相色谱柱上进行分离，最终通过质谱技术对分离后的物质进行鉴定和定量。

GC-MS在药物代谢研究、毒物学研究、药物滥用检测以及环境污染物分析等方面具有重要的应用价值。

三、原子吸收光谱法（AAS）原子吸收光谱法（AAS）是一种通过测量原子在特定波长的光束中吸收光的强度来定量分析样品中金属元素的方法。

AAS广泛用于测定药物中的微量金属元素。

例如，铁、锰、铜、锌等微量金属元素在生物体内被广泛应用。

AAS具有灵敏度高、准确性好等优点，成为体内药物分析中的重要技术手段。

四、高效液相色谱法（HPLC）高效液相色谱法（HPLC）是一种将液相色谱技术与高压技术结合起来的分析方法。

它通过将待测样品在高压下通过色谱柱进行分离，然后通过检测器对分离后的组分进行定性和定量。

HPLC广泛应用于药物代谢、药物溶出度的测定、药物杂质的分析等方面。

五、电感耦合等离子体质谱法（ICP-MS）电感耦合等离子体质谱法（ICP-MS）是一种将电感耦合等离子体技术与质谱技术结合起来的分析方法。

它利用高温等离子体对待测样品中的元素进行电离和激发，然后通过质谱技术进行分析。

体内药物分析方法验证主要有哪些体内药物分析的方法有很多，归纳起来主要有以下5类：
1、色谱分析法：
体内药物分析中，色谱技术（Chromatography）一直是研究体内药物及其代谢物最强有力的手段，其在体内药物分析中的应用始于上世纪八十年代。

2、联用分析法：
目前使用较广泛的为色谱联用分析法和色谱与核磁共振联用分析法。

3、免疫分析法：
免疫分析法（Immunoassay，IA）的原理是利用抗原-抗体的特异反应来测定体内药物的含量。

它将分析方法与免疫原理相结合，进行超微量分析，具有灵敏度高、选择性强、操作简便、快速用量少、样品一般不需进行预处理等优点。

4、光谱分析法：
光谱分析法（SpectroscopicAnalysis）包括比色法（COL）、紫外分光光度法（UV）、荧光分光光度法（FLUOR）和原子吸收分光光度法。

5、电化学分析法：
电化学分析法（ElectrochemicalAnalysis）是一类基于电池内发生电化学反应而建立起来的方法。

测定时，通过选择适当的电极组成化学电池，以测定电压、电流、电阻、电量等电信号强度变化来对
药物进行定性和定量分析。

该类方法的特点是仪器设备简单、操作方便，易于实现测试的连续化和自动化。

摘要目的：建立体内含量测定方法学，规范数据处理。

适用范围：体内实验，酶实验等。

1仪器试剂1.1仪器涡旋仪，20ul、200ul、1000ul移液枪，高速离心机，氮吹仪1.2试剂甲醇、乙腈（色谱纯）2操作规程2.1溶液配制2.1.1内标溶液配置（假设需加入20ul内标液的浓度为50ug/ml）将储备液浓度稀释到40ug/ml2.1.2标准曲线浓度配置假设血药最大浓度为30ug/ml，则设标曲血药最大浓度为60ug/ml血药浓度设定点为：60,30，12,6,2.4,1.2,0.48,0.24ug/ml10ul药物浓度为：600,300,120,60,24,12,4.8,2.4ug/ml（若吸收值比较大，继续逐级稀释，最低点测不到可减少浓度点）对应的序号为:1,2,3,4,5,6,7,8（稀释规律为1稀释两倍为2,1稀释5倍为3,2稀释5倍为4,3稀释5倍为6，一次类推）；在设定QC浓度时通常2号定为高浓度，中浓度一般选择标准曲线中间浓度可以选择4号或者5号，低浓度通常选择7号，标准曲线最低点即8号为最低定量限浓度（LLOQ）2.1.3加入的20ul药液配置取内标溶液（40ug/ml）X ul,再取同体积的配置的10ul药物浓度混合后即得。

2.2实验步骤2.2.1所需要处理的样品及具体细则：（1）处理标准曲线样品三套（随行空白样品）编号：1-1,1-2，1-3,1-4,1-5,1-6，1-7,1-8；1-kb2-1,2-2，2-3,2-4,2-5,2-6，2-7,2-8；2-kb3-1,3-2，3-3,3-4,3-5,3-6，3-7,3-8；3-kb操作：EP管加20ul药液（内标+药物），再加入空白血浆，沉淀蛋白，取上清液氮气吹干，复溶，进样（开始时进一套标曲，中间进一套标曲，最后进一套标曲）。

（2）处理QC样品（高、中、低）、LLOQ样品,每个浓度5份/天，连续处理三天编号：1高0-1，1高0-2，1高0-3，1高0-4，1高0-5；1中0-1，1中0-2，1中0-3，1中0-4，1中0-5；1低0-1，1低0-2，1低0-3，1低0-4，1低0-5；LL-1，LL-2,LL-3，LL-4,LL-5（最低定量限）.2高0-1，2高0-2，2高0-3,2高0-4，2高0-5；2中0-1，2中0-2，2中0-3,2中0-4，2中0-5；2低0-1，2低0-2，2低0-3；2低0-4，2低0-5.3高0-1，3高0-2，3高0-3,3高0-4，3高0-5；3中0-1，3中0-2，3中0-3,3中0-4，3中0-5；3低0-1，3低0-2，3低0-3,3低0-4，3低0-5.操作：EP管加20ul药液（内标+药物），再加入空白血浆，沉淀蛋白，取上清液氮气吹干，复溶，进样（每天进一批QC样品连续进三天）。

体内药物分析常用生物样品处理方法和方法学验证1.血浆血浆样品处理方法主要包括离心、超滤、蛋白沉淀和固相萃取。

首先，通过离心将血清和细胞分离，并将上清液收集。

然后，使用超滤技术去除高分子物质，如蛋白质，以得到更纯净的血浆样品。

接下来，可以使用蛋白沉淀方法去除血浆中的蛋白质，以便进一步分析非蛋白质药物。

最后，固相萃取是常用的药物浓度测定方法，可以通过固相材料吸附目标药物，然后用洗脱液洗脱和浓缩样品，最后定量分析。

2.尿液尿液样品处理方法常采用固相萃取、pH调节、加入稳定剂等技术。

固相萃取可以去除尿液中的杂质，并将药物萃取到固相材料上，然后用洗脱剂将药物洗脱出来。

pH调节可以使药物离子化或去离子化，以提高其固相萃取的效率。

此外，加入稳定剂可以保持样品的稳定性，防止药物分解或降解。

3.组织和细胞组织和细胞样品处理方法包括离心、组织切割、细胞溶解和蛋白沉淀等技术。

首先，通过离心将组织或细胞分离，并收集上清液。

然后，使用组织切割技术将组织样品切成适当的大小。

对于细胞样品，可以使用细胞溶解剂将细胞完全裂解。

最后，蛋白沉淀可以去除样品中的蛋白质，以便进一步分析非蛋白质药物。

方法学验证是为了确保分析方法的准确性和可靠性而进行的步骤和操作流程的验证。

主要包括以下几个方面：1.线性范围验证：验证方法在一定浓度范围内，药物浓度与测定结果之间的关系是否呈线性。

2.灵敏度验证：验证方法的最低检测限、最低定量限和测定范围等指标，以评估方法对药物浓度的敏感度。

3.精密度和准确度验证：通过重复测定和与参考方法比较等方法验证方法的重复性和准确性。

4.选择性验证：验证方法对样品中其他可能存在的干扰物的选择性，以保证药物的测定不受干扰。

5.稳定性验证：验证样品在不同温度、时间、pH条件下的稳定性，以评估样品的保存期限和条件。

综上所述，体内药物分析常用的生物样品处理方法包括血浆的离心、超滤、蛋白沉淀和固相萃取，尿液的固相萃取、pH调节和加入稳定剂，组织和细胞的离心、组织切割、细胞溶解和蛋白沉淀等。