体内药物分析常用生物样品处理方法和方法学验证
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体内药物分析中的样品预处理技术体内药物分析是指体内样品(生物体液、器官或组织)中药物及其代谢产物或内源性生物活性物质的定量分析。
通常药物进入体内后,其化学结构与存在状态就可能发生显著变化。
在体液中,药物的存在形式多样化,除游离型的原料药物或其代谢物,也有原形药物或其代谢物与葡萄糖醛酸等内源性小分子经共价结合的结合物(或缀合物),还有与蛋白质分子经氢键及其他分子间力结合的结合型药物;而且药物及其代谢物的浓度通常很低、干扰物质多。
因此,在测定时,除少数情况将体液作简单处理后可直接测定外,通常在测定前要对体内样品进行分离净化与浓集等样品前处理,从而为体内样品中药物的测定提供良好的环境和条件。
常用的样品前处理方法有:去除蛋白质、缀合物水解、化学衍生化、分离浓集及微波萃取和微透析技术等。
一、体内样品种类:体内药物分析采用的体内样品包括血液、尿液、唾液、头发、脏器组织、乳汁、精液、脑脊液、泪液、胆汁、胃液、胰液、淋巴液、粪便等样品。
这些大都具有:①采样量少;②待测物浓度低;③干扰物质多的特点。
二、体内样品预处理的目的:⑴使待测药物游离,以便测定药物或代谢物的总浓度;⑵满足测量方法的要求,纯化浓集样品;⑶保护仪器性能、改善分析环境。
三、常用生物样品预处理技术:⒈有机破坏法:湿法破坏:电热消化器法、电热板消化法、烘箱消化法干法破坏:高温电阻炉灰化法、低温等离子灰化法氧瓶燃烧法⒉去蛋白质法:溶剂解法(加入与水相混溶的有机溶剂)、加入中性盐、加入强酸、加入含锌盐或铜盐的沉淀剂、超滤法、酶水解法、加热法⒊分离、纯化和浓集法:液﹣液萃取法、固相萃取法⒋缀水物的水解法:酸水解法、酶水解法⒌化学衍生化发:硅烷化、酰化、烷基化、紫外衍生化、荧光衍生化、点化学衍生化、生成非对映异构体衍生化发四、新兴生物样品预处理技术:⒈微波消解⒉自动化固相萃取⒊固相微萃取⒋液相微萃取⒌微透析技术⒍超临界流体萃取⒎分子印迹固相萃取这里就固相微萃取技术和超临界流体萃取技术进行简单说明:⑴固相微萃取固相微萃取( Solid phase micro2-extraction,SPME) 是80年代末发展起来的样品预处理方法, 其装置简单, 操作方便, 已实现自动控制, 适用于现场分析。
体内药物分析第二章生物样品与样品制备1.体内药分的对象:人体和动物体液、组织、器官、排泄物 2.体内药物分析的特点:样品量少,不易重新获得;样品复杂,干扰杂质多;供临床用药监护的检测分析方法要求简便、快速、准确,以便迅速为临床提供设计合理的用药方案及中毒解救措施;实验室拥有多种仪器设备,可进行多项分析工作;工作量大,测定数据的处理和阐明有时不太容易。
需相关学科参与。
3.体内药物分析样品的种类:最常用且易获得的分析样品有:血样、尿样、唾液和粪便。
特殊情况下:乳汁、泪液、脊髓液、胆汁、羊水、各种组织4.血清:血清是由血液中纤维蛋白原等的影响引起血液凝结而析出的澄清黄色液体,约为全血的30%?50%5.尿液:尿液的主要成分:水、含氮化合物、盐类;体内药物清除主要通过尿液排出,药物以其原型或代谢物及其缀合物等形式排出;尿药测定主要用于药物剂量回收、尿清除率、生物利用度、药物代谢率的研究,并可推断患者是否按医嘱用药。
6.生物样品分析的前处理:是指测定生物样品中的药物及其代谢物时,对样品进行分离、纯化、浓集,必要时对待测组分进行衍生化,为测定创造良好的条件。
7.为何进行前处理?1)药物进入体内除原药外还有多种形式存在2)生物样品的介质组成比较复杂,尤其蛋白质严重影响分离效果,必须进行前处理3)除去介质中含有的大量内源性物质等杂质,提取出低浓度的被测药物,同时浓集药物或代谢物的浓度,使其在所用分析技术的检测范围内。
8.生物样品处理方法选择的一般原则:待测药物的理化性质;待测药物测定的目的与浓度范围。
9.去除蛋白质的方法:加与水相混溶的有机溶剂;加入中性盐;加入强酸;加入含锌盐及铜盐的沉淀剂;酶解法。
10.生物样品的分析由两步组成:样品的前处理(分离、纯化与浓集)和对提取物的仪器分析;提取法是应用最多的分离、纯化方法;提取的目的:从大量共存物中分离出所需要的微量组分药物及其代谢物,并通过溶剂的蒸发使样品得到浓集,以供测定;提取法分为液 -液提取法和液 - 固提取法。
体内药物分析方法(精选)体内药物分析方法(精选)随着现代医学的发展,药物在疾病治疗中起到了至关重要的作用。
对于新药物的研发、药物代谢的了解以及用药的个体化,需要使用合适的体内药物分析方法。
本文将介绍几种常用的体内药物分析方法。
一、液相色谱-质谱联用法(LC-MS)液相色谱-质谱联用法(LC-MS)是一种将液相色谱(LC)和质谱技术(MS)结合起来的分析方法。
它通过将待测样品进行分离,利用质谱技术对分离后的成分进行快速、准确的鉴定和定量。
LC-MS在药物代谢动力学研究、药物相互作用分析、药物残留检测、药物中间体的筛选等方面具有广泛的应用。
二、气相色谱-质谱联用法(GC-MS)气相色谱-质谱联用法(GC-MS)是一种将气相色谱(GC)和质谱技术(MS)结合起来的分析方法。
它通过将待测样品在高温条件下蒸发,然后在气相色谱柱上进行分离,最终通过质谱技术对分离后的物质进行鉴定和定量。
GC-MS在药物代谢研究、毒物学研究、药物滥用检测以及环境污染物分析等方面具有重要的应用价值。
三、原子吸收光谱法(AAS)原子吸收光谱法(AAS)是一种通过测量原子在特定波长的光束中吸收光的强度来定量分析样品中金属元素的方法。
AAS广泛用于测定药物中的微量金属元素。
例如,铁、锰、铜、锌等微量金属元素在生物体内被广泛应用。
AAS具有灵敏度高、准确性好等优点,成为体内药物分析中的重要技术手段。
四、高效液相色谱法(HPLC)高效液相色谱法(HPLC)是一种将液相色谱技术与高压技术结合起来的分析方法。
它通过将待测样品在高压下通过色谱柱进行分离,然后通过检测器对分离后的组分进行定性和定量。
HPLC广泛应用于药物代谢、药物溶出度的测定、药物杂质的分析等方面。
五、电感耦合等离子体质谱法(ICP-MS)电感耦合等离子体质谱法(ICP-MS)是一种将电感耦合等离子体技术与质谱技术结合起来的分析方法。
它利用高温等离子体对待测样品中的元素进行电离和激发,然后通过质谱技术进行分析。