抗凝血酶检测原理

抗凝血酶（AT ）检测介绍用途采用自动化分析仪定量测定血浆中抗凝血酶（AT ）的活性，能用于诊断AT 合成减少或消耗增加性疾病，和监测替代治疗效果。

概述和解释AT 是血浆凝血酶、活化因子V 的抑制剂，不可逆的抑制这些酶的复合物。

加入肝素后活化凝血因子的失活加速。

抗凝血酶（A ）有助于迅速测定抗凝血酶的生理活性，能用于诊断遗传性和获得性抗凝血酶缺乏，表示血栓危险度增加。

获得性抗凝血酶缺乏常见于大手术后或伴败血症的弥散性血管内凝血（DIC ）、坏死、肝实质病变（肝炎、药物中毒、嗜酒）和含雌激素的口服避孕药等消耗性疾病。

试验能早期检出有血栓危险度的病人。

方法学原理应用肝素使标本中抗凝血酶III 转换成抑制剂，使凝血酶失活。

残余凝血酶采用动力学方法测量405nm 吸光度的增加，公式如下：[]残余肝素过量标本＋凝血酶－凝血酶＋凝血酶III -AT ATIII ⎯⎯→⎯IPA ANBA OH Arg o Pr Gly Tos IPA ANBA Arg o Pr Gly Tos −+−−−−⎯⎯⎯⎯→⎯−−−−−残余凝血酶病人标本中吸光度线性降低与抗凝血酶III 出现呈线性关系。

样本为了获得血浆，仔细混合1份枸橼酸钠（0.11mol/l ）和9份静脉全血，避免产生泡沫。

立即离心，不小于1500×g 、至少10分钟。

标本稳定性-20℃ 1月2~8℃ 2天15~25℃ 6小时贮存在-20℃的冻融血浆必须在37℃10分钟内溶解，在2小时内完成检测。

不能多次冷冻。

使用未稀释的标本。

室内质量控制每次校准和每天每8小时应运行2种质控物（1份为正常范围，另一份为病理范围）。

质控物必须和标本一样处理。

每个实验室应建立自身质控范围，即采用厂商提供的质控物的靶值和范围的均值，或者实验室建立的均值和可信范围。

如果质控测定值超出可信范围，应核查试剂、参考曲线和血凝分析仪。

操作的局限性抗凝剂如水蛭素，会干扰AT试验结果。

预期值正常的75-125%（对于成人和3个月以上儿童）。

凝血四项检测方法及原理凝血四项？嘿，那可是个超重要的检测呢！先说说凝血酶原时间（PT）的检测吧。

把血液样本放进仪器里，就像把小士兵放进战场，仪器开始各种分析。

检测步骤不难，就是取血、处理、分析。

但可得注意啊，取血的时候一定要规范，不然结果能准吗？这就好比做饭，材料不对，味道能好吗？PT 反映外源性凝血系统状况，能看出有没有出血倾向啥的。

安全性？那绝对杠杠的，都是经过严格测试的方法，不会出啥幺蛾子。

稳定性也没得说，只要操作规范，结果基本靠谱。

那它用在哪呢？手术前得查吧，万一凝血有问题，手术可就危险了。

优势就是快速、准确，能让医生快速了解患者凝血情况。

就像有个小侦探，一下子就把凝血的秘密给找出来了。

活化部分凝血活酶时间（APTT）呢，也是个厉害角色。

检测的时候就像一场神秘的探险。

同样取血处理分析，注意事项也不少，比如样本不能被污染。

这就跟宝贝不能弄脏了一样，弄脏了就不灵光了。

APTT 反映内源性凝血系统状况，能发现一些隐藏的问题。

安全性和稳定性也很棒，不用担心出乱子。

应用场景也多，像一些血液病的诊断就少不了它。

优势就是敏感，能早早发现问题。

就像个小雷达，啥问题都逃不过它的眼睛。

凝血酶时间（TT）呢，也是很关键。

检测过程就像解谜一样。

取血后认真分析，注意样本的保存。

要是保存不好，结果可就不准啦。

TT 反映纤维蛋白原转为纤维蛋白的时间。

安全性高，稳定性强。

可以用于检测一些抗凝药物的效果。

优势就是针对性强，能专门针对纤维蛋白进行检测。

就像个小狙击手，瞄准目标一击即中。

纤维蛋白原（FIB）检测也很重要。

检测就像一场魔法表演。

取血分析，注意操作的准确性。

FIB 反映凝血功能的一个重要指标。

安全性和稳定性都有保障。

在很多疾病的诊断中都有用。

优势就是直观，能让医生清楚看到凝血功能的情况。

就像个小镜子，把凝血的情况照得清清楚楚。

实际案例？那可多了去了。

比如有个患者要做手术，术前做了凝血四项检测，发现凝血有问题，及时调整了治疗方案，避免了手术中的风险。

出凝血6.1抗凝血酶III（AT III）活性测定（第四版）出凝血6.2 原理：抗凝血酶III能和凝血酶形成复合物，使之丧失转化纤维蛋白原为纤维蛋白的酶活性。

在血浆中加入过量的凝血酶后，凝血酶与血浆中的AT III形成1︰1复合物，剩余的凝血酶作用于显色剂，裂解出显色基团，其显色程度与血浆中的AT III活性呈负相关。

出凝血6.3标本处理：患者处于休息状态下，采空腹静脉血（急诊病人除外）。

采血者应技术熟练，“一针见血”，以防止组织损伤，使外源性凝血因子进入标本。

最好不与其它实验一起采集而使血液停留在针管的时间延长。

采完血后，将血液沿管壁缓缓注入试管，避免产生气泡；然后迅速将血液和抗凝剂轻轻颠倒混匀，避免用力震荡。

全血要在1小时内分离血浆。

分离乏血小板血浆时，要在室温下3000rpm离心10分钟，室温下可存放4小时。

全部试验不能在4小时内完成，应将乏血小板血浆分装在0.5～1.0ml的小试管中快速冷冻，储存于-20℃冰箱中。

冷冻过的标本不能再次冷冻，否则结果会不准确。

冷冻血浆融化时，应将盛冷冻血浆的容器置于37℃水浴中，并轻轻摇动，使其迅速融化。

出凝血6.4 试剂：试剂购于天津威士达公司AT III试剂盒：试剂盒代号OWWR 15。

试剂包括6×15ml凝血酶试剂；6×3ml底物试剂；1×100ml缓冲液。

凝血酶试剂每瓶用15ml 缓冲液复溶，室温平衡30分钟。

底物试剂每瓶用3ml蒸馏水复溶，室温平衡30分钟。

出凝血6.5仪器：使用Sysmex公司的CA-7000型全自动血液凝固仪。

出凝血6.6 操作：按仪器操作步骤执行标准操作。

出凝血6.６.1开机：按下机器侧面的POWER 按钮。

开机后机器进行自检，当屏幕上边显示“Ready:”时可以进行试验。

出凝血6.６.2检查消耗品：1、准备反应杯：打开仪器上盖装反应杯的盖子查看反应杯是否够量，不足时，需及时添加。

（一次性最多可放1000 个杯子）2、准备试剂：按照仪器对试剂的要求，把试剂准备好，放到仪器内相应位置，注意查看试剂的量和有效期。

血浆凝固酶试验原理及应用血浆凝固酶是一种重要的血液凝固酶，它在机体内参与了血液凝固过程中的“内源性”凝血系统。

凝血酶原是一种粉末样的蛋白质，它被凝血酶原转化酶（也称因子ⅩIII）转化为凝血酶。

血浆凝固酶试验是检测凝血酶原转化酶活性的一种方法。

该试验通过观察血浆中的凝血酶原转化为凝血酶的速度来评价凝血酶原的活性。

血浆凝固酶试验的原理是通过活化因子Ⅻ促进凝血反应的发生，加入磷酸盐缓冲液和钙离子，激活因子Ⅴ，然后再加入凝血因子Ⅷ和Ⅹ，最后再加入凝血酶原，观察凝血酶原转化为凝血酶的时间。

根据时间的长短可以判断血浆凝固酶的活性。

通常情况下，凝血酶原转化酶活性正常，凝血酶原可以在一定的时间内被转化为凝血酶，保证了血液凝固的正常进行。

但当凝血酶原转化酶活性受到影响时，凝血酶原的转化速度可能增加或减慢，从而导致血液凝固功能的异常。

血浆凝固酶试验主要应用于评估患者的凝血功能状态，尤其是在外科手术前、高危患者的护理过程中、怀疑出血紊乱或血栓形成异常的检查中。

凝血功能的异常在外科手术、围术期及产科育婴分娩等情况下都是不容忽视的，因此血浆凝固酶试验有重要的临床价值。

通过血浆凝固酶试验可以及时评估患者的凝血功能状态，及时采取相应措施进行干预，减少出血风险。

此外，血浆凝固酶试验还可以用于评估凝血功能的异常状态，包括遗传性凝血因子缺陷、获得性凝血因子缺陷和抗凝系统异常等。

对于遗传性凝血因子缺陷，血浆凝固酶试验可以评估患者的凝血功能状态，指导治疗和预后评估。

对于获得性凝血因子缺陷，如维生素K缺乏病、肝功能衰竭等，血浆凝固酶试验可以及时发现凝血功能异常，从而指导治疗。

对于抗凝系统异常，血浆凝固酶试验也可以用于评估抗凝系统的功能状态，以指导抗凝治疗的有效性和安全性。

在临床实践中，血浆凝固酶试验通常与其他凝血功能试验相结合使用，如凝血酶原时间（PT）、活化部分凝血活酶时间（APTT）、凝血酶时间（TT）等。

通过综合分析多个凝血功能指标，可以更全面地评估患者的凝血功能状态，从而制定合理的治疗方案。

凝血四项检测，即常见的PT、APTT、TT、FIB四项指标的检测，是评估患者的凝血功能状态的常用方法。

在临床上，常用于手术前准备、抗凝治疗监测、DIC等病理状态的诊断和疾病治疗过程的监测。

下面我们来看一下这四项检测的原理和指标意义。

1. PT检测原理PT是血浆凝血酶原时间，其指的是血浆中血凝酶原转变成血凝酶所需的时间。

PT检测原理是在外源凝血通路上，通过观察血浆中凝血反应物质与其他组分的相互作用而获得的结果。

正常情况下，PT值一般在10-13秒之间，超出一定范围可能提示凝血功能障碍。

2. APTT检测原理APTT是活化部分凝血时间，其指的是血浆中凝血因子的内在通路所需时间。

APTT检测原理是通过钙离子与凝血因子活化剂、凝血酶原激活剂和其他组分的相互作用而获得的结果。

正常情况下，APTT值一般在20-40秒之间，超出一定范围也可能提示凝血功能障碍。

3. TT检测原理TT是凝血时间，其指的是在添加凝血酶原激活剂后，血浆中血纤维蛋白转变成凝血酶的时间。

TT检测原理是通过观察血浆中凝血酶原与凝血酶的相互作用，以及血纤维蛋白的形成和溶解过程而获得的结果。

正常情况下，TT值一般在10-15秒之间，超出一定范围也可能提示凝血功能障碍。

4. FIB检测原理FIB是纤维蛋白原，其指的是血浆中未转化为纤维蛋白的原始形态。

FIB检测原理是通过测量纤维蛋白原在溶液中聚集成的纤维蛋白的含量。

正常情况下，FIB值一般在2-4g/L之间，如果FIB值太低，则提示可能存在凝血障碍。

总之，凝血四项检测是评估患者凝血功能状态的重要方法，各项指标的异常情况均暗示其对应的凝血功能存在障碍。

医生在临床上需要结合患者的具体情况，综合判断并进行相应治疗。

血凝抑制试验原理血凝抑制试验是一种用于检测血液凝血功能的实验方法，通过该试验可以了解血液中凝血因子的活性和功能状态，对于一些凝血功能异常的疾病诊断和治疗具有重要的临床意义。

下面将详细介绍血凝抑制试验的原理及其相关内容。

首先，血液凝血是机体对抗外界出血的重要生理过程，它包括血小板聚集和血浆凝血因子的激活。

凝血过程由内源凝血途径和外源凝血途径组成，两者最终汇合于共同通路，形成纤维蛋白原凝块，使血液凝固。

而血凝抑制试验主要是通过模拟体内凝血过程，测定血浆中抗凝血物质的活性，以评价凝血功能状态。

其次，血凝抑制试验的原理是通过加入外源激活剂和凝血因子，观察血浆中凝血酶原时间（PT）和活化部分凝血活酶时间（APTT）的变化来评估凝血功能。

在正常情况下，当外源激活剂和凝血因子加入后，血浆中的凝血酶原时间和活化部分凝血活酶时间会在一定时间内出现明显的延长，反映了凝血因子的活性和功能状态。

而在某些凝血功能异常的疾病中，这些时间会出现异常缩短或延长的情况，从而提示了凝血功能的异常。

此外，血凝抑制试验还可以通过测定凝血因子的活性来评价凝血功能。

在试验中，可以加入不同浓度的抗凝血物质，观察凝血因子活性的变化，从而评估抗凝血物质对凝血功能的影响。

通过这种方法，可以更加准确地了解凝血功能异常的原因和程度。

综上所述，血凝抑制试验是一种重要的检测血液凝血功能的方法，其原理是通过模拟体内凝血过程，测定血浆中抗凝血物质的活性，以评价凝血功能状态。

通过测定凝血酶原时间和活化部分凝血活酶时间的变化，以及测定凝血因子的活性，可以更加准确地了解凝血功能的异常情况，为临床诊断和治疗提供重要的参考依据。

血凝抑制试验的开展对于促进血液凝血功能的研究和临床诊疗具有重要的意义。

凝血酶原时间【PT】原理 : 将凝血活酶和钙离子加到枸椽酸钠抗凝血浆中，37 ℃保温，测定血浆凝固时间(PT) 。

如果患者凝固时间延长，表示血浆中缺乏( 或降低) 某一种或几种凝血因子。

本法主要用于过筛检测外源凝血途径依赖维生素K的第Ⅱ、第Ⅶ、第Ⅹ因子。

另外，第Ⅴ因子和纤维蛋白原缺乏以及存在相关因子的抑制物时，也可出现异常结果。

活化部分凝血活酶时间【APTT】原理将一种脑磷脂( 血小板替代物，即部分凝血活酶) 和激活剂加到血浆中，经过保温后，加入适当浓度的钙离子。

其纤维蛋白凝块形成的时间( 以秒计)，即为APTT。

本法主要用于过筛测定内源途径和共同途径凝血因子的缺陷，如因子Ⅻ、Ⅶ、Ⅸ、Ⅺ、PK、HMWK 以及纤维蛋白原等。

同时也用于上述因子的抑制物测定和肝素治疗的监控。

激活凝血试验【ACT】原理：血液中加入惰性硅藻土，可增加血浆接触活性，加速血液凝结过程，从血液注入含硅藻土的试管开始至有血凝块出现即为ACT。

测定ACT可了解内源性凝血通路，也是监测肝素水平和鱼精蛋白用量最有用的指标。

用硅藻土监测ACT的正常值为60～130s。

不过它的变动范围大而且受许多因素如血小板计数和功能、纤维蛋白原水平，温度、抑肽酶及鱼精蛋白过量影响。

国际标准化比值【INR】是通过PT换算来的标准比值，能更准确的反映凝血酶原时间。

WHO规定用Warfarin（法华林）时INR值允许范围为：手术前处理：（非髋离手术1.5～2.5，髋部外科手术2.0～3.0）；预防静脉血栓；2.0～3.0；活动性静脉血栓；（反复发生的静脉血栓，肺栓塞及其预防 2.0～4.0）；预防动脉血栓和栓塞包括心脏瓣膜（机械瓣）的手术：3～4.5。

-------------------------------------------------------------------------------------------------------------【肝素】1916年Mclean发现了肝素。

凝血酶时间检测原理咱们人体的血液啊，就像一个超级复杂又神奇的小宇宙。

凝血是身体的一个超级重要的功能，就像是身体的小卫士在伤口那里搭起一个个小堡垒，防止血液一直流个不停。

而凝血酶时间检测呢，就是专门来看看这个凝血过程里的一个小环节到底正不正常的。

那凝血酶是啥呢？它就像是凝血这个大工程里的一个小工匠。

当我们身体有了伤口，一系列的凝血因子就开始忙活起来了。

凝血酶就是在这个过程中出现的一个关键角色。

它可以把纤维蛋白原变成纤维蛋白。

纤维蛋白啊，就像是一根根小绳子，它们会交织在一起，最后形成一个大网，把血细胞啥的都网住，这样就形成了血凝块，伤口就不会流血啦。

凝血酶时间检测呢，就是在实验室里，把病人的血浆拿出来，然后加入标准的凝血酶。

这就像是一场小小的比赛，看看凝血酶在这个血浆里发挥作用的速度。

正常情况下呢，凝血酶一加入，纤维蛋白原就会很快地被转化，然后就会在一定的时间内形成血凝块。

这个正常的时间范围是有标准的哦。

如果凝血酶时间变长了，那就说明可能有点小问题啦。

也许是纤维蛋白原的量不够，就像小工匠要做网子，但是原材料不够，那肯定就慢呀。

又或者是纤维蛋白原的质量不太好，就像原材料有点劣质，不好加工。

还有可能是有一些其他的东西在捣乱，比如说有一些抗凝物质，它们就像调皮的小捣蛋鬼，阻止凝血酶好好工作。

相反呢，如果凝血酶时间变短了，这也不正常哦。

这可能是因为血浆里有一些不正常的物质，让凝血酶变得太兴奋了，干活干得太快，这也不是身体正常运转该有的状态呢。

凝血酶时间检测在临床上可重要啦。

医生们就像侦探一样，通过这个检测结果来判断病人的凝血功能是不是正常。

比如说，如果有病人总是容易出血，或者是在做手术之前，都要看看这个凝血酶时间。

如果凝血酶时间不正常，医生就会想办法调整，就像调整一个小机器的某个零件一样，让身体的凝血功能恢复正常。

【名称】抗凝血酶-Ⅲ【英文名】antithrombin Ⅲ【别名】【概述】人体内与凝血系统功能相拮抗的是抗凝血系统，在正常情况下，两者保持动态平衡，从而维持血液在血管内的正常流动。

抗凝血酶Ⅲ是抗凝系统中最重要的成分，它由肝脏合成，为一种多功能的丝氨酸蛋白酶抑制物，可抑制凝血酶生成，具有强大的抗凝活性．占血浆抗凝酶活性的70%。

【原理】在含有抗AT-Ⅲ抗血清(抗体)的琼脂糖凝胶板孔中，加入受检血浆或血清(抗原)，进行电泳，抗原和抗体会形成特异地火箭样免疫沉淀峰。

沉淀峰的高度与样品中AT-Ⅲ的抗原量成正比关系。

【试剂】(1)兔抗人AT-Ⅲ血清。

(2)巴比妥-盐酸缓冲液(pH值8.2)：巴比妥钠47.6g，溶于3L水中，加1.17mol/L盐酸(浓盐酸193ml加水1807ml)55ml，测pH值，并以盐酸校正pH 值至8.2，然后用水补足总量至4265ml。

(3)标准血浆。

(4)4.4mmol/L磷钼酸溶液。

【操作方法】(1)将溶解后的兔抗人AT-Ⅲ血清(试剂A)按瓶签标示稀释倍数的一半，用电泳缓冲液稀释备用。

另用水配成20g/L浓度的琼脂糖溶液。

将上述两种溶液在56℃等量混匀，倾入夹有80mm×80mm×1.5mm“U”形模框的两块玻板中，待凝固后，于板之一侧打一排加样孔，孔径2mm，孔距3mm。

(2)将溶解后的标准血浆(试剂B)用水作1∶2、1∶4、1∶8、1∶16的稀释，样品也用水作1∶5稀释，然后用微量加样器分别定量加入加样孔，每孔5μl，于15V/cm电势梯度下，电泳6h(加样孔应置于负极侧)。

(3)电泳完毕，将凝胶板置4.4mmol/L磷钼酸溶液中，固定15min，量取各火箭峰，自加样中心至峰尖的高度(mm)。

以不同稀释度标准血浆的峰高(X)对相应的AT-Ⅲ抗原含量(Y)在正坐标纸上制作标准曲线。

再将样品的峰高在标准曲线上直接读出AT-Ⅲ抗原含量；亦可作直线回归运算，得回归公式Y＝b x＋a，将样品的峰高代入式中x，即得出ATⅡ∶Ag的含量Y。

抗凝血酶（AT）测定1. 实验原理在待测血浆中加入过量的凝血酶，凝血酶与血浆中的AT形成1:1的复合物，剩余的凝血酶作用于显色肽S2765，裂解出显色基团对硝基苯胺(pNA)，用405nm测吸光度，显色程度与剩余凝血酶的量成正相关，而与血浆AT的量呈负相关。

2. 标本采集2.1 早晨空腹采血(空腹12小时左右)，静脉采血。

2.23.8％(w/v)枸椽酸钠0.2ml+静脉血1.8ml，混匀。

3. 标本存放：全血贮存在4～10oC不超过2小时，最好1小时内(3000r/min×15min)分离血浆，此血浆在室温22～24oC下可存放2小时，在2～4oC可存放4小时，在-20oC 可存放2周，长时间保存需在冰冻条件下，在-70oC可存放6个月。

冷冻血浆融化时，应将盛血浆的容器置37oC水浴中，并轻轻摇动，使其迅速融化，以免凝血因子消耗，解冻后立即测试。

冷冻过的标本不能再次冷冻，否则结果不准确。

4. 标本运输：低温条件下运输。

5. 标本拒收的标准：抗凝剂不符合，采血量不准确，凝固，溶血，脂血标本不能作该项目检测。

6. 实验材料：6.1每个试剂均购自德国Dade Behring Marburg公司。

1）AT测定试剂盒（代号P/N:20008900）冻干发色底物S2765 2瓶（6mg/瓶)冻干活化X因子试剂（包括牛活化X因子、肝素、缓冲液、牛血清白蛋白）2瓶2）定标血浆Calibration Plasma（代号P/N:8467300）3）正常质控血浆Normal control plasma（代号P/N:8467011）4）异常水平发色底物法质控血浆Abnormal chromogenic control plasma level I/II（代号P/N:8467600）5）Cleaning agent（代号P/N:9832700）6）Cleaning solution（代号P/N:9831700）6.2试剂准备发色底物：用2mL NCCLS II型或相同质量的蒸馏水溶解1瓶冻干发色底物，盖上盖子，轻摇至完全溶解，置15～25oC30分钟，用前摇匀，勿用力振摇。