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dna多态性分析基础教学课件pptxx年xx月xx日CATALOGUE目录•引言•dna多态性基础知识•dna多态性分析技术•dna多态性与生物进化•dna多态性与基因组医学•讨论和总结01引言DNA多态性分析是生物信息学的一个重要领域，它涉及到遗传变异和个体差异的研究，对于深入探讨人类生物学特征、遗传疾病和个性化医疗等领域有着重要的意义。
当前研究现状和发展趋势目前，DNA多态性分析已经成为了生物信息学领域的研究热点之一。
随着测序技术的不断进步和生物信息学算法的日益优化，DNA多态性分析在研究人类遗传疾病和药物反应等领域的应用越来越广泛。
03掌握相关数据分析技巧学生需要掌握常用的数据分析技巧，如基因型比对、连锁分析和聚类分析等。
01掌握DNA多态性分析的基本概念和原理学生需要了解DNA多态性的基本概念、分类、遗传学基础以及测序技术的基本原理等。
02熟悉常用的DNA多态性分析软件和方法学生需要熟悉常用的DNA多态性分析软件、数据处理流程以及统计学分析方法等。
预期学习成果熟悉常用的DNA多态性分析软件和数据处理流程；理解DNA多态性的基本概念和遗传学基础；能够理解和应用相关的生物信息学知识和术语。
能够应用常用的DNA多态性分析方法和数据分析技巧；02dna多态性基础知识DNA是一种长链生物分子，其结构由双螺旋组成，两条链上的碱基通过氢键相互配对。
DNA双螺旋结构DNA中的碱基有四种，分别是腺嘌呤（A）、鸟嘌呤（G）、胸腺嘧啶（T）和鳞喉嘧啶（C）。
碱基种类dna结构与组成DNA复制DNA的复制是指DNA双链在细胞分裂之前进行的复制过程，以保证亲代DNA的遗传信息正确传递给子代。
转录和翻译DNA的遗传信息通过转录和翻译两个过程转化为蛋白质，其中转录是指将DNA上的信息转录到RNA上，翻译是指将RNA上的信息翻译成蛋白质。
dna的复制和表达DNA多态性是指在一个生物群体中，存在两种或多种不同的DNA序列或基因型，这些序列或基因型在频率上至少相差1%。
人类基因多态性及其在疾病中的作用研究人类基因的多样性是指在基因组中存在着大量的变异形式，这些变异形式会导致个体之间在基因型和表型方面的差异。
基因多态性在人类进化、种群遗传学、生殖医学等方面有着重要的作用。
本文主要讨论人类基因多态性在疾病中的作用研究。
一、基因多态性与疾病的关系人类基因多态性对疾病的易感性和发生率有着重要的影响。
目前已知的疾病与基因的关联关系有三种类型：单基因遗传性疾病、多基因遗传性疾病和环境因素与基因的相互作用导致的疾病。
1、单基因遗传性疾病单基因遗传性疾病指由单个基因的突变引起的疾病，例如囊性纤维化、地中海贫血等。
这类疾病的发生率较低，通常表现为家族性聚集。
在遗传学中，存在以A、a表示基因的等位基因，每个人都有两个等位基因。
有些等位基因是显性的，有些是隐性的。
如果某个基因出现突变，从而导致这个基因的表达方式或功能发生改变，就会引起相应的疾病。
2、多基因遗传性疾病多基因遗传性疾病指受多个基因影响的疾病，例如糖尿病、高血压等。
这类疾病的发生率较高，常常表现为不同等级的易感性。
每个人的基因组都存在着大量的基因多态性，每个基因的等位基因数量也不尽相同。
如果某些基因的等位基因发生变异导致其表达方式或功能发生改变，就会对人体的生理机能产生影响，从而引发疾病。
3、环境因素与基因的相互作用导致的疾病环境因素与基因的相互作用也可以导致某些疾病的发生。
例如饮食、生活习惯、环境污染等对基因罕见变异的人更容易产生影响。
这也解释了为什么同一种疾病同一种基因型的人却具有不同的表型和发病率。
二、基因多态性与疾病的研究方法基因多态性与疾病之间的关联还不是很清楚，因此现在研究这一领域的学科被称为分子遗传流行病学，目的是通过研究基因多态性与疾病的相关性，进一步探索疾病的病因和治疗。
1、关联分析关联分析是一种研究基因多态性与疾病相关性的方法，通常使用两种技术：基因测序和基因芯片技术。
基因芯片技术能够快速而准确地在大量样本中分析出数千个SNP的基因型，而基因测序则可以更全面地研究某个基因的所有突变情况。
基因突变和多态性基因突变和多态性是遗传学中的重要概念，它们在生物进化和个体间的变异中起着关键作用。
本文将探讨基因突变和多态性的定义及其在生物界的意义，以及它们对生物适应性和人类健康的影响。
一、基因突变的定义与分类基因突变是指DNA序列发生的一种突然而异常的变化，它是遗传信息的重要组成部分。
基因突变可以分为多种类型，包括点突变、插入突变、缺失突变和倒位突变等。
这些突变可能会影响基因的表达和功能，进而导致生物性状发生变化。
二、基因突变对生物进化的重要性基因突变是生物进化的基础，它为生物体的遗传多样性提供了源源不断的新变异。
基因突变可以使得个体具备适应环境的新特征，从而在竞争中获得优势并传递给后代。
这种累积的遗传变异是进化的主要驱动力之一。
三、多态性的定义与种类多态性是指在一个种群中存在多种形态或表型的现象。
基因多态性是多态性的一个重要表现形式，它指的是同一基因具有多种等位基因，并且不同等位基因可能对生物表型产生不同的影响。
多态性可以分为基因型多态性和表型多态性。
四、多态性对生物适应性的影响多态性可以增强群体的适应性和生存能力。
一方面，基因多态性使得生物个体对变化环境具备更多的适应选择余地，可以减轻环境压力对群体的冲击。
另一方面，多态性还可以促进生物的繁殖和繁殖成功率，提高遗传多样性。
五、基因突变和多态性在人类健康中的作用基因突变和多态性在人类健康中扮演重要角色。
一些基因突变可能导致人类遗传病的出现，如囊性纤维化、镰刀细胞性贫血等。
然而，基因多态性也可以带来一定的优势，如免疫系统的多态性有助于人类抵抗疾病。
了解基因突变和多态性对人类健康的影响，对疾病的预防和治疗具有重要意义。
六、探索基因突变和多态性的未来研究方向随着科学技术的进步，我们对基因突变和多态性的认识还在不断深化。
未来的研究方向包括基因突变的机制解析、多态性与环境交互作用的探索，以及利用基因突变和多态性的知识开展针对遗传病的治疗和预防等。
总结：基因突变和多态性对生物界的影响是不可忽视的。
临床医学检验：分子生物学检验技术考试题库1、填空题由于DNA是由4种碱基组成的，所以任何限制性内切核酸酶的切割频率的理论值应该是____________________。
正确答案：1/42、配伍题翻译前体（江南博哥）的RNA是()细胞内含量最多的RNA是()蛋白质翻译的模板是()核小体RNA是()A．hnRNAB．mRNAC．snRNAD．rRNAE．tRNA正确答案：A,D,B,C3、判断题基因的多态性指一个群体中，同时和经常存在两种以上的变异型() 正确答案：对4、多选下列哪些是染色体以外的遗传因子()A．病毒核酸B．真核生物的线粒体C．细菌的质粒D．转座子E．转位因子正确答案：B, C, D, E5、单项选择题pBR322质粒载体的描述中，错误的是()A．只有一个复制起始位点B．具有两个抗生素抗性基因C．抗性基因中有抗四环素基因D．具有较小的分子量E．具有较高的拷贝数正确答案：C6、判断题蛋白质芯片技术的特点为假阳性率低，样品用量少，无交叉杂交现象()正确答案：错7、单选?某女，29岁，由于感冒、发烧住院，实验室检查：免疫球蛋白降低，CD4分子数量减少。
经询问，该病人有不洁性接触史。
进一步检查应做()A．梅毒抗体或抗原检查B．泌尿生殖道感染C．HIV抗原检测D．分子生物学检查染色体E．不需要检查，直接治疗正确答案：C8、单选?男，45岁，发现有动脉硬化症状。
查体：见角膜有老年性色素环。
查血：TC12.00mmol/L，TG2.6mmol/L。
最可能的诊断是()A．混合性高脂血症B．高甘油三酯血症C．家族性高胆固醇血症D．Ⅰ型高脂血症E．Ⅱ型高脂血症正确答案：C9、问答题试述基因多态性在遗传性疾病发生方面有何重要意义?正确答案：基因多态性是指在一个群体中，存在两种或两种以上的变异型或基因型，而且这类基因型的频率比较高，一般认为每种变异型超过1%，即可定为多态性。
在人类基因组中大部分DNA序列不参与蛋白质的编码，因此在这些序列中可出现大量的不均一性。
人类基因组多态性研究及其意义人类基因组是指所有人体细胞中所含有的全部遗传信息。
随着科技水平的不断提升，人类已经成功完成了人类基因组的测序，这项成就意味着我们已经掌握了人类基因组的所有信息，也为人类基因组多态性研究提供了可能。
什么是人类基因组多态性？人类基因组多态性是指人类基因组中的某些区域或基因序列存在多种可能的变异类型，这些变异类型在人群中呈现出一定的频率分布，即多态性。
多态性分析主要包括基因型和基因频率的研究。
基因型是指基因的具体表现形式，包括人类基因组中所有基因的不同变异类型的组合形式。
基因频率则是指一个人群中不同的基因型出现的频率。
人类基因组多态性的研究意义人类基因组多态性的研究不仅对于人类基因组学领域具有重要意义，也对于人类遗传学、医学、心理学等领域具有重要意义。
1. 基础科学研究人类基因组多态性研究是深入探索人体生命本质和探寻生命起源的重要手段，对于生命科学、基础医学研究、进化生物学等领域具有重要意义。
2. 遗传学研究人类基因组多态性对于遗传学来说具有十分重要的意义。
通过对遗传基因的多态性进行研究，遗传学家可以了解人类的遗传特征、性状和疾病易感性，并且可以探讨基因影响的机制、表达方式和遗传规律。
例如，研究人类基因组多态性可以从遗传水平预判患某种疾病的可能性，缩小个体化治疗方案的范围。
3. 医学研究人类基因组多态性有着广泛的应用价值，特别是在医学上。
对于人类基因组多态性的深入研究，可以在临床上为医生提供更加精确的诊断结果和更有效的治疗方案。
比如，通过人类基因组多态性研究，可以对某些患病人群进行基因治疗或者定向药物研发，这将有助于加强现代医学的个性化治疗。
4. 行为心理学方面研究人类基因组多态性不仅影响人体内部的生物机制，还会影响人体对于外界刺激的反应、心理机制以及认知过程。
因此，有些研究者发展了一种“基因心理学”思路，探讨人类基因组多态性对人类认知过程、记忆力、行为方式以及性格特征的影响。
基因多态性的生物学功能和调控基因是控制生物个体遗传性状的基本单位。
基因多态性是指在人类或其他生物个体的基因组中，同一基因具有不同等位基因的存在。
这种基因多态性造成了生物个体间基因型和表型的差异，进而导致生物在适应环境变化中的差异性。
基因多态性对个体生长、发育、代谢、疾病易感性等多个生物学过程具有影响。
基因多态性的生物学功能基因多态性对个体生物学功能和表现具有显著影响。
举例来说，ATP-binding cassette sub-family B member 1 (ABCB1)基因C3435T的基因多态性与药物的转运有关。
C3435T基因位于ABCB1基因上，它对药物跨过血管内皮细胞和神经细胞膜具有影响，因此影响药物的生物利用度、血浆浓度和药物毒性。
另一例如肝细胞生长因子基因-1（HGF-1）基因的多态性，它参与肝脏和肾脏组织的生长和维护。
在肝脏或肾脏遭受损伤时，HGF可激活内皮细胞增殖，发生分化，刺激细胞迁移，促进相邻组织的再生修复。
HGF-1基因多态性与肿瘤的易感性、肝病和肾病的发生有关。
因此，基因多态性对于生物在疾病代谢和修复、环境适应和行为心理等方面具有重要功能。
基因多态性调控机制基因多态性的调控机制包括基因突变和重组。
基因突变主要是指基因序列发生缺失，添加，或改变的一种方式。
基因突变在基因的复制、转录和翻译中产生不稳定的结构，直接导致基因功能的改变。
基因重组则指新的等位基因的形成，即DNA序列在两个亲本基因组中随机重组集成新基因。
基因重组在基因多样性和进化中起重要作用。
此外，基因多态性在生物进化中具有至关重要的作用。
生物进化需要资源重分配，躲避捕食和适应环境改变等自然选择机制。
在这些进化过程中，基因多态性是为生物体提供适应性的基础。
基因多态性也对人类行为和心理性状具有影响，如预测反应、认知和情感，以及毒品成瘾和心理疾病等。
基因多态性的未来方向基因多态性的未来研究可以深入探究基因的作用、进化和表现的机制，并改善预防和治疗基于基因多态性的疾病。
人类遗传基因的多样性及其生物学意义人类中的遗传基因多样性可以被认为是人类进化的一项独特成就，它拓宽了生命的范围，增强了对环境的适应性和适应性。
在研究中，我们也可以借助人类遗传基因多样性更好地了解人体和疾病。
在人类的遗传基因中，存在一些重要的特征，如多态性。
多态性是指在同一基因型群体中，某个基因存在两种或多种不同的等位基因，且每种等位基因的频率在一定范围内。
对于大多数人，多态性相对来说是有利的，因为它可以增加人体对不同环境因素的适应性。
举个例子，人们从不同的地理环境中获得营养，如牛奶和海鲜，这些环境间营养成分的差异为不同基因型的人体提供了不同的优势。
另一个重要的特征是人类的表型多样性。
表型是指个体的形态、生理和行为特征。
由于表型与基因之间的关系非常复杂，因此表型多样性可以增加人类适应多样环境的能力。
例如，越来越多的研究表明，失调性定向和智力水平因基因复杂性而分布幅度广泛。
这种广泛分布的现象积极地支持多样性和包容不同群体的概念。
人类中的遗传多样性来源主要有两个方面。
第一个方面是人类移居历史导致的人群分化。
人类自然移居过程中，不同地区的人群往往出现分化，这种分化会导致这些人群在基因频率上出现差异，形成了“地球种族”。
第二个方面是自然选择的影响。
我们知道，自然选择是一个复杂的过程，它可以驱动有利基因在人类群体中的传播和衍生。
因此，自然选择也是人类遗传基因多样性的主要驱动力。
那么，人类遗传基因多样性在生物学上的意义是什么呢？首先，它形成了人类进化历程中的一个重要环节。
因为这种多样性对人体的适应和生存产生了非常重要的贡献，它为人类保护自己免受各种环境危害提供了必要的基础。
同时，学习人类基因的多样性可以增加我们对人类基因结构和功能的理解，加深对人类疾病的认识，对预防、诊断、治疗疾病提供了有益的科学支持。
范德·维尔斯（Vanderwalle）的团队近期的研究也证明，家庭如何保护宝贵的资源们可以预测宝宝的智力和生存能力。
基因多态性及其生物学作用和医学意义基因多态性及其生物学作用和医学意义一、基因多态性：多态性（polymorphism）是指处于随机婚配的群体中，同一基因位点可存在2种以上的基因型。
在人群中，个体间基因的核苷酸序列存在着差异性称为基因（DNA）的多态性(gene polymorphism)。
这种多态性可以分为两类，即DNA位点多态性(site polymorphism)和长度多态性 (longth polymorphism)。
1.位点多态性：是由于等位基因之间在特定的位点上DNA序列存在差异，也就是基因组中散在的碱基的不同，包括点突变（转换和颠换），单个碱基的置换、缺失和插入。
突变是基因多态性的一种特殊形式，单个碱基的置换又称为单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism, SNP), SNP通常是一种二等位基因（biallelic）或二态的变异。
据估计，单碱基变异的频率在1/1000-2/1000。
SNP在基因组中数量巨大，分布频密，检测易于自动化和批量化，被认为是新一代的遗传标记。
2. 长度多态性：一类为可变数目***重复序列（variable number of tandem repeats, VNTRS），它是由于相同的重复顺序重复次数不同所致，它决定了小卫星DNA（minisatellite）长度的多态性。
小卫星是由15-65 bp的基本单位***而成，总长通常不超过20bp，重复次数在人群中是高度变异的。
另一类长度多态性是由于基因的某一片段的缺失或插入所致，如微卫星DNA （microsatellite），它们是由重复序列***构成，基本序列只有1-8bp,如(TA)n及(CGG)n等，通常重复10-60次。
长度多态性是按照孟德尔方式遗传的，它们在基因定位、DNA指纹分析，遗传病的分析和诊断中广泛地应用。
造成基因多态性的原因：1复等位基因（multiple allele）位于一对同源染色体上对应位置的一对基因称为等位基因（allele）。
由于群体中的突变，同一座位的基因系列称为复等位基因。
某些复合体基因的每一座位都存在为数众多的复等位基因，这是某些复合体（HLA）高度多态性的最主要原因。
2共显性（condominance）一对等位基因同为显性，称为共显性，某些复合体中如HLA 每一对等位基因匀为共显性。
共显性大大增加了人群中某些基因表型的多样化。
基因的多态性显示了遗传背景的多样性和复杂性。
它可能是人类在进化过程中抵御不良环境因素的一种适应性表现，对维持种群的生存与延续具有重要的生物学意义。
二、基因多态性的生物学作用：1．遗传密码的改变：如果基因多态性的碱基的取代、缺失、插入引编码序列的核苷酸顺序改变，在转录和翻译合成蛋白质的过程中，有的对多肽链中氨基酸的排列顺序产生影响，有的不产生影响。
可分为：错义突变(missense mutation)指DNA分子中碱基对的取代，使得mRNA的某一密码子发生变化，由他所编码的氨基酸就变成另一种不同的氨基酸，使得多肽链中氨基酸的顺序也相应地发生改变。
无义突变(nonsense mutation)指由于碱基取代使原来可翻译某种氨基酸的密码子变成了终止密码子。
例如UAU（氨酸）颠换成UAA（终止密码子）使多肽链的合成到此终止，形成一条不完整的多肽链，使蛋白质的生物活性和功能改变。
转换也可引起无义突变。
同义突变(same sense mutation)指碱基的取代并不都是引起错义突变和翻译终止，也就是虽然碱基被取代了，但蛋白质水平上没有引起变化，氨基酸没有被取代。
移码突变 (frame-shifting mutation)指在编码序列中单个碱基、数个碱基的缺失或插入，片段的缺失或插入可使突变位点之后的三联体密码子阅读框发生改变，不能编码原来的正常蛋白质。
2．对mRNA剪接的影响：如果点突变发生内含子的剪切位点，可以产生两种影响：一是原有的剪接位点消失，二是产生新的剪切位点。
无论是那一种形式，都可以导致mRNA的错误剪接，产生异常的mRNA，最终产生异常的表达产物，数个碱基的缺失、片段缺失等匀有可能造成剪接位点的缺失。
3．蛋白质肽链中的片段缺失：无义突变和DNA片段的缺失都可以导致肽链中的片段缺失，致使基因编码的蛋白质失去原有的功能。
移码突变不仅翻译后的肽链中氨基酸序列发生改变，而且也导致肽链中的大片段缺失。
4．启动子的突变及非转录区的突变：可以使基因的转录水平或活性的增强或降低。
5．基因多态性的基因型频率分布：在人群中符合Hardy-Wenberg平衡。
三、基因多态性的医学意义：人类基因多态性在阐明人体对疾病、毒物的易感性与耐受性，疾病临床表现的多样性（clinical phenotype diversity），以及对药物治疗的反应性上都起着重要的作用。
临床上早期有关基因多态性的研究是从HLA基因开始的，分析基因型在疾病发生易感性方面的作用，如HLA-B27等位基因与强直性脊椎炎发生率的密切关联，可作为诊断的依据。
通过基因多态性的研究，可从基因水平揭示人类不同个体间生物活性物质的功能及效应存在着差异的本质。
通过对基因多态性与疾病的易感性的联系研究，如P53抑癌基因多态性与肿瘤发生及转移的关系研究，可阐明人体对疾病、毒物和应激的易感性，不仅为临床医学也为预防医学的发展带来新的领域。
疾病基因多态性与临床表型多样性的联系已受到重视，如肿瘤等多基因病的临床表型往往多样化，阐明基因型（genotype ）与表型(phenotype)之间的联系在认识疾病的发生机理、预测疾病的转归等方面也有重要的作用。
药物代谢基因多态性可以影响药物的代谢过程及清除率，从而影响治疗效果。
致病基因的多态性使同一疾病不同个体其体内生物活性物质的功能及效应出现差异，导致治疗反应性上悬殊，按照基因多态性的特点用药，将会使临床治疗符合个体化的要求。
在疾病基因多态性研究的引导下，临床医生将有可能预断不同的个体在同样的致病条件下会出现什么样的病理反应和临床表现，即临床表型。
如高血压的治疗将根据基因多态性的研究选择更具针对性的药物，调整其剂量，而不是不加选择地使用ACEI、钙拮抗剂或交感神经受体阻断剂。
合并症的防治也会更个体化，更具针对性。
基因多态性的研究对于遗传病具有双重意义，一方面，基因的有害突变，不论是经典的点突变，还是动态突变，其本身就可能是遗传病的病因，另一方面,众多的多态性位点又是很好的遗传标记，可以在遗传病的研究和临床诊断中发挥重要的作用。
1.多态性作为遗传病的病因：点突变引起的疾病：从镰刀状细胞贫血开始，突变引起各种遗传病的例子愈来愈多，遗传性肿瘤也逐渐被认识。
重复序列多态性作为遗传病的病因：如CCG，CTG和CAG这样的三核苷酸重复序列，当其拷贝数过度增高时可以引起强直性肌营养不良等。
三核苷酸拷贝数的扩增或突变发生在世代传递过程中，由于拷贝数在世代间的改变，它被称为动态突变。
目前动态突变疾病大多是些神经系统的退行性疾病，也有少数肿瘤。
动态突变疾病的发现提示序列拷贝数的多态性能够成为遗传病的病因。
2.多态性作为遗传标记的应用：绝大多数DNA多态性并不引起遗传病，但可作为遗传标记来使用。
例如：上述提到的各种多态性标记，包括RFLP位点，微卫星和小卫星DNA标记都已广泛用于遗传病的连锁诊断。
利用各条染色体上位置已知的众多的多态性标记，通过患病家系的连锁分析，可以找到多基因病的致病基因或相关基因的位置，并为他们的分离克隆提供依据。
此外，在疾病的关联分析和病因学研究方面，通过比较患病群体和正常群体，可以发现两组间多态性位点的特定等位基因频率有显著差别，则表明该位点与该疾病相关联。
使用多态性标记的关联分析既可以提示相关基因存在的位置，也有助于发病机理的阐明。
基因多态性还可以用于疾病的分型与治疗，即根据患者疾病多态性的基因型来解释疾病的病因和临床表现。
在预防医学方面，基因多态性的研究涉及的范围广泛，包括基因多态性与病因未知的疾病关系的研究，也包括对已知特定环境因素致病易感基因的筛选。
由于基因多态性有明显的种族差异，因此在基因-环境交互作用模式上，不同的种族之间有可能不同。
所以，开展我国人群的基因多态性与环境的作用关系的研究具有重要的意义。
而基因多态性的研究在职业病医学中则更具有实际的意义。
对易感基因和易感性生物标志物的分析，将某些携带敏感基因型的人甄别开来，采取针对性预防措施，提高预防职业性危害工作的效率。
对特定的污染物易感人群和耐受人群的基因多态性研究，有助于阐明环境因素的致病机制，也推动了遗传易感性标志物的研究。
四、基因多态性的检测方法：1．限制性片段长度多态性（Restriction Fragment Length Polymorphism，RFLP）：由DNA 的多态性，致使DNA 分子的限制酶切位点及数目发生改变，用限制酶切割基因组时，所产生的片段数目和每个片段的长度就不同，即所谓的限制性片段长度多态性，导致限制片段长度发生改变的酶切位点，又称为多态性位点。
最早是用Southern Blot/RFLP方法检测，后来采用聚合酶链反应（PCR）与限制酶酶切相结合的方法。
现在多采用PCR-RFLP法进行研究基因的限制性片段长度多态性。
2．单链构象多态性（SSCP）：是一种基于单链DNA构象差别的点突变检测方法。
相同长度的单链DNA如果顺序不同，甚至单个碱基不同，就会形成不同的构象。
在电泳时泳动的速度不同。
将PCR产物经变性后，进行单链DNA凝胶电泳时，靶DNA中若发生单个碱基替换等改变时，就会出现泳动变位（mobility shift），多用于鉴定是否存在突变及诊断未知突变。
3．PCR-ASO探针法（PCR-allele specific oligonucleotide, ASO）：即等位基因特异性寡核苷酸探针法。
在PCR扩增DNA片段后，直接与相应的寡核苷酸探杂交，即可明确诊断是否有突变及突变是纯合子还是杂合子。
其原理是：用PCR扩增后，产物进行斑点杂交或狭缝杂交，针对每种突变分别合成一对寡核苷酸片段作为探针，其中一个具有正常序列，另一个则具有突变碱基。
突变碱基及对应的正常碱基匀位于寡核苷酸片段的中央，严格控制杂交及洗脱条件，使只有与探针序列完全互补的等位基因片段才显示杂交信号，而与探针中央碱基不同的等位基因片段不显示杂交信号，如果正常和突变探针都可杂交，说明突变基因是杂合子，如只有突变探针可以杂交，说明突变基因为纯合子，若不能与含有突变序列的寡核苷探针杂交，但能与相应的正常的寡核苷探针杂交，则表示受检者不存在这种突变基因。
若与已知的突变基因的寡核苷探针匀不能杂交，提示可能为一种新的突变类型。
4. PCR-SSO法：SSO技术即是顺序特异寡核苷酸法（Sequence Specific Oligonucleotide, SSO）。
