实验二 细菌的人工培养 最后

细菌的人工培养实验报告细菌的人工培养实验报告一、引言细菌是一类微小而简单的单细胞生物，广泛存在于自然界中的各种环境中。

为了研究和利用细菌，科学家发展出了人工培养细菌的方法。

本实验旨在通过人工培养细菌的过程，观察并学习细菌的生长特性及其对培养条件的响应。

二、材料与方法1. 实验所用材料和仪器：- 细菌培养皿- 细菌培养基- 微量移液器- 试管- 烧杯- 灭菌棒- 显微镜- 显微镜载玻片2. 实验步骤：a. 准备细菌培养基：按照实验所需的培养基配方，称取适量培养基粉末，并加入适量蒸馏水，搅拌均匀，然后用自动压力锅或高压灭菌锅对培养基进行高压灭菌处理。

b. 取出培养基后，将其倒入细菌培养皿中，用灭菌棒均匀涂布于培养皿底部。

c. 从已知细菌菌液中取一定数量，利用微量移液器滴加于培养皿上，注意避免不同菌种之间的交叉污染。

d. 将培养皿封闭，置于恒温培养箱中，控制培养温度和湿度，培养一定时间。

e. 从培养皿中取出一部分菌液，加入试管中，用显微镜观察细菌的形态、结构和数量。

f. 取少量菌液，滴于显微镜载玻片上，用显微镜观察不同放大倍数下的细菌结构。

三、结果与分析在人工培养过程中，通过观察培养皿上的细菌生长情况和显微镜下的细菌形态，我们可以得出以下结果和分析：1. 细菌生长情况：根据培养皿上的观察，我们可以观察到细菌在培养基上形成了不同大小和形状的菌落。

这说明细菌在适宜的培养条件下能够繁殖并形成群落。

2. 细菌形态：通过显微镜观察细菌的形态，我们可以发现不同菌种之间的形态差异。

例如，某些细菌呈现长棍状、圆球状或螺旋状等形态。

这些形态特征有助于我们对不同细菌的识别和分类。

3. 细菌数量：通过观察显微镜载玻片下的细菌液滴，我们可以估算细菌的数量。

我们可以观察到细菌在显微镜下以聚集和单独分散的形式出现。

数量的变化可以反映出细菌的生长速度和代谢活性。

四、讨论通过本实验，我们可以得出以下讨论结论：1. 细菌对培养条件的响应：细菌在不同的培养条件下表现出不同的生长特性。

实验二培养基的配制和灭菌一、实验目的微生物的生长发育都有一定的营养需要，培养基即人工培养微生物、为其生长发育提供所需营养的基质。

培养基配好后必须经过灭菌方能用于分离培养微生物试验，因此培养基的配制和灭菌是植物病理实验室中最基本的工作，通过本次实验学习植病实验室中常用培养基的配制方法和高压灭菌锅的使用方法。

二、内容、材料和方法(一)培养基的配制培养基按组成成分及对这些成分了解的程度分为天然培养基、半组合培养基和组合培养基三类，从物理性质上又分为液体培养基和固体培养基两类，培养基的种类不同，配制方法也有差异，限于时间，本次实验仅配制马铃薯琼脂培养基和牛肉膏蛋白胨培养基。

1马铃薯蔗糖琼脂培养基（PSA）这是植病实验室最常用的培养基(简称PSA)，主要用于植物病原真菌的分离和培养，有时也用于植物病原细菌。

成分：马铃薯200克蔗糖 10~20克琼脂 17~20克加水至1000毫升方法：将马铃薯洗净去皮切块，加水煮沸半小时，用双层纱布滤去薯块，补足水量，加入琼脂，加热熔化，再加糖，待完全化后，乘热用双层纱布过滤分装，塞好棉塞高压灭菌。

马铃薯蔗糖琼脂培养基略带酸性，培养真菌无需调节pH，培养细菌则调节pH至中性，此培养基留作下次实验分离培养病原真菌用，故不必调节pH。

5人分作一组，1、2组各作此培养基500毫升，其中200毫升分装试管，每管约10毫升，灭菌后摆成斜面；其余300毫升，分装在3个250—300毫升的三角瓶中，每瓶装100毫升左右，灭菌后妥善保存，留待下次实验使用。

2肉汁胨培养基（BPA）这种培养基主要用于细菌的分离和培养成分：牛肉浸膏 3克蛋白胨 5~10克蔗糖 10克酵母浸膏 1克琼脂 17~20克加水至 1000毫升方法：先将琼脂加热熔化于大部水中，再将其它各成分用少量水化开加入，调节pH至7，趁热用双层纱布过滤，分装，塞棉塞高压灭菌。

牛肉浸膏和酵母浸膏十分粘稠，不易称重，称重时用小烧杯盛装，以玻璃棒沾取，故要先称好杯和棒的重量后，再开始沾取浸膏称重，称后将杯和棒上粘着的浸膏洗净于锅中。

实验二培养基的配制及灭菌一、实验目的：1. 掌握常用培养基的制备方法；2. 了解培养基的成分、类型及特点；3. 学会玻璃仪器的洗涤和灭菌前的准备工作。

4.了解培养基的配制原理和方法，掌握其配制过程和分装方法。

二、实验原理人工配制的培养基是植物组织培养的营养基础，不同材料对培养基的要求不尽相同，适当地设计和选用培养基对组织培养是至关重要的，一个完整的培养基配方应包含有无机盐、有机营养、水、植物生长调节剂、琼脂及其他成分。

培养基的主要成分的详细内容见课本p26~29。

为了省时和减少多次称量的误差，一般先将药品配制成浓缩一定倍数的母液，用时稀释，储存于冰箱低温（2~4摄氏度）中待用。

基本培养基有8中母液，即大量元素母液、微量元素母液、有机物母液、钙盐母液、铁盐母液、肌醇母液、镁元母液、生长调节物质母液，基本培养基的配制方法有两种：一是可以将培养基的每种成分配成单一化合物的母液，便于配制不同种类的基本培养基时使用；二是配成几种不同的混合液，这样在大量配制同一种培养基时更省时、省力。

在配制母液时应注意防止沉淀产生。

绝大多数生长调节物质不溶于水，可以加热并不断搅拌促使溶解，必要时加入稀酸或稀碱等物质促溶。

各类植物生长调节物质的用量极小,它们对外植体愈伤组织的诱导和根、芽等器官分化起着重要和明显的调节作用。

通常使用的浓度单位是mg/L。

配制好的培养基应在24h之内完成灭菌工作，以免造成杂菌大量繁殖。

灭菌方法有：高温高压灭菌、过滤除菌、射线除菌等方法。

培养基常采取高压灭菌的方法，灭菌时间一般是在0.105MPa压力下，温度121摄氏度时，灭菌时间应根据容积的体积确定，所需最少时间见课本P32表2ˉ2。

培养基必需保证绝对无菌，否则因其营养丰富细菌、真菌极易滋生而导致植物死亡。

灭菌后的培养基不宜马上使用，以免造成培养材料的损失。

（一）、组成培养基的五类成分目前，大多数培养基的成分是由无机营养物、碳源、维生素、生长调节物质和有机附加物等五类物质组成的。

1实验内容：2显微镜油镜的使用与保护。

3细菌的形态与结构的观察。

4实验目的：5学会显微镜的使用，重点掌握油镜的使用与保护。

6进一步认识细菌的形态，明确细菌的大小与测量单位。

7熟悉细菌的特殊结构。

8实验材料：显微镜、擦镜纸、液体石蜡、消毒液、细菌的基本形态标本、细菌的特殊结构标本。

4实验方法：(1)显微镜油镜的使用与保护显微镜是一种贵重的光学仪器，而油镜又是显微镜的最精密部分，是观察细菌最重要的工具。

因此，要求大家必须熟练地掌握显微镜的使用和保护，尤其是油镜，避免损坏。

1识别油镜：95╳、100╳、HI、OeL。

2对光：自然光用平面反光镜，人工光用凹面反光镜；先用低倍镜对光，次用高倍镜。

对好光源后，染色标本将聚光器升高，光圈放开。

3、调节焦距：选一张细菌染色标本置于载物台上，用推进器固定，用低倍镜先找准物象，再用高倍镜看清物体，于标本上加镜油一滴。

⑴用眼从侧面观察，转动粗螺旋调节器，将油镜头徐徐下降浸入其中，切不可用力过猛，以免损坏油镜。

⑵用左眼从接目镜观察，徐徐向上转动粗螺旋调节器，见模糊物象后，再用细螺旋调节器，直到物象完全清晰为止。

4、显微镜的保护：⑴所有的光学部分结构都不能用手指、普通布擦拭，用过的油镜头应立即先用擦镜纸蘸少许二甲苯擦拭，再用干擦镜纸擦去二甲苯，以防二甲苯镜头上的固定胶，致使镜片脱落。

⑵显微镜的光学部分应避免日光直射。

避免接触强酸、强硷、氯仿、酒精。

⑶显微镜用毕，将物镜转成品字形并下降集光器和镜筒，用软布擦拭各部件后覆盖于接目镜上，双手端平送入镜箱内。

置于干燥处，以防受潮。

(二)细菌形态观察1、细菌的基本形态；球菌：肺炎球菌、脑膜炎球菌、葡萄球菌、链球菌杆菌：大肠杆菌、炭疽杆菌、结核杆菌、白喉杆菌弧菌：霍乱弧菌2、细菌的特殊结构：荚膜：肺炎球菌、产气荚膜杆菌鞭毛：水弧菌（周毛菌）一、实验内容：3细菌标本片的制备（操作）4革兰染色法（操作）二、实验目的：1进一步了解细菌特殊结构在鉴别细菌过程中的实用意义。

第二节细菌培养检测技术节概述细菌的培养技术是微生物实验中基本技术之一。

大多数细菌均可用人工方法培养，只有将细菌培养出来才能对它进行研究和鉴定知识点导航一.培养基的种类培养基（culture medium）是细菌生长繁殖所需要的各种营养物质的人工制品。

适宜的培养基能使细菌在体外迅速生长繁殖，便于对细菌进行分离和鉴别。

可分为基础培养基、营养培养基、选择培养基、鉴别培养基、厌氧菌用培养基和特殊培养基。

（一）基础培养基只含有细菌生长所需的最基本营养成分，应用最广泛，为制备多种培养基的基础，常见的有肉汤培养基、琼脂培养基。

（二）营养培养基在基础培养基中加入葡萄糖、血液、血清、腹水或酵母浸膏等有机物，可供营养要求较高的细菌生长需要或增菌用。

如结核分枝杆菌培养基中添加鸡蛋、马铃薯、甘油等。

（三）选择培养基利用不同种类细菌对化学物质的敏感性不同而制成，使分离菌大量繁殖而抑制其它细菌生长的培养基。

培养基中含有的抑制剂能抑制非目的菌生长或使其生长不佳，有利于目的菌的检出和识别。

选择培养基多为固体平板，用于从标本中分离某些特定的细菌。

（四）鉴别培养基培养基中加有某些特定成分，如糖、醇类和指示剂等，用于检查细菌的各种生化反应，以资鉴别和鉴定细菌。

（五）厌氧菌用培养基专性厌氧菌须在无氧条件下才能生长，故需在培养基中加入半胱氨酸、硫乙醇酸钠等还原剂，降低培养基中氧化还原电势，并应与外界空气隔绝，使培养基本身为无氧的环境。

（六）特殊培养基为某些需要在特殊条件下才能生长的细菌培养之用。

如高渗盐增菌培养基、高渗糖增菌培养基、改良Kagan氏培养基等。

二.培养基的制备制备一般培养基的主要过程基本相似，包括调配、溶化、调整pH、过滤、分装、灭菌及检定和保存。

三.细菌检验室的注意事项及无菌技术细菌培养必须随时为防止污染和病原菌的扩散而进行操作，即无菌操作。

细菌检验室的注意事项如下：1．细菌的培养应在接种罩或无菌室内进行。

有条件的实验室可在超净工作台内进行。

细菌的人工培养实验步骤细菌的人工培养实验步骤细菌的人工培养是微生物学研究中非常重要的实验方法，可以用于分离、鉴定和纯化细菌。

下面将详细介绍细菌的人工培养实验步骤。

一、准备实验室设备和材料1. 培养基：根据不同的研究目的选择合适的培养基，如营养琼脂、大肠杆菌选择性琼脂、血琼脂等。

2. 细菌液：从保存在冰箱或冷冻库中的细菌液中取出所需的细菌，并进行预处理。

3. 实验室设备：无菌操作台、离心机、移液器、显微镜等。

4. 无菌操作器具：无菌培养皿、试管、移液器等。

二、制备固体培养基1. 称取所需量的琼脂和其他成分，加入适量的去离子水中溶解。

2. 调整pH值，通常为7.0-7.4。

3. 加热消毒：将琼脂溶液装入无菌试管或烧杯中，用高压灭菌器或自制压力锅进行高温高压灭菌。

4. 倒制琼脂：将琼脂溶液倒入无菌培养皿中，使其均匀分布在培养皿底部。

5. 固化琼脂：将培养皿放置在平板上，待琼脂凝固后即可使用。

三、制备液体培养基1. 称取所需量的营养成分和其他添加剂，加入适量的去离子水中溶解。

2. 调整pH值，通常为7.0-7.4。

3. 加热消毒：将液体培养基装入无菌试管或烧杯中，用高压灭菌器或自制压力锅进行高温高压灭菌。

四、细菌的预处理1. 从冷冻库或冰箱中取出细菌液，并进行预处理。

通常采用离心法将细菌沉淀下来，并用生理盐水洗涤2-3次，以去除残留培养基和代谢产物等。

2. 用显微镜观察细胞形态和数量，并调整浓度至合适的范围。

五、接种细菌1. 无菌操作台上进行无菌操作，将细菌液用移液器均匀地滴在琼脂培养皿表面上。

2. 用火柴头或无菌环将细菌液均匀地涂抹在琼脂表面上。

3. 将培养皿倒置放置于恒温箱中，通常为37℃，并注意标记好培养皿的信息。

4. 观察培养皿中细菌的生长情况，并记录下来。

六、细菌的分离和鉴定1. 根据实验设计和研究目的，选择不同的方法对细菌进行分离和鉴定，如生化试验、药敏试验等。

2. 根据实验结果对细菌进行鉴定，并记录下相关信息。