自身抗体的检测ppt课件

ANA检测的临床意义
ANA可见于多种自身免疫性疾 病，特别是结缔组织疾病，常作为 结缔组织疾病的诊断，病情判断和 疗效观察的指标
已证实ANA对很多自身免疫性疾病有 诊断价值。ANA的靶抗原为细胞核内的不 同生化成份，包括核酸、细胞核蛋白和核 糖体蛋白。在不同疾病中，特别是风湿性 疾病，其抗体谱有一定的特意性。在炎症 性风湿病中ANA阳性率在20%-100%之间， 其中类风湿性关节炎中ANA阳性率最低， 为20%-40%。所以，检测ANA对于不同类 型风湿病意义重大。
自身抗体的检测 及应用
2012.9.19
抗核抗体（ANA）的检测与临床应用
抗核抗体的定义 传统定义：针对细胞核成分抗原总称。 广义定义：针对细胞内所有抗原成分的
自身抗体的总称。对ANA的理解不再局 限于核成份，而是指核质和核蛋白的总 称。
ANA测定原理和方法：
间接免疫荧光法（IIF):现多以Hep-2细胞（人喉 癌上皮细胞）为底物（Ag)，其以核质丰富而极 大地提高了ANA检测的阳性率和滴度。
临床意义：高滴度的抗RNP抗体为 混合结缔 组织病（MCTD）的特征，发生率为95~100%。 也可出现于SLE，但总是与抗Sm抗体同时出 现。抗Sm抗体对SLE具有高度特异性，发生 率为20~40%。
抗SSA／SSB抗体
荧光模式
Hep-2片：细 胞核呈细 颗粒荧光， 核仁不发 光。
肝组织片： 细颗粒荧 光。
正常的健康人
女性＞男性，出现率 随年龄而增加
风湿性疾病患者亲属 ？孕妇
SLE患者使用IIF法测定ANA阴性的一些解释
技术方面
临床方面
经皮质激素或免疫抑制剂治疗。
终末期肾病。
隐蔽ANA：与循环中免疫复合物结合，沉积于组 织。
由于大量蛋白尿而从肾脏丢失。
ANA的荧光染色型别
根据产生的荧光模型、靶抗原的分布部位分类如下：
常见疾病
⑴ SLE活动性：占95%-100%，
非活动性：占80%-100%。 （2）药物诱导的SLE：占100%。 （3）混合性结缔组织疾病：占100%。 （4）其它风湿性疾病：占20%-50% （5）进行性系统硬化症：占85%-95%。 （ 6）多肌炎和皮肌炎：占30%-50%。 （7）干燥综合征：占70%-80%。 （8）慢性活动性肝炎：占30%-40%。 （9）溃疡性结肠炎：占26%。
ANA试验的结果中一般会报告其分型，这些 分型可能与某一特定的抗原反应活性相关。
分型 核仁型 着丝点型 周边型 斑点型/ 弥散型
相关疾病 硬皮病
CREST综合征
SLE 混合性结缔组织 病（MCTD）
抗双链DNA抗体（ds-DNA） 的检测与临床应用
检测：测定抗ds-DNA以血鞭毛虫属的绿 萤短膜虫为靶抗原基质，可联合使用 HEp-2细胞及灵长类肝组织检测。
抗SSA／SSB抗体
自身抗原：SSA抗原是一个小核糖核蛋白，由 一个RNA分子和两种不同的蛋白质组成。蛋白 质的分子量为52KD和60KD。抗体直接针对蛋 白质的抗原决定簇。SSB抗原是分子量为48kD 的磷酸化蛋白。
临床意义；最常见于干燥综合征（SS）,也见 于SLE、原发性胆汁性肝硬化（PBC），偶见 于慢活肝。抗SSA抗体在新生儿红斑狼疮的发 生率几乎为100%。
抗体水平与疾病活动度相关，随着疾 病活动的控制，抗ds-DNA抗体滴度可以 下降或消失。
ANA谱3检测及临床应用
抗RNP/Sm抗体
荧光模式： Hep-2片：细胞
核粗颗粒， 核仁阴性。
肝组织切片： 同上。
荧光法不能区 分抗RNP和 抗体Sm。
抗RNP/Sm抗体
自身抗原：抗原RNP和Sm属于一组小核糖核 蛋白（snRNP），由低分子量的RNA和多种蛋 白质组成，RNA中尿苷（U-RNA）含量较高。
➢ 细胞核： 核均质型（DNA、组蛋白和核小体等） 核颗粒型（Sm、uRNP、SS-A、SS-B、Ku、I和Ⅱ型周期蛋白） 核膜型（板层素、gp120等） 核仁型（SCL-70、PM-SCL、RNA多聚酶、原纤维蛋白等） 核浆点型（着丝点、核多点及核少点型） ➢ 细胞浆： 胞浆颗粒型（线粒体、Jo-1、核糖体等）
核仁阳性(Nucleolar)
自身抗原：位于DNA脱氧核糖磷酸框架 上。
抗dsDNA抗体
荧光模式：
绿蝇短膜虫： 动基体均 质的或边 缘亮度增 强的荧光。
Hep-2细胞： 细胞核的 均质型荧 光。
临床应用
抗双链DNA抗体（ds-DNA）是系统性红 斑狼疮的特异性抗体，其阳性率因检测方法而 异，在40-90%。但抗ds-DNA阴性并不能排除 患有SLE的可能性。抗ds-DNA抗体具有预测 价值，85%的出现抗ds-DNA抗体的健康人在 五年内发展为SLE。已证实抗ds-DNA抗体参 与SLE的病理过程，在疾病形成过程中，抗 ds-DNA和其抗体形成的免疫复合物沉积在皮 下毛细血管、肾和其他器官内，激活补体系统， 从而导致组织损伤。
其它
还可见于： 非结缔组织疾病中也可 出现阳性；正常人（特别是老年人）也 可出现阳性，但滴度低，并且常表现为 IgM型；高滴度ANA则高度提示自身免 疫性疾病。
ANA（＋）的原因
风湿性疾病
药物诱导
SLE 多发性肌炎 干燥综合征 硬皮病 血管炎
RA
慢性肝脏疾病 慢性肺部疾病 慢性感染 血液系统异常 恶性肿瘤
胞浆纤维型：波形蛋白、原肌球蛋白和肌动蛋白等
➢ 分裂期细胞阳性：纺垂体、中间体、中心体等
ANA筛查的方法
间接免疫荧光法（IIF） 基质组合为：HEP-2细胞 + 灵长类肝
（猴）
核颗粒型：核粗颗粒型
抗核抗体染色类型 核仁型（nucleolar）
均质性 （ homogeneous ）
ANA的 荧光类型
是系统性红斑狼疮（SLE）的标准筛选试验。 我们实验室采用欧蒙荧光测系统，将1:100作
为血清起始稀释度，所以如果是低滴度的1:100 阳性，只能视为一个临界可疑值，临床意义不大。
ANA作为自身免疫性结缔组织病的筛选试验必须 强调高滴度。
ANA的靶抗原分布
整个细胞，包括细胞核、细 胞浆、细胞骨架、细胞分裂周期 蛋白等。