第7章细菌感染的检查方法与防治原则优秀课件

第7章细菌感染的检 查方法与防治原则
第七章 细菌感染的检查与防治
感染性疾病的病因学诊断 确定感染的微生物，为临床诊断提供根据。 由于该诊断是通过确定感染的微生物而确立的， 故称微生物学诊断（病原学诊断）。 关系到正确的治疗、控制和预防。
检查方法
微生物学(细菌的形态学检查、分离培养和鉴定） 免疫学（查Ag或Ab） 分子生物学（查核酸）
分离培养
生化试验 血清学试验 药物敏感试验 动物试验
分子生物学技术 其他检测技术
初步诊断
明 确 诊 断
第二节 细菌感染的特异性预防
一、人工主动免疫(artificial active immunization) （一）疫苗、类毒素
1、死疫苗—伤寒、霍乱等。 2、活疫苗—BCG、鼠疫等。
疫苗接种
死疫苗与活疫苗的比较
5、重组载体疫苗 将抗原表位的目的基因片段转入减毒的病 毒或细菌。 形式：整合于病毒、细菌基因组或质粒 本质：活疫苗
6、核酸疫苗（ DNA Vaccine）
核酸疫苗原理：将病原体的保护性抗原 基因与质粒重组，重组体注入机体，使 机体持续表达该抗原，诱导体液和细胞 免疫。
优点：
a、制备简便、成本低；
尤其用于在形态、排列和染色性方面无特 征的某些病原菌的检查。
阳性率高于直接镜检，但时间长。

革兰染色原理：细胞壁结构不同。
G+结构致密、肽聚糖层厚、乙醇不易透入； 乙醇使胞壁脱水形成一道屏障，短暂阻止结晶 紫-碘复合物从胞内渗出；
G-疏松、肽聚糖层薄、外膜均含大量脂质，易 被乙醇溶解，使胞壁通透性增高，胞内结晶紫 -碘复合物被溶解脱出而脱色。
b、便于贮藏和运输；
c、免疫应答持久。
核酸疫苗缺点：安全性问题 a、人们担心外源DNA整合到宿主染色体中 而激活癌基因和影响抑癌基因的表达， 导致细胞的恶性转化。 b、可能诱导自身免疫性疾病。
（二）类毒素
概念： 可诱导机体建立特异性抗毒素免疫。 +吸附剂（佐剂） 如：白喉-百日咳-破伤风三联疫苗（DPT）
革兰染色实际意义--鉴别细菌 选择用药 研究细菌致病性
其它染色有： 单染色、抗酸染色、特殊染色等。
抗酸染色法
特殊染色法：鞭毛染色 荚膜染色 负染色法
2、生化反应 现有“程序控制的自动分析仪”。
3、血清学鉴定：用已知Ab鉴定从标本中分离 培养出的未知菌（玻片法简便易行）。 分群、分型
4、动物试验
（三）细菌抗原的检测
用已知Ab检测未知抗原（Ag-Ab反应）。 优点--特异、灵敏、简便 方法：玻片凝集、协同凝集、间接血凝试验、 乳胶凝集、对流免疫、酶免疫技术、免疫荧光 技术。
常用的免疫学技术有—-- 协同凝集试验 乳胶凝集试验
特异性Ab
待检Ag
载体颗粒 SPA、乳胶
凝集
协同凝集试验示意图
酶联免疫吸附试验 (ELISA,间接法)
用于：①分离鉴定病原菌； ②测定细菌的毒力及产毒性
选用高度易感、健康等条件的动物。
如：毒素-抗毒素中和试验---小白鼠； 钩端螺旋体---幼龄豚鼠、金地鼠。
5、药物敏感试验
指导临床选择用药，及时治疗和控制感 染有重要意义。
药敏试验（纸片法）
6、自动微生物鉴定和药敏分析系统： 微生物编码鉴定技术---数据库 微量培养 自动监测分析 自动记录药敏结果
核酸杂交、PCR、16S rRNA基因测序、基因芯 片等技术。
更特异、敏感、快速
PCR
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检测PCR产物
三、细菌感染的血清学诊断(serological diagnosis)
区别点 制剂特点 接种剂量与特点 保存及有效期 免疫效果
死疫苗 死，强毒株 量大，2~3次 易保存，约1年 较低， 维持数月~2年
活疫苗 活，减毒株 量较小，1次 不易保存 较高， 维持3~5年甚至更长
3、亚单位疫苗(subunit vaccine)
利用现代生物技术，除去细菌或病毒无关有 害成分，分离提取纯化对人体有保护性的抗 原。如：肺炎链球菌、脑膜炎球菌的荚膜多 糖疫苗，+佐剂即成。
第一节 细菌感染的实验室诊断
早期采集
一、标本的采集和送检原则
无菌操作 适当的标本（注意病程）
采集双份血清 尽快送检（标本必须新鲜）
做好标记
（一）细菌形态学检查
针对一些在形态与染色上具有特征的 病原菌。 1）光学显微镜 2）染色法检查
（二）细菌分离培养与鉴定 主要内容：
1、细菌分离培养—菌落大小、色素、溶血； 2、涂片、染色、镜检。
查Ab：检测病人血液中由于细菌感染而产生的 特异性抗体，辅助临床诊断。
广泛用于多种病原体的微生物诊断和流行 病学调查。
双份血清：早期（急性期） 晚期（恢复期）
结果：根据双份血清中测到的抗体效价， 若升高4倍或以上，有辅助诊断价值。 方法：凝集试验，中和试验，ELISA等。
致病菌的检验程序
直接涂片染色
enzymes such as peroxidase react with appropriate substrates such as 3,3’,5,5’-Tetramethylbenzidine), this causes a change in color.
对流免疫电泳
免疫扩散试验
（四）细菌核酸的检测
接种少量抗原可使人体产生良好免疫应 答，且接种反应轻微。
优点
a、去除引起副反应的物质； b、因不含核酸可免去减毒活疫苗回复突 变及灭活全疫苗发生感染性复活的可能； c、消除肿瘤病毒潜在的致癌作用； d、可利用化学试剂分解病毒体。
4、基因工程疫苗 本质上是亚单位疫苗 如：含宋内志贺菌表面抗原质粒的伤 寒沙门菌Ty21a 优点：安全、经济、可批量生产； 缺点：抗原的回收纯化困难。
二、人工被动免疫
1．抗毒素 如：精制破伤风、白喉、肉毒抗毒素 2．血清丙种球蛋白、胎盘丙种球蛋白 3．抗菌血清：已淘汰 4． 其他免疫制剂：IFN、IL等。