05-01-037DNS法测定糖化酶活力(精)

一、实验目的1. 了解糖化力的概念和测定方法。

2. 掌握使用DNS法测定糖化力的实验操作步骤。

3. 分析不同条件下糖化力的变化规律。

二、实验原理糖化力是指在一定条件下，酶将淀粉分解成葡萄糖的能力。

DNS法（3,5-二硝基水杨酸法）是测定糖化力的常用方法，其原理是：在酸性条件下，DNS与还原糖反应生成紫红色复合物，通过测定该复合物的吸光度，可以计算出还原糖的浓度，从而计算出糖化力。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 淀粉酶- 淀粉- DNS试剂- 硫酸铜溶液- 氢氧化钠溶液- 水浴锅- 移液器- 试管- 离心机- 分光光度计2. 实验仪器：- 糖化力测定仪- 移液器- 离心机- 分光光度计四、实验步骤1. 样品制备：- 称取一定量的淀粉，加入适量的水，搅拌均匀，煮沸，冷却后备用。

- 称取一定量的淀粉酶，用适量的水溶解，备用。

2. 糖化反应：- 将淀粉溶液和淀粉酶溶液按照一定比例混合，放入水浴锅中，在适宜的温度下进行糖化反应。

3. DNS反应：- 将糖化反应后的溶液取出，加入适量的DNS试剂，混匀。

- 在沸水中加热5分钟，取出冷却。

- 加入适量的氢氧化钠溶液，混匀。

4. 吸光度测定：- 使用分光光度计测定溶液在540nm处的吸光度。

- 根据标准曲线计算出还原糖的浓度。

5. 计算糖化力：- 根据还原糖的浓度和反应条件，计算出糖化力。

五、实验结果与分析1. 标准曲线的绘制：- 使用已知浓度的还原糖溶液，按照DNS法测定吸光度，绘制标准曲线。

2. 不同条件下糖化力的变化：- 在不同温度、pH值、淀粉酶用量等条件下，测定糖化力。

- 分析不同条件下糖化力的变化规律。

六、实验讨论1. 实验误差分析：- 实验过程中可能存在的误差包括：淀粉酶的活性、淀粉溶液的浓度、DNS试剂的浓度等。

2. 实验结果分析：- 根据实验结果，分析不同条件下糖化力的变化规律，探讨影响糖化力的因素。

七、结论通过本实验，我们掌握了DNS法测定糖化力的实验操作步骤，了解了不同条件下糖化力的变化规律。

DNS法测定酶活实验方法总结及优化方案
目前纤维素酶没有统一的测定方法，诸多因素影响纤维素酶酶活测定大小的比较。

选择适宜的酶活测定条件，提高测定结果的准确性，可根据有关资料中采用的测定条件，以及通过控制变量法对酶活力测定中的主要影响因素进行研究。

目前实验室采用测酶活方法：
1、葡萄糖标准曲线制作：
530nm比色。

2、酶活测定方法：
考虑到酶液中培养基成分会对吸光值造成一定的影响，所以空白管0还是采用先将酶高温灭活的方法，后面保持实验条件一致，显色时间与标准曲线的显色时间保持一致。

单位酶活的计算：T n k OD ml U 1000
1
)/(⨯⨯⨯=酶活力 n ：稀释倍数； K ：曲线斜率； T ：反应时间，min ； 1000：mg 换算成ug.
以下是近期所做的实验结果：
葡萄糖标准曲线
两种产纤维素酶细菌不同测试结果
测定结果
实验结论：从以上几种对酶液的处理方法来看，183的酶活要比R2高，两种菌都是以胞外酶为主。

目前尚没找到有关于加缓冲溶液并且超声破碎的文献，所得测量结果与前面三种方法均不符，这一步需另外探索。

根据《纤维素酶活力测定条件研究》（夏服宝等，《饲料工业》2005年第26卷第16期）和《影响纤维素酶活力测定的几个因素》（刘妙莲等，中国食品发酵工业研究所）这两篇文献，实验室可先从底物浓度、温度、DNS用量、显色时间以及对菌体的超声破碎时间这几方面进行探索，进而优化实验方法。

DNS法对食用菌发酵液淀粉酶活力的测定1. 研究背景食用菌是一种常见的菌类食品，具有丰富的营养价值和药用价值。

而淀粉酶作为重要的酶类成分，在食用菌的发酵过程中起着重要作用。

对食用菌发酵液中淀粉酶活力的测定具有重要意义。

2. DNS法的原理DNS法是测定还原糖的方法之一，也是目前测定淀粉酶活力的常用方法之一。

该方法利用二糖苷键，能使α-醛基于2-氮杂己糖缺氧基和1-喹啉酮缓和形成稳定的红色络合物。

3. 实验方法（1）试剂准备：取得极少数数DNS试剂，製备酸水（2）样品处理：取得一定量食用菌发酵液样品（3）测定操作：操作过程如下...（4）结果处理：计算淀粉酶活力，公式如下...4. 实验结果和分析（1）样品A淀粉酶活力为X，样品B淀粉酶活力为Y（2）通过对比实验结果分析，得出...5. 结论本实验通过DNS法对食用菌发酵液中淀粉酶活力进行了测定，得出了样品A和样品B的淀粉酶活力结果。

实验结果表明...6. 意义和展望该实验结果对于食用菌产业和相关研究领域具有一定的意义，同时也为淀粉酶活性的测定方法提供了一种有效的方案。

未来有望进一步探索...7. 参考文献（1）XXX，XX.（2018）。

（2） XXX，XX.（2019）...8. 附录实验原始数据表格...总结：本实验使用DNS法对食用菌发酵液中淀粉酶活力进行了测定，并得出了实验结果。

该方法具有操作简便、结果准确等优点，对于相关研究和生产实践具有一定的借鉴意义。

食用菌发酵液淀粉酶活力的测定，是一项具有重要意义的研究。

食用菌作为一种常见的菌类食品，不仅具有丰富的营养价值，还具有一定的药用价值。

而淀粉酶作为食用菌发酵过程中的重要酶类成分，对于提高食用菌发酵液的产率和质量起着关键作用。

准确测定食用菌发酵液中淀粉酶活力，对于食用菌产业和相关研究领域具有重要意义。

在实验中，DNS法是常用于测定淀粉酶活力的方法之一，其原理是利用二糖苷键，形成红色络合物来测定还原糖的含量。

实验十四糖化酶活力的测定一、实验目的1、学习糖化型淀粉酶(或液体曲)酶活力的测定方法。

2、了解糖化型淀粉酶活力大小对工艺生产的指导意义。

二、实验原理糖化型淀粉酶可催化淀粉水解生成葡萄糖。

本实验在一定条件下用一定量的糖化型淀粉酶作用于淀粉，然后用碘量法测定所生成的葡萄糖的含量来计算淀粉酶的活力。

碘量法定糖原理：淀粉经糖化酶水解生成葡萄糖，葡萄搪具有还原性，其羰基易被弱氧化剂次碘酸钠所氧化：I2+2NaOH=NaIO+NaI+H2ONaIO+C6H12O6=NaI+CH2OH(CHOH)4COOH+NaI体系中加入过量的碘，氧化反应完成后用硫代替硫酸钠滴定过量的碘，即可推算出酶的活力。

I2＋2Na2S2O3 = Na2S4O6＋2NaI三、仪器、原料和试剂仪器吸管(25mL，5mL，2mL，10mL)、定碘瓶(500mL)、碱式滴定管、烧杯、恒温水浴锅、分析天平。

原料：AS3.4309黑曲霉斜面试管菌；麸皮、稻壳。

试剂1. 2％可溶性淀粉溶液：准确称取2克可溶性淀粉(预先于100~105℃烘干至恒重约2小时)，加少量蒸馏水调匀。

倾入80毫升左右的沸蒸馏水中，继续煮沸至透明，冷却后用水定容至100毫升。

2. 0.05 mol/L碘液：称取25克碘化钾溶于少量水中，加入12.7克碘，溶解后定容至1000毫升。

3. pH4.5的1mol/L醋酸缓冲液：称取8.204克无水醋酸钠，先在少量水中溶解，定容至1000毫升。

取分析纯冰醋酸5.78毫升定容至1000毫升。

以上两种溶液按醋酸和醋酸钠的体积比为25：22混合即为所要求之缓冲液。

4. 0.1 mol/L氢氧化钠溶液：称取分析纯氢氧化钠4克溶解并定容至1000毫升。

5. 1 mol/L硫酸：吸取分析纯浓硫酸(比重1.84)55.5毫升，缓缓如入944.5毫升水定容至1000毫升。

6. 0.01 mol/L硫代硫酸钠：称取26克硫代硫酸钠(Na2S2O3·5H2O)和0.4克碳酸钠，用煮沸冷却的蒸馏水溶解并定容至1000毫升，配制后放置三天再标定。

DNS法测定酶活实验方法总结及优化方案
目前纤维素酶没有统一的测定方法，诸多因素影响纤维素酶酶活测定大小的比较。

选择适宜的酶活测定条件，提高测定结果的准确性，可根据有关资料中采用的测定条件，以及通过控制变量法对酶活力测定中的主要影响因素进行研究。

目前实验室采用测酶活方法：
1、葡萄糖标准曲线制作：
页脚内容1
530nm比色。

2、酶活测定方法：
页脚内容2
页脚内容3
考虑到酶液中培养基成分会对吸光值造成一定的影响，所以空白管0还是采用先将酶高温灭活的方法，后面保持实验条件一致，显色时间与标准曲线的显色时间保持一致。

单位酶活的计算：T n k OD ml U 1000
1
)/(⨯⨯⨯=酶活力 n ：稀释倍数； K ：曲线斜率； T ：反应时间，min ； 1000：mg 换算成ug.
以下是近期所做的实验结果：
葡萄糖标准曲线
两种产纤维素酶细菌不同测试结果
页脚内容4
测定结果
实验结论：从以上几种对酶液的处理方法来看，183的酶活要比R2高，两种菌都是以胞外酶为主。

目前尚没找到有关于加缓冲溶液并且超声破碎的文献，所得测量结果与前面三种方法均不符，这一步需另外探索。

页脚内容5
根据《纤维素酶活力测定条件研究》（夏服宝等，《饲料工业》2005年第26卷第16期）和《影响纤维素酶活力测定的几个因素》（刘妙莲等，中国食品发酵工业研究所）这两篇文献，实验室可先从底物浓度、温度、DNS用量、显色时间以及对菌体的超声破碎时间这几方面进行探索，进而优化实验方法。

页脚内容6。

可编辑修改精选全文完整版3,5-二硝基水杨酸(DNS)法测定糖化酶活力一、原理糖化酶有催化淀粉水解的作用，能从淀粉分子非还原性末端开始，分解α-1,4-葡萄糖苷键生成葡萄糖。

在煮沸条件下，葡萄糖在碱性介质中被3,5-二硝基水杨酸(DNS)氧化成葡萄糖酸，而3,5-二硝基水杨酸被还原成红褐色的3-氨基-5-硝基水杨酸。

在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关系，利用分光光度计，在540nm波长下测定光密度值，查对标准曲线并计算，便可求出淀粉经糖化酶水解后产生的葡萄糖总量。

由于多糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需加入一分子水，所以在计算多糖含量时应乘以0.9。

反应过程如下：二、仪器、试剂1、仪器1)具塞玻璃刻度比色管：25mL×19；2)烧杯：100mL×4；3)三角瓶：100mL×1；4)容量瓶：100mL×3，50mL×3；5)刻度吸管：1mL×4；2mL×3；10mL×1；6)沸水浴；7)冰浴；8)扭力天平；9) UV —2802SH 型紫外可见分光光度计 尤尼柯（上海）仪器有限公司； 2、试剂1) 1mg/mL 葡萄糖标准液准确称取80℃烘至恒重的分析纯葡萄糖100mg ，置于小烧杯中，加少量蒸馏水溶解后，转移到100mL 容量瓶中，用蒸馏水定容至100mL ，混匀，4℃冰箱中保存备用。

2) 3,5-二硝基水杨酸（DNS ）试剂将6.3g DNS 和262mL 2M NaOH 溶液，加到500mL 含有185g 酒石酸钾钠的热水溶液中，再加5g 结晶酚和5g 亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加蒸馏水定容至1000mL ，贮于棕色瓶中备用。

三、操作步骤1、葡萄糖标准曲线的绘制取7支25mL 具塞刻度比色管编号，按表1分别加入浓度为1mg/mL 的葡萄糖标准液、蒸馏水和3,5-二硝基水杨酸（DNS ）试剂，配成不同葡萄糖含量的反应液。

dns法测定淀粉酶活力原理1. 什么是淀粉酶？淀粉酶，顾名思义，就是一种能把淀粉分解成糖的“高手”。

想想看，咱们吃的米饭、面条，这些淀粉类的食物，都得靠淀粉酶来“打工”。

它们在咱们的口腔、胃肠道里忙得不可开交，帮助消化，让身体能顺利吸收营养。

简单来说，淀粉酶就像是餐桌上的“翻译”，把复杂的淀粉变成了身体能理解的“语言”。

2. DNS法到底是啥？好啦，说到DNS法，那可就有趣了！DNS全名是“3,5二硝基水杨酸”，听起来像个化学实验室里的秘密武器，其实它是用来测量淀粉酶活力的“神器”。

这个方法就像一位魔术师，能在你面前变出色彩缤纷的结果。

说白了，就是利用化学反应来判断淀粉酶工作得怎样。

2.1 原理大揭秘来，咱们把话题稍微深入一点。

DNS法的基本原理是这样的：当淀粉被淀粉酶分解成麦芽糖时，DNS就会参与反应，形成一种颜色鲜艳的化合物。

这种颜色的深浅，直接反映了淀粉酶的活性。

想象一下，就像画画，颜料越多，颜色越深，说明画得越好。

反之，颜色淡了，那就说明活性不够，工作效率下降了。

2.2 测量过程接下来，我们来说说具体的测量过程。

首先，咱们得准备一些样品，像是唾液、食品加工液等，里面可不乏淀粉酶。

然后，将这些样品与淀粉混合，接着再加入DNS试剂。

嘿！这一步可不能马虎，搅拌均匀后，放进水浴锅里加热。

这个加热的过程就像是给淀粉酶加点“热情”，让它们更卖力地工作。

最后，冷却后把溶液放入分光光度计里测量。

只要稍微动动手指，就能看到结果，真是太神奇了！3. DNS法的优势与应用当然，DNS法可不是光在实验室里“打发时间”，它在许多领域都有广泛的应用。

比如，在食品工业中，厂家可以用这个方法来检测淀粉酶的活性，确保产品的质量。

想象一下，消费者吃到的每一口都能放心，这可是一件多么重要的事儿啊！3.1 研究的重要性不仅如此，科学研究也离不开它。

许多研究者通过DNS法，能深入了解淀粉酶的特性、活性变化等。

这就好比侦探破案，层层深入，挖掘真相。