实验十九 (6) 糖化型淀粉酶活力测定
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华南农业大学综合实验报告实验项目名称:糖化酶活力测定实验项目性质:综合实验计划学时:2学时所属课程名称:食品与发酵工业分析班级:10级生物工程1班姓名:肖佩学号:************指导老师:沈玉栋徐振林一.实验原理采用可溶性淀粉为底物,在一定的pH值与温度下,使之水解为葡萄糖(还原糖),以直接滴定法测定。
二.试剂及仪器(1)碱性酒石酸铜甲溶液(使用时等体积混合甲、乙溶液):甲液:称取15.693g硫酸铜(Cu2SO4·5H2O),0.05g次甲基蓝,用水溶解并稀释定容至1000mL;乙液:称取50g酒石酸钠钾,54g氢氧化钠,4g亚铁氰化钾,用水溶解并稀释定容至1000mL(2)0.1%标准葡萄糖溶液:准确称取1g无水葡萄糖(预先在100-1050C 烘干),用水溶解,加5mL浓盐酸,用水定容至1000mL。
(3)pH4.6乙酸-乙酸钠缓冲溶液:0.2mol/L乙酸溶液:量取11.8mL冰乙酸,用水稀释至1000mL;0.2mol/L 乙酸钠溶液:称取27.2g乙酸钠(CH3COONa·3H2O),用水定容至1000mL;pH4.6乙酸-乙酸钠缓冲液:取0.2mol/L的乙酸溶液和0.2mol/L的乙酸钠溶液等体积混合。
(4)0.1mol/L氢氧化钠溶液:称取4g氢氧化钠,用水溶解并定容至1000mL。
(5)2%可溶性淀粉溶液:准确称取2g可溶性淀粉(预先于10-105 0C烘干),加少量水调匀,倾入80mL沸水中,继续煮沸至透明,冷却后用水定容至100mL。
(6)固体曲(7)滴定管、电子天平、烧杯、恒温水浴锅、脱脂棉、容量瓶、移液管、三角瓶三.测定步骤(1)5%固体曲浸出液制备:称取5.0g固体曲(以绝干曲计),置于250mL 烧杯中,加90mL水和10mL pH4.6乙酸-乙酸钠缓冲溶液,搅匀,于30℃水浴中保温浸1小时,每隔15min 搅拌一次。
用脱脂棉过滤,滤液为5%固体曲浸出液。
淀粉酶活力测定实验报告淀粉酶活力测定实验报告实验三、淀粉酶活性的测定实验报告实验四、淀粉酶活性的测定一、实验目的:1、了解α - 淀粉酶和β - 淀粉酶的不同性质及其淀粉酶活性测定的意义;2、学会比色法测定淀粉酶活性的原理及操作要点。
二、实验原理:淀粉酶存在于几乎所有植物中,特别是萌发后的禾谷类种子,淀粉酶活力最强,其中主要是α-淀粉酶和β-淀粉酶。
根据α-淀粉酶和β-淀粉酶特性不同,α-淀粉酶不耐酸,在pH3.6以下迅速钝化;β-淀粉酶不耐热,70? 15min 则被钝化。
测定时,使其中一种酶失活,即可测出另一种酶的活性。
淀粉在淀粉酶的催化作用下可生成麦芽糖,利用麦芽糖的还原性与3,5-二硝基水杨酸反应生成棕色的3-氨基-5-硝基水杨酸,测定其吸光度,从而确定酶液中淀粉酶活力(单位重量样品在一定时间内生成麦芽糖的量)。
三、实验用具:1、实验设备研钵,具塞刻度试管,离心管,分光光度计,酸度计,电热恒温水浴锅,离心机,电磁炉。
2、实验材料与试剂(1)0.1mol/l pH5.6的柠檬酸缓冲液:A液:称取柠檬酸20.01g,定容至1000ml;B液:称取柠檬酸钠29.41g,定容至1000ml;取A液55ml与B液145ml混匀。
(2)1%可溶性淀粉溶液:1g淀粉溶于100ml 0.1mol/l pH5.6的柠檬酸缓冲液;(3)1%3,5-二硝基水杨酸试剂:称取3,5-二硝基水杨酸1g、NaOH 1.6g、酒石酸钾钠30g,定容至100ml水中,紧盖瓶塞,勿使CO2进入;(4)麦芽糖标准溶液:取麦芽糖0.1g溶于100ml水中;(5)pH 6.8的磷酸缓冲液: 取磷酸二氢钾6.8g,加水500ml使溶解,用0.1mol/L氢氧化钠溶液调节pH值至6.8,加水稀释至1000ml即得。
(6)0.4mol/L的NaOH溶液;(7)1%NaCl溶液。
(8)实验材料:萌发的谷物种子(芽长约1cm)四、操作步骤1、酶液提取:取6.0g浸泡好的原料,去皮后加入10.0mL 1%的NaCl 溶液,磨碎后以2000r/min 离心10min,转出上清液备用。
淀粉酶活力测定实验报告一、实验目的1、学习和掌握淀粉酶活力测定的原理和方法。
2、了解淀粉酶的作用特点及其在生物体内的重要性。
3、培养实验操作技能和数据处理能力。
二、实验原理淀粉酶是能够水解淀粉分子中α-1,4 糖苷键的一类酶的总称,包括α淀粉酶和β淀粉酶。
α淀粉酶可以随机地作用于淀粉分子内部的α-1,4 糖苷键,生成麦芽糖、麦芽三糖、糊精等还原糖。
β淀粉酶则从淀粉分子的非还原性末端依次水解相隔的α-1,4 糖苷键,生成麦芽糖。
在本次实验中,利用淀粉酶水解淀粉生成还原糖,还原糖能与 3,5-二硝基水杨酸试剂反应,生成棕红色的 3-氨基-5-硝基水杨酸。
颜色的深浅与还原糖的量成正比,通过比色法测定吸光度,并与标准曲线对比,即可计算出淀粉酶的活力。
三、实验材料与仪器1、实验材料新鲜淀粉酶提取液1%淀粉溶液(称取 1g 可溶性淀粉,加入少量蒸馏水调匀,然后缓缓倾入沸水中并不断搅拌,最后定容至 100ml)pH 69 的磷酸缓冲液3,5-二硝基水杨酸试剂(DNS 试剂)麦芽糖标准溶液(1mg/ml)2、实验仪器分光光度计恒温水浴锅移液器离心机试管、刻度吸管、容量瓶等四、实验步骤1、标准曲线的绘制取 7 支干净的具塞刻度试管,编号,按下表加入试剂:|管号|麦芽糖标准液(ml)|蒸馏水(ml)| DNS 试剂(ml)|麦芽糖含量(mg)|||||||| 0 | 0 | 20 | 20 | 0 || 1 | 02 | 18 | 20 | 02 || 2 | 04 | 16 | 20 | 04 || 3 | 06 | 14 | 20 | 06 || 4 | 08 | 12 | 20 | 08 || 5 | 10 | 10 | 20 | 10 || 6 | 12 | 08 | 20 | 12 |摇匀后,在沸水浴中加热 5 分钟,取出后立即用冷水冷却至室温,再向每管中加入蒸馏水 20ml,摇匀。
以 0 号管为空白对照,在 540nm 波长下测定各管的吸光度值。
淀粉酶活性的测定实验报告淀粉酶活性的测定实验报告引言淀粉酶是一种重要的酶类,能够催化淀粉的降解为葡萄糖。
淀粉酶活性的测定对于了解酶的特性以及其在生物化学过程中的作用具有重要意义。
本实验旨在通过测定淀粉酶的活性,探究其受到不同因素的影响,为进一步研究酶的功能提供基础数据。
材料与方法1. 实验材料:淀粉酶溶液、淀粉溶液、缓冲液、I2-KI试剂、洗涤液。
2. 实验仪器:比色皿、移液管、离心机、恒温水浴。
实验步骤:1. 预热水浴至37°C。
2. 准备不同浓度的淀粉溶液(0.2%、0.4%、0.6%、0.8%、1.0%),并分别加入比色皿中。
3. 向每个比色皿中加入相同体积的淀粉酶溶液,混匀后立即放入预热的水浴中。
4. 在反应开始后的不同时间点(如0、5、10、15、20分钟),取出一个比色皿,立即加入I2-KI试剂,形成蓝色淀粉-碘复合物。
5. 使用比色计测定各比色皿中的吸光度,并记录下实验数据。
6. 重复实验步骤2-5,以获得可靠的结果。
结果与讨论通过实验测定得到各个时间点下不同淀粉浓度的吸光度值,进而计算出淀粉酶的活性。
实验结果显示,随着淀粉浓度的增加,淀粉酶的活性也随之增加。
这是因为淀粉浓度的增加会提供更多的底物供淀粉酶催化反应,从而增加反应速率。
然而,当淀粉浓度超过一定范围时,淀粉酶的活性开始饱和,即使再增加淀粉浓度,反应速率也不再显著增加。
此外,实验结果还显示,随着反应时间的增加,淀粉酶的活性逐渐增加,但增加速率逐渐减缓。
这是因为淀粉酶需要一定的时间来结合底物,并催化反应发生。
随着反应进行,底物逐渐减少,淀粉酶与底物的结合也变得更加困难,从而导致反应速率的下降。
此外,实验还可以探究其他因素对淀粉酶活性的影响,如温度、pH值等。
通过调节这些因素,可以进一步了解淀粉酶的特性以及其在生物体内的作用机制。
结论通过本实验的测定,我们得出了淀粉酶活性与淀粉浓度和反应时间的关系。
实验结果表明,淀粉酶活性随着淀粉浓度的增加而增加,并随着反应时间的增加而逐渐饱和。
淀粉酶活性测定实验报告淀粉酶活性测定实验报告引言:淀粉酶是一种重要的酶类,它在生物体内起着关键的消化和代谢作用。
淀粉酶能够将淀粉降解为较小的分子,以供生物体吸收和利用。
因此,测定淀粉酶的活性对于了解生物体的消化系统以及酶的功能机制具有重要意义。
本实验旨在通过测定淀粉酶的活性,探究其在不同条件下的变化规律,从而加深对淀粉酶的认识。
材料与方法:1. 实验器材:试管、移液管、恒温水浴、分光光度计。
2. 实验试剂:淀粉溶液、淀粉酶溶液、碘液、磷酸盐缓冲液。
3. 实验步骤:a. 准备一系列稀释淀粉酶溶液,分别为0.1、0.2、0.3、0.4、0.5 mg/mL。
b. 取一定量的淀粉溶液置于试管中,加入相应浓度的淀粉酶溶液,混匀。
c. 将试管置于恒温水浴中,保持温度在37°C,反应10分钟。
d. 在反应结束后,加入适量的磷酸盐缓冲液停止反应。
e. 加入适量的碘液,使溶液变为蓝黑色。
f. 使用分光光度计测定溶液的吸光度,记录下吸光度值。
g. 重复以上步骤,分别测定其他浓度的淀粉酶溶液。
结果与讨论:通过实验测定,我们得到了不同浓度淀粉酶溶液的吸光度值,并以吸光度值作为淀粉酶活性的指标。
根据实验结果,我们可以得出以下结论:1. 淀粉酶活性与浓度呈正相关关系:实验结果显示,随着淀粉酶溶液浓度的增加,吸光度值也随之增加。
这表明淀粉酶的活性与其浓度呈正相关关系。
当淀粉酶溶液浓度较低时,其活性较弱,无法有效降解淀粉;而当浓度增加时,淀粉酶活性也相应增强,能够更快速地将淀粉降解为较小的分子。
2. 淀粉酶活性受温度影响较大:实验中将反应温度保持在37°C,这是因为淀粉酶在人体内的最适温度为37°C。
然而,当温度偏离最适温度时,淀粉酶的活性会受到显著影响。
过高或过低的温度都会导致淀粉酶的构象变化,从而影响其催化效率。
因此,合适的温度对于淀粉酶的活性至关重要。
3. 淀粉酶活性受pH值影响:酶活性与pH值之间存在一定的关系。
00淀粉酶活力的测定一、目的学习和掌握测定淀粉酶(包括α-淀粉酶和β-淀粉酶)活力的原理和方法。
二、原理淀粉是植物最主要的贮藏多糖,也是人和动物的重要食物和发酵工业的基本原料。
淀粉经淀粉酶作用后生成葡萄糖、麦芽糖等小分子物质而被机体利用。
淀粉酶主要包括α-淀粉酶和β-淀粉酶两种。
α-淀粉酶可随机地作用于淀粉中的α-1,4-糖苷键,生成葡萄糖、麦芽糖、麦芽三糖、糊精等还原糖,同时使淀粉的粘度降低,因此又称为液化酶。
β-淀粉酶可从淀粉的非还原性末端进行水解,每次水解下一分子麦芽糖,又被称为糖化酶。
淀粉酶催化产生的这些还原糖能使3,5-二硝基水杨酸还原,生成棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸,其反应如下:淀粉酶活力的大小与产生的还原糖的量成正比。
用标准浓度的麦芽糖溶液制作标准曲线,用比色法测定淀粉酶作用于淀粉后生成的还原糖的量,以单位重量样品在一定时间内生成的麦芽糖的量表示酶活力。
淀粉酶存在于几乎所有植物中,特别是萌发后的禾谷类种子,淀粉酶活力最强,其中主要是α-淀粉酶和β-淀粉酶。
两种淀粉酶特性不同,α-淀粉酶不耐酸,在pH3.6以下迅速钝化。
β-淀粉酶不耐热,在70℃15min钝化。
根据它们的这种特性,在测定活力时钝化其中之一,就可测出另一种淀粉酶的活力。
本实验采用加热的方法钝化β-淀粉酶,测出α-淀粉酶的活力。
在非钝化条件下测定淀粉酶总活力(α-淀粉酶活力+β-淀粉酶活力),再减去α-淀粉酶的活力,就可求出β-淀粉酶的活力。
三、实验材料、主要仪器和试剂1.实验材料萌发的小麦种子(芽长约1cm)2.仪器(1)离心机(2)离心管(3)研钵(4)电炉(5)容量瓶:50mL×1, 100mL ×1 (6)恒温水浴(7)20mL具塞刻度试管×13 (8)试管架(9)刻度吸管:2mL×3, 1mL×2, 10mL×1 (10)分光光度计3.试剂(均为分析纯)(1)标准麦芽糖溶液(1mg/mL):精确称取100mg麦芽糖,用蒸馏水溶解并定容至100mL。
一、实验目的1. 了解淀粉酶的生物学特性及其在生物体内的作用。
2. 掌握淀粉酶活性的测定方法。
3. 分析淀粉酶活性受温度、pH值等因素的影响。
二、实验原理淀粉酶是一种水解淀粉的酶,可以将淀粉分解为麦芽糖和葡萄糖。
淀粉酶活性是指单位时间内淀粉酶催化淀粉分解的速率。
本实验采用DNS法测定淀粉酶活性,DNS 法是一种灵敏、准确、精确度高的测定方法,适用于测定小样品淀粉酶活性。
三、实验材料与仪器1. 实验材料:淀粉酶、淀粉、DNS试剂、标准葡萄糖溶液、pH缓冲液、蒸馏水、试管、恒温水浴锅、移液器、量筒、滴定管等。
2. 实验仪器:pH计、电子天平、电子显微镜、分光光度计等。
四、实验步骤1. 配制淀粉酶溶液:称取适量淀粉酶,用蒸馏水溶解,配制成一定浓度的淀粉酶溶液。
2. 配制淀粉溶液:称取适量淀粉,用蒸馏水溶解,配制成一定浓度的淀粉溶液。
3. 测定淀粉酶活性:取一定量的淀粉溶液于试管中,加入适量淀粉酶溶液,置于恒温水浴锅中,在一定温度下反应一定时间。
4. 测定DNS反应液:取一定量的反应液,加入DNS试剂,置于沸水浴中反应一定时间。
5. 比色:用分光光度计在特定波长下测定DNS反应液的吸光度。
6. 计算淀粉酶活性:根据标准葡萄糖溶液的吸光度值,绘制标准曲线,计算反应液中葡萄糖的浓度,进而计算淀粉酶活性。
五、结果与分析1. 淀粉酶活性随温度升高而增加,在一定温度范围内达到最大值,之后随温度升高而降低。
2. 淀粉酶活性随pH值升高而增加,在一定pH范围内达到最大值,之后随pH值升高而降低。
3. 淀粉酶活性受激活剂和抑制剂的影响,其中激活剂可以增强淀粉酶活性,抑制剂可以抑制淀粉酶活性。
六、实验结论1. 淀粉酶是一种水解淀粉的酶,在生物体内具有重要作用。
2. DNS法是一种灵敏、准确、精确度高的测定淀粉酶活性的方法。
3. 淀粉酶活性受温度、pH值、激活剂和抑制剂等因素的影响。
七、实验讨论1. 实验过程中,淀粉酶溶液和淀粉溶液的浓度对实验结果有较大影响,需要严格控制浓度。
⽣化实验--淀粉酶活性测定标准实验报告实验⼆:酶活⼒测定⽅法的研究⼀.研究背景及⽬的酶是⾼效催化有机体新陈代谢各步反应的活性蛋⽩,⼏乎所有的⽣化反应都离不开酶的催化,所以酶在⽣物体内扮演着极其重要的⾓⾊,因此对酶的研究有着⾮常重要的意义。
酶的活⼒是酶的重要参数,反映的是酶的催化能⼒,因此测定酶活⼒是研究酶的基础。
酶活⼒由酶活⼒单位表征,通过计算适宜条件下⼀定时间内⼀定量的酶催化⽣成产物的量得到。
本实验选取萌发的⽲⾕类种⼦为材料,通过对其所含两种淀粉酶活⼒的测定来研究酶活⼒测定的⽅法。
⼆.实验原理萌发的种⼦中存在两种淀粉酶,分别是α淀粉酶和β淀粉酶,β淀粉酶不耐热,在⾼温下易钝化,⽽α淀粉酶不耐酸,在pH3.6下则发⽣钝化[1]。
本实验的设计利⽤β淀粉酶不耐热的特性,在⾼温下(70℃)下处理使得β淀粉酶钝化⽽测定α淀粉酶的酶活性[1]。
酶活性的测定是通过测定⼀定量的酶在⼀定时间内催化得到的麦芽糖的量来实现的,麦芽糖的浓度利⽤⽐⾊法可以很容易测得。
然后利⽤同样的原理测得两种淀粉酶的总活性,拟将总活性与α淀粉酶的活性的差值看作β淀粉酶的活性,再做进⼀步分析。
实验中为了消除⾮酶促反应引起的麦芽糖的⽣成带来的误差,每组实验都做了相应的对照实验,在最终计算酶的活性时以测量组的值减去对照组的值加以校正。
三.材料、试剂与仪器材料:萌发的⼩麦种⼦试剂:①1%淀粉溶液(称取1克可溶性淀粉,加⼊80ml蒸馏⽔,加热熔解,冷却后定容⾄100ml);②pH5.6的柠檬缓冲液:A液(称取柠檬酸20.01克,溶解后定容⾄1L)B液(称取柠檬酸钠29.41克,溶解后定容⾄1L)取A液5.5ml、B液14.5ml 混匀即可;③3,5-⼆硝基⽔杨酸溶液(称取3,5-⼆硝基⽔杨酸1.00克,溶于20ml 1M 氢氧化钠中,加⼊50ml蒸馏⽔,再加⼊30克酒⽯酸钠,待溶解后,⽤蒸馏⽔稀释⾄100ml,盖紧瓶盖保存);④麦芽糖标准液(称取0.100克麦芽糖,溶于少量蒸馏⽔中,⼩⼼移⼊100ml 容量瓶中定容);⑤0.4M NaOH仪器:722光栅分光光度计(编号990695)DK-S24型电热恒温⽔浴锅(编号L-304056)离⼼机(TDL-40B) 配平天平药物天平电热锅100ml容量瓶50ml容量瓶移液管试管研钵烧杯洗瓶四.实验⽅法本实验按照下列表格的中的操作步骤进⾏:五.数据整理上表中前4⾏数据为实验的原始数据。