微量凝集反应课件2012.12.10ppt

【材料】 (1)TRUST抗原悬液 （牛心提取的类脂质） (2)被检血清。 (3)阳性对照血清；阴性对照血清 (4)试验专用卡片；专用滴管及针头
【意义】 RPR是定性试验，用于梅毒的筛选和疗效的判定。
阳性标本如有需要，也可将血清作1:2—1:32稀释后，按 上述方法做半定量试验。
注意：
1.一期梅毒：70%； 二期梅毒：100%
TPPA （梅毒螺旋体抗体明胶颗粒凝集试验）
U型板（微量反应板）
TPPA是梅毒确诊试验。 TPPA在梅毒治愈后它还 是阳性的，而RPR可以 转阴或者滴度效价很低
RF因子检测（正向间接凝集）
❖ 【原理】
类风湿因子(rheumatic factor，RF)是一种 发生于类风湿病人血清中的抗人变性 IgG抗体 (IgM为主)，此种抗体可与IgG的Fc段呈特异反 应。将变性IgG致敏胶乳颗粒，与病人血清中的 RF相遇时，即可发生凝集现象。
3、O与H抗体在诊断上的意义
OHAB
诊 断 意 义（可能）
伤寒及副伤寒感染早期/交叉反应
伤寒及副伤寒感染晚期/预防接种/非特异性回忆反应
伤寒
甲型副伤寒
乙型副伤寒 接种伤寒及副伤寒三联疫苗 非肠热症/早期用抗生素/免疫功能低下
H与O抗体的性质及其消长意义
抗体 类型
O IgM 抗 体
H IgG 抗 体
❖ 【操作方法】
(1)试剂使用前，预置达室温。 (2)轻轻摇匀胶乳试剂 (3)反应板上滴加一滴未稀释血清滴(20ul) (4)然后滴加一滴胶乳试剂，并立即旋转摇动 使两者充分混匀。
(5)每次实验均应设阳性与阴性对照。 【结果观察与报告】
2分钟内出现明显而均匀的凝集颗粒者为阳 性，不凝集者为阴性。（凝集RF >20IU/mL)

抗原抗体在玻片上进行的反应，血型鉴定、细菌分型。
相应抗体
玻片法直接凝集反应示意图
(1)半定量试验-抗体效价测定。 (2)玻片凝集试验也可用试管法，如肥达外斐反应。 非特异性凝集可出现假阳性，必须做阴性对照(不加抗体， 只加抗原)。
1
2
3
4
5
6
6
7
1:2 1:4 1:8 1;16 1:32 1:64 1:64 1:128
临床检验中早期妊娠试验，现已被金标法替代。
三、间接血凝试验 间接血凝实验是以红细胞作为载体的间接凝集实验，用已 知的抗原或抗体致敏红细胞与标本中的抗体或抗原特异性结 合。常用绵羊、家兔等红细胞。
自身红细胞凝集试验 样本：患者全血(含有红细胞，血清中有待检的抗原或抗)。 试剂：抗红细胞单克隆抗体与已知抗体连接，检测未知抗 原。例如：乙型肝炎表面抗原(HBsAg)。
载体颗粒
抗原致敏颗粒
凝集
正向间接凝集反应原理
已知 抗原
无抗体
胶乳 颗粒
载体颗粒
抗原致敏颗粒
无凝集
无相应抗体存在时无凝集现象发生
2.反向间接凝集反应 用特异性抗体(已知)致敏载体检测未知抗原。
已知 抗体
待检 抗原
载体颗粒
抗体致敏颗粒
凝集
反向间接凝集反应原理
已知 抗体
无抗原
载体颗粒
抗体致敏颗粒
无凝集
待检血清 (RH抗体)
不完全抗体 (RH抗体)
Rh抗原
凝集 现象
Rh＋O型红细胞
抗人球蛋白
间接接coombs试验原理示意图
直接与间接Coombs试验的区别
试验 检测目的
样本
直接 红细胞表面的

是指细菌、螺旋体和红细胞等颗 粒性抗原，在适当电解质参与下可直 接与相应抗体结合出现肉眼可见的凝 集。反响中的抗原称为凝集原，参与 反响的抗体称为凝集素。
二、间接凝集反响
将的可溶性抗原〔或抗体〕吸附或耦联 到与免疫无关的载体颗粒外表,形成致敏颗粒, 再与相应抗体〔或抗原〕作用,在适宜的电解 质存在的条件下，出现肉眼所见的凝集现象， 称之。
A、正向：诊断试剂为抗原致 敏的载体颗粒及相应抗体，用 于检测标本中是否存在与致敏 抗原一样的抗原。
第一种情况：
(标本)
结果：免疫微球不凝集为阳性
第二种情况：
标本 中无 抗原
结果：免疫微球凝集为阴性
3间接凝集抑制反响
B、反向：诊断试剂为抗体致敏的 载体颗粒及相应抗原，用于检测标 本中是否存在与致敏抗体一样的抗 体。
凝集反响
是指颗粒性抗原(红细胞、细菌等)或可 溶性抗原〔或抗体〕与载体颗粒结合 成致敏颗粒后与相应抗体〔或抗原〕 发生特异性结合，在适当电解质存在 下，形成肉眼可见的凝集现象。
在免疫学技术中，凝集反响可分为 直接凝集反响和间接凝集反响两大类 。
凝集反响的类型 一、直接凝集反响(direct agglutination)
非特异性类脂抗体测定
1、性病研究实验室试验〔VDRL〕 2、不加热血清反响素试验〔USR〕 3、快速血浆反响素试验 〔RPR〕 4、甲苯胺红试验〔TRUST〕
特异性梅毒血清学试验
梅毒螺旋体抗原血清试验：用梅毒螺旋体作为抗 原检测血清中的抗螺旋体IgM和/或IgG抗体，其 敏感性和特异性均高于非梅毒螺旋体抗原血清试 验，但不能用作疗效观察的指标。
• 梅毒快速血浆反响素试验 • Rapid Plasma Reagin 〔RPR〕 • RPR试验

以பைடு நூலகம்盐缓冲液为反应介质的抗原抗体特异 性结合的沉淀试验。
环状沉淀 絮状沉淀 免疫浊度测定
絮状沉淀试验(flocculation)
【原理】将抗原溶液与相应抗体溶液混合,在 电解质存在的条件下,抗原与抗体结合出现可 见的絮状沉淀。
【应用】测定抗原抗体反应的最适比。
【方法】 1、抗原稀释法:抗原最适比例 2、抗体稀释法:抗体最适比例 3、方阵滴定法:抗原抗体最适比例
logC/d ＝K
Mancini曲线
Fahey曲线
T1为16～24h；T2为24～48h；T3为 48h以上,可见T3为直线，T1为反抛物 线
t1为 16～ 24h；t2为24～48h；t3为 48h以上,可见t1为直线，t3为反抛物线
已知含量的Ag标 准品
Fahey曲线的绘制
Fahey曲线,使用半 对数纸画曲线,浓 度的对数与沉淀环
(2)试管凝集试验 半定量试验
在微生物学检验中常用已知细菌 作为抗原液与一系列稀释的受检血清 混合,保温后观察每管内抗原凝集程 度,通常以产生明显凝集现象的最高 稀释度作为血清中抗体的效价,亦称 为滴度。
(2)试管凝集试验 半定量试验
方法: 1)倍比稀释待检血清:
0、5ml 0、5ml 0、5ml
• 沉淀线偏向抗原孔一方, 表示抗体浓度＞抗原,反 之,则是抗体浓度＜抗原 浓度。
【 CIEP方法评价】
(1)简便、快速、敏感度较双扩提高8～16倍,可测蛋 白质浓度达 ug/ml。
(2)要求抗原、抗体比例严格,尽估计使用高效价免疫 血清,必要时对待检样品采纳不同稀释度
(3)不适宜抗原抗体都是球蛋白的检测 。 (4)由于电渗的缘故,目前已不推荐使用。
抗球蛋白参与的间接血凝试验 (Coombs试验)