血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳的影响因素分析

影响血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳实验分离效果的因素:【 1】电泳介质 pH 的影响:对于蛋白质及氨基酸等两性物质,电泳介质的 pH 影响蛋白质的电泳情况即可决定蛋白质的带电量(Q 。

pI-pH<0,分子带正电荷,向负极泳动;pI-pH>0,分子到负电荷,向正极泳动;pI-pH=0,兼性离子,净电荷为零。

pH 偏离等电点越远,分子所带净电荷越多,其泳动速度越快。

所以,当┃ pI-pH ┃接近零时,分子处于等电状态,不移动,影响条带清晰度,从而影响实验分离效果。

【对应注意点】由于血清蛋白质的等电点多在 pH 4~6 之间,因此,分离血清蛋白常用 pH 8.6的巴比妥缓冲液或者三羟甲基氨基甲烷 (Tris 缓冲液。

【 2】缓冲溶液的离子强度:离子强度低,电泳速度快,分离区带不易清晰;离子强度高,电泳速度慢,但区带分离较清晰。

离子强度过低,缓冲溶液的缓冲量小,不易维持 pH 的恒定;离子强度过高,则降低蛋白质的带电量使电泳速度减慢。

所以,当离子强度过低时,电泳速度虽快,但易引起分离区带不清晰; 当离子强度过高时,虽分离区带清晰,但点用速度过慢,所以要选择合适的离子强度。

【对应注意点】离子强度的选择要合适, 一般常用的离子强速为 0.02~0.2之间。

【 3】电场强度的影响:电场强度和电泳速度成正比关系。

电场强度一每厘米的电势差计算,也称电势梯度。

电场强度越高,则带电离子的移动速度越快。

随着电场强度的增高,电流强度增加,产热也增多。

产热的不良后果:①引起水的蒸发,改变溶液 pH 及离子强度②引起介质温度高,可使蛋白质变性。

另外,当电场强度过高时,电泳速度也会很快,分离区带将不清晰。

【对应注意点】电泳实验要控制在一定范围之内, 进行高压电泳时, 必须装备有效的冷却装置。

【 4】电渗:在电场中,由于多孔支持物吸附水中的离子使支持物表面相对带电,在电场作用下,溶液就像一定方向移动,此种现象称作电渗。

乙酸纤维素薄膜电泳分离血清蛋白失败原因乙酸纤维素薄膜电泳分离血清蛋白失败的原因可能有很多种，以下是一些可能的原因：
1. 样品不纯：如果血清样品中存在过多的杂质，可能会干扰电泳分离过程，导致蛋白分离效果不佳。

2. 操作不当：在进行电泳分离时，如果操作不当，例如加样量不准确、电泳槽中缓冲液不合适、电压过高或过低等，都可能导致蛋白分离效果不佳。

3. 薄膜质量问题：乙酸纤维素薄膜的质量也会影响电泳分离的效果。

如果薄膜的孔径过大或过小，或者存在其他质量问题，都可能导致蛋白分离效果不佳。

4. 血清蛋白变性：在电泳分离前，血清蛋白需要进行变性处理，如果变性处理不当，可能会导致蛋白分离效果不佳。

5. 电泳温度不适宜：电泳过程中的温度也会影响电泳分离的效果。

如果温度过高或过低，都可能导致蛋白分离效果不佳。

为了解决这些问题，可以采取以下措施：
1. 对血清样品进行预处理，去除杂质，提高样品纯度。

2. 严格按照操作规程进行电泳分离，确保加样量准确、电泳槽中缓冲液合适、电压控制在适宜范围内。

3. 选择质量好的乙酸纤维素薄膜，确保其孔径适宜且无质量问题。

4. 对血清蛋白进行正确的变性处理，使其能够更好地进行电泳分离。

5. 控制电泳温度在适宜范围内，确保电泳分离的效果。

实验四、血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳目的：熟悉醋纤薄膜电泳方法及其在分离血清蛋白中的应用，了解电泳技术的一般原理。

原理：1、电泳：带电质点在电场中移动的现象称为电泳。

影响电泳泳动速度的因素：《生化实验》p.51.内因：带电性质及电量，质点大小，质点形状外因：电场强度，溶液pH值，溶液离子强度，电渗现象等任何一个物质的质点，由于其本身在溶液中的解离或由于其表面对其它带电质点的吸附，会在电场中向一定的电极移动。

例如，氨基酸、蛋白质、酶、激素、核酸及其衍生物等物之都具有许多可解离的酸性和碱性基团，它们在溶液中会解离而带电。

一般来说，在碱性溶液中（即溶液的pH值大于等电点pI；本实验的pH值为8.6，pI不一样，样品带电荷也就不一样；选取不合适的pH，会使样品带有不同的正或负电荷，影响电泳），分子带负电荷，在电场中向正极移动。

而在酸性溶液中，分子带正电荷，在电场中向负极移动。

移动的速度取决于带电的多少和分子的大小。

不同的质点在同一电场中泳动速度不同，常用泳动度（或迁移率）来表示。

泳动度的定义是带电质点在单位电场强度下的泳动速度。

即：p.53.《生化实验》泳动度首先取决于带电质点的性质，即质点所带静电荷的量、质点的大小和质点的形状。

一般来说，质点所带静电荷越多，质点直径越小，越接近于球形，则在电场中泳动速度越快；反之，则越慢。

泳动度除受质点本身性质的影响外，还受其它外界因素的影响，如溶液的粘度等。

影响泳动速度的主要外界因素有下列几种：p.53-56.一）电场强度二）溶液的pH值pH值距等电点越远，质点所带静电荷越多，泳动速度也越快；反之，则越慢。

因此分离某一混合蛋白质样品时，应选择一个合适的pH值，使各种蛋白质所带静电荷的量差异较大，以利于分离。

为使电泳过程中溶液的pH恒定，必须采用缓冲液。

三）溶液的离子强度越高，泳动速度越慢，一般最适离子强度在0.02~0.2之间。

为了保持电泳过程中待分离生物大分子的电荷以及缓冲液pH值的稳定性，缓冲液通常要保持一定的离子强度，一般在0.02－0.2，离子强度过低，则缓冲能力差，但如果离子强度过高，会在待分离分子周围形成较强的带相反电荷的离子扩散层（即离子氛），由于离子氛与待分离分子的移动方向相反，它们之间产生了静电引力，因而引起电泳速度降低。

影响血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳操作因素探讨人体血清蛋白的组成可分为:A—白蛋白,G—球蛋白(其中包括:α1球蛋白,α2球蛋白,β球蛋白和γ球蛋白)。

正常人血清中各种蛋白质的含量有其正常值范围,血清中白蛋白与球蛋白的百分比A/G值大于1,而异常人血清的A/G值小于1。

定量分析时灵敏度高,同时还便于照相和保存等特点。

因此近年来在医学临床化验中得到广泛采用。

然而,在实际的应用中由于影响其操作的因素甚多,常常导致薄膜上各条蛋白质区带分离不清晰,或蛋白质分离不完全,直接影响对血清蛋白的定量分析结果的准确性。

本文针对这一问题结合其原理及主要操作环节进行分析。

2操作原理采用醋酸纤维素薄膜作为支持物的电泳方法,叫做醋酸纤维素薄膜电泳。

醋酸纤维素是纤维素的羟基乙酰化所形成的纤维素醋酸酯。

醋酸纤维素薄膜具有泡沫状的结构,有强的渗透性,力,其厚度仅为120微米。

人体血清经点样器点样于薄膜的一端,,点均低于pH=7,因此在pH=816所以将点样端置于电泳槽的负极端后,接通电源,,。

又由于各种血清蛋白的等电点不相同,在同一pH,同时各种蛋白质还存在分子量的大小差异,。

蛋白质分子量小,而所带电荷数多,则移动速度快;反之亦然。

可以对人体血清的各种蛋白质进行分离。

分离出的蛋白质经过氨基黑染色,漂洗后便可在薄膜上形成各条蛋白质的染色区域色带,再根据这些色带的颜色深浅,染色区域的大小,经比色后可以定性或定量测定各蛋白带的含量。

3影响因素分析311血液样品处理方式的影响电泳使用的血液样品必须确保新鲜,不能发生溶血反应。

从患者身上采集的血液样品应即时分离出血清,以避免出现溶血现象。

为了尽快分离出血清,常常采用的方法是迅速地将采集到的血液样品采取离心分离,同时分离出的血清应尽快进行电泳,以避免血清蛋白变性沉淀或被微生物污染。

312醋酸纤维薄膜的选择的影响醋酸纤维素薄膜具有泡沫状的结构,薄膜的质地好坏将直接影响血清蛋白在薄膜上的分离。

而薄膜在生产,加工、包装、运输、裁剪等过程中常常会导致薄膜表面受损,影响其质地均匀。

血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳实验一．实验原理1、电泳是指带电质点在电场中向本身所带电荷相反的电极移动的现象。

在一定pH条件下，不同的质点由于具有不同的等电点而带不同性质的电荷，因而在一定的电场中它们的移动方向和移动速度也不同，即它们的电泳迁移率不同，因此，可使它们分离。

2、影响电泳迁移率的外界因素：电场强度、溶液的pH值、溶液的离子强度和电渗现象。

3、影响电泳迁移率的内在因素：质点所带净电荷的量、质点的大小和形状。

4、采用醋酸纤维薄膜作为支持物的电泳方法称为醋酸纤维素薄膜电泳。

醋酸纤维素薄膜电泳具有微量、快速、简便、分辨力高，对样品无拖尾和吸附现象等优点。

5、醋酸纤维素是纤维素的羟基乙酰化所形成的纤维素醋酸酯，将它溶于有机溶剂（如：丙酮、氯仿、氯乙烯、乙酸乙酯等）后，涂抹成均匀的薄膜则成为醋酸纤维素薄膜。

该膜具有均一的泡沫状的结构，厚度约为120 μm，有很强的通透性，对分子移动阻力很小。

6、本实验以醋酸纤维素为电泳支持物，分离各种血清蛋白。

血清中含有清蛋白、α-球蛋白、β-球蛋白、γ-球蛋白和各种脂蛋白等。

各种蛋白质由于氨基酸组成、分子量、等电点及形状不同，在电场中的迁移速度不同。

以醋酸纤维素薄膜为支持物，正常人血清在pH8.6的缓冲体系中电泳，染色后可显示5条区带。

其中清蛋白的泳动速度最快，其余依次为α1-、α2-、β-及γ-球蛋白。

二．实验仪器和试剂✧器材醋酸纤维素薄膜（3×8cm），培养皿，载玻片，电泳仪，电泳槽，粗滤纸，镊子✧材料新鲜血清（未溶血）✧试剂1、巴比妥缓冲液（pH 8.6，离子强度0.06）：巴比妥1.66g, 巴比妥钠12.76g，加水至1000ml。

置4℃冰箱保存，备用。

（已配置）2、染色液：氨基黑10B 0.5g, 甲醇50ml, 冰醋酸10ml，蒸馏水40ml，混匀。

3、漂洗液：含95％乙醇45ml，冰醋酸5ml，蒸馏水50ml，混匀。

4、NaOH溶液：称取NaOH 16g，定容至1000ml。

血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳实验报告一、实验目的1、掌握血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳的基本原理。

2、熟悉电泳操作的基本技术和方法。

3、了解血清蛋白质的组成和相对含量。

二、实验原理血清中含有多种蛋白质，它们在 pH 值为 86 的缓冲液中均带负电荷，在电场中会向正极移动。

由于各种蛋白质分子大小、形状及所带电荷量不同，在电场中的迁移速度也就不同，从而可将血清蛋白质分离成不同的区带。

醋酸纤维薄膜具有均一的泡沫样结构，渗透性强，对蛋白质吸附极少，因此适合用于电泳。

三、实验材料1、器材电泳仪、电泳槽、醋酸纤维薄膜（2×8cm）、点样器、镊子、培养皿、滤纸、铅笔、直尺。

2、试剂巴比妥缓冲液（pH 86，离子强度 006）、染色液（氨基黑 10B）、漂洗液。

3、样本新鲜血清四、实验步骤1、准备醋酸纤维薄膜将醋酸纤维薄膜浸泡于巴比妥缓冲液中，浸泡时间约为 30 分钟，直至薄膜完全浸透。

2、点样取出浸透的薄膜，用滤纸吸去多余的缓冲液，在无光泽面距一端15cm 处，用铅笔轻轻划一条横线作为点样线。

然后，用点样器蘸取血清，均匀地点在点样线上，使血清形成一条细窄的直线。

点样量要适中，过多会导致蛋白质区带扩散，过少则不易观察到清晰的区带。

3、电泳将点样后的薄膜小心地放入电泳槽中，点样端靠近负极，使薄膜平整地贴在电泳槽的支架上。

盖上电泳槽盖，接通电源，调节电压为120V，电泳时间约为 50 60 分钟。

4、染色电泳结束后，取出薄膜，直接放入染色液中浸泡 5 10 分钟，使蛋白质区带染上颜色。

5、漂洗将染色后的薄膜取出，放入漂洗液中漂洗数次，直至背景无色，蛋白质区带清晰可见。

五、实验结果经过染色和漂洗后，在醋酸纤维薄膜上可以观察到清晰的血清蛋白质区带。

从正极到负极依次为清蛋白、α1-球蛋白、α2-球蛋白、β球蛋白和γ球蛋白。

通过与标准图谱对比，可以大致估算出各蛋白质组分的相对含量。

六、结果分析1、影响电泳结果的因素（1）点样不均匀或点样量过多过少都会导致区带不清晰或不完整。

血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳实验常见的问题及对策血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳实验是一种常见的生物化学实验方法，通过此实验可以对血清中的蛋白质进行分离和鉴定。

然而，在进行这一实验时，常常会遇到一些问题，例如电泳过程中出现异常带、电泳图不清晰等。

这些问题的出现会影响实验结果的准确性和可靠性，因此在进行血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳实验时，必须要注意相关问题及对策。

一、电泳图不清晰在进行血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳实验时，有时候会出现电泳图不清晰的情况。

这可能是由于电泳电压设置不当、电泳时间过长或电泳缓冲液配制不正确等原因造成的。

针对这一问题，我们可以采取以下对策：1. 检查电泳电压设置是否合适，过高或过低的电压都会导致电泳图不清晰，应该合理调整。

2. 根据实验要求，适当控制电泳时间，避免过长的电泳时间导致电泳图不清晰。

3. 检查电泳缓冲液的配制是否正确，保证缓冲液的pH值和离子浓度符合实验要求。

二、异常带出现在血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳实验中，有时候会出现异常带，这可能是由于样品加载不均匀、电泳条件设置不当或电泳系统不稳定等原因导致的。

针对这一问题，我们可以采取以下对策：1. 在加载样品时，一定要保证加载均匀，避免出现异常带的情况。

2. 检查电泳条件，包括温度、湿度等环境因素，保证电泳条件的稳定性。

3. 定期检查电泳系统的工作状态，确保系统处于良好工作状态。

血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳实验中常见的问题及对策是电泳图不清晰和异常带出现。

通过采取相应的对策，可以有效解决这些问题，保证实验的准确性和可靠性。

在进行实验时，我们需要注意实验条件的控制，确保实验的稳定性和可重复性。

只有这样，才能得到准确可靠的实验结果，为后续的研究工作提供可靠的数据支持。

对于血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳实验常见问题及对策的个人观点和理解，我认为在实验过程中，需要对实验条件进行严格控制，包括但不限于电泳电压、电泳时间、缓冲液配制和样品加载等，以确保实验的准确性和可靠性。