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六味地黄丸对糖尿病牙周炎小鼠成纤维细胞和护骨素的影响目的探讨六味地黄丸对糖尿病牙周炎患者的成纤维细胞和护骨素的影响。
方法选取50只大鼠建立糖尿病牙周炎模型，将其随机分为对照组和观察组，每组25只。
对照组正常喂养，蒸馏水灌胃。
观察组六味地黄丸600 mg/（100 g/d）灌胃。
进行HE染色，在光镜下观察，计算并比较两组小鼠成纤维细胞和护骨素数。
结果与对照组相比，观察组的成纤维细胞和护骨素均明显高于对照组（P ＜0.05）。
小鼠护骨素和时间进行相关分析，结果呈明显正相关(r = 0.885，P < 0.01)，小鼠成纤维细胞和时间进行相关分析，结果呈明显负相关（r = -0.796，P < 0.01）。
结论六味地黄丸能明显改善糖尿病牙周炎患者的成纤维细胞和护骨素情况，为临床治疗糖尿病牙周炎提供科学依据。
[Abstract] Objective To explore the influence of Liuwei Dihuang to rehmannia periodontitis fibroblasts and protect bone meal influence in diabetes patients. Methods Selected 50 rats diabetes periodontitis model establishment, and it would randomly divided into the control group and the observation group, each group of only 25. The normal control group feeding, distilled water irrigation stomach. The observation group bolus of Liuwei Dihuang 600 mg/(100 g/d) fill the stomach. For HE dyed, in light-microscopy, calculation and compared the two groups of mice fibroblasts and protect bone primes. Results Compared with the control, the observation group fibroblasts and protect bone meal were significantly higher than that in control group (P < 0.05). The bone meal and time in mice correlation analysis, the result was obviously positive correlation (r = 0.885, P < 0.01), the mice fibroblasts and time for the correlation analyzed, the result was obvious negative correlation (r =-0.796, P < 0.01). Conclusion Bolus of Liuwei Dihuang can obviously improve the diabetes patients with periodontitis fibroblasts and protect bone meal, clinical treatment for diabetes periodontitis provide the scientific basis.[Key words] Liuwei Dihuang; Diabetes periodontitis; Fibroblasts; The bone meal; Animal experiments牙周炎是口腔两大主要疾病之一。
六味地黄丸含药血清对骨髓细胞增殖的影响
高丽;白赟;王永辉;李敏;周然
【期刊名称】《时珍国医国药》
【年(卷),期】2012(23)7
【摘要】目的观察六味地黄丸含药血清对正常大鼠骨髓细胞体外增殖的影响。
方
法体外培养大鼠股骨骨髓细胞,加入不同浓度的六味地黄丸含药血清,采用MTT比
色法检测对骨髓细胞增殖的影响,采用流式细胞仪PI单标法检测对骨髓细胞周期的影响。
结果与正常对照组比较,六味地黄丸含药血清能显著促进骨髓细胞增殖,促使
细胞由G0/G1期进入S期以及由S期进入G2/M期,从而有利于骨髓细胞的增殖。
结论六味地黄丸含药血清对大鼠骨髓细胞有很好的促增殖作用。
【总页数】2页(P1598-1599)
【关键词】六味地黄丸;骨髓细胞;增殖
【作者】高丽;白赟;王永辉;李敏;周然
【作者单位】山西中医学院实验管理中心
【正文语种】中文
【中图分类】R285.5
【相关文献】
1.归脾汤含药血清对骨髓细胞增殖的影响 [J], 高丽;聂中标;柴智;王永辉;史利霞;周
然
2.六味地黄丸含药血清对Eahy926细胞ERK/Nrf2-HO-1信号通路的影响 [J], 吕
小辉;孙佳瑜;蔡智刚;张瑞鹏;单爱云
3.六味地黄丸含药血清对OS-732细胞增殖分化的影响 [J], 夏雄智;樊粤光;刘武
4.六味地黄丸含药血清对椎间盘Ⅰ型和Ⅱ型胶原表达的影响**☆ [J], 徐无忌;李悦;原超
5.五虎汤含药血浆与含药血清体外干预RSV诱导的树突细胞自噬影响T细胞增殖活化的研究 [J], 张鑫;王孟清;罗银河;丁伊
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六味地黄生物制剂对衰老小鼠脾淋巴细胞DNA损伤的保护作用李天河;丘婷;杨霞;翁志平;汤佩莲;赵越【摘要】Objective To study the mechanism of LW-PSB in delaying senescence. Method Mice were randomly divided into 4 groups, including the control group, the positive drug group, the aging model group and the LW-PSB group. Animal model was established by subcutaneous injection with 0. 5 mL 5% D-gal once daily for 50 consecutive days,except for the control group which was treated with saline. Mice in each group began to be given corresponding drug at 0. 2 mL o 10 g-1 dosage at day 10. Spleen lymphocytes were extracted and subjected to electrophoresis to analyzing the DNA damage at day 50. Results Compared with the control group, spleen lymphocytes in aging model of mice were serious damage (P <0. 01 ) ,and the ta il length, tail moment and tail DNA% were (145. 96 ±94. 63) μm, (51. 34 ±44. 67) μm and (23. 14 ± 15. 90)% .respectively. Compared with the model group,changes of these parameters in the positive drug group and the LW-PSB group were significant ( P < 0. 01 ). Conclusion LW-PSB can obviously protect against DNA damage of spleen lymphocytes in aging model mice induced by D-galactose that may be one of the molecular mechanisms by which LW-PSB delays senescence.%目的探讨六味地黄生物制剂延缓衰老的机制.方法小鼠随机分为正常对照组、阳性药物(维生素E)组、衰老模型组与六味地黄生物制剂组.除正常对照组注射生理盐水外,其余各组皮下注射0.5mL 5％D-半乳糖以建立衰老模型,连续50 d.第10天开始以0.2mL· 10g-1给予各组小鼠灌胃相应的药物,50 d后处死小鼠,分离脾淋巴细胞并利用单细胞凝胶电泳法检测各组小鼠脾脏淋巴细胞的DNA损伤情况.结果与正常对照组比较,衰老模型组小鼠的脾淋巴细胞有较为严重的损伤(P＜0.01),尾长、尾距与DNA拖尾率分别为(145.96±94.63)μm、(51.34 ±44.67) μm、(23.14±15.90)％;与衰老模型组比较,阳性药物组和六味生物制剂组小鼠的DNA损伤均显著降低(P＜0.01).结论六味地黄生物制剂对D-半乳糖所致的衰老小鼠的脾淋巴细胞有明显的保护作用,这可能是六味地黄生物制剂延缓衰老的机制之一.【期刊名称】《广东药学院学报》【年(卷),期】2012(028)006【总页数】3页(P644-646)【关键词】六味地黄生物制剂;衰老小鼠;脾淋巴细胞;DNA损伤【作者】李天河;丘婷;杨霞;翁志平;汤佩莲;赵越【作者单位】广东药学院中药学院,广东广州510006;广东药学院中药学院,广东广州510006;广东药学院中药学院,广东广州510006;广东药学院中药学院,广东广州510006;广东药学院中药学院,广东广州510006;广东药学院中药学院,广东广州510006【正文语种】中文【中图分类】R285光合细菌(photosynthetic bacteria，PSB)是一种以光为能源的厌氧细菌，含有多种生理活性物质，具有进行光合作用、发酵等功能。
六味地黄丸组方的临床应用及研究（作者:___________单位: ___________邮编: ___________）【摘要】笔者从方剂溯源、古代应用于临床各种疾病、现代研究及临床应用角度、结合现代疾病探讨六味地黄丸治疗疾病谱的范围，通过寻找疾病的共同发病机制，确定六味地黄丸研究的多系统靶点，明确六味地黄丸的主要药理作用方向及有效成份。
【关键词】六味地黄丸；疾病谱；临床应用；综述Abstract： It explores the disease range of Liuwei Dihuang Pill from formulae source，ancient clinical application，modern study and application angles，combining with modern diseases，to define its multi system targets，main pharmaceutical function and effective components by seeking for common mechanism.Key words：Liuwei Dihuang Pill; disease spectrum; clinical application; review六味地黄丸是著名方剂，经历代医家临床反复验证，组方严谨合理，功效显著，其后许多滋阴补肾的方剂由此方衍化而来。
多年来，除丸剂外，亦被改为汤剂、颗粒剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、片剂、口服液等用于临床，运用范围逐渐扩大，主治病证相应增多，现将有关文献综述如下。
1 方剂的溯源1.1 六味地黄丸方出宋·钱乙《小儿药证直诀》“地黄丸”条。
方中药物六味：熟地黄、山药、山茱萸、泽泻、牡丹皮、茯苓，原书用以治疗小儿肾怯失音、囟开不合、神气不足、目白睛多、面色晄白以及肾疳、骨疳、筋疳及肝疳等证。
浅谈中药的抗衰老性随着我国老龄化逐渐加剧,延缓衰老已成了当今医学研究的重大课题。
肾虚是导致衰老的主要原因之一,我们发现补肾中药在抗衰老研究方面具有巨大的潜力。
现就补肾中药抗衰老实验研究予以简介并评述如下:一、单味中药实验⑴巴戟素是巴戟天的糖苷类单体之一,能够明显增加衰老大鼠大脑皮层一氧化氮含量,提高大鼠脑组织超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶活性,降低大鼠脑中过氧化脂质及脂褐素含量。
利用放射性核素观察,巴戟素还能提高老龄小鼠大脑皮层3H-葡萄糖含量。
提示巴戟素补肾抗衰老作用机制是能够抗氧化损伤。
⑵枸杞多糖能明显抑制老年小鼠骨髓细胞原癌基因的表达。
枸杞多糖抗衰老作用机理之一可能是通过抑制原发癌基因的表达,从而抑制细胞凋亡。
⑶枸杞能显著延长果蝇寿命。
雌蝇平均寿命延长4d,雄蝇、雌蝇体内SOD活性明显升高,雌雄果蝇体内丙二醛含量均降低,提示枸杞胶囊具有抗氧化延缓果蝇衰老作用。
⑷熟地水提取液可显著提高小鼠红细胞膜活性,降低MDA含量,与衰老模型组比较,差异显著。
⑸熟地氯仿及乙醇提取溶液能明显增加D-半乳糖衰老小鼠脑组织中NO含量,提高脑中一氧化氮合酶和SOD的活性,提示熟地氯仿提取液比乙醇提取液抗衰老效果更佳。
⑹怀牛膝药物血清具有显著促人胚肺二倍体细胞增殖能力。
对同一代龄细胞,药物血清组细胞繁殖总数高于对照组。
这表明怀牛膝药物血清有促进细胞的增殖,提高细胞DNA合成的能力。
二、复方实验⑴六味地黄丸能明显抑制环磷酰胺诱导小鼠活体骨髓细胞微核率提高,降低诱导骨髓细胞姐妹染色单体互换频,表明六味地黄丸具有良好抗DNA损伤作用。
⑵从六味地黄汤分离获得的六味地黄多糖和P-3,对正常小鼠及快速老化模型SAMP8和SAMR1小鼠脾细胞增殖反应有直接促进作用,使脾细胞掺入量明显增加,但不增强有丝分裂原刀豆素诱导脾细胞增殖反应,大剂量时,对正常小鼠及SAMP8小鼠诱导脾细胞增殖反应有一定抑制作用。
这表明两种多糖不仅能增强正常小鼠细胞免疫,对衰老小鼠免疫功能降低也有一定改善作用。
六味地黄丸古今之功效刘亚辉、徐福超、代亚杰、邹俊（河南农业大学中药材系中药学11-2班）摘要：六味地黄丸药物成分由熟地黄、山茱萸、干山药、泽泻、牡丹皮、茯苓组成，根据相关配伍应用组成三补三泻，主要用于肾阴虚腰膝酸软，盗汗遗精、尤其是小儿囟门不合等症。
近代有相关人员对其进行重新开发利用，发现六味地黄丸拥有显著地增强免疫、抗衰老、抗疲劳降血脂、降血压、降血糖、改善肾功能、促进新陈代谢作用。
关键词：六味地黄丸、高血压、增强免疫、呼吸道感染、II型糖尿病、骨质疏松六味地黄丸属于补益剂中的补阴药。
药物成分由熟地黄、山茱萸、干山药、主要功效是滋阴补肾主治肾阴虚证腰膝酸软，头晕目眩，泽泻、牡丹皮、茯苓，耳鸣耳聋，盗汗遗精、消渴、骨蒸潮热、手足心热、舌燥咽痛、牙齿松动、足跟作痛、小便淋漓、以及小儿囟门不合，舌红少苔、脉沉细数方中重用熟地黄，滋阴补肾，填精益髓，为君药山茱萸补养肝肾，并能涩精；干山药补益脾阴，亦能固精，共为臣药;三药相配，滋阴肝脾肾称为“三补”但熟地黄的用量是山茱萸和山药两味药之和，故以补肾阴为主，补其不足以治本。
配伍泽泻利湿泄浊，并防熟地黄之滋腻恋邪；牡丹皮清泄相火，并治山茱萸之温涩；茯苓淡渗脾湿，并助山药之健运。
三药为“三泻”渗湿浊，清虚火，平其偏胜以治标，均为佐药。
六味合用，三补三泻，其中补药用量重于泻药，是以补为主；肝脾肾三阴并补，以补肾阴为主[1]。
近年来有的研究发现六味地黄丸还有许多新功效。
通过临床观察发现六味地黄丸拥有显著地增强免疫、抗衰老、抗疲劳降血脂、降血压、降血糖、改善肾功能、促进新陈代谢作用。
1 调节免疫功能医学家观察了醋酸可的松对大鼠免疫功能的抑制作用及补肾中药的调节作用。
结果表明，六味地黄丸能提高实验动物降低的脾脏白细胞介素2活性，拮抗使用醋酸可的松造成的脾脏重量减轻[2]。
研究发现，六味地黄丸对多形核白细胞的免疫功能有明显的双向调节作用，且具有一定的防癌作用。
骨髓造血干细胞骨髓是机体重要的中枢免疫器官，是体液免疫应答发生以及各种免疫细胞发生和B 细胞分化成熟的场所。
六味地黄丸的药理作用分析与临床应用研究目的分析六味地黄丸的药物作用机理以及对肝肾阴虚等各类疾病的临床作用效果。
方法选取2011年10月～2013年10月于我院接受治疗的肝肾阴虚患者共60例，其中糖尿病患者、高血压患者、慢性肾炎患者以及慢性肝炎患者各15例，服用六味地黄丸进行治疗，根据不同患者的病情，对服用量进行酌情增减，一个疗程后，观察患者的身体康复情况。
结果经过一个疗程后，13例糖尿病患者症状改善明显，治疗率为86.7%；14例高血压患者症状改善明显，治疗率为93.3%，12例慢性肾炎患者症状改善明显，治疗率为80%，14例慢性肝炎患者症状改善明显，治疗率为93.3%，经过统计学分析后，差异均具有统计学意义。
结论六味地黄丸对于治疗糖尿病、高血压、慢性肾炎以及慢性肝炎等疾病具有显著的疗效，因此应进一步研究六味地黄丸的药物作用机理，加强临床推廣应用。
标签：六味地黄丸；药物作用机理；肝肾阴虚；临床应用六味地黄丸由东汉张仲景《金匮要略》中的肾气丸演化而来，配方最早见于宋代《小儿药证直诀》，主要成分为熟地黄、泽泻、牡丹皮、山茱萸、山药、茯苓六种[1]。
六味地黄丸经过现代医学的验证，确认其在治疗由肝肾阴虚导致的头晕耳鸣、盗汗遗精、小便淋沥、手足心发热、腰酸膝软等症状上效果显著，具有较强的临床推广意义。
我院近年来在治疗糖尿病、高血压、慢性肾炎以及慢性肝炎的过程中，采取了服用六味地黄丸的治疗方式，取得了良好的效果，先做如下报道。
1资料与方法1.1一般资料选取2011年10月～2013年10月于我院接受治疗的肝肾阴虚患者共60例，其中糖尿病患者、高血压患者、慢性肾炎患者以及慢性肝炎患者各15例。
年龄18～72岁，平均年龄（45.6±2.3）岁。
糖尿病患者治疗前临床表现为”消渴”症状，例如体重下降、多食、多饮、小便频繁等，空腹平均血糖指数为（9.4±2.7）mmol/L，餐后平均血糖指数为（13.6±1.9）mmol/L。
六味地黄丸对改善智力迟缓型小鼠智力水平的研究赵靓;蔡利军;孟立娜【期刊名称】《浙江中医药大学学报》【年(卷),期】2013(000)012【摘要】[目的]探讨对不同年龄段智力迟缓型小鼠予六味地黄丸干预后的智力水平的改变及其机制。
[方法]将20只昆明雌性小白鼠数字随机化分为5组，每组4只，分别表示为A组(对照组)；B组(肾虚组)；C组(肾虚子代补肾组)；D组(肾虚母代补肾组)；E组(肾虚母、子代均补肾组)。
随后将5只昆明雄性小白鼠随机投入上述5组中，雌雄交配后，取出雄鼠，对B、C、D、E组进行恐吓，并同时给予0.1%的三水醋酸铅水溶液，直到生产前，建立中医“恐伤肾”的模型。
D、E组小鼠在正常孕育的同时予补肾干预。
A、B、C组常规饲料及饮水。
母鼠于交配后19～22d时先后产子，得到A、B、C、D、E组的子代鼠，C、E组的子代鼠饲料中继续添加六味地黄丸，A、B、D组子代鼠正常饮食，期间对不同年龄段的子代鼠分次进行行为学测试并分析。
[结果]初生鼠翻身测试实验中补肾子代鼠的翻身成功率优于未补肾组，少年鼠空地测试显示补肾组在行为测试中的表现优于未补肾组，且长期补肾组（子代、母代鼠均补肾）优于只有子代或是母代补肾组，组间多重比较（LSD-t统计分析法）有统计学意义，A组与B组、C组、D组比较（t分别为27.50、8.10、9.30、3.00，P均﹤0.05），B组与C组、D组、E组比较（t分别为19.40、18.20、27.80，P均﹤0.05）,C组与D组比较差异有统计学意义（t为8.40，P﹤0.05），D组与E组比较差异有统计学意义（t为9.60,P﹤0.05），青年鼠走钢丝测试，补肾组一定程度上仍优于未补肾组，A组与D组,B组与C组,B组与E组，C组与D组，D组与E组比较差异均有统计学意义（t分别为22.01、25.41、20.90、32.11、27.60，P均<0.05）。
[结论]六味地黄丸对于改善智力迟缓型小鼠的智力水平具有一定的作用。
六味地黄丸对干燥综合征模型小鼠的实验研究
王琼
【期刊名称】《安徽医药》
【年(卷),期】2012(016)002
【摘要】目的探讨六味地黄丸对干燥综合征(SS)小鼠的治疗作用.方法利用弗氏佐剂和百日咳、白喉、破伤风联合疫苗+同种鼠颌下腺抗原诱导方法建立SS小鼠模型,以六味地黄丸对SS模型小鼠进行干预,观察六味地黄丸对SS模型小鼠唾液流量及颌下腺指数的影响,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测小鼠血清IFN-γ及IL-6水平.结果六味地黄丸可以增加SS模型小鼠的唾液流量及颌下腺指数,并显著降低SS模型小鼠血清的IFN-γ及IL-6水平.结论六味地黄丸对SS有治疗作用.其作用机制可能与其明显下调SS小鼠血清IFN-γ及IL-6水平有关.
【总页数】3页(P163-165)
【作者】王琼
【作者单位】解放军第105医院干部病房,安徽,合肥,230031
【正文语种】中文
【相关文献】
1.六味地黄丸抑制移植性原发性肝癌小鼠肿瘤生长的实验研究 [J], 罗春蕾;顾怡中;钟薏;周荣耀
2.六味地黄丸对自发性2型糖尿病模型小鼠肝、肾和胰腺组织学变化的影响 [J], 吕璐;郑源强;张精彩;李斯琦;王晓东;尹星;徐佳;韩新荣;石艳春
3.增液汤对原发性干燥综合征小鼠干预作用实验研究 [J], 国小红
4.双(α-呋喃甲酸)氧钒与六味地黄丸联合使用对正常小鼠一般生殖毒性的实验研究[J], 冯莉;杨琳;王宇春;谢明进;阎世平;范英昌
5.气阴双补法对干燥综合征小鼠的实验研究 [J], 金桂兰;汪悦
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基金项目:福建中西医结合研究院科研基金项目(No 130002905010805)作者简介:高冬(19672),女,副教授,从事中西医结合基础理论研究。
3通讯作者:宋军(19642),男,副主任医师,医学博士,从事中西医结合临床和基础理论研究。
六味地黄丸对老年小鼠造血干细胞影响的实验研究高 冬1,2,郑良朴1,2,林久茂1,2,林 薇1,2,陈旭征1,2,宋 军33,陈可冀4(11福建中医学院,福建福州350109;21福建中西医结合研究院,福建福州350109;31中国中医科学院医学实验中心,北京100091;41中国中医科学院西苑医院,北京100091) 摘要 目的:观察六味地黄丸对老年小鼠骨髓造血干细胞的数量、表型、细胞周期和集落形成能力的影响。
方法:老年昆明种小鼠随机分为生理盐水对照组及六味地黄丸高、中、低剂量组,灌胃给药7d 后,分离骨髓造血干细胞,进行细胞计数;流式细胞仪检测细胞表型和细胞周期;并采用甲基半固体培养基检测集落的形成。
结果:各组小鼠骨髓单核细胞和悬浮细胞数量以及集落产率无显著差异,但低、中剂量组Sca 21和C D34的表达提高,说明较低剂量的药物能提高骨髓中造血干细胞的数量,而且药物还具有提高细胞增殖能力的作用。
结论:六味地黄丸激活造血干细胞,通过升高骨髓中造血干细胞的数量和增殖能力提高造血机能,以达到提高免疫功能的作用。
关键词 六味地黄丸;造血干细胞;骨髓中图分类号:R28515 文献标识码:A 文章编号:100124454(2008)022*******Exper i m en t a l Study on Effect of L i uwe iD i huang P ill on HSC fro m M ouse M arrowG AO Dong 1,2,ZHE NG L iang 2pu1,2,L IN J iu 2mao1,2,L IN W ei 1,2,CHE N Xu 2zheng 1,2,S ONG Jun 3,CHE N Ke 2ji4(11Fujian College of T C M ,Fuzhou 350109,China;21Fujian Acade my of I ntergrative M edicine,Fuzhou 350109,China;31Medi 2cal Research Center,China Acade my of TC M ,Beijing 100091,China;41Xiyuan Hos p ital,China Acade my of T C M ,Beijing 100091,China )Abstract Objective:T o investigate the effect of L iu wei D ihuang Pill on the nu mber,the surface marker,cell cycle and col ony for mati on of HS C fr om mouse marr ow 1M ethods:O ld Kun m ing m ice were random ly divided int o 4gr oup s:the contr ol gr oup,l ow,m id 2dle and high dose of L iu weiD ihuang Pill gr oup 1Then we separated the HSC fr om marr ow after 7days fed with saline or L iu weiD ihuang Pill res pectively,nu merated monocyte,detected the surface marker and cell cycle of the HSC by F ACS and tested the col ony f or m ing by se m is olid media culture 1Results:Among the f our gr oup s,there was no obvi ous difference in the nu mber of MNC,sus pended cell and col ony 1The exp ressi on of Sca 21and C D34increased in the l ow and m iddle dosage gr oup,itmeant that the nu mber of HS C elevated by l ow and m iddle dosage medicine 1The ability of cell p r oliferati on was als o higher in the three dosage gr oup s 1Conclusi on:L iu wei D i 2huang Pill activates HSC by increasing the nu mber,p r oliferati on and functi on of more p ri m itive HS C 1Key words L iu wei D ihuang Pill;He mat opoietic stem cell (HSC );Marr ow 六味地黄丸是中药滋补肾阴的经典代表名方,临床疗效确切,组方严谨合理。
近年来,有关六味地黄丸的药效学研究主要集中在增强免疫功能、抗衰老、抗肿瘤及抗化疗药物毒副作用、降血糖、调节血脂、降血压等方面,而其对造血功能的影响尚未见报道。
为了探讨六味地黄丸在动员和激活小鼠骨髓造血干细胞方面的作用,我们开展了相关研究,并得到一些初步的结果,现报告如下。
1 材料与方法111 动物及分组 昆明种小鼠,20月龄,体重50～60g,雌雄不限,由福建中医学院实验动物中心提供。
随机分成生理盐水对照组(以下简称对照组)和六味地黄丸高、中、低剂量组,每组5只。
112 药物 六味地黄丸由北京同仁堂科技发展股份有限公司制药厂生产,将其制备成012g/m l 的水溶液,4℃保存备用。
113 仪器及试剂11311 仪器:倒置式系统显微镜I X70(OLY MP US 公司,配备同公司的数码摄像装置),流式细胞仪F ACS Calibur (BD 公司),溶红细胞处理仪(BD 公司),CO 2培养箱(Heraus ),超净工作台(苏州净化设备公司)。
11312 试剂:I M DM 培养基(均购自Hycl one 公司),优质胎牛血清(B I O CHROM AG 公司),F I T C 标记的大鼠抗小鼠CD34、阴性对照大鼠I gG2a 2PE 和I gG2a 2F I T C (Ser otec 公司),PE 标记的大鼠抗小鼠Sca 21(B i olegend 公司)和小鼠早期造血细胞甲基半固体长期培养基MethoCultT M GF M3434(含重组小鼠白细胞介素310μg/L、重组鼠干细胞集落刺激因子50μg/L、重组白细胞介素610μg/L、重组人促红细胞生成素3K U/L、重组人胰岛素10mg/L) (Ste m Cell Tech公司);小鼠淋巴细胞分离液(中国医学科学院生物医学工程研究所);Cycle TESTT M p lus DNA REAGENT KI T(BD公司)。
114 实验方法11411 给药方法:小鼠按体重灌胃给药,六味地黄丸高、中、低剂量组分别给予药物13、615、3125g/kg (相当于成人临床日用量的20、10、5倍),对照组用等量的生理盐水,每天1次。
第8d在给药后2h 内,处死小鼠进行骨髓造血干细胞的分离提取。
11412 小鼠骨髓造血干细胞的分离培养:参照Pereira〔1〕方法,将小鼠脱臼处死后置于75%酒精浸泡约5m in,无菌条件下分离出小鼠的股骨。
尽量去除骨表面附着的组织,吸取10m l I M DM培养液,用针头在股骨干骺端钻孔,从股骨一端冲洗骨髓腔,将骨髓细胞吹到培养皿内,用吸管反复轻柔吹打成细胞悬液,150目铜网过滤,收集过滤的细胞悬液,用11090g/m l的淋巴细胞分离液分离单个核细胞,以1000r/m in离心5m in形成细胞沉淀,去上清液后重新制备细胞悬液,以1×106个/m l接种于含10%胎牛血清和10%马血清的I M DM培养基(含青霉素、链霉素各100U/m l)中,置5%CO2、37℃饱和湿度培养箱中培养,48h后收集非贴壁的悬浮细胞进行实验。
11413 细胞计数:用吸管反复轻柔吹打制成单细胞悬液,采用细胞计数板常规计数。
11414 细胞分裂周期的检测:吸取100μl细胞悬液(细胞浓度≥1×106个/m l),加入250μl A液,混匀后室温静置10m in,加入200μl B液,轻轻混匀,再次室温静置10m in,加入200μl C液混匀,低温(2～6℃)避光10m in后,上机待检。
利用Cell Quest软件获取数据,ModiFit分析。
11415 造血干细胞表型Sca21和CD34的检测:分别吸取100μl细胞悬液(细胞浓度≥1×106个/ m l),各加入10μl大鼠抗小鼠Sca21或CD34抗体,同时做阴性对照,室温避光孵育20m in,溶红细胞处理仪机洗后,重新悬浮,上机待检。
11416 集落形成的检测:将造血干细胞悬液以1×104个/m l接种于甲基半固体培养基中,5%CO2、37℃饱和湿度下培养7d,任选6个视野计数爆式红系集落形成单位(BF U2E),培养15d任选6个视野计数粒2巨噬细胞混合集落形成单位(CF U2M ix)。
CF U2M ix以40个以上细胞组成的细胞团为一个集落, BF U2E以50个以上细胞组成的细胞团为一个集落。
115 统计学处理 计量资料以 x±s表示,采用SPSS1010统计软件包进行组间t检验。
2 结果211 各组小鼠骨髓单核细胞总量和悬浮细胞数量比较 见表1。
各组间小鼠骨髓单核细胞总量以及非贴壁细胞数量没有显著差异,但低、中剂量给药组单核细胞总量和三个剂量悬浮细胞的数量有上升的趋势。
212 各组小鼠造血干细胞表型Sca21、CD34及数量比较 见表2及图1。
流式细胞仪检测结果表明,与对照组相比,低、中剂量药物能明显提高非贴壁细胞中Sca21+、CD34+细胞的百分率,说明这两个剂量的药物使得造血干细胞的数量升高,而高剂量药物抑制Sca21和CD34的表达,降低造血干细胞的数量。
