超氧化物歧化酶质量标准

人超氧化物歧化酶（SOD）酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定人血清，血浆及相关液体样本中超氧化物歧化酶（SOD）的活性。

实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人超氧化物歧化酶（SOD）水平。

用纯化的人超氧化物歧化酶（SOD）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入超氧化物歧化酶（SOD），再与HRP标记的超氧化物歧化酶（SOD）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。

TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的超氧化物歧化酶（SOD）呈正相关。

用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人超氧化物歧化酶（SOD）活性浓度。

试剂盒组成：试剂盒组成48孔配置96孔配置保存说明书1份1份封板膜2片（48）2片（96）密封袋1个1个酶标包被板1×481×962-8℃保存标准品：720U/L0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存标准品稀释液 1.5ml×1瓶 1.5ml×1瓶2-8℃保存酶标试剂3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存样品稀释液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存显色剂A液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存显色剂B液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存终止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存浓缩洗涤液（20ml×20倍）×1瓶（20ml×30倍）×1瓶2-8℃保存样本处理及要求：1.血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。

仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。

2.血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。

一、原理1.超氧化物歧化酶（SOD）超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）是一种能专一地清除超氧离子自由基（）的金属酶，它具有抗衰老、抗辐射、抗炎及抗癌等作用因而在医药、化妆品及食品工业等方面有了广泛的应用前景。

SOD是一种酸性蛋白，对热、pH和蛋白酶的水解较一般酶稳定。

按照它所含金属离子的不同，可分为Cu-Zn-SOD（二聚体，蓝绿色）、Mn-SOD（紫红色）和Fe-SOD（黄褐色）三种。

SOD催化下述反应：2+2→+。

机体内的过量和不足均对机体不利，SOD 对过量的的及时清除保证了机体内的含量相对的平衡。

机体内的形成可分为生理性和病理性两方面。

在一些正常生理过程中会形成一些。

例如：呼吸链中电子传递结果可产生一些。

在某些疾病（如氩中毒、辐射病等）过程中会产生大量的。

过量的如不及时清除，会对细胞损伤。

SOD将歧化为和，而过氧化氢（物）酶、谷胱甘肽过氧化酶可催化或氧化氢分解，在机体内形成一套解毒系统，对机体起防护作用。

2.有机溶剂沉淀法分离纯化蛋白质本实验采用有机溶剂沉淀法以新鲜猪血为原料，从中提取SOD并进行分离纯化。

有机溶剂沉淀法的基本原理：①亲水性有机溶剂加入溶液后降低了介质的介电常数，使溶质分子之间的静电引力增加，聚集形成沉淀；②水溶性有机溶剂本身的水合作用降低了自由水的浓度，压缩了亲水溶质分子表面原有水化层的厚度，降低了它的亲水性，导致脱水凝集。

常见的有机溶剂有丙酮和乙醇等。

3.邻苯三酚自氧化法测定酶活力酶活性测定的方法有以下几种方法：邻苯三酚自氧化法、黄嘌呤氧化酶法、NBT光还原法、化学发光法、肾上腺素自氧化法及亚硝酸法等。

本实验SOD酶活性采用邻苯三酚自氧化法测定，酶活性单位定义为：每毫升反应液中，每分钟抑制邻苯三酚自氧化速率达50%的酶量定义为1个酶单位。

邻苯三酚自氧化法的原理：利用邻苯三酚在碱性条件下能迅速自氧化，产生，生成有颜色的中间产物。

反应开始后先变成黄绿色，几分钟后转为黄色，吸光度值与反应时间能在3～4 min内维持线性关系。

简介超氧物歧化酶(Superoxide Dismutase简称SOD)是一种新型酶制剂。

它在生物界的分布极广，几乎从动物到植物，甚至从人到单细胞生物，都有它的存在。

SOD被视为生命科技中最具神奇魔力的酶、人体内的垃圾清道夫。

SOD是氧自由基的自然天敌，是机体内氧自由基的头号杀手，是生命健康之本。

全球118位科学家发表联合声明：自由基是百病之源，SOD是健康之本。

体内的SOD活性越高，寿命就越长。

SOD类型：超氧化物歧化酶按其所含金属辅基(活性中心)不同可分为三种，第一种是含铜（Cu）锌（Zn）金属辅基的称（Cu.Zn—SOD），最为常见的一种酶，呈绿色，主要存在于机体细胞浆中；第二种是是含锰（Mn）金属辅基的称（Mn—SOD），呈紫色，存在于真核细胞的线粒体和原核细胞内；第三种是含铁（Fe）金属辅基的称（Fe—SOD），呈黄褐色，存在于原核细胞中。

耐热SOD是国家“十五”、“十一五”863计划重大课题项目（课题编号：2004AA、2007AA），由中国科学院国家重点实验室采用先进技术，历时八年开发出来的新一代SOD酶产品（专利号：ZL7.9）。

SOD是Super Oxide Dismutase 缩写，中文名称超氧化物歧化酶，是生物体内重要的抗氧化酶，广泛分布于各种生物体内，如动物，植物，微生物等。

SOD具有特殊的生理活性，是生物体内清除自由基的首要物质。

SOD在生物体内的水平高低意味着衰老与死亡的直观指标；现已证实，由氧自由基引发的疾病多达60多种。

它可对抗与阻断因氧自由基对细胞造成的损害，并及时修复受损细胞，复原因自由基造成的对细胞伤害。

由于现代生活压力，环境污染，各种辐射和超量运动都会造成氧自由基大量形成；因此，生物抗氧化机制中SOD的地位越来越重要！SOD是是一种含有金属元素的活性蛋白酶，是目前生物学、医学和生命科学领域中世界级的高、尖、精课题。

超氧化物歧化酶（SOD）目前世界范围内的开发，大都从动物血里提取，不但代价昂贵，而且动物性SOD的排他性、不易常温保存，有艾滋病等血液病毒的交叉感染及其它潜在危险，故国际卫生组织呼吁：立刻停止动物性SOD的使用。

超氧化物歧化酶（SOD)编辑超氧化物歧化酶（Superoxide Dismutase SOD）是一种广泛存在于动植物、微生物中的金属酶。

能催化生物体内超氧自由基(O2-)发生歧化反应，是机体内O2-的天然消除剂[1] 。

从而清除O2-，在生物体的自我保护系统中起着极为重要的作用。

在免疫系统中也有极为重要的作用[2] 。

中文名丹青宝牌SOD口服片外文名superoxidedismutase别称抗衰老之星主要原料SOD、人参，黄芪是否含防腐剂否主要营养成分SOD是超氧化物歧化酶主要食用功效清除自由基、逆转亚健康、延缓衰老，改善睡眠、改善肠胃功能、预防老年性痴呆，抗氧化、抗辐射损伤，提高免疫力适宜人群老人、儿童、妇女，免疫低下者、术后康复者副作用无储藏方法避光，置于阴凉干燥处目录1简介2SOD的研发史1简介编辑SOD是一种金属酶，含有铜和锌两种离子，需氧。

生物中，SOD催化使对抗体有关的超氧阴离子变成双氧水，随后被双氧水分解，保护机体免受超氧阴离子的影响，是一种新型的抗氧化酶。

超氧化物歧化酶Orgotein (Superoxide Dismutase, SOD)，别名肝蛋白，简称：SOD。

SOD是一种源于生命体的活性物质，能消除生物体在新陈代谢过程中产生的有害物质。

对人体不断地补充SOD具有抗衰老的特殊效果。

2SOD的研发史编辑1938年英国科学家Mann和Keilin首次从牛红血球中分离出一种含铜蛋白质，最初定名为血铜蛋白。

1956 年英国教授Harman D提出了“自由基衰老学说”，认为自由基是引起衰老和疾病的最终根源。

1969年美国生化专家Fridovich和他的学生Mccord从牛红细胞中重新发现这种蛋白，定名为SOD，并报告SOD有清除自由基的作用。

1980年日本著名医学博士羽靳负指出：关节神经痛、白内障、黄褐斑、癌症等，多种疾病与过量的自由基有关，SOD可以有效清除自由基。

1985年全世界100多个国家的数百位科学家一致公认人体内存在着一套对抗自由基的机制，这套机制由体内SOD支配和调控，SOD是对抗和俘获自由基的核心力量，是体内唯一以自由基为底物的清除剂。

细胞外超氧化物歧化酶
细胞外超氧化物歧化酶（extracellular superoxide dismutase，EC-SOD）是一种重要的抗氧化酶，它能够将细胞外的超氧阴离子（superoxide anion，O2-）转化为氧气（O2）和过氧化氢（H2O2），从而保护细胞免受氧化应激的损伤。

EC-SOD主要存在于细胞外基质中，包括血管壁、肺泡、肾小球、关节软骨等组织中。

它的主要功能是清除细胞外的超氧阴离子，防止其进入细胞内部，从而保护细胞免受氧化应激的损伤。

此外，EC-SOD还能够调节细胞外基质的氧化还原状态，维持组织的正常生理功能。

EC-SOD的表达受到多种因素的调节，包括氧化应激、炎症、生长因子等。

研究表明，EC-SOD的表达水平与多种疾病的发生和发展密切相关。

例如，肺部疾病、心血管疾病、糖尿病等疾病的患者常常伴随着EC-SOD表达水平的下降，这可能是导致这些疾病发生和发展的重要原因之一。

因此，EC-SOD的研究具有重要的理论和实际意义。

一方面，深入了解EC-SOD的生物学功能和调节机制，有助于揭示氧化应激与疾病发生发展之间的关系，为疾病的预防和治疗提供新的思路和方法。

另一方面，开发EC-SOD的药物或治疗手段，有望成为治疗氧化应激相关疾病的新途径。

EC-SOD作为一种重要的抗氧化酶，具有广泛的生物学功能和临床应用前景。

未来的研究应该进一步深入探讨其生物学机制和临床应用价值，为人类健康事业做出更大的贡献。

超氧化物歧化酶（SOD）的制备超氧化物歧化酶，简称SOD（Super Oxide Dismutase），是一种广泛存在于动、植物及微生物中的金属酶，至少可分为三种类型：第一种类型-Cu·Zn-SOD，呈蓝绿色，主要存在于真核细胞的细胞浆内，分子量在32000左右，由两个亚基组成，每个亚基含一个铜和一个锌。

第二种类型-Mn-SOD，呈粉红色，其分子量随来源不同而异。

来自原核细胞的分子量约为4000，由两个亚基组成，每个亚基各含一个锰；来自真核细胞线粒体的-Mn-SOD，由4个亚基组成，分子量约为80000。

第三种类型-Fe-SOD，呈黄色，只存在于真核细胞中，分子量在38000左右，由两个亚基组成，每个亚基各含一个铁。

此外，在牛肝中还存在一种-Co·Zn-SOD。

自从1973年Weisiger等在鸡肝中发现二种SOD以来，至今已采用了各种分离及分析方法，成功地从各种动物肝脏及血液中，分离纯化了SOD。

同时发现SOD的存在可能与机体衰老、肿瘤发生、自身免疫性疾病和辐射防护有关。

目前临床上主要用于延缓人体衰老，防止色素沉着，消除局部炎症，特别是治疗风湿性关节炎、慢性多发性关节炎及放射治疗后的炎症，无抗原性，毒副作用较小，是很有临床价值的治疗酶。

SOD不仅在临床上大显身手，而且近年来又被广泛的应用于日用化工行业。

含有SOD的化妆护肤品，对抗衰老及去除脸面雀斑等有显著作用。

添加SOD的化妆护肤品倍受女士的青睐，其产品具有很强的竞争力。

如市场上销售的奥琪、大宝、紫罗兰、永芳等高级护肤化妆品，都因添加了SOD而成为抢手货。

随着SOD被广泛应用于护肤霜、洗面奶、香皂等领域及活性氧、疾病诊断和抗辐射等方面的研究，SOD将成为广大药厂和日用化工厂的重要原料。

目前我国大规模生产SOD 厂家屈指可数，市场需求量大，在今后一段时间内供应将趋紧，因此充分利用动物废弃物，生产SOD是大有发展前途的。

（一）原料及试剂：1、牛血或猪血：动物血液一定要保证新鲜，无污染。

超氧化物歧化酶（SOD）-NBT法（酶标仪48T）（1）检测原理：超氧化物歧化酶（SOD）（EC 1.15.1.1）在动植物、微生物和培养细胞体内广泛存在，其具有抗衰老、提高机体对多种疾病的抵抗力，能增强机体对外界环境的适应力。

本实验是NBT法测定SOD活性，NBT可以和黄嘌呤氧化酶(Xanthine Oxidase, XO)催化产生的超氧化物阴离子(O2.-)反应产生有颜色物质，后者在560nm处有吸收；SOD 可清除O2.-，从而抑制有色物质形成；反应液颜色越深，说明SOD活性愈低，反之活性越高。

1①组织样本：取约0.1g组织（水分充足的样本可取0.25g），加入1mL提取液，在4ºC或冰浴进行匀浆(或使用各类常见匀浆器)。

4ºC×12000rpm离心10min，取上清作为待测液。

【注】：若增加样本量，可按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例进行提取②细菌/细胞样本：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；取约500万细菌或细胞加入1mL 提取液，超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；12000rpm 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

【注】：若增加样本量，可按照细菌/细胞数量（104）：提取液（mL）为500~1000：1的比例进行提取。

③液体样本：直接检测；若浑浊，离心后取上清检测。

2、上机检测①可见分光光度计预热30min以上，调节波长至560nm，蒸馏水调零。

②测定前将试剂一、三和四25℃水浴5min以上。

③试剂四每次加样前务必混匀，保证试剂的均一性。

④在1mL玻璃比色皿（光径1cm）中依次加入：【注】：1、若样本量较多，测定前可将试剂一、三和四按照240μL:60μL:320μL比例混成一个混合液（需依据当次检测的样本数量混合对应的试剂量），每管务必最后一步加620μL该混合液。

2、样本对照管*：提取后样本颜色较深的，一定要做此管，否则抑制率偏低，即SOD活性偏低。

人超氧化物歧化酶（SOD）酶联免疫分析（ELISA）试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定人血清，血浆及相关液体样本中超氧化物歧化酶（SOD）的含量。

实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人超氧化物歧化酶（SOD）水平。

用纯化的总SOD 抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入超氧化物歧化酶（SOD），再与HRP标记的超氧化物歧化酶（SOD）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。

TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的人超氧化物歧化酶（SOD）呈正相关。

用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人超氧化物歧化酶（SOD）浓度。

试剂盒组成：试剂盒组成48孔配置96孔配置保存说明书1份1份封板膜2片（48）2片（96）密封袋1个1个酶标包被板1×481×962-8℃保存标准品：540ng/ml0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存标准品稀释液 1.5ml×1瓶 1.5ml×1瓶2-8℃保存酶标试剂3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存样品稀释液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存显色剂A液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存显色剂B液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存终止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存浓缩洗涤液（20ml×20倍）×1瓶（20ml×30倍）×1瓶2-8℃保存样本处理及要求：1.血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。

仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。

2.血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。