doi:10.3969/j.issn.1000⁃484X.2021.01.014㊃临床免疫学㊃儿童特应性皮炎血清特异性IgE 和斑贴试验结果的临床分析①杨素莲 谢 阳② 朱国兴 卢荣标 陈家敏 赖 维(中山大学附属第三医院皮肤性病科,广州510630) 中图分类号 R758.2 文献标志码 A 文章编号 1000⁃484X (2021)01⁃0078⁃05①本文为国家自然科学基金青年科学基金项目(81803133)㊂②通信作者,E⁃mail:xieyang2009@㊂作者简介:杨素莲,女,副主任医师,主要从事皮肤病变应原检测与治疗工作㊂[摘 要] 目的:回顾性分析广州地区特应性皮炎(AD)患儿常见变应原,为AD 预防和诊治提供依据㊂方法:ELISA 检测138例AD 患儿血清特异性IgE(sIgE),并分析其吸入组㊁食入组变应原;其中43例患儿同时接受了用于检测日常接触类变应原的皮肤斑贴试验,分析其结果分布特征㊂结果:吸入性特异性总IgE 抗体检测结果阳性率为57.97%(80/138),明显高于健康对照组的10.00%(3/30)(P <0.01);粉尘螨㊁蟑螂和兽毛sIgE 阳性率与健康对照组相比显著增高(P <0.01);食入性特异性总IgE 抗体检测结果阳性率为47.10%(65/138),显著高于健康对照组的3.33%(1/30)(P <0.01);牛奶㊁鸡蛋和海鲜(蟹/虾)sIgE 阳性率明显高于健康对照组(P <0.05)㊂43例AD 患儿斑贴试验总阳性率81.40%(35/43),其中1种变应原阳性13例(37.14%)㊁2种阳性8例(22.86%)㊁3种阳性9例(25.71%)㊁4种以上变应原阳性5例(14.29%),前3位常见接触类变应原依次为氯化镍㊁氯化钴㊁硫酸镍与甲醛并列㊂结论:血清特异性IgE 抗体检测和斑贴试验有助于帮助临床发现AD 患儿的吸入性㊁食入性和接触性变应原,尘螨㊁蟑螂㊁动物毛㊁牛奶㊁鸡蛋㊁虾蟹类海鲜㊁镍和钴金属制品㊁甲醛可能是诱发本地区AD 儿童发病的重要过敏原㊂[关键词] 特应性皮炎;变应原;特异性IgE;斑贴试验Clinical analysis of serum specific IgE measurement and skin patch test in children with atopic dermatitisYANG Su⁃Lian ,XIE Yang ,ZHU Guo⁃Xing ,LU Rong⁃Biao ,CHEN Jia⁃Min ,LAI Wei .Department of Dermatology and Venereology ,the Third Affiliated Hospital ,Sun Yat⁃Sen University ,Guangzhou 510630,China[Abstract ] Objective :Retrospective analyze of the allergens among children with atopic dermatitis(AD)in Guangzhou area,and to provide evidence for prevention and treatment for AD.Methods :138AD children serum specific IgE(sIgE)were measured by ELISA,and positive rates of inhaled,ingested allergens were analyzed.A skin patch test for contact allergens detection was done simul⁃taneously in 43AD children among the 138cases,and distribution characteristics of results were analyzed as well.Results :Positive rate of all inhaled allergens was 57.97%(80/138),significantly higher than control group(10.00%,3/30,P <0.01).Positive rates of dust mites,cockroaches and animal hair were significantly higher than those of control group(P <0.01).Positive rate of all ingested allergens was 47.10%(65/138),significantly higher than that in control group(3.33%,1/30,P <0.01).Positive rates of milk,egg and seafood were significantly higher than those of control group(P <0.05).Positive rate of skin patch test in 43AD children was 81.40%(35/43).One kind of allergies was found in 13cases (37.14%),while two kinds of allergies were found in 8cases(22.86%),three kinds of allergies in 9cases(25.71%)and more than 4kinds of allergies in 5cases(14.29%).The most common contact allergies were nickel chloride,cobalt chloride,nickel sulfate and formaldehyde.Conclusion :Serum sIgE measurement and skin patch test could help clinicians to detect inhaled,ingested and contact allergens in AD children effectively.Dust mites,cockroaches,animal hair,milk,seafood,nickel /cobalt based materials and formaldehyde may be the most common allergens that induce relapse in AD children in Guangzhou area.[Key words ] Atopic dermatitis;Allergen;Specific IgE;Patch test 特应性皮炎(atopic dermatitis,AD)又称特应性湿疹,是一种具有遗传倾向的慢性㊁复发性㊁炎症性皮肤病,以顽固瘙痒和多形性皮损为临床特征,多为终身患病㊁难以根治㊂全世界范围内约15%~30%儿童受AD影响[1]㊂我国近20年AD的发病率逐渐上升㊂AD通常自婴儿期或儿童早期发病,患儿常有过敏性鼻炎和过敏性哮喘倾向,称为 过敏进程”,AD是过敏进程的第一步,而这一时期是儿童心理和生理生长发育的关键时期[2]㊂AD引起的瘙痒㊁睡眠障碍以及疾病的慢性迁延和反复发作严重影响患儿及其家庭的生活质量㊂由于目前尚无根治AD的理想方法,因此有效预防和降低其复发非常重要㊂AD病因和发病机制至今未能阐明,但国内外研究均认为其与家族遗传㊁复杂的免疫学机制㊁皮肤屏障功能受损㊁精神因素等密切相关[3⁃4]㊂诱发AD复发加重的免疫学因素主要可分为吸入性变应原㊁食入性变应原㊁接触性变应原和感染4个方面[5]㊂健康教育㊁寻找和回避变应原因素是预防和治疗AD的基本策略,因此了解儿童AD患者变应原分布特征对防治AD及宣教具有重要意义[6]㊂临床筛查吸入性和食入性变应原常用检测血清总IgE和特异性IgE(sIgE)的方法,而检测接触类变应原常用斑贴试验[5]㊂本文通过对血清sIgE抗体的检测和斑贴试验回顾性分析我院138例2~14岁AD患儿吸入性㊁食入性和接触性变应原检测结果,为临床制定防治措施提供依据㊂1 资料与方法1.1 资料1.1.1 临床资料 回顾性分析2016年1月至2018年12月于中山大学附属第三医院皮肤性病科就诊的2~14岁AD患儿,诊断标准符合Williams临床诊断标准[7]㊂排除标准为:①受试部位有色素㊁瘢痕㊁鲜红斑痣或其他瑕疵者;②2周内使用过免疫抑制剂㊁糖皮质激素或3d内系统服用过抗组胺药者[8];③不能配合完成操作者㊂共收集138例AD 患儿进行血清sIgE测定,其中男性83例,女性55例,年龄2.5~12.8岁,平均年龄8.3岁,另选择同期体检的健康同龄儿童30例作为对照组,两组年龄和性别比较差异无统计学意义,具有可比性㊂138例AD患儿中,43例进行日常生活系列斑贴试验,其中男性25例,女性18例,年龄9.3~12.8岁,平均年龄11.2岁,依从性100%,试验过程无脱落㊂患儿均来自广州及周边地区㊂本研究通过本院伦理委员会批准,参与研究患儿的监护人均签署知情同意书㊂1.1.2 仪器与试剂 SM⁃3自动化酶免分析仪(北京天石医疗用品制作所);变应原包括吸入性9种:杂草(车前草/艾蒿/蒲公英)㊁蟑螂(美洲大蠊/德国大蠊)㊁羽毛(鸡毛/鸭毛)㊁兽毛(猫毛/狗毛)㊁花粉(春季/夏季)㊁粉尘螨㊁真菌(链格孢/烟曲霉/多主枝孢)㊁桑蚕丝㊁鲜花(康乃馨/勿忘我/红玫瑰),食入性变应原10种:牛奶㊁鸡蛋(蛋白/蛋黄)㊁海鲜(蟹/虾)㊁淡水鱼(草鱼/鲫鱼/鳙鱼)㊁肉类(猪肉/牛肉/羊肉)㊁花生/大豆㊁芝麻㊁调味品(大蒜/葱)㊁谷物(小麦/玉米)㊁水果(芒果/荔枝/菠萝),变应原特异性IgE抗体检测试剂盒(深圳博卡生物技术有限公司);日常生活系列接触变应原(45种)斑贴试验试剂盒(福建和众生物技术技术有限公司提供,生产批号:20161001,20170901)㊂1.2 方法1.2.1 血清sIgE抗体检测 采集患儿和健康体检者静脉血3ml,于室温下静置20~30min后,高温冷冻离心机以3000g离心10min,分离血清于2~8℃下备用(<7d)㊂ELISA法检测,全部操作按照试剂说明书进行㊂所有试剂和微孔板平衡至室温,取所需用量的微孔板标记,血清样本使用样本稀释液以2倍稀释㊂阳性质控孔加入100μl阳性质控血清,阴性质控孔加入100μl阴性质控血清,其他检测孔均加入100μl稀释后的血清样本,轻摇混匀微孔板置于37℃水浴箱孵育1h㊂甩去微孔板中的液体,洗涤缓冲液清洗3次,将剩余水分吸干㊂向各孔中先后加入100μl生物素标记抗人IgE抗体与辣根过氧化物酶⁃链亲和素结合物,混匀后分别于37℃孵育1h和30min,并至少洗涤3次,干燥后将显色剂加入反应孔,37℃下孵育10min,加入终止液50μl终止反应,20min内用酶标仪读取各反应孔的吸光度(OD)值㊂以OD<0.15为阴性,OD≥0.15为阳性㊂1.2.2 斑贴试验 参照斑贴试验诊断试剂盒说明书操作,除去保护纸,将受试变应原贴敷在患儿背部脊柱两侧正常皮肤,固定后以手掌轻轻压,使其充分接触皮肤㊂患儿试验期间局部避免激烈运动㊁湿水㊁搔抓㊂48h后将斑试物揭去并做好标记,30min后观察结果,同时于72h㊁96h分别进行第2次㊁第3次结果观察及判读㊂结果判定按国际接触性皮炎研究组(international contact dermatitis research group, ICDRG)推荐的标准进行:① -”为阴性反应,皮肤无任何改变;② ±”为可疑反应,仅有轻度红斑;③ +”为弱阳性反应,红斑㊁浸润㊁可有少量丘疹;④ ++”为强阳性反应,红斑㊁浸润明显㊁丘疹㊁水疱㊁反应可超出受试区;⑤ +++”为极强阳性反应,红斑㊁浸润明显㊁丘疹㊁出现水疱㊁大疱,反应超出受试区;⑥ IR”为刺激性反应㊂阳性率=(弱阳性例数+强阳性例数+极强阳性例数)/受试例数×100%㊂1.3 统计学分析 应用SPSS20.0软件进行统计学分析㊂率的比较采用χ2检验,以P <0.05为差异有统计学意义㊂2 结果2.1 血清sIgE 抗体检测结果 138例患儿变应原sIgE 吸入组(总IgE 抗体2)和IgE 食入组(总IgE 抗体1)检测结果阳性率为57.97%(80/138,OD =0.407±0.208)和47.10%(65/138,OD =0.368±0.073),明显高于健康对照组的10.00%(3/30,OD =0.166±0.007)和3.33%(1/30,OD 值0.153),表1 AD 患儿血清sIgE 检测结果[例(%)]Tab.1 Results of children with AD serum sIgE testing[n (%)]N AllergenAD(n =138)HC(n =30)1IgE inhalation group(Total IgE antibody 2)80(57.97)3(10.00)2)Dermatophagoidesfarinae 73(52.90)4(13.33)2)Cockroaches (periplanetaamericana /blattellagermanica)45(32.61)1(3.33)2)Animal hair(cat hair /dog hair)43(31.16)2(6.67)2)Pollen(spring /summer)17(12.32)1(3.33)Weeds(plantain herb herb /felon)16(11.59)2(6.67)Feather(chicken feather /duck feather)15(10.87)1(3.33)Fungi(alternaria /fumigatus /cladospo⁃riumherbarum)12(8.70)0(0.00)Mulberry silk 5(3.62)0(0.00)Flower (carnation /forget⁃me⁃not /red roses)3(2.17)0(0.00)2IgE ingestion group (Total IgE antibody 1)65(44.93)1(3.33)2)Seafood(crab /shrimp)32(23.19)1(3.33)1)Egg(egg white /egg yolk)25(18.12)1(3.33)1)Milk23(13.67)0(0.00)1)Fruits(mango /lychee /pineapple)16(11.59)1(3.33)Peanuts /soybean 15(10.87)1(3.33)Meat(pork /beef /lamb)6(3.16)0(0.00)Flavouring(garlic /scallion)3(2.17)0(0.00)Freshwater fish (grass carp /crucian /bighead)3(2.17)0(0.00)Sesame2(1.45)0(0.00)Grains(wheat /corn)1(0.72)0(0.00)Note:Compared with AD,1)P <0.05,2)P <0.01.表2 43例AD 患儿斑贴试验结果[例(%)]Tab.2 Patch test results of 43children with AD [n (%)]N Allergenn (%)1Nickel dichloride 12(27.91)2Cinnamaldehyde 10(23.26)3Nickel sulfate 9(20.93)4Formaldehyde 9(20.93)5Mercuric sulfide 8(18.60)6Peru balsam 7(16.28)7Spice mixture 6(13.95)8Triethanolamine 6(13.95)9Epoxy resin5(11.63)10Naphthyl mix5(11.63)11Potassium dichromate 5(11.63)12Aromatic compounds 4(9.30)13Benzoic acid4(9.30)14Mercapto mix 4(9.30)15Black rubber mixture 3(6.98)16Benzyl salicylate3(6.98)17Cobaltous chloride 3(6.98)18Ethylenediaminedihydrochloride 3(6.98)19Fatty acid sodium sulfate3(6.98)20Lanolin 3(6.98)21Rosin3(6.98)22Sorbic acid3(6.98)23Alkylalcoholpolyoxyethylene ether sodium sulfate2(4.62)24Carba mixture2(4.62)25Chlorhexidine gluconate solution2(4.62)26Eighteen alcohol 2(4.62)27P⁃phenylenediamine 2(4.62)28Propylene glycol 2(4.62)29Salicylic acid 2(4.62)30Triclosan 2(4.62)312⁃Chloroacetamide 1(2.33)32Benzacaine1(2.33)33Bromonitrampropanol 1(2.33)34Camphor 1(2.33)35Cinnamyl alcohol 1(2.33)36Glutaraldehyde 1(2.33)37Imidazolidinylurea 1(2.33)38Paraben ester 1(2.33)39Methylbenzene 1(2.33)40P⁃tert⁃Butylphenol formaldehyde resin1(2.33)41Quart 151(2.33)42Sodium dodecyl sulfate1(2.33)43Stearic acid1(2.33)44Thiuram mix 1(2.33)45Xylol 1(2.33)Note:Multiple allergens positive patients were included in each allergenpositive case.差异有统计学意义(P<0.01);吸入组检出率前3位分别为粉尘螨㊁蟑螂(美洲大蠊/德国大蠊)和兽毛(猫毛/狗毛),与对照组相比显著升高,差异有统计学意义(P<0.01),食入组中牛奶㊁鸡蛋与海鲜(蟹/虾)高于对照组(P<0.05),见表1㊂2.2 斑贴试验 43例AD患儿斑贴试验阳性35例,总阳性率81.40%㊂其中1种变应原阳性13例(37.14%)㊁2种阳性8例(22.86%)㊁3种阳性9例(25.71%)㊁4种以上变应原阳性5例(14.29%),前3位常见变应原依次为氯化镍㊁氯化钴㊁硫酸镍与甲醛并列㊂见表2㊂3 讨论AD的发病和遗传㊁环境因素密切相关㊂不同人种㊁不同地域中诱发AD的环境变应原种类可能存在较大差异㊂Ⅰ型变态反应可能是AD重要的始发和维持因素[9]㊂AD患儿暴露于过敏原后,机体产生IgE诱发肥大细胞脱颗粒,从而介导急性炎症发生[10]㊂本研究结果显示AD患儿吸入组和食入组血清sIgE阳性率分别为57.97%和47.10%,显著高于健康对照组,与国内外数据相符,提示吸入性和食入性过敏原在AD发病中起重要作用[10⁃11]㊂另外,吸入性变应原中粉尘螨㊁蟑螂(美洲大蠊/德国大蠊)㊁兽毛(猫毛/狗毛)sIgE阳性率升高,该结果与相关报道不完全一致,分析其原因可能与各地区环境㊁气候㊁文化差异有关[12⁃13]㊂广州地区属于亚热带地区,气候闷热潮湿,尘螨㊁蟑螂容易生长繁殖;而随着城市人口老龄化㊁少子化,本地区养狗㊁猫等宠物的居民越来越多,儿童又喜欢与宠物玩耍,从而增加了AD 的发病风险㊂因此在疾病宣教上应注意教育家长改善环境卫生,建议采用湿式打扫㊁加强室内通风㊁晾晒被褥及避免接触宠物等措施以减少以上变应原的吸入㊂国内外研究显示牛奶和鸡蛋是AD患者最常见的食入性变应原,本研究结果与文献相符[10⁃11]㊂本研究数据提示虾蟹类海鲜变应原阳性率高于对照组,这可能与广州地区处于沿海㊁本地居民喜食海鲜的习惯有关㊂该结果提示医护人员应根据患儿病史适当指引家长合理调整饮食结构,以减少AD的诱发风险㊂接触性变应原在AD中的作用在国际上一直存在争议㊂国外文献报道健康儿童人群中斑贴试验阳性率可达13.3%[14]㊂但越来越多研究证明接触性变应原参与AD的发生[14⁃18]㊂在欧洲超过15个相关研究数据显示儿童AD患者斑贴试验的阳性率大于50%,并且和AD的严重程度有明显相关性,北美的AD患儿斑贴试验阳性率更高,约为75.4%[15⁃16,18]㊂斑贴试验阳性的AD患儿中,约57%~77%有阳性结果相关的临床表现[14,16]㊂美国接触性皮炎学会的指南建议:对于病情稳定的AD患者不需要进行常规斑贴试验,但对于难治性㊁不明原因加重的㊁特殊部位的AD,推荐斑贴试验检测接触性变应原[19]㊂说明斑贴试验在AD诊治中具有一定的灵敏度和特异性㊂迄今为止,国内尚未有针对AD患儿的斑贴试验结果报道㊂本研究仅对138例AD患儿中的43例患儿进行斑贴试验,结果显示阳性率81.40%,较接近北美的文献数据㊂其中有62.86%患者存在2种或2种以上变应原,提示多元性致敏也可能是部分AD患儿病程长㊁治疗难度大的原因之一㊂本研究斑贴试验结果显示前3位常见变应原依次为氯化镍(12/43,27.91%)㊁氯化钴(10/43,23.26%)㊁硫酸镍和甲醛(9/43,20.93%)㊂国外多个AD患儿斑贴试验结果均显示镍金属为最常见的接触性变应原,钴金属阳性率也在前5位[14,17,20]㊂日常生活中镍金属暴露因素众多,如手机㊁钥匙㊁拉链等㊂此外,坚果㊁巧克力和豆类植物等食品中也含有镍元素[21];钴金属存在于日用品中,如玻璃㊁颜料催干剂㊁彩色瓷器㊁合金和牙科材料中,与日常生活密不可分㊂值得注意的是,对于挥发性的变应原,欧美AD 人群常见对各种香料显示阳性[14,17,20]㊂但本研究斑贴试验阳性结果第3位的还有甲醛㊂分析其原因,一方面可能由于我国人民较少在日常生活中使用各种香水类化妆品,另一方面,甲醛多存在于建筑材料中,我国近二十年大力发展房地产和城市化,人们接触建筑材料的机会较从前明显增加,生活中难以完全避免,应引起医患双方的关注㊂综上所述,血清sIgE抗体检测和斑贴试验有助于临床发现AD患儿的吸入性㊁食入性和接触性变应原,尘螨㊁蟑螂㊁动物毛㊁牛奶㊁鸡蛋㊁虾蟹类海鲜㊁镍和钴金属制品㊁甲醛可能是诱发本地区儿童AD 发病的重要过敏原,在日常诊疗中应该细心加以甄别㊂本研究样本量较小,研究数据有一定的局限性,期待未来的研究能更加完善㊂参考文献:[1] LAUGHTER D,ISTVAN J A,TOFTE S J,et al.The prevalence ofatopic dermatitis in Oregon schoolchildren[J].J Am AcadDermatol,2000,43(4):649⁃655.DOI:10.1067/mjd.2000.107773.[2] SPERGEL J M.From atopic dermatitis to asthma:The atopic march[J].Ann Allergy Asthma Immunol,2010,105(2):99⁃106.DOI:10.1016/j.anai.2009.10.002.[3] SILVERBERG N B,SILVERBERG J I.Atopic dermatitis:PartⅠ[J].Clin Dermatol,2017,35(4):341⁃343.DOI:10.1016/j.clindermatol.2017.03.003.[4] BROUGH H A,LIU A H,SICHERER S,et al.Atopic dermatitisincreases the effect of exposure to peanut antigen in dust on peanut sensitization and likely peanut allergy[J].J Allergy Clin Immunol, 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