分析实验DNA分子标记检测技术鉴定向日葵品种纯度的方法

应用分子标记检测作物杂交种纯度研究现状及比较分析作者：刘子记曹振木杨衍来源：《长江蔬菜·学术版》2013年第06期摘要：分子标记技术可以弥补和克服杂交种纯度形态学及同工酶鉴定中的许多缺陷和难题，为作物杂交种纯度鉴定提供一种准确、可靠、快速、方便的方法。

通过综述几种常用分子标记技术的原理、优缺点及其在作物杂交种纯度鉴定中的应用现状，展望了分子标记检测技术在杂交种纯度检测乃至遗传育种、良种推广中的重要性，以期为研究分子标记技术提供参考。

关键词：纯度鉴定；分子标记；杂交种；多态性种子是重要的农业生产资料，是实现农业科技进步的载体。

种子质量的优劣直接影响农产品质量和优良品种的增产潜力，而种子质量的好坏在很大程度上取决于种子的纯度，开展种子纯度检测对保证种子质量和提高生产效益具有重要意义。

生物混杂及机械混杂是影响杂交种纯度的主要原因，作物杂交种纯度检验的常用方法主要包括形态鉴定、田间鉴定和同工酶电泳技术鉴定等[1]。

种子形态差异有限，且易受环境条件影响，因此形态鉴定准确性较差；田间鉴定所需时间较长，成本较高，表型易受栽培措施和环境条件的影响，不同的鉴定者对同一性状的评价也存在一定的差异，不能满足快速检测杂交种纯度的需要；同工酶鉴定虽然准确、可靠、不受外界环境影响，但多态性不够丰富，且有组织和器官特异性[2]。

随着作物新品种数量的不断增加，遗传基础日趋狭窄，传统的鉴定方法不能有效区分遗传关系较近的杂交种[3]，难以满足作物杂交种纯度鉴定在精确度方面的要求。

近年来，随着DNA分子标记技术的问世及迅速发展，使得从基因组水平上检测杂交种纯度成为可能。

分子标记技术能够从DNA水平上揭示杂交子代与亲本间的遗传差异，不受植株生长季节的限制，不受基因表达、栽培条件和环境条件的影响，无器官、组织及发育特异性，能够检测微小的变异，多态性丰富，稳定性高，可以大大缩短检验时间[4]。

近年来，分子标记技术在国内外被广泛应用于作物杂交种纯度鉴定。

植物总DNA的提取和DNA纯度的测定谌诚董琳马楠（武汉生物工程学院10级园林系本科一班）摘要:利用基因工程手段对植物进行定向改造，已成为当今植物育种学发展的一个新领域，植物基因工程操作离不开植物基因组DNA 的制备。

Abstract: The use of genetically engineered plants by means of directional transformation, has become a new field of plant breeding today, plant genetic engineering can not be separated from the plant genomic DNA preparation.一、实验目的要求1.了解核酸的存在形式及理化性质。

2.掌握CTAB法提取植物总DNA的原理及操作技术。

3.了解DNA的鉴定方法。

4.学习紫外分光光度法测定DNA浓度和纯度。

二、实验原理利用基因组较长的特性可以将其与细胞器或质粒等小分子DNA 分离，加入一定量的异戊醇或乙醇，基因组的大分子DNA即沉淀形成纤维状絮团漂浮其中，而小分子DNA则只形成颗粒状沉淀附于壁上及底部，从而达到分离的目的。

在提取过程中，染色体会发生机械断裂，产生大小不同的片段，因此分离基因组DNA时应尽量在温和的条件下操作，如尽量减少酚/氯仿抽提、混匀过程要轻缓，以保证得到较长的DNA。

植物中的次生代谢产物一多酚类化合物可以介导DNA降解，而多糖的污染也是影响植物核酸纯度最常见的问题。

这些多糖能抑制限制酶，连接酶及DNA聚合酶等分子生物学酶类的生物活性。

应考虑去除多糖和酚类物质。

三、实验材料1,7mol/ml Nacl溶液，紫外线可见分光光度计，离心机，75%乙醇。

一、操作方法1、取3m核酸提取缓冲液于离心管中，65℃水浴预热。

2、称取水稻幼苗叶片0.5g，剪碎，置于65℃预热的研钵中，加入少许石英砂，并加入3ml预热到65℃的核酸提取缓冲液。

基于SSR标记的向日葵DNA指纹图谱构建冯飞;汪磊;傅春玲;谭美莲;汪魏;严兴初;王力军【期刊名称】《中国油料作物学报》【年(卷),期】2018(040)004【摘要】利用SSR分子标记技术对124份向日葵参试材料和育成品种进行遗传多样性、亲缘关系分析及指纹图谱构建,旨在为向日葵育种、品种纯度鉴定提供参考.利用19对条带清晰、多态性稳定的SSR引物对群体材料进行扩增分析,发现这些引物的多态信息含量变化范围为0.30～0.62,平均值为0.41.聚类分析结果表明,参试材料间遗传多样性相对较低,其最小遗传相似系数为0.62,亲缘关系与地理来源关系不明显.构建了124份材料的指纹图谱,结果表明除SPQ3和SY7外,19对引物能很好地将其余122份材料鉴别出来,但部分位点具有高度的一致性,基因来源范围较小.以上研究结果表明,参试向日葵材料遗传背景较为狭窄,在育种中应拓宽亲本来源,提高遗传多样性.【总页数】8页(P508-515)【作者】冯飞;汪磊;傅春玲;谭美莲;汪魏;严兴初;王力军【作者单位】中国农业科学院油料作物研究所,农业部油料作物生物学与遗传育种重点实验室,湖北武汉,430062;中国农业科学院油料作物研究所,农业部油料作物生物学与遗传育种重点实验室,湖北武汉,430062;中国农业科学院油料作物研究所,农业部油料作物生物学与遗传育种重点实验室,湖北武汉,430062;中国农业科学院油料作物研究所,农业部油料作物生物学与遗传育种重点实验室,湖北武汉,430062;中国农业科学院油料作物研究所,农业部油料作物生物学与遗传育种重点实验室,湖北武汉,430062;中国农业科学院油料作物研究所,农业部油料作物生物学与遗传育种重点实验室,湖北武汉,430062;中国农业科学院油料作物研究所,农业部油料作物生物学与遗传育种重点实验室,湖北武汉,430062【正文语种】中文【中图分类】S565.5【相关文献】1.基于SSR标记的太湖稻区常规粳稻DNA指纹图谱构建及遗传相似性分析 [J], 罗兵;孙海燕;杨志刚;沈宗根;汤俊;端木银熙2.基于EST-SSR及SRAP标记构建苦荬菜品种(系)DNA指纹图谱 [J], 班骞;谢彩云;范国华;黄琳凯;张新全3.基于SSR标记新疆陆地棉的DNA指纹图谱构建及遗传多样性分析 [J], 王欣怡;艾先涛;李雪源;龚照龙;王俊铎;范李萍;郑巨云;梁亚军;郭江平;买买提·莫明4.基于SSR标记的68份红毛丹种质资源DNA指纹图谱构建 [J], 林兴娥;牛俊海;陈莹;明建鸿;高宏茂;葛宇;周兆禧5.基于cpSSR标记的山药种质资源DNA指纹图谱构建及遗传多样性分析 [J], 张静珍;王连军;雷剑;柴沙沙;杨新笋;张文英因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

专利名称：一套检测向日葵品种纯度的SNP分子标记及其应用专利类型：发明专利
发明人：唐顺学,李乐,彭佩,肖金华,田冰川
申请号：CN202011601849.6
申请日：20201229
公开号：CN112626257A
公开日：
20210409
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明公开了一套检测向日葵品种纯度的SNP分子标记及其应用。

所述一套17个SNP分子标记，可用于检测来源不同的油葵和食葵品种和遗传材料的纯度，具有广泛的应用普适性，并且能追溯推测不纯样品的污染来源；具有共显性标记，特异性、灵敏度和分辨力高；标记不受环境条件影响，能够使用种子或任何类型的植物组织，检测结果准确、重复性和稳定性好；技术简单，易于自动化，检测通量高，速度快；单位数据点检测成本低；不同检测实验室的数据结果可以相互比较验证，数据具有普适的可比性。

申请人：华智生物技术有限公司
地址：410000 湖南省长沙市芙蓉区合平路618号
国籍：CN
代理机构：广州嘉权专利商标事务所有限公司
代理人：肖云
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向日葵 DNA 指纹图谱构建及遗传多样性分析张曼;田娟;张雷;牛庆杰;李慧英;孙墨可;张义【摘要】以12份向日葵杂交种和18份向日葵亲本为材料，利用SSR 分子标记，从502对 SSR 引物中筛选了34对核心引物。

34对引物在30份研究材料中共检测到81个多态性片段，平均每对引物的多态性片段为2.38个。

基于34个 SSR标记的扩增结果，利用 NTsys 2.10e 软件计算遗传相似系数，并建立 UPGMA 聚类图，结果表明：30份材料之间的遗传相似系数变化范围为0.4320～0.9012，在遗传相似系数0.62处可以将30份材料分为两大类，一定程度上反映了材料间的亲缘关系。

同时 SSR 标记指纹图谱的建立为向日葵品种纯度和真伪鉴定提供了科学数据。

%34 core SSR primers were selected from 502 SSR primers on12 sunflower hybrids and 18 parental lines used SSR. 81 polymorphic DNA bands were detected by using 34 core SSR primers with averaged 2.38 bands per primer. Ge-netic similarity coefficient was computed using the software NTsys 2.10e, and a dendrogram of genetic relationship was con-structed using UPGMA method. The results indicated that the genetic similarity ranged from 0.432 0~0.901 2 among 30 cultivars. Two cluster groups were classified with the similarity coefficient of 0.62, revealed the genetic relatives among culti-vars. The sunflower SSR construction of DNA fingerprinting provided scientific data for identification as well as determination of purity of the sunflower cultivars.【期刊名称】《宁夏农林科技》【年(卷),期】2015(000)007【总页数】6页(P26-30,44)【关键词】向日葵;SSR;指纹图谱;遗传多样性【作者】张曼;田娟;张雷;牛庆杰;李慧英;孙墨可;张义【作者单位】吉林省白城市农业科学院，吉林白城 137000;吉林省白城市农业科学院，吉林白城 137000;吉林省白城市农业科学院，吉林白城 137000;吉林省白城市农业科学院，吉林白城 137000;吉林省白城市农业科学院，吉林白城137000;吉林省白城市农业科学院，吉林白城137000;吉林省白城市农业科学院，吉林白城 137000【正文语种】中文【中图分类】S565.5近年来，DNA指纹图谱鉴定技术发展迅速，包括RFLP、RAPD、SSR、AFLP指纹图谱技术，以及新兴的SNP、SRAP、TRAP指纹图谱技术等[1]。

向日葵品种纯度检验的方法与技术
谢宗铭;孙宝启
【期刊名称】《种子》
【年(卷),期】1999(000)002
【摘要】本文叙述了向日葵品种纯度鉴定的几种主要方法，重点介绍了生化指纹技术和ＤＮＡ指纹诊断技术的原理和发展与应用潜力，从产用角度出发，提出了传统方法与生化方法以及分子水平技术有机结合的品种纯度鉴定路线思想。

【总页数】4页(P38-41)
【作者】谢宗铭;孙宝启
【作者单位】新疆农垦科学院作物所向日葵室;中国农业大学种子科学系
【正文语种】中文
【中图分类】S565.5
【相关文献】
1.EST-PAGE法对向日葵杂交种及自交系品种纯度的鉴定 [J], 胡辉林;党润盈;王军
2.SSR技术在作物品种纯度和真伪检验中的探讨 [J], 丁锐学;胡军祥
3.SSR分子标记方法鉴定杂交向日葵品种纯度研究 [J], 孟全业;赵建宗;李巧英;续建国;林展;王圆荣
4.DNA分子标记检测技术鉴定向日葵品种纯度的研究 [J], 高飞;张英;林展;赵建宗
5.杂交向日葵品种纯度鉴定技术的应用 [J], 赵建宗
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专利名称：一种快速鉴定食用向日葵杂交种SH338真实性和纯度的方法
专利类型：发明专利
发明人：张永平,马德甯,司立平,姚梅园,万县贞
申请号：CN201510033344.7
申请日：20150122
公开号：CN105861640A
公开日：
20160817
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明公布了一种快速鉴定食用向日葵杂交种SH338真实性和纯度的方法，通过在大量的SSR引物中筛选出SR-123、SR-889和SR-1114，并在上述引物下获得了适于以食用向日葵杂交种SH338及其亲本标准向日葵种子A03-6和06R-2的基因组DNA为模板的PCR扩增反应的最优组合，对比通过凝胶电泳处理获得的食用向日葵杂交种SH338及其标准向日葵种子A03-6和06R-2的电泳图谱，判定所述食用向日葵杂交种SH338真实性和纯度的鉴定，该方法方便、快捷，操作步骤简单，能够在短时间内对大量的待测食用向日葵杂交种SH338进行快速鉴定，测定结果准确。

申请人：北京三瑞农业科技有限公司,内蒙古三瑞农业科技有限公司,甘肃德瑞农业科技有限公司地址：101100 北京市通州区八里桥南街16号8号楼1005号
国籍：CN
代理机构：北京三聚阳光知识产权代理有限公司
代理人：赵敏
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植物品种鉴定dna指纹方法总则植物品种鉴定是通过比较不同植物品种之间的遗传差异来确定其真实身份的过程。

DNA指纹方法是一种常用的鉴定手段，通过分析植物DNA中的特定位点或序列的差异来进行鉴定。

以下是植物品种鉴定DNA指纹方法的总则：1. DNA提取：首先从待鉴定植物样本中提取DNA。

提取方法可以根据具体实验室的设备和试剂选择合适的方法，如CTAB法、酚/氯仿法等。

2. 选择分子标记：选择适合的分子标记来分析DNA指纹。

常用的分子标记包括核酸序列重复（SSR）、随机扩增多态性DNA (RAPD)、序列特定扩增（STS）等。

选择合适的分子标记取决于目标植物种群的遗传特点和研究目的。

3. PCR扩增：使用PCR（聚合酶链反应）技术扩增DNA片段。

根据选择的分子标记，设计引物使其能够特异性扩增目标区域。

PCR反应条件与所选的引物和目标区域有关，需进行优化。

4. 凝胶电泳：将PCR扩增产物分离和可视化。

通常使用琼脂糖凝胶电泳将扩增产物按照大小进行分离，然后通过染色或其他方法可视化DNA条带。

5. 数据分析：根据凝胶电泳结果，对DNA条带进行解读和分析。

比较不同品种之间的DNA条带差异，可以鉴定品种是否相同或相关。

6. 统计分析：使用适当的统计方法对分析结果进行处理和解读。

通过计算相似性指数、聚类分析等统计方法，可以得出植物品种之间的遗传关系和相似性。

需要注意的是，植物品种鉴定的DNA指纹方法虽然被广泛应用，但在具体实施时要根据植物物种的特点和研究目的进行调整和优化。

另外，为了确保结果的准确性和可靠性，应该在实验过程中采取严格的质量控制和验证步骤。

总之，植物品种鉴定的DNA指纹方法主要包括DNA提取、分子标记选择、PCR扩增、凝胶电泳、数据分析和统计分析等步骤。

这些步骤的选择和实施应根据具体的研究需求进行调整和优化。

dna浓度和纯度的测定实验报告DNA 浓度和纯度的测定实验报告一、实验目的本次实验的主要目的是准确测定 DNA 样品的浓度和纯度，以评估其质量和适用性，为后续的分子生物学实验如 PCR、基因克隆、测序等提供可靠的材料。

二、实验原理1、紫外分光光度法DNA 分子在 260nm 波长处有特异的紫外吸收峰，其吸收强度与DNA 的浓度成正比。

通过测定 260nm 处的吸光度（A260），可以计算出 DNA 的浓度。

同时，根据 A260 与 A280 的比值，可以评估 DNA 的纯度。

纯的 DNA 样品，A260/A280 的比值约为 18。

2、荧光染料法某些荧光染料如 PicoGreen 可以与双链 DNA 特异性结合，结合后的荧光强度与 DNA 浓度成正比。

通过使用荧光分光光度计或荧光酶标仪测定荧光强度，可以定量 DNA 浓度。

三、实验材料与仪器1、材料DNA 样品、TE 缓冲液（10 mM TrisHCl，1 mM EDTA，pH 80）、标准 DNA 溶液（已知浓度）。

2、仪器紫外分光光度计、荧光分光光度计或荧光酶标仪、微量移液器、离心管、移液器吸头。

四、实验步骤（一）紫外分光光度法1、准备工作（1）打开紫外分光光度计，预热 30 分钟。

（2）用 TE 缓冲液作为空白对照，调节仪器零点。

2、样品测定（1）取适量 DNA 样品，用 TE 缓冲液稀释至适当浓度（通常A260 值在 01 10 之间）。

（2）将稀释后的样品加入比色皿中，测定 260nm 和 280nm 处的吸光度，记录 A260 和 A280 的值。

3、浓度计算DNA 浓度（μg/μL）＝ A260 ×稀释倍数 × 504、纯度评估根据 A260/A280 的比值评估 DNA 纯度。

（二）荧光染料法1、准备工作（1）将标准 DNA 溶液稀释成一系列不同浓度的标准液。

（2）按照荧光染料试剂盒的说明，配制荧光染料工作液。

论述抗列当向日葵品种的选育技术要点抗列当向日葵是指对列当病毒具有抗性的向日葵品种。

列当病毒是一种危害向日葵的病毒，会导致向日葵叶片出现黄化、疏病、瘦小、形状不正等症状，从而影响向日葵的生长和产量。

选育抗列当向日葵品种具有重要意义。

下面将论述抗列当向日葵品种的选育技术要点。

一、遗传背景的筛选抗列当向日葵品种的选育首先需要从不同的向日葵种质资源中筛选出具有抗病毒基因的遗传背景。

以常见的向日葵品种为材料，通过人工感染的方法筛选出对列当病毒具有抗性的材料，并从中选择具有高抗性的亲本材料，为后续的杂交育种工作打下基础。

二、快速筛选抗性材料的分子标记技术随着分子生物学技术的发展，利用分子标记技术可以快速筛选出具有抗列当病毒基因的材料。

通过PCR扩增和测序技术，可以鉴定出基因组中携带抗性基因的材料，从而加快选育进程，缩短育种周期。

三、良好的育种方法育种方法是选育抗列当向日葵品种的关键环节。

一方面需要采用传统的杂交育种方法，通过人工授粉和选育，逐步选育出具有抗病毒基因的向日葵品种；另一方面也需要借助现代生物技术手段，如基因编辑技术等，对向日葵的基因进行改良，加强其抗病毒能力。

四、疫苗接种技术为了验证向日葵品种的抗列当病毒效果，需要采用疫苗接种技术进行验证。

选择常见感染列当病毒的向日葵品种作为疫苗材料，对选育出的抗病毒向日葵品种进行接种实验，观察其抗病毒效果，并对结果进行统计和分析，为品种的选育提供科学依据。

五、抗病毒能力的鉴定在选育过程中，需要对候选品种进行抗病毒能力的鉴定。

通过对候选品种的接种实验和病毒鉴定技术，对其抗病毒能力进行评估，筛选出表现出较强抗性的品种，为最终的品种选育提供参考依据。

六、优良性状的保持在选育抗列当向日葵品种的过程中，除了关注其抗病毒能力外，还需要保持其优良的性状。

通过合理的种质材料选择、适宜的栽培管理和育种技术手段，将抗病毒基因与其他良好的性状结合起来，培育出既具有抗病毒能力又具有优良性状的抗列当向日葵品种。