实验 6 植物体内硝酸还原酶活力的测定硝酸还原酶（ nitrate reductase,NR ），是植物氮素同化的关键酶，它催化植物体内的硝酸盐还原为亚硝酸盐（ NO 3 ˉ +NADH+H ＋→ NO 2 ˉ +NAD ＋ +H 2 O ）。
产生的亚硝酸盐与对–氨基苯磺酸（或对–氨基苯磺酰胺）及α - 萘胺（或萘基乙烯二胺）在酸性条件下定量生成红色偶氮化合物。
其反映如下：生成的红色偶氮化合物在 540 nm 有最大吸收峰，可用分光光度法测定。
硝酸还原酶活性可由产生的亚硝态氮的量表示。
一样单位鲜重以 N μg ／（ g · h ）为单位。
NR 的测定可分为活体法和离体法。
活体法步骤简单，适合快速、多组测定。
离体法复杂，但重复性较好。
Ⅰ离体法二、实验材料、试剂与仪器设备（一）实验材料水稻、小麦叶片、幼穗等。
（二）试剂1 ．亚硝酸钠标准溶液：准确称取分析纯 NaNO2 g 溶于无离子水后定容至 1000 mL ，然后再吸取 5 mL 定容至 1000 mL ，即为含亚硝态氮的 1 μg ／ mL 的标准液。
2 ． mol/L pH 的磷酸缓冲液： Na 2 HPO 4 · 12H 2 O g 与 NaH 2 PO 4 · 2H 2 O g 加无离子水溶解后定容至 1000 mL 。
3 ． 1 ％磺胺溶液： g 磺胺溶于 100 mL 3mol/L HCl 中（ 25 mL 浓盐酸加水定容至 100 mL 即为 3 mol/L HCl ）。
4 ．％萘基乙烯胺溶液： g 萘基乙烯胺溶于 100 mL 无离子水中，贮于棕色瓶中。
5 ． mol/L KNO 3 溶液： g KNO 3 溶于 250 mL mol/L 的磷酸缓冲液。
6 ． mol/L 的磷酸缓冲液： g Na 2 HPO 4 · 12H 2 O ， g K 2 HPO 4 · 3H 2 O 溶于 1000 mL 无离子水中。
实验八硝酸还原酶活性测定一、目的硝酸还原酶是植物氮素代谢中的关键酶之一，它与作物吸收利用氮肥有关，对作物的产量和品质有影响。
因而可以把硝酸还原酶的活力当作植物营养或农田施肥的指标之一，也可作为品种选育的指标之一。
通过本实验可初步掌握测定硝酸还原酶活性的原理与方法。
二、原理硝酸还原酶能将NO3－还原成NO2－产生的NO2－的量与硝酸还原酶的活性相关。
通过测定反应液中产生的NO2－含量，即可确定酶活性大小。
NO2－含量可用磺胺显色法测定。
NO2－与磺胺及a－萘胺在酸性条件下生成红色偶氮化合物其反应如下：酶活性可用单位鲜重组织在单位时间内产生的亚硝酸量来表示：亚硝酸态氮微克数/克鲜重组织1小时。
三、实验材料、仪器和试剂1．实验材料植物的根、茎、叶，本实验选用白萝卜叶片2．仪器（1）分光光度计（2）离心机（3）真空泵和真空干燥器（4）恒温水浴锅（5）恒温箱（6）刻度吸管（lml、2ml、5ml）（7）试管（8）天平（9）三角瓶（50ml）3．试剂（1）亚硝酸钠标准液：称取0.1000g亚硝酸钠（AR），用蒸馏水溶解并定容至100ml。
然后吸取5ml再用蒸馏水定客至1000m1。
即为浓度5μg／ml的亚硝酸钠标准液。
（2）0.lmol·L－1pH7.5磷酸缓冲液（3）0.2 mol·L－1的硝酸钾溶液（4）1％对氨基苯磺磷酸（5）2％α－萘胺（6）30％三氯乙酸四、操作步骤1．标准曲线的制作操作项目管号1 2 3 4 5 6NaNO2淀标准液(ml) 0 0.4 0.8 1.2 1.6 2.0 蒸馏水(ml) 2.0 1.6 1.2 0.8 0.4 0 NaNO2含量（μg）0 2 4 6 8 10 磺胺(ml) 各4α－萘胺各4摇匀在30℃水浴中保温20分钟。
然后在520ml波长下比色测定消光值。
以亚硝酸钠含量为横坐标，消光值为纵坐标绘制标准曲线。
2．酶反应和酶活性测定将白萝卜叶片洗静，剪成0.5cm2h的小片，混匀后称三份，每份0.5－1.0g，分另放人50ml的三角瓶中，编号按下表加试剂摇匀，置真空于燥器中，抽气10分钟。
