重庆大学生物化学实验_实验五 蛋白质pI测定

蛋白质测定实验报告蛋白质测定实验报告引言：蛋白质是生命体内最基本的有机物之一，具有重要的生物学功能。

蛋白质测定实验是生物化学实验中常见的一种实验方法，通过测定样品中的蛋白质含量，可以了解生物体的营养状况、疾病发展以及药物疗效等方面的信息。

本实验旨在通过比色法测定蛋白质的浓度，并探究实验中可能遇到的问题和解决方法。

实验方法：1. 样品制备：将待测样品制备成适宜的浓度，通常需要进行稀释或浓缩处理。

2. 蛋白质与试剂反应：将样品与试剂按照一定比例混合，使蛋白质与试剂发生特定的反应。

常用的试剂包括伯胺蓝、比酚等。

3. 光度测定：将反应后的样品溶液置于分光光度计中，通过测量吸光度来间接测定蛋白质的浓度。

4. 标准曲线绘制：根据已知浓度的标准品，测定各标准品的吸光度，并将吸光度与浓度绘制成标准曲线。

5. 测定样品浓度：根据标准曲线，通过测定样品的吸光度，反推出样品中蛋白质的浓度。

实验结果与讨论：在本次实验中，我们使用了伯胺蓝作为试剂，制备了一系列不同浓度的标准品，并通过测定其吸光度绘制了标准曲线。

接下来，我们分别测定了三个未知样品的吸光度，并利用标准曲线计算出其蛋白质浓度。

实验中，我们发现了一些问题。

首先，样品的制备过程中，可能会出现蛋白质的损失或者污染，这会导致最终测定结果的误差。

为了解决这个问题，我们可以在制备过程中加入保护剂，如酶抑制剂或蛋白酶抑制剂，来减少蛋白质的降解。

其次，比色法本身对样品的颜色敏感，如果样品本身的颜色较深，会干扰吸光度的测定。

为了解决这个问题，可以通过稀释样品或者使用其他试剂来减少干扰。

在实验结果的讨论中，我们发现样品A的蛋白质浓度较高，样品B的蛋白质浓度较低，而样品C的蛋白质浓度与标准品相近。

这些结果提示我们样品A可能是一种富含蛋白质的食品，样品B可能是一种低蛋白质的食品，而样品C可能是一种未知的食品，需要进一步的研究来确定其成分。

结论：通过本次蛋白质测定实验，我们成功地测定了三个样品中蛋白质的浓度，并对实验中可能遇到的问题提出了解决方法。

蛋白质测定的实验报告蛋白质测定的实验报告引言：蛋白质是生命体内重要的组成部分，对于维持生命活动起着重要作用。

因此，准确测定蛋白质的含量对于生物学研究和医学诊断具有重要意义。

本实验旨在通过两种常用的蛋白质测定方法——布拉德福法和BCA法，来测定未知蛋白质溶液的含量，并比较两种方法的优缺点。

实验材料和方法：实验所需材料包括：布拉德福试剂盒、BCA试剂盒、未知蛋白质溶液、标准蛋白质溶液、比色皿、吸光度计等。

实验步骤如下：1. 准备工作：将布拉德福试剂盒和BCA试剂盒从冰箱中取出，恢复至室温。

2. 制备标准曲线：分别取不同浓度的标准蛋白质溶液，加入相应的试管中，然后按照试剂盒说明书的方法进行反应，最后测定吸光度。

3. 测定未知样品：将未知蛋白质溶液加入比色皿中，然后按照试剂盒说明书的方法进行反应，最后测定吸光度。

4. 计算蛋白质浓度：根据标准曲线上的吸光度值，通过线性回归计算未知蛋白质溶液的浓度。

实验结果：经过实验测定，我们得到了未知蛋白质溶液的浓度。

使用布拉德福法测定的结果为X g/L，而使用BCA法测定的结果为Y g/L。

讨论：布拉德福法和BCA法是常用的蛋白质测定方法，它们各自有着优缺点。

布拉德福法是一种基于蛋白质与染料结合的方法。

其优点是操作简单，结果稳定可靠。

然而，布拉德福法对于某些蛋白质可能存在的干扰物敏感，因此在选择试剂盒时需要根据具体样品的特点进行选择。

此外，布拉德福法对于低浓度的蛋白质测定不够敏感，因此在测定低浓度样品时需要进行稀释。

BCA法是一种基于蛋白质与铜离子的还原反应的方法。

其优点是对于大部分蛋白质都具有较好的灵敏度和特异性。

此外，BCA法在测定低浓度样品时表现出较好的线性关系，因此在测定低浓度样品时更为适用。

然而，BCA法对于一些干扰物，如还原剂和某些金属离子，也较为敏感，因此在实验操作时需要注意。

综上所述，布拉德福法和BCA法都是常用的蛋白质测定方法，它们各有优劣。

在实际应用中，我们需要根据具体样品的特点和测定的目的选择合适的方法。

蛋白质测定方法——化学报告蛋白质的检测酚试剂法灵敏度较高20~250mg 费时蛋白质在碱性溶液中其肽键与Cu2+螯合，形成蛋白质一铜复合物，此复合物使酚试剂的磷钼酸还原，产生蓝色化合物酚类、柠檬酸、硫酸铵、tris缓冲液、甘氨酸、糖类、甘油等均有干扰作用由上表可大致了解五种检测蛋白质的方法，下面以实验的形式进行详细阐述：1 材料与方法1.1 仪器材料(1)仪器:凯氏定氮仪、紫外分光光度计、可见光分光光度计、工作离心机、布氏漏斗、抽滤泵。

(2)试剂及原材料:牛奶、酸奶、豆浆、0.12mol/LpH=4. 7醋酸- 醋酸钠缓冲液、乙醇-乙醚等体积混合液、浓H2SO4 、40%氢氧化钠、30%过氧化氢、2%硼酸溶液、0. 050molPL标准盐酸溶液、硫酸钾- 硫酸铜接触剂、混合指示剂、标准蛋白溶液、双缩脲试剂、考马斯亮蓝G- 250试剂。

1.2 实验方法(1)凯氏定氮法测定蛋白质含量将待测样品与浓硫酸共热,含氮有机物即分解产生氨(消化) ,氨又与硫酸作用,变成硫酸铵。

为了加速消化,可以加入CuSO4 作催化剂和加入K2SO4 以提高溶液的沸点,而加入30%过氧化氢有利于消化溶液的澄清。

消化好的样品在凯氏定氮仪内经强碱碱化使之分解放出氨,借蒸汽将氨蒸至定量硼酸溶液中,然后用标准盐酸溶液进行滴定,记录,计算出样品含氮量。

每个样品做三次重复测定,取平均值。

(2)紫外吸收法测定蛋白质含量蛋白质分子中,酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸残基的苯环含有共轭双键,使蛋白质具有吸收紫外光的性质,吸收峰在280nm处,其吸光度(即光密度值)与蛋白质含量成正比。

此外,蛋白质溶液在238nm的光吸收值与肽键含量成正比。

利用一定波长下,蛋白质溶液的光吸收值与蛋白质浓度的正比关系,可以进行蛋白质含量的测定。

紫外吸收法简便、灵敏、快速,不消耗样品,测定后仍能回收使用。

低浓度的盐,例如,生化制备中常用的(NH4)2SO4 等和大多数缓冲液不干扰测定,特别适用于柱层析洗脱液的快速连续检测,因为此时只需测定蛋白质浓度的变化,而不需知道其绝对值。

第1篇一、实验目的本次实验旨在通过生物化学实验，加深对生物大分子结构和功能的理解，掌握蛋白质、核酸等生物大分子的提取、分离和鉴定方法，并学会使用相应的实验技术和仪器。

二、实验原理1. 蛋白质的提取与鉴定：蛋白质是生命活动中的重要物质，其提取和鉴定是生物化学研究的重要内容。

本实验通过蛋白质的盐析、电泳等方法，实现对蛋白质的提取和鉴定。

2. 核酸的提取与鉴定：核酸是生物遗传信息的携带者，其提取和鉴定对于研究生物遗传具有重要意义。

本实验通过酚-氯仿法提取DNA，通过比色法测定DNA的浓度。

3. 酶的活性测定：酶是生物体内催化反应的催化剂，其活性测定是研究酶的重要方法。

本实验通过测定酶促反应速率，计算酶的活性。

三、实验材料与仪器1. 材料：新鲜动物组织、化学试剂、缓冲液、电泳凝胶等。

2. 仪器：高速离心机、电泳仪、分光光度计、显微镜等。

四、实验步骤1. 蛋白质的提取与鉴定（1）取一定量新鲜动物组织，加入适量缓冲液，研磨。

（2）将研磨液离心，取上清液即为蛋白质提取液。

（3）将蛋白质提取液加入等体积的95%乙醇，混匀，静置。

（4）取沉淀，用少量双蒸水洗涤，干燥，溶解于适量双蒸水中。

（5）将蛋白质溶液进行SDS-PAGE电泳，观察蛋白质条带。

2. 核酸的提取与鉴定（1）取一定量新鲜动物组织，加入适量缓冲液，研磨。

（2）将研磨液加入等体积的酚-氯仿，混匀，静置。

（3）取上清液，加入等体积的异丙醇，混匀，静置。

（4）取沉淀，用少量双蒸水洗涤，干燥，溶解于适量双蒸水中。

（5）用分光光度计测定DNA的浓度。

3. 酶的活性测定（1）配制底物溶液。

（2）将底物溶液加入酶溶液，记录反应速率。

（3）根据反应速率计算酶的活性。

五、实验结果与分析1. 蛋白质的提取与鉴定：通过SDS-PAGE电泳，成功分离出多条蛋白质条带，表明实验中成功提取了蛋白质。

2. 核酸的提取与鉴定：通过比色法测定，成功提取出DNA，浓度为0.5μg/μL。

一、实验名称：蛋白质分子量测定——凝胶层析法二、实验目的：1. 理解凝胶层析法的原理和操作步骤。

2. 掌握蛋白质分子量测定的方法。

3. 分析实验结果，并探讨影响实验结果的因素。

三、实验原理：凝胶层析法是一种分离和纯化蛋白质的方法，其原理是利用凝胶的分子筛作用，根据蛋白质分子大小不同进行分离。

凝胶是一种多孔材料，其孔径大小与蛋白质分子大小相匹配，使得小分子蛋白质能够进入凝胶内部，而大分子蛋白质则无法进入，从而实现分离。

四、实验材料与试剂：1. 蛋白质样品：如鸡蛋清、血清等。

2. 凝胶：如聚丙烯酰胺凝胶、琼脂糖凝胶等。

3. 电泳缓冲液：如Tris-HCl缓冲液、硼酸缓冲液等。

4. 标准蛋白质分子量对照品：如已知分子量的蛋白质。

5. 电泳仪、电泳槽、紫外灯等。

五、实验步骤：1. 准备凝胶：将凝胶溶解在适当浓度的缓冲液中，倒入模具中，制成凝胶板。

2. 准备样品：将蛋白质样品与适量的电泳缓冲液混合，加入样品缓冲液，制成样品溶液。

3. 制备标准蛋白质分子量对照品：将已知分子量的蛋白质溶解在电泳缓冲液中，制成标准蛋白质溶液。

4. 加样：将样品溶液和标准蛋白质溶液分别加入凝胶板上的孔中。

5. 电泳：将凝胶板放入电泳槽中，加入电泳缓冲液，接通电源，进行电泳。

6. 显色：电泳完成后，将凝胶板取出，放入含有显色剂的溶液中，进行显色。

7. 测量：用紫外灯照射凝胶板，观察蛋白质条带的位置，并记录下蛋白质分子量。

六、实验结果与分析：1. 通过观察电泳图谱，可以清晰地看到蛋白质条带，其中标准蛋白质分子量对照品的条带位置已知，可以用来判断样品蛋白质分子量的大小。

2. 实验结果显示，样品蛋白质分子量分布较广，存在多个分子量大小不同的蛋白质。

3. 通过比较样品蛋白质条带与标准蛋白质条带的位置，可以估算出样品蛋白质的分子量。

4. 影响实验结果的因素包括凝胶的制备、电泳条件、显色剂的选择等。

七、讨论与心得：1. 凝胶层析法是一种常用的蛋白质分离和纯化方法，具有操作简单、分离效果好等优点。

实验名称：生化蛋白测定实验实验日期：2023年X月X日实验目的：1. 掌握蛋白质定量分析的基本原理和方法。

2. 熟悉分光光度计的使用和操作。

3. 通过实验，学习如何测定蛋白质浓度。

实验原理：蛋白质的定量分析是生物化学研究中不可或缺的环节。

本实验采用双缩脲法测定蛋白质含量。

该方法基于蛋白质中的肽键与铜离子在碱性条件下形成紫色络合物，其颜色深浅与蛋白质含量成正比。

通过比色法测定吸光度，从而计算出蛋白质的浓度。

实验材料与试剂：1. 实验材料：动物组织样品（如肝脏、肌肉等）。

2. 试剂：- 双缩脲试剂：A液（含碱性酒石酸铜溶液）、B液（含硫酸铜溶液）。

- 标准蛋白质溶液（已知浓度）。

- 0.1mol/L氢氧化钠溶液。

- 0.05mol/L硫酸铜溶液。

- 0.1mol/L盐酸溶液。

- 0.1mol/L磷酸盐缓冲液（pH 7.0）。

实验仪器：1. 分析天平。

2. 分光光度计。

3. 烧杯。

4. 试管。

5. 移液器。

6. 混匀器。

实验步骤：1. 样品处理：称取适量动物组织样品，用0.1mol/L氢氧化钠溶液溶解，制成蛋白质溶液。

2. 标准曲线绘制：取不同浓度的标准蛋白质溶液，加入双缩脲试剂A液，混匀，室温放置10分钟。

加入B液，混匀，在540nm波长下测定吸光度。

以蛋白质浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。

3. 样品测定：取待测样品，按照上述步骤进行处理，测定吸光度。

4. 计算蛋白质浓度：根据标准曲线，计算待测样品中蛋白质的浓度。

实验结果：1. 标准曲线绘制：根据实验数据，绘制标准曲线，线性回归方程为y=0.0035x+0.0146，相关系数R²=0.998。

2. 样品测定：待测样品的吸光度为0.65。

3. 蛋白质浓度计算：根据标准曲线，待测样品中蛋白质浓度为0.3mg/mL。

讨论与分析：本实验采用双缩脲法成功测定了待测样品中的蛋白质含量。

实验过程中，应注意以下几点：1. 样品处理过程中，应尽量减少蛋白质的降解。

第1篇一、实验目的1. 了解蛋白质在特定条件下的变化规律。

2. 掌握蛋白质检测的方法和技巧。

3. 分析蛋白质变化对生物体的影响。

二、实验原理蛋白质是生物体内重要的生物大分子，具有多种生物学功能。

在生物体内，蛋白质在特定条件下会发生结构、性质和功能的变化。

本实验通过检测蛋白质在变性、水解、氧化等条件下的变化，了解蛋白质的稳定性及其生物学功能。

三、实验材料1. 实验试剂：硫酸铵、氯化钠、氢氧化钠、硫酸铜、硫酸锌、苯酚、福林试剂、三氯乙酸等。

2. 实验仪器：电热恒温水浴锅、紫外可见分光光度计、移液器、试管、烧杯、天平等。

四、实验方法1. 变性实验：将蛋白质溶液加入一定浓度的硫酸铵溶液，观察蛋白质的沉淀现象，检测蛋白质的变性程度。

2. 水解实验：将蛋白质溶液加入一定浓度的三氯乙酸溶液，观察蛋白质的沉淀现象，检测蛋白质的水解程度。

3. 氧化实验：将蛋白质溶液加入一定浓度的硫酸铜溶液，观察蛋白质的颜色变化，检测蛋白质的氧化程度。

4. 蛋白质含量测定：采用紫外可见分光光度法测定蛋白质溶液的吸光度，计算蛋白质含量。

五、实验步骤1. 变性实验：（1）取2ml蛋白质溶液，加入等体积的硫酸铵溶液，混合均匀。

（2）将混合溶液置于室温下，观察蛋白质的沉淀现象。

2. 水解实验：（1）取2ml蛋白质溶液，加入等体积的三氯乙酸溶液，混合均匀。

（2）将混合溶液置于室温下，观察蛋白质的沉淀现象。

3. 氧化实验：（1）取2ml蛋白质溶液，加入等体积的硫酸铜溶液，混合均匀。

（2）观察蛋白质的颜色变化。

4. 蛋白质含量测定：（1）取2ml蛋白质溶液，加入苯酚试剂，混合均匀。

（2）将混合溶液置于紫外可见分光光度计中，测定吸光度。

（3）根据标准曲线计算蛋白质含量。

六、实验结果与分析1. 变性实验：在硫酸铵溶液中，蛋白质发生沉淀，表明蛋白质在较高浓度的硫酸铵溶液中发生变性。

2. 水解实验：在三氯乙酸溶液中，蛋白质发生沉淀，表明蛋白质在较高浓度的三氯乙酸溶液中发生水解。

蛋白质的等电点测定及性质实验一、实验目的初步学会测定蛋白质等电点的基本方法，并了解蛋白质的性质。

二、实验原理蛋白质分子是两性电解质，当调节溶液的酸碱度，使蛋白质分子上所带的正负电荷相等时，在电场中，该蛋白质分子既不向正极移动，也不向负极移动，这时溶液的pH值，就是该蛋白质的等电点（pI）。

不同蛋白质，等电点不同。

在等电点时，蛋白质溶解度最小，容易沉淀析出。

因此，可以借助在不同pH溶液中的某蛋白质的溶解度来测定该蛋白质的等电点。

在蛋白质溶液中加入一定浓度的中性盐，蛋白质即从溶液中沉淀析出，这种作用称为盐析。

盐析法常用的盐类有硫酸铵、硫酸钠等。

蛋白质的盐析作用是可逆过程。

由盐析获得的蛋白质沉淀，当降低其盐类浓度时，又能再溶解。

而重金属离子与蛋白质结合成不溶于水的复合物。

三、试剂和器材⑴高筋面粉、低筋面粉。

⑵ 1mol/L醋酸。

（每组自配0.1mol/L醋酸、0.01mol/L醋酸）⑶ 0.5%酪蛋白溶液。

称取2.5克酪蛋白，放入烧杯中，加入40℃的蒸馏水，再加入50毫升1N 氢氧化钠溶液，微热搅拌直到蛋白质完全溶解为止。

将溶解好的蛋白溶液转到500毫升容量瓶中，并用少量蒸馏水洗净烧杯，一并倒入容量瓶。

在容量瓶中再加入1N醋酸溶液50毫升，摇匀，再加蒸馏水定容至500毫升，得到略显混浊的、在0.1N NaAc溶液中的酪蛋白溶液。

⑷鸡蛋白溶液。

将80mL鸡蛋清与800mL蒸馏水混合均匀后，用洁净的多层湿纱布垫在漏斗上过滤，滤液即为鸡蛋白溶液（不能有不溶性物悬浮）。

要现配现用，最好使用经过煮沸并封在容器中隔绝空气冷却的蒸馏水。

⑸质量分数为5%的CuSO4溶液。

（每排3组合配）⑹ (NH4)2SO4饱和溶液。

（确保有固体析出）⑺天平、水浴锅、移液管、试管等。

四、操作步骤1、蛋白质的等电点测定⑴取5支同种规格的试管，编号，按表1顺序精确加入各种试剂，特别注意0.5%酪蛋白溶液最后加入，然后逐一振荡试管，使试管混合均匀。

生物化学大实验第一部分 蛋白质提取、纯化及分析技术实验一多酚氧化酶（PPO）的分离提取一、原理与目的多酚氧化酶（有3类，儿茶酚酶、戚酶、甲苯酚酶），它是植物组织内广泛存在的一种含铜氧化酶，位于质体、微体内，可参与植物生长、分化和种皮透性的调节，属于末端氧化酶的一种。

植物受到机械损伤和病菌侵染后，PPO催化酚与O2氧化形成为醌，使组织形成褐变，以便损伤恢复，防止或减少感染，提高抗病能力。

多酚氧化酶的活性与植物抗病有一定联系，植物免疫机理现在认为主要是产生对病源有害物质。

已发现具有免疫作用的有害物质是多种多样的，概括为两种类型，其中的一种类型就是原有的有毒物质，植物本身含有的一些对病菌有抑制作用，使病菌无法在寄主中生长。

很早就发现酚类化合物与抗病有明显的相关，例如原儿茶酸与儿茶酚对有色洋葱磷茎炭疽病菌的抑制作用。

多酚氧化酶也可与细胞内其他底物氧化相偶联，起到末端氧化酶的作用：氧化底物 NADH＋H+醌 H2O底物 NAD+酚 1/2 O2但是PPO的存在是水果、蔬菜褐变的主要原因之一，影响一些经济植物产品的质量。

因此，许多学者对此进行研究，并从一些植物组织中分离纯化这种酶，研究酶的理化性质和生化特性。

多酚氧化酶活性高低也是马铃薯解除休眠的指标之一。

本实验将采用马铃薯为主要材料，通过细胞组织破碎匀浆、过滤、离心、硫酸铵沉淀、透析等步骤获得PPO的粗酶液。

通过本项实验，学习和了解蛋白质的提取、分离的基本原理和方法，掌握相关仪器设备的操作使用，以及蛋白质的提取、分离的系统技术。

二、材料与试剂（1）马铃薯（大约每小组150-200g）（2）试剂：0.03M磷酸缓冲液PH6.0(内含0.02m巯基乙醇，0.001m EDTA，5%甘油，1%的聚乙烯吡咯烷酮)配制时配×10倍的浓缩液1000ml；固体硫酸铵；0.03M磷酸缓冲液PH6.0（内含0.02m巯基乙醇，0.001m EDTA，0.005m MgCL2）配置时配。

高校生物化学专业蛋白质测定实验报告模板一、实验目的蛋白质测定是生物化学领域中重要的实验之一，本实验旨在通过一系列的实验步骤，了解和掌握常用的蛋白质测定方法及技术，并能准确测定样品中的蛋白质含量。

二、实验原理（这部分根据实验内容确定所采用的蛋白质测定方法，例如BCA 法、Lowry法等进行详细介绍）三、实验仪器与试剂3.1 实验仪器：（列举用到的仪器和设备，如分光光度计、离心机等）3.2 实验试剂：（列举用到的试剂，包括蛋白质标准品和测定试剂等）四、实验步骤4.1 样品制备：（详细描述样品的制备过程）4.2 样品测定：（根据所选用的蛋白质测定方法，描述具体的实验步骤，如试剂的加入顺序、温度和时间等）4.3 数据处理：（对蛋白质测定实验所得的数据进行处理和计算）五、实验结果与分析5.1 原始数据记录：（记录实验中所获取的原始数据，以表格方式展示）5.2 数据处理结果：（根据所采用的蛋白质测定方法，对实验数据进行处理和计算，例如计算样品中蛋白质的浓度）5.3 结果分析：（对实验结果进行详细的分析，包括数据的可靠性、可能存在的误差以及与理论值的比较等）六、实验讨论与改进6.1 实验讨论：（对实验结果进行深入分析和讨论，包括与其他相关研究成果的比较等）6.2 实验改进方向：（针对实验过程中可能存在的问题，提出改进方向和方法）七、结论根据实验所得数据和结果分析，得出结论。

八、参考文献（列举所参考的文献，按照规范格式书写）以上为高校生物化学专业蛋白质测定实验报告的基本模板，根据实验具体要求和所选用的测定方法进行适当调整。

在撰写过程中，应注意严格按照实验报告的要求格式书写，并确保表达清晰、准确，避免出现影响阅读体验的问题。

实验一 氨基酸、蛋白质的主要化学性质一、目的用实验方式验证氨基酸、蛋白质的主要化学性质，增强感性熟悉。

二、原理α—氨基酸和蛋白质均含有α—氨基酰基R —CH —C —的结构，故都能与水合 | || NH 2 O 茚三酮作用生成兰紫色物质。

OC OHC C OH O+R CH COOH NH 2OCCHOH C+NH 3pH5100℃+R CHO CO 2++NH 3O C CHOH C O +O HO CC HO C OOC C C OC C C ON +3H 2OO C C C OC C C ON ONH 4C C C OOC C C O N -+（蓝紫色）水合茚三酮3脯氨酸和羟脯氨酸与茚三酮反映不释放氨而直接生成黄色化合物。

2蛋白质分子中含有肽键，与双缩脲结构相似，故在碱性环境中能与硫酸铜结合成紫红色的络合物，此反映称为双缩脲反映。

蛋白质分子中若存在含有苯环的氨基酸，如酪氨酸、色氨酸等，当其与浓硝酸共热时，则变成黄色，这就是黄蛋白反映，若再继续加碱则颜色转变成橘黄色。

若蛋白质分子中具有含硫氨基酸如半胱氨酸、蛋氨酸等，则与碱及醋酸铅共热时，分解而产生硫离子，后者遇铅盐即生成黑色硫化铅沉淀。

蛋白质胶体是亲水胶体，若除去其质点上的水膜和电荷，蛋白质粒子则凝聚析出，这就是蛋白质的沉淀作用，使蛋白质胶体沉淀的方式有多种，常常利用的有下列几种：1、盐析法：加中性盐或硫酸铵等电解质试剂于蛋白质溶液中，这些电解质离子的水化能力比蛋白质强，能够夺去蛋白质粒子外围的水膜，而且蛋白质粒子外围的双电层又受到了紧缩，也就是使其所带的电荷减弱，蛋白质胶体粒子由于失去两种使自己稳固的因素而沉淀。

2、有机溶剂的沉淀作用：水溶性的有机溶剂如乙醇、丙酮等，它们与水的亲和力大于蛋白质，因此能破坏蛋白质粒子的水膜，而使其沉淀析出。

3、生物碱试剂的沉淀反映：生物碱沉淀剂如三氯醋酸、若味酸、鞣酸等都能与蛋白质阳离子结成不溶性的盐而沉淀析出。

一、实验目的1. 了解蛋白质的组成、结构及其生物功能；2. 掌握蛋白质的提取、纯化、鉴定和定量方法；3. 掌握蛋白质变性、复性等基本性质；4. 培养实验操作技能和科学思维。

二、实验原理1. 蛋白质是由氨基酸通过肽键连接而成的生物大分子，具有多种生物功能，如催化、运输、结构支撑等；2. 蛋白质的提取方法有：酸法、碱法、盐析法等；3. 蛋白质的纯化方法有：凝胶过滤、离子交换、亲和层析等；4. 蛋白质的鉴定方法有：紫外光谱法、电泳法、质谱法等；5. 蛋白质的定量方法有：Lowry法、BCA法、 Bradford法等；6. 蛋白质变性是指蛋白质的空间结构发生改变，导致其生物功能丧失；蛋白质复性是指蛋白质在适当条件下恢复其生物功能。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：鸡蛋清、硫酸铵、硫酸钠、SDS、Tris-HCl缓冲液、考马斯亮蓝G-250、电泳槽、电泳仪、紫外分光光度计等；2. 试剂：盐酸、氢氧化钠、氯化钠、硫酸铵、SDS、Tris-HCl缓冲液、考马斯亮蓝G-250等；3. 仪器：高速离心机、分析天平、电泳槽、电泳仪、紫外分光光度计等。

四、实验方法与步骤1. 蛋白质提取：取鸡蛋清，加入适量盐酸或氢氧化钠，搅拌，然后加入硫酸铵，使蛋白质沉淀，离心，收集沉淀；2. 蛋白质纯化：将沉淀溶解于Tris-HCl缓冲液，加入SDS，进行SDS-PAGE电泳，分离蛋白质；3. 蛋白质鉴定：将电泳后的蛋白质条带用考马斯亮蓝G-250染色，观察颜色变化；4. 蛋白质定量：将电泳后的蛋白质条带用紫外分光光度计测定其吸光度，计算蛋白质浓度；5. 蛋白质变性：将蛋白质溶液加热至100℃，观察蛋白质的沉淀现象；6. 蛋白质复性：将变性的蛋白质溶液冷却至室温，观察蛋白质的溶解现象。

五、实验结果与分析1. 蛋白质提取：成功提取了鸡蛋清中的蛋白质，沉淀量较多；2. 蛋白质纯化：SDS-PAGE电泳结果显示，蛋白质在凝胶上分离良好，纯度较高；3. 蛋白质鉴定：考马斯亮蓝G-250染色结果显示，蛋白质条带呈现蓝色，表明蛋白质存在；4. 蛋白质定量：紫外分光光度计测定结果显示，蛋白质浓度为0.5mg/mL；5. 蛋白质变性：加热至100℃后，蛋白质发生沉淀，表明蛋白质变性；6. 蛋白质复性：冷却至室温后，蛋白质溶解，表明蛋白质复性。

1. 了解蛋白质的检测原理和方法。

2. 掌握常用蛋白质检测试剂的使用方法。

3. 通过实验，学会对蛋白质进行定量分析。

二、实验原理蛋白质是生物体内重要的生物大分子，具有多种生物学功能。

蛋白质的检测方法有很多，本实验主要采用比色法检测蛋白质含量。

比色法是基于蛋白质与特定试剂发生反应后，形成具有特定颜色的化合物，通过测定其吸光度来定量分析蛋白质含量。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 蛋白质标准品- 待测样品- 蛋白质检测试剂（如BCA法试剂）- 蒸馏水- 移液器- 试管- 离心机- 分光光度计2. 实验仪器：- 电子天平- 移液器- 离心机- 试管- 分光光度计1. 准备工作：（1）将蛋白质标准品、待测样品和BCA试剂分别配制在适当的浓度下。

（2）使用电子天平准确称量蛋白质标准品和待测样品。

2. 蛋白质标准曲线的制作：（1）将蛋白质标准品配制成一系列不同浓度的标准溶液。

（2）按照试剂说明书，将标准溶液与BCA试剂混合，室温下反应一定时间。

（3）将反应后的溶液在特定波长下测定吸光度。

（4）以蛋白质浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。

3. 待测样品的蛋白质含量测定：（1）按照试剂说明书，将待测样品与BCA试剂混合，室温下反应一定时间。

（2）将反应后的溶液在特定波长下测定吸光度。

（3）根据标准曲线，计算出待测样品中蛋白质的浓度。

4. 结果分析：（1）比较待测样品和蛋白质标准品的吸光度，计算蛋白质含量的相对误差。

（2）对实验数据进行统计分析，评估实验结果的可靠性。

五、实验结果1. 蛋白质标准曲线的制作：标准曲线拟合度良好，相关系数R²=0.998。

2. 待测样品的蛋白质含量测定：待测样品中蛋白质浓度为1.23mg/mL。

六、实验讨论1. 实验过程中，要注意控制实验条件，确保实验结果的准确性。

2. 在蛋白质标准曲线的制作过程中，要选择合适的浓度范围，避免标准曲线出现弯曲。

3. 待测样品的蛋白质含量测定结果与蛋白质标准品比较，相对误差在±5%以内，说明实验结果可靠。

实验一1、糖类的颜色反应1. α-萘酚反应糖在浓无机酸（硫酸或盐酸）作用下，脱水生成糠醛及糠醛衍生物，后者能与α-萘酚生成紫红色物质。

注意：因糠醛及糠醛衍生物对此反应均呈阳性，不是糖类的特异反应。

2. 间苯二酚反应在酸作用下，酮糖脱水生成羟甲基糠醛，后者再与间苯二酚作用生成红色物质。

此反应是酮糖的特异反应。

因为醛糖在同样条件下呈色反应缓慢，只有在糖浓度较高或煮沸时间较长时，才呈微弱的阳性反应。

2、还原作用许多糖类由于其分子中含有自由的或潜在的醛基或酮基，因此在碱性溶液中能将铜、铁、银等金属离子还原，同时糖类本身被氧化成糖酸及其他产物。

糖类这种性质常被利用于检测糖的还原性及还原糖的定量测定。

本实验所用的试剂为斐林试剂和本尼迪克特试剂。

它们都是Cu2＋的碱性溶液，能使还原糖氧化而本身被还原成红色（颗粒大）或黄色（颗粒小）的Cu2O沉淀。

实验二脂肪碘值的测定碘值（价）是指100g脂肪在一定条件下吸收碘的克数。

碘值是鉴别脂肪的一个重要常数，可用以判断脂肪所含脂肪酸的不饱和程度。

脂肪中常含有不饱和脂肪酸，不饱和脂肪酸具有一个或多个双键，能与卤素起加成作用而吸收卤素。

常用碘与脂肪中不饱和脂肪酸的双键起加成作用。

脂肪的不饱和程度越高，所含的不饱和脂肪酸越多，与其双键起加成作用的碘量就越多，碘值就越高。

故可用碘值表示脂肪的不饱和度。

I2+－CH=CH－－CHI－CHI－本实验用溴化碘(Hanus试剂)代替碘。

用一定量(必须过量)溴化碘和待测的脂肪作用后，用硫代硫酸钠滴定的方法测定溴化碘的剩余量，然后计算出待测脂肪吸收的碘量，求得脂肪的碘值。

加成作用：IBr+－CH=CH－－CHI－CHBr－剩余溴化碘中碘的释放：IBr + KI KBr + I2再用硫代硫酸钠滴定释放出来的碘：I2 +2Na2S2O3 2Na2S4O6+2NaI思考题：何谓空白溶液和空白实验？空白实验有何意义？在各种分析方法中，为消除干扰，用与测定试样时完全一致的条件进行测定的溶液。