Agilent~1260LC液相色谱仪使用、维护保养规范流程

Agilent 1260液相色谱仪+VWD+DAD+FLD检测器操作、维护和期间核查规程1 目的：为保证仪器的正常使用及测量结果的真实可靠特制定本规程。

2 范围：本规程适用于Agilent 1260液相色谱仪测定食品、保健食品、食品添加剂等样品时的操作、维护和期间核查。

3 职责：仪器使用人按本规程操作仪器和作好使用登记。

仪器责任人负责监督仪器的使用、保管、维护与保养和期间核查。

仪器设备管理员负责仪器的综合管理。

4 仪器组成Agilent 1260高效液相色谱仪由真空脱气机、四元泵、自动进样器、柱温箱、VWD、DAD、FLD检测器及OPENLAB CDS工作站组成5 操作规程开机前准备准备好流动相并安装色谱柱。

将水相放入A/D瓶，有机相放到溶剂瓶B/C，同时配制10%的异丙醇/水溶液以备柱塞清洗用。

开机打开计算机：打开计算机电源，登陆Windows操作系统。

启动工作站：打开Agilent 1260各模块（脱气机，四元泵，自动进样器，柱温箱，检测器）左下方的电源开关，液相各模块进入自检，右下方的指示灯不同颜色闪烁几下，最后变成橘黄色或无色，启动完成。

点击屏幕左下角“开始”，选择“所有程序（P）”，选择“AgilentTechnologies”选择“Open LAB”，选择OpenLABControl，或双击桌面图标，则会进入到下面的界面：11 编制人/起草人：审核人：批准人：批准日期：2016年6月2日实施日期：2016年6月2日下面步骤如果已经配置过，则不需要操作通过点击菜单左上方的，可以分别创建位置和仪器，得到如下界面输入相关信息，注意仪器类型一栏要选择Agilent LC System，输入完后点击确定。

出现如下界面22 编制人/起草人：审核人：批准人：批准日期：2016年6月2日实施日期：2016年6月2日选定刚刚创建的仪器名称，点击“配置仪器”，选择“配置模块”，注意不要选择“使用经典驱动程序”。

Agilent1260⾼效液相⾊谱仪操作规程1、⽬的确保Agilent 1260⾼效液相⾊谱仪的正确使⽤及管理。

2、范围研发分析中⼼实验室Agilent 1260⾼效液相⾊谱仪。

3、责任仪器使⽤者对本标准的实施负责。

4、内容4. 1 开机4.1.1打开计算机，进⼊Windows 画⾯。

4.1.2⾃下⽽上打开1260LC各模块电源，待各模块⾃检完成后，双击电脑桌⾯上LC1260-1(Online)图标，化学⼯作站⾃动与1260LC通讯，进⼊⼯作站画⾯。

4.1.3单击【View】菜单选择【Method and Run control】项，也可单击⼯作站画⾯左下⾓【Method and Run control】项，进⼊⽅法和运⾏控制窗⼝。

4.2 安装⾊谱柱正确安装实验所需的⾊谱柱，注意⾊谱柱流速箭头⽅向，试验过程中需检查是否存在漏液。

4.3 溶剂瓶体积设置把事先配好的流动相倒⼊相应的溶剂瓶中，单击【instrument】菜单,选择【More Quat Pump】项下【Bottle filling】，在参数设置处输⼊各溶剂瓶（A、B、C、D）内溶液实际体积和停泵体积，单击【OK】键，即可。

4.4 设置【Seal wash】单击【instrument】菜单,选择【More Quat Pump】项下“control”, 在seal wash这栏中选择“On”, 清洗功能开始运⾏，并设置清洗时间，每隔5min清洗0.1min。

4.4 脱⽓逆时针旋开Purge阀，单击【instrument】菜单,选择【More Quat Pump】项下“control”, 在“pump”这栏中选择“On”,泵开始运⾏。

设置“solvents”⼀栏中相应参数，将试验中所⽤到的管道逐⼀脱⽓，直⾄管内（由溶剂瓶到泵⼊⼝）⽆⽓泡为⽌所需时间，3ml/min冲洗⼤约需5min～10 min ,,完成后选择“off” , 单击OK键关泵，顺时针旋紧Purge阀。

安捷伦1260操作规程安捷伦（Agilent）1260操作规程一、仪器概述安捷伦1260高效液相色谱仪是一种用于液相色谱分析的仪器，具有高灵敏度、高分辨率和高效率的特点。

该仪器由进样器、色谱柱、色谱泵、检测器等组成。

二、仪器准备1. 确保仪器的电源已连接并接通。

2. 检查进样器、色谱柱和检测器是否安装正确。

3. 检查液相色谱仪的液相系统是否已进行适当的液相填充，以及是否有足够的溶剂。

三、方法设置1. 打开色谱软件，并选择合适的方法模板。

2. 根据分析需求，在方法设置中输入样品信息、进样量、流速等参数。

3. 设置检测器的波长、增益和测量范围。

四、进样操作1. 打开进样器的盖子，将待测样品加入样品瓶中。

2. 点击软件中的进样按钮，设置样品名称和进样量。

3. 将样品瓶放入进样器，并关闭盖子。

4. 点击软件中的进样按钮，开始进样。

5. 进样完成后，从进样器中取出样品瓶，并将它放入垃圾桶中。

五、色谱柱操作1. 打开色谱柱的阀门，并将柱端与色谱柱连接。

2. 检查色谱柱是否没有泄漏，如果有泄漏，则需重新连接。

3. 检查色谱柱的温度，确保它处于合适的温度范围内。

六、液相泵操作1. 打开液相泵的电源，并连接到电脑上。

2. 设置合适的流速和梯度梯度。

3. 点击软件中的启动按钮，开始进行分析。

七、数据分析1. 使用色谱软件进行数据采集和分析。

2. 根据需要选择适当的数据处理方法，如峰面积计算、定量分析等。

3. 导出分析结果并保存。

八、仪器维护1. 分析结束后，关闭液相泵、进样器、色谱柱和检测器等设备的电源。

2. 清洗色谱柱和进样器，保持其清洁。

3. 定期检查仪器的连接线和电源线是否有松动或损坏。

九、安全操作1. 在操作仪器时，注意安全，避免接触到有害化学品。

2. 在操作过程中，严禁随意触摸仪器或移动连接线。

3. 在操作过程中，如遇到异常情况，请及时停止分析并向管理员报告。

通过以上操作规程，可以有效地使用安捷伦1260高效液相色谱仪进行样品分析。

1目的规范Agile nt 1260系列高效液相色谱的日常使用和维护保养，保证仪器的正常运转，确保检测工作的顺利进行。

2适用范围适用于Agile nt 1260系列高效液相色谱系统的日常使用和维护。

3职责实验室分析人员负责Agile nt 1260系列高效液相色谱系统的日常使用和维护。

4系统组成4.1 Agile nt 1260 系列四元泵（G1311C）和脱气机；4.2可变波长紫外检测器（VWD G1314F ；4.3 Chemstation A.01.04 色谱工作站4.4国产柱温箱（AT-550）色谱柱；4.5电脑、打印机等辅助设备。

5定义无6操作程序6.1开机前的准备6.1.1检查仪器校验标识，确认仪器处于校验周期内。

6.1.2检查上次《实验室仪器设备使用记录表》和仪器状态，确认仪器处于正常状态；6.1.3流动相的制备：6.1.3.1按《高效液相色谱法流动相配制标准操作规程》配制需要的流动相。

6.1.3.2用前超声脱气（一般10〜20min）。

6.1.4更换流动相：6.1.4.1将泵的吸滤器从旧流动相中取出，用新流动相冲洗后放入新流动相的储液瓶中，并盖好瓶盖；6.1.4.2将排液管的出口端放入废液瓶中，并盖好瓶盖。

6.1.5供试溶液的配制：6.1.5.1供试品用规定溶剂配制成供试品溶液。

6.1.5.2定量测定时，对照品溶液和供试品溶液均应分别配制 2份。

6.1.5.2如有必要，样品需预处理，如过滤等，以免对色谱系统产生污染和色谱干扰。

6.1.6选择色谱柱： 6.1.6.1根据待检供试品的检测方法确定所需的色谱柱；6.1.6.2检查仪器上安装的色谱柱是否与其相同，若不同则需进行更换。

6.1.7更换色谱柱6.1.7.1拆卸原色谱柱：先握住色谱柱，再松动色谱柱出口端螺帽，取下出口端的管线；松动色谱柱入口端螺帽，取下入口端的管线；用止动塞将色谱柱的进出口塞住拧紧后，将色谱柱放回原专用包装盒内6.1.7.2安装新色谱柱：从专用包装盒内取出色谱柱，松动并取下色谱柱出入口的止动塞；将与进样器相连的管线一端插入色谱柱入口端，拧紧螺帽；（注意：安装时色谱柱上的流向标志应与管路的流动相流向一致。

安捷伦液相操作维护保养规程一、安全操作规范：1.操作前必须穿戴个人防护装备，包括实验服、手套、护目镜等。

2.在操作液相设备时，要保证周围环境干燥、清洁无尘。

3.不得将有机溶剂直接排放到下水道中，应按照相关规定进行处理。

4.避免与有机溶剂发生直接接触，防止引起火灾和爆炸。

在操作过程中要小心避免溢漏。

二、操作准则：1.严密密封液相系统，避免泄漏。

2.在使用气溶胶短管时，注意定期更换新管，并将废弃管进行妥善处理。

3.当不使用设备时，要关闭电源，并将设备清洁干净，避免灰尘和污渍。

4.设备放置时要水平摆放，不可放置在湿润或有机溶剂易波及的地方。

5.使用过程中，要定期检查设备的密封部分是否正常，如有破损应及时更换。

三、操作流程：1.根据实验要求，合理选用相关仪器设备，并调整好设备的参数。

2.操作前先进行设备的预热，保持设备恒定的温度。

3.将待测样品注入进样装置中，确保样品完全进入进样管。

4.打开进样阀，将样品注入到色谱柱中，观察色谱曲线并记录相关数据。

5.实验结束后，使用合适的溶剂将色谱柱进行洗脱，防止发生堵塞现象。

6.将设备进行清洗，除去可能残留下来的污物。

7.对设备进行维护检查，保证下次使用时设备处于良好状态。

四、设备保养：1.定期检查设备的电源线和数据线，如有破损应及时更换。

2.定期清洗仪器的进样口和进样管，防止堵塞。

3.对仪器设备进行定期润滑，确保设备的正常运转。

4.定期校准仪器的测量参数，确保仪器的准确性。

5.确保仪器设备的周围环境干燥，避免设备受潮。

五、事故及处理方法：1.发生溢漏情况时，立即关闭设备，及时清理溢漏物，并通风排气。

3.发生火灾或爆炸时，迅速撤离现场，并使用灭火器等灭火工具进行灭火。

六、员工培训和操作技能提升：1.新员工入职时，进行液相操作培训，包括安全操作规范、设备操作流程等方面的培训。

2.定期组织员工进行操作技能培训和考核，提高员工的操作技能和专业知识水平。

3.鼓励员工参加相关培训和学习，提升专业水平和操作技能。

Agilent1260液相色谱仪器操作规程一.生产厂家：美国Agilent二.到货日期：2011年1月三.附件：电脑、打印机四.使用范围：用于三聚氰胺，维生素A、D、E,β-胡萝卜素，牛磺酸，山梨酸、苯甲酸，乳糖、蔗糖等的检测五.工作环境：温度15℃~30℃，湿度20%~80%六.操作步骤:1.开机前准备：1.1.打开仪器室的空调。

1.2.配制流动相（按国标）,准备好蒸馏水、乙腈和甲醇。

2.开机：2.1.打开1260液相色谱仪器的进样器、泵、柱温箱和检测器的电源。

2.2.打开计算机。

2.3.打开“仪器1联机”图标，各模块完成自检。

2.4.点击“打开”图标，进入化学工作站。

3.设置运行模块和方法3.1.进样器（自动进样器）3.1.1.设置进样量，在“进样器”的模块中，点击鼠标右键，在“方法”中，按照国标，检测不同物质，设定不同的进样量。

反相：最大进样量为100ul，抽取速度一般设定200ul/min。

正相：最大进样量为500ul，抽取速度一般设定200~500ul/min。

3.1.2.设置进样器停止时间，在“进样器”的模块中，点击鼠标右键，在“方法”中，如标样的出峰时间为7分钟，停止时间可以设置为8分钟以上。

3.2.泵（四元泵或单泵）3.2.1.泵的流速：在“泵”的模块中，点击鼠标右键，点击“方法”，按照国标要求，如设置1.00ml/min。

3.2.2.如果是四元泵，可选择溶剂瓶，输入需要使用的各溶液的比例，如B 蒸馏水90%，C乙腈10%，点击“确认”。

3.2.3.在“泵”的模块中点击鼠标右键，点击“控制”，选择“泵”（打开），确认。

3.2.4. 设置泵停止时间：在“泵”的模块中，点击鼠标右键，点击“方法”，一般选择“与进样器一致/无限制”。

3.2.5. 压力限值：最小值一般设0bar，最大值一般设100bar。

3.3.柱温箱3.3.1.设置柱温箱的温度：在“柱温箱”模块中，点击鼠标右键，点击“方法”，左边按照国标要求可设置，比如35度，一般右边设置同左边。

标准操作规程STANDARD OPERATING PROCEDURE的准确性，特制定此规程。

2 范围：本规程适用于Agilent 1260高效液相色谱仪的使用、维护和保养。

3 责任者：化验员4 程序：4.1 开机4.1.1 打开计算机，输入用户名和密码，进入Windows 7画面。

4.1.2 打开1260 LC 各模块电源(不分先后)。

待各模块自检完成后，双击“仪器1联机”图标，化学工作站自动与1260 LC通讯，进入工作站。

（注意：在“仪器1脱机”关闭的情况下，“仪器1联机”方能打开。

）4.1.3 从“视图”菜单中选择“方法和运行控制”画面，来调用所需的界面，正常情况会默认进入此界面。

4.1.4 保对应溶剂瓶装入所要使用的流动相，左击“四元泵”模块下的“溶剂瓶”图标或右击“四元泵”下选择“瓶填充”，输入溶剂的实际体积和瓶总体积，可输入停泵的体积。

单击“确定”。

（注意：此操作很重要，以免气泡进入系统）。

4.1.5 轻轻旋开泵上的冲洗阀（缓缓旋开约1/4即可，不可用力太过）。

右击“四元泵”图标，出现参数设定菜单，单击“方法”选项，进入泵编辑画面。

设流量，从0 ml/min 逐渐变为3ml/min，溶剂A设到100%；单击“确定”。

右击“四元泵”图标，选择“控制”选项，选中“打开”，单击“确定”，则系统开始排气，直到管线内（由溶剂瓶到泵入口）无气泡为止；切换到通道同法继续排气，直到所有要用通道无气泡为止（只需排所用到的通道即可）。

4.1.6 右击“四元泵”图标，出现参数设定菜单，单击“方法”选项，进入泵编辑画面。

设流量为：0ml/min，单击“确定”，轻轻关闭排气阀（旋紧即可）。

4.2 数据采集方法、系列编辑：4.2.1 编辑完整方法：4.2.1.1 从“方法”菜单中选择“编辑完整方法”项，选中除“数据分析”外的三项，单击“确定”，进入下一界面“方法注释”。

4.2.1.2 方法信息：在“方法注释”中写入方法的相关信息。

1、目的确保Agilent 1260高效液相色谱仪的正确使用及管理。

2、范围研发分析中心实验室Agilent 1260高效液相色谱仪。

3、责任仪器使用者对本标准的实施负责。

4、内容4. 1 开机4.1.1打开计算机，进入Windows 画面。

4.1.2自下而上打开1260LC各模块电源，待各模块自检完成后，双击电脑桌面上LC1260-1(Online)图标，化学工作站自动与1260LC通讯，进入工作站画面。

4.1.3单击【View】菜单选择【Method and Run control】项，也可单击工作站画面左下角【Method and Run control】项，进入方法和运行控制窗口。

4.2 安装色谱柱正确安装实验所需的色谱柱，注意色谱柱流速箭头方向，试验过程中需检查是否存在漏液。

4.3 溶剂瓶体积设置把事先配好的流动相倒入相应的溶剂瓶中，单击【instrument】菜单,选择【More Quat Pump】项下【Bottle filling】，在参数设置处输入各溶剂瓶（A、B、C、D）内溶液实际体积和停泵体积，单击【OK】键，即可。

4.4 设置【Seal wash】单击【instrument】菜单,选择【More Quat Pump】项下“control”, 在seal wash这栏中选择“On”, 清洗功能开始运行，并设置清洗时间，每隔5min清洗0.1min。

4.4 脱气逆时针旋开Purge阀，单击【instrument】菜单,选择【More Quat Pump】项下“control”, 在“pump”这栏中选择“On”,泵开始运行。

设置“solvents”一栏中相应参数，将试验中所用到的管道逐一脱气，直至管内（由溶剂瓶到泵入口）无气泡为止所需时间，3ml/min冲洗大约需5min～10 min ,,完成后选择“off” , 单击OK键关泵，顺时针旋紧Purge阀。

4.5 平衡色谱柱单击【instrument】菜单,选择【Set up Instrument Method】项下“Quat Pump”, 在“solvents”一栏将试验中要用到的有机相通道（甲醇/乙腈）设置为100%，并将“Flow”从低流速逐级设为1ml/min，在“pump”这栏中选择“On”,泵开始运行，冲洗约10min钟后，设定与测试方法相同的柱流速和流动相比例平衡色谱柱(梯度采用起始流动相比例)，冲洗色谱柱，直至基线走平，一般需要30 min ～60 min。

1 使用前1.1 保持贮液瓶清洁，对专用贮液瓶应定期清洁；用试剂瓶作贮液瓶时，要经常更换。

1.2 定期（如半个月）在稀硝酸溶液中超声、清洁过滤器，保持过滤器畅通无阻。

1.3 使用HPLC试剂和新蒸二次蒸馏水作流动相，所使用的溶剂其截止波长一定要低于检测波长，对不是HPLC级的试剂要进行过滤（HPLC试剂出厂前已用0.02µm滤膜过滤）。

对流动相一定要脱气。

1.4 每天开始使用仪器，注意放空排气，确保泵头、流动池以及其它流路系统中无气泡存在。

1.5 保持仪器使用环境20℃-30℃，湿度30%-70%。

2 使用中2.1 珍惜保护色谱柱，避免柱头突然产生大的波动，扰动损伤柱床。

如避免泵启动过速、升压过快、样品阀搬动过慢所造成的柱压力的波动。

2.2 采用保护（警戒）柱，延长柱寿命。

如污染物堆积于保护柱柱头，造成柱压升高，柱效下降，峰型变差时，卸下用强溶剂反冲后再用或更换新保护柱。

2.3 避免超负荷进样，对250*4.6mm的柱子，绝对进样量应不超过100µg。

在灵敏度允许的前提下，应尽量将试样浓度降低，减少绝对进样量（进样体积可保持不变），这是保持HPLC 柱性能持久良好的重要举措之一。

2.4 经常用强溶剂冲洗柱子，将柱内强保留组分及时洗脱出。

反相柱用异丙醇-二氯甲烷（1:1）冲洗，正相（硅胶柱）用纯甲醇或异丙醇冲洗，时间均不少于1h。

2.5 以硅胶为基质的柱子，如C-18、C-8等，要控制好流动相的pH值，一般不要低于2.5，不高于7.0。

2.6 尽量用流动相溶解样品，一是避免出现拖尾峰、怪峰，二是避免试样在系统中由于溶解度降低而析出。

2.7 对于阻塞或受伤严重的柱子，必要时，可卸下不锈钢滤板，超声洗去滤板阻塞物，对塌陷污染的柱床进行清除、填充、修补工作，此举可使柱效恢复到一定程度（80%），有继续使用的价值。

2.8 色谱仪检测器输出和积分仪（处理机）要匹配，要合理设置参数如斜率、半峰宽、阈值、AUFS值、衰减等。

Agilent 1260 LC型高效液相色谱仪标准操作规程一、目的：建立Agilent 1260 LC型高效液相色谱仪标准操作规程，保证正确使用。

二、适用范围：适用于Agilent 1260 LC型高效液相色谱仪标准操作。

三、职责：研发部对本标准的实施负责。

四、正文：1 仪器组成及电源：1.1 仪器组成：本仪器由四元泵、真空脱气机、DAD检测器、安捷伦化学工作站组成。

1.2 电源：泵为110V稳压电源，检测器为220V稳压电源，工作站为220V稳压电源。

1.3开机运行前，更换溶剂瓶中的流动相，若管道为第一次使用，先用针管排空各管道中的气泡。

2 仪器硬件开启：自上而下或自下而上顺序开启各模块（真空脱气机、四元泵、自动进样器、VWD检测器、荧光检测器），打开电源指示灯，指示灯亮，显“绿色”；状态指示灯指示当前的状态，各模块进行自检（自动进样器的门板必须关上）。

3安捷伦化学工作站的操作：3.1开机运行步骤3.1.1 待各模块自检完成后，双击“仪器1联机”图标，化学工作站自动与1260LC通讯，进入工作站画面，各模块的软件图标均为绿色。

3.1.2从“视图”菜单中选择“方法和运行控制”画面，点击”视图”菜单中的”样品视图”、”系统视图”、“命令行”，来调用所需界面（或直接从“视图”菜单中选择“全部菜单”来调用全部界面。

3.1.3把流动相放入溶剂瓶中。

3.1.4打开“Purge”阀，点击泵图标，点击“设置泵”，进入泵编辑画面，设置流速为3-5ml/min，点击“确定”，则系统开始排空管道内的气泡，切换通道继续排空，直至所有要用的通道无气泡为止。

3.1.5点击泵图标，选“控制”选项，选中“关闭”关泵，关闭“Purge”阀。

3.1.6点击泵图标，设置流速冲洗柱子。

3.1.7点击泵下面的瓶图标，输入溶剂的实际体积和瓶体积，点击“确定”。

3.2数据采集方法编辑3.2.1从“方法”菜单中选择“编辑完整菜单”项，选中除“数据分析”外三项，点击“确定”，进入下一画面。

目的：建立1260型液相色谱仪使用清洁维护保养操作规程。

范围：1260型液相色谱仪。

责任人：质量管理部经理、化验室主任、化验员。

内容：1. 开机准备：1.1启动计算机：打开计算机电源，登陆 windows操作系统。

1.2启动液相：打开各模块电源。

待各模块自检完成后(各模块右上角指示灯为黄色或者无色)，双击“EZChrom Elite”图标，或者“开始->所有程序->Chromatgraphy-> EZChrom Elite”。

1.3开启工作站：工作站打开，点击“控制”。

打开仪器控制视图：选择“控制->仪器状态”，即可显示仪器控制视图。

视图模块右上角状态灯颜色说明：无色：未开电源或者模块准备就绪黄色：模块未准备就绪绿色：正在进样分析红色：模块出错所有模块红色，仪器有漏液工作站图形颜色说明：绿色：模块准备就绪黄色：模块未准备就绪蓝色：正在进样分析红色：出错或者不能联机灰色：此模块没启用2.进样2.1配置流动相：将流动相装入溶剂瓶中。

设置溶剂瓶参数，在溶剂瓶图形上单击鼠标左键，出现图形，点击“瓶填充”设置溶剂瓶中流动相实际体积。

冲洗流动相管路：旋开溶液排空阀。

左键单击“流速”，设置“流速”为5ml/min。

2.2开启模块：单击每个模块右下角的按钮，可以单独启动模块或者单击检测器按钮灯未点亮，检测器图形为黄色或者单击右键“控制->打开”按钮，启动全部模块，检测器灯也将点亮。

2.3监视基线：点击按钮或者“视图->在线信号”打开“在线图谱”。

点击“改变”按钮，选择“可选信号”中需要监视的信号，“添加”到“选定信号中”。

调整“窗口”中“X 周范围”，如需要画“0”点基线，请选择“画零线”。

调整 Y 轴“Y 轴范围”与“偏移量”或者选择“Y 轴自动调整”来选择合适的监视图形。

2.4平衡色谱柱、进样分析：关闭溶液排空阀(确认泵流量为 1ml/min)，监视压力基线，等待平稳后，可以进样采集分析。

Agilent 1260液相色谱仪+VWD+DAD+FLD检测器操作、维护和期间核查规程1 目的：为保证仪器的正常使用及测量结果的真实可靠特制定本规程。

2 范围：本规程适用于Agilent 1260液相色谱仪测定食品、保健食品、食品添加剂等样品时的操作、维护和期间核查。

3 职责：仪器使用人按本规程操作仪器和作好使用登记。

仪器责任人负责监督仪器的使用、保管、维护与保养和期间核查。

仪器设备管理员负责仪器的综合管理。

4 仪器组成Agilent 1260高效液相色谱仪由真空脱气机、四元泵、自动进样器、柱温箱、VWD、DAD、FLD检测器及OPENLAB CDS工作站组成5 操作规程5.1 开机前准备准备好流动相并安装色谱柱。

将水相放入A/D瓶，有机相放到溶剂瓶B/C，同时配制10%的异丙醇/水溶液以备柱塞清洗用。

5.2开机5.2.1 打开计算机：打开计算机电源，登陆Windows操作系统。

5.2.2启动工作站：打开Agilent 1260各模块（脱气机，四元泵，自动进样器，柱温箱，检测器）左下方的电源开关，液相各模块进入自检，右下方的指示灯不同颜色闪烁几下，最后变成橘黄色或无色，启动完成。

点击屏幕左下角“开始”，选择“所有程序（P）”，选择“Agilent Technologies”选择“Open LAB”，选择OpenLABControl，或双击桌面图标，则会进入到下面的界面：下面步骤如果已经配置过，则不需要操作通过点击菜单左上方的，可以分别创建位置和仪器，得到如下界面编制人/起草人：审核人：批准人：输入相关信息，注意仪器类型一栏要选择Agilent LC System，输入完后点击确定。

出现如下界面选定刚刚创建的仪器名称，点击“配置仪器”，选择“配置模块”，注意不要选择“使用经典驱动程序”。

如果仪器中包括DAD、FLD，则需要选择“3D光谱评估”。

点击确定编制人/起草人：审核人：批准人：选择“是”，来配置仪器选择IP地址，输入仪器IP，默认地址为192.168.254.11 。

Agilent 1260（四元泵）高效液相色谱仪使用、清洁及维护保养操作规程Agilent 1260（四元泵）高效液相色谱仪使用、清洁及维护保养操作规程1目的建立1260（四元泵）高效液相色谱仪使用、清洁及维护保养操作规程，规范人员操作。

2 适用范围适用于Agilent（四元泵）高效液相色谱仪的使用与维护。

3 责任与监督检验人员负责执行本规程，部门负责人监督本规程的实施。

4 规程细则4.1仪器原理高效液相色谱法系采用高压输液泵将规定的流动相泵入装有填充剂的色谱柱，对供试品进行分离测定的色谱方法。

注入的供试品，由流动相带入色谱柱内，各组分在柱内被分离，并进入检测器检测，由积分仪或数据处理系统记录和处理色谱信号。

4.2仪器操作4.2.1系统组成：本系统由四元梯度泵、VWD检测器、自动进样器、柱温箱及Openlab Chemstation工作站和台式电脑等组成。

4.2.2操作前准备：4.2.2.1流动相的选择分类：组成分——单组分和多组分极性-极性、弱极性、非极性常用溶剂：甲醇、水、乙腈、乙醇、乙酸乙酯、四氯化碳等。

（溶剂最好为HPLC级，水为纯化水）其中多采用二元或多元组合溶剂作为流动相，通过调节各组分的比例改变流动相的极性，已达到最佳的分离效果，对于部分情况还可以加入缓冲盐，调节出峰时间和达到改善峰型的效果。

4.2.2.2流动相的选择为了除去流动相中的杂质，保护系统和色谱柱，在流动相使用完，装入新的溶剂前应使用抽滤瓶对溶剂进行过滤。

4.2.2.3流动相的超声与脱气为了除去溶解在流动相中的气泡，降低基线噪音，在HPLC开机前应把各溶剂瓶在超声机中超声10-15min左右。

对于溶解在流动相中的极微气体，安捷伦1260HPLC四元泵中集合了脱气机，可以进一步对混合后的流动相进行脱气处理。

4.2.2.4流动相冷却流动相在超声机中长时间超声后，由于水分子振动摩擦，使水温上升，因此流动相瓶中的溶剂也会被加热。

Agilent 1260（四元泵）高效液相色谱仪使用、清洁及维护保养操作规程Agilent 1260（四元泵）高效液相色谱仪使用、清洁及维护保养操作规程1目的建立1260（四元泵）高效液相色谱仪使用、清洁及维护保养操作规程，规范人员操作。

2 适用范围适用于Agilent（四元泵）高效液相色谱仪的使用与维护。

3 责任与监督检验人员负责执行本规程，部门负责人监督本规程的实施。

4 规程细则4.1仪器原理高效液相色谱法系采用高压输液泵将规定的流动相泵入装有填充剂的色谱柱，对供试品进行分离测定的色谱方法。

注入的供试品，由流动相带入色谱柱内，各组分在柱内被分离，并进入检测器检测，由积分仪或数据处理系统记录和处理色谱信号。

4.2仪器操作4.2.1系统组成：本系统由四元梯度泵、VWD检测器、自动进样器、柱温箱及Openlab Chemstation工作站和台式电脑等组成。

4.2.2操作前准备：4.2.2.1流动相的选择分类：组成分——单组分和多组分极性-极性、弱极性、非极性常用溶剂：甲醇、水、乙腈、乙醇、乙酸乙酯、四氯化碳等。

（溶剂最好为HPLC级，水为纯化水）其中多采用二元或多元组合溶剂作为流动相，通过调节各组分的比例改变流动相的极性，已达到最佳的分离效果，对于部分情况还可以加入缓冲盐，调节出峰时间和达到改善峰型的效果。

4.2.2.2流动相的选择为了除去流动相中的杂质，保护系统和色谱柱，在流动相使用完，装入新的溶剂前应使用抽滤瓶对溶剂进行过滤。

4.2.2.3流动相的超声与脱气为了除去溶解在流动相中的气泡，降低基线噪音，在HPLC开机前应把各溶剂瓶在超声机中超声10-15min左右。

对于溶解在流动相中的极微气体，安捷伦1260HPLC四元泵中集合了脱气机，可以进一步对混合后的流动相进行脱气处理。

4.2.2.4流动相冷却流动相在超声机中长时间超声后，由于水分子振动摩擦，使水温上升，因此流动相瓶中的溶剂也会被加热。

优胜美特制药有限公司&浙江巨泰药业有限公司文件名称文件编制及管理规程文件编号颁发部门研究所替代生效日期起草人审核人批准人起草日期审核日期批准日期--------药物研究所--------版本号生效日期变更项目, 简述修订原因及内容00010203定期审核部门/人员份数分发号一、目的制定Agilent 1260型高效液相色谱仪操作维护规程，使操作维护规范化，保证检测结果准确可靠。

二、适用范围本规程适用于Agilent 1260型高效液相色谱仪的操作维护。

三、职责QC对本规程的实施负责，项目主管、研发总监对本规程实施进行监督。

四、程序内容4.1仪器配置本仪器由梯度泵，自动进样器，柱温箱，VWD检测器或DAD检测器和操作软件工作站组成。

4.2操作前的准备4.2.1流动相的制备用色谱纯的试剂配制流动相，必要时照紫外分光光度法进行溶剂检查，应符合要求；水为新鲜制备的重蒸馏水。

对规定pH值的流动相，应使用精密pH 计进行调节，配制好的流动相应通过0.45μm以下的滤膜滤过，用前脱气，应配制足量的流动相。

4.2.2 供试溶液的配制供试品用规定溶剂配成供试溶液。

定量测定时，对照品溶液和样品供试溶液均应分别配制2份。

供试溶液在注入色谱仪前，一般应经0.45μm以下的滤膜滤过，必要时，在配制供试溶液前，样品需经提取净化，以免对色谱系统产生污染。

4.2.3 检查上次使用记录和仪器状态，检查色谱柱是否适用于本次试验，色谱柱进出口位置是否与流动相的流向一致，原保存溶剂与现用流动相能否互溶，流动相的pH值与该色谱柱是否相适应，仪器是否完好，仪器的各开关位置是否处于关断的位置。

4.3仪器的操作4.3.1 接通电源，打开计算机及工作站其他各部件开关，约30秒后，各部件进入待机状态，指示灯为橘黄色，启动完成。

4.3.2用鼠标双击企业仪器启动程序界面上的Agilent1260仪器图标进入Agilent1260 LC在线色谱工作站，该页面主要由以下几个部分组成：4.3.2.1最上方为命令栏，依次为文件,控制,方法，分析，序列，数据等；4.3.2.2命令栏下方为快捷操作图标，如多个样品连续进行分析、新建方法序列、单个样品分析、调用文件、保存文件等；4.3.2.3左部有五栏从上到下依次为方法，序列，报告，控制，视图五栏。

Agilent 1260 HPLC高效液相色谱仪操作、维护保养和清洁规程4B509 负责人：武佳老师 6651821 开机1.1 打开电脑。

1.2 从泵到检测器依次打开液相色谱各个模块的电源。

1.3 双击桌面“仪器—联机”，进入联机界面。

1.4 排气：1.4.1 手动旋开泵处冲洗阀（逆时针旋转约半圈）。

1.4.2 右键单击“泵”图标区域，选择“方法…”选项，进入泵编辑画面，设流速：5ml/min（一般为3－5ml/min），点击“确定”。

1.4.3 右键单击“泵” 图标，点击“控制…”选项，选中“ON”，点击“确定”，则系统开始冲洗，直到管线内（由溶剂瓶到泵入口）无气泡为止，（一般为5分钟），切换通道继续冲洗，直到所有要用通道无气泡为止。

1.4.4 右键单击“泵” 图标，点击“方法…”选项，设流速：0ml/min，手动旋紧冲洗阀。

1.4.5 右键单击“泵”图标，点击“方法…”选项，按照方法要求选择合适比例的流动相，设流速：1.0ml/min。

1.4.6同理右键单击“柱温箱”，“检测器”图标，点击“方法…”选项，按照方法的要求设置温度，波长，点击“控制” 选项，“ON”打开柱温箱和检测器。

2 编辑方法2.1 点击“方法”－“编辑完整方法”开始编辑完整方法。

2.2 选中除“数据分析”外的三项，进入下一选项卡。

2.3 方法信息：在“方法注释”中加入方法的信息（如：This is for test!）。

进入下一选项卡。

2.4 泵参数设定：在“流速”处输入流量, 如1.0ml/min，停止时间：如10 min（该停止时间仅为做一个样品需要的时间），按照要求选择合适比例的流动相配比，如乙腈：水＝75：25，A为水，B为乙腈，则设置B：75％即可。

进入下一选项卡。

2.5 自动进样器参数设定: 选择“洗针进样”----可以输入进样体积和洗瓶位置，进入下一选项卡。

2.6 柱温箱参数设定: 在“温度”下面的空白方框内输入所需温度,如：40度。