安捷伦(agilent1260)高效液相色谱仪操作规程

安捷伦1260全自动高效液相操作规程
1.样品的准备：最好使用流动相溶解样品；进样前样品需过滤膜，除去悬浮不溶杂质。

2.流动相的选择和处理：使用高纯度试剂，所有含盐或含水溶剂必须膜过滤，100%色谱纯有机试剂，滤膜过滤后方可使用；流动相现配现用，剩余的流动相（水相）及时清理，实验间隔>2天，建议倒掉；任何溶剂，如果有可见悬浮物、菌丝，不可使用；更换流动相之前，必须事先阅读色谱柱的说明书；除非有说明，反相柱不得使用100%水。

3.开机注意事项：先开HPLC仪器开关、脱气机、泵和紫外检测电源；等各电源开启后（30s），打开在线软件；冲柱子和平衡时，暂不开紫外灯；平衡完后，打开紫外灯，设置梯度和波长或引用方法。

4.实验结束：C18反相柱应用色谱甲醇保存，不能含任何酸、盐；用甲醇替换通道，四个过滤头均存放于有机溶剂瓶中，以防长菌；流速调零，再关闭软件，最后依次关闭脱气机、泵和紫外检测器的电源。

Agilent 1260 液相色谱仪操作规程一、准备工作a)启动计算机：打开计算机,登陆windows操作系统。

b)启动工作站：开启Agilent 1260各模块电源，待Agilent 1260各模块自检完成后(各模块右上角指示灯为黄色或者无色)，点击LC1260(联机)。

c)开启工作站：进入工作站，点击“方法和运行控制”或者在“视图”中选择“方法和运行控制”。

打开仪器控制视图：选择“视图->系统视图”，即可显示仪器控制视图。

d)配置流动相：将流动相装入溶剂瓶中。

设置溶剂瓶参数，在溶剂瓶图形上单击鼠标左键，点击“溶剂瓶填充量”设置溶剂瓶中流动相实际体积，也可设定低体积关泵；溶剂要求：色谱级纯或优级纯乙腈或甲醇，二次蒸馏水。

e)冲洗流动相管路：反时针旋开泵模块上的溶液排空阀。

右键单击泵视图的空白处，选择“方法”，设置“流速”为5ml/min。

对于G1311X(四元泵)分别将A,B,C,D 四个通道设置“溶剂”为100%，冲洗至管线内无气泡为止; 设置溶剂比例为初始比例，“流速”为1ml/min，关闭Purge阀。

f)开启模块：开启模块：鼠标右键点击每个模块的空白处都会弹出提示框，选择“控制”即可在新的窗口中选择打开或者关闭各个模块。

也可在仪器视图中选择“打开”。

g)监视基线：点击“视图->在线信号”打开“在线图谱”。

h)平衡色谱柱、进样分析：监视压力和信号基线等待平稳后，可以进样采集分析。

二、数据采集方法编辑a)方法编辑：在“方法和运行控制”状态下，单击“方法”菜单，选择菜单中“新建方法”，调用化学工作站的默认方法DEF-LC.M ，选择“方法”菜单下的“编辑完整方法”，设置好泵参数、进样方式、柱箱温度、波长、积分参数等，即可开始编辑一个完整地方法。

b)方法存贮：在“方法和运行控制”状态下，单击“方法”菜单，选择菜单中“方法另存为”选项，方法以检测项目名存贮。

三、样品信息编辑a)运行单个样品：在“方法和运行控制”状态下，单击“运行控制”菜单，选择“样品信息”进行样品信息编辑。

安捷伦液相1260高效液相色谱操作规程1.前期工作查找资料（最好是外文文献）了解别人做该样品时常用的流动相和固定相。

如果还不清楚样品是什么物质，最起码也应该对其极性进行了解，为选择合适的流动相和固定相打好基础。

流动相选择注意事项：①避免使用高粘度的溶剂作为流动相；②所选用的流动相一定要与样品相溶；③各流动相之间可以很好的相溶；固定相选择注意事项：a.正相色谱正相色谱用的固定相通常为硅胶（Silica）以及其他具有极性官能团胺基团，如（NH2，APS）和氰基团（CN，CPS）的键合相填料。

由于硅胶表面的硅羟基（SiOH）或其他极性基团极性较强，因此，分离的次序是依据样品中各组分的极性大小，即极性较弱的组份最先被冲洗出色谱柱。

正相色谱使用的流动相极性相对比固定相低，如正已烷（Hexane），氯仿（Chloroform），二氯甲烷（Methylene Chloride）等。

b.反向色谱反向色谱用的填料常是以硅胶为基质，表面键合有极性相对较弱官能团的键合相。

反向色谱所使用的流动相极性较强，通常为水、缓冲液与甲醇、乙腈等的混合物。

样品流出色谱柱的顺序是极性较强的组分最先被冲洗出，而极性弱的组分会在色谱柱上有更强的保留。

常用的反向填料有：C18（ODS）、C8（MOS）、C4（Butyl）、C6H5（Phenyl）等。

2.准备工作①用于液相色谱分析的样品溶液使用前要经过0.15µm过滤器过滤，必须达到均匀而无颗粒的状态；②流动相一定要选用色谱级别的（最好是默克、飞世尔、时联等牌子的），并且在使用之前一定要使用0.4µm过滤器过滤，再用超声波清洗仪脱气处理20-30min；③在连接柱子和色谱仪之前，阀件或管路一定要清洗干净，（一般用异丙醇将管路清洗）3.仪器操作（一）将所选择的流动相加入相应的试剂瓶中：棕色瓶对应A 泵，该瓶中只能加双蒸水或娃哈哈纯净水；B、C、D泵根据需要添加。

注：若流动相中有水、乙腈最好现用现处理，不宜放置太长时间。

安捷伦1260高效液相色谱仪操作规程资料安捷伦1260高效液相色谱仪操作规程安捷伦1260高效液相色谱仪操作规程一、开机（1）打开计算机，登陆windows操作系统。

（2）打开主机各模块电源（从上至下），待各模块完成自检后，再双击桌面“仪器1联机”图标，进入化学工作站，从视图菜单中选择“方法和运行控制”画面。

（3）进行仪器配置，点仪器-仪器配置-选择所需模块-自动配置-输入IP地址：192.168.254.11。

把各流动相放入相应的溶剂瓶中。

（4）编辑方法。

方法-新建方法-方法-编辑完整方法-编辑各项（四元泵、TCC、VWD、仪器曲线参数设定，仪器参数默认），完成后，文件→方法另存为→编辑名称，保存方法。

（5）排气。

旋开排气阀（逆时针），右单击“四元泵”图标出现快捷键，点击“方法”设置泵流速，排气可设置1.2ml/min，l流量梯度100，也可5ml/min，流量梯度10。

一般冲洗3-5min，注意倾斜储液瓶使过滤头处的气体进入管道才可使气体排出，观察管路中气体位置，以其排净为目的。

关泵，关闭排气阀（顺时针）。

（注意：先开排气阀，再开泵，先关泵，后关排气阀）。

（6）在让液体进入柱子之前应将甁填充设置为实际值，谨防空进。

将泵流速设置1ml/min,用过渡液即缓冲液冲洗色谱柱20—30分钟。

（7）换流动相，待柱前压力基本稳定后，打开检测器，视图，在线信号，选择信号，观察基线情况。

二、数据采集信息编辑及进样（1）编辑样品信息：点“单次样品”小瓶，或点击运行信息-单次进样，设定操作者姓名，样品数据文件名，进样量等。

（2）编辑好样品信息后方可进样。

三、数据处理（1）打开桌面“仪器1脱机”，单击“数据分析”进入数据分析画面。

（2）从“文件”菜单中选择调用信号，选择您的数据文件名，单击确定。

（3）谱图优化。

从“图形”菜单中选择“信号选项”从范围中选择“自动量程”及合适的显示时间，或选择“自定义量程”调整，反复进行，直到图比例合适为止。

安捷伦1260高效液相色谱仪操作规程一、仪器介绍二、前期准备1.打开仪器电源，待仪器自检完成后，确保所有指示灯都亮起。

2.检查溶剂瓶的液位，确保足够的溶剂供给。

3.清洁好色谱柱并连接到系统中。

三、仪器启动1.打开色谱软件，选择相应的方法。

2.点击“系统”菜单，选择“启动系统”命令，系统开始进行初始化。

3.在系统初始化完成后，点击“准备”菜单，选择“准备系统”命令，系统开始进行一系列的自动化准备工作，比如冲洗和平衡柱子。

4.检查系统的压力和温度，确保在正常范围。

四、样品进样1.准备好待测样品和标准品。

2.将样品装入进样瓶中，注意不要超过瓶口。

3.将进样瓶插入样品进样系统中，按照方法设置的条件进行进样。

4.点击软件界面上的“进样”按钮，开始进样。

五、色谱柱选择1.根据待测样品的性质和分离特点，选择合适的色谱柱。

2.将色谱柱连接到色谱仪系统中。

3.检查色谱柱的压力和温度，确保在正常范围。

六、色谱条件设置根据分析方法的要求，设置好色谱条件，包括流量、温度、柱温等参数。

七、检测器设置1.根据需要选择合适的检测器，比如紫外检测器、荧光检测器等。

2.设置检测器的工作参数，如波长、增益、基线噪声等。

八、开始分析1.在样品进样后，点击软件界面上的“开始”按钮，开始进行色谱分析。

2.监控检测器输出的信号，根据需要可以对信号进行放大或调整。

九、结果解析1.根据所用方法的要求，对分析结果进行解析。

2.可以通过软件导出结果并进行后续处理。

十、仪器关机1.关闭色谱仪软件。

2.关闭色谱柱进样系统。

3.关闭色谱仪电源。

此为安捷伦1260高效液相色谱仪的操作规程，希望能对使用者提供一定的参考和帮助。

在操作过程中，应严格按照安全操作规范进行，并及时进行维护和保养，以保证仪器的正常运行。

安捷伦1260高效液相色谱仪操作规程安捷伦1260高效液相色谱仪操作规程一、开机（1）打开计算机，登陆windows操作系统。

（2）打开主机各模块电源（从上至下），待各模块完成自检后，再双击桌面“仪器1联机”图标，进入化学工作站，从视图菜单中选择“方法和运行控制”画面。

（3）进行仪器配置，点仪器-仪器配置-选择所需模块-自动配置-输入IP地址：192.168.254.11。

把各流动相放入相应的溶剂瓶中。

（4）编辑方法。

方法-新建方法-方法-编辑完整方法-编辑各项（四元泵、TCC、VWD、仪器曲线参数设定，仪器参数默认），完成后，文件→方法另存为→编辑名称，保存方法。

（5）排气。

旋开排气阀（逆时针），右单击“四元泵”图标出现快捷键，点击“方法”设置泵流速，排气可设置1.2ml/min，l流量梯度100，也可5ml/min，流量梯度10。

一般冲洗3-5min，注意倾斜储液瓶使过滤头处的气体进入管道才可使气体排出，观察管路中气体位置，以其排净为目的。

关泵，关闭排气阀（顺时针）。

（注意：先开排气阀，再开泵，先关泵，后关排气阀）。

（6）在让液体进入柱子之前应将甁填充设置为实际值，谨防空进。

将泵流速设置1ml/min,用过渡液即缓冲液冲洗色谱柱20—30分钟。

（7）换流动相，待柱前压力基本稳定后，打开检测器，视图，在线信号，选择信号，观察基线情况。

二、数据采集信息编辑及进样（1）编辑样品信息：点“单次样品”小瓶，或点击运行信息-单次进样，设定操作者姓名，样品数据文件名，进样量等。

（2）编辑好样品信息后方可进样。

三、数据处理（1）打开桌面“仪器1脱机”，单击“数据分析”进入数据分析画面。

（2）从“文件”菜单中选择调用信号，选择您的数据文件名，单击确定。

（3）谱图优化。

从“图形”菜单中选择“信号选项”从范围中选择“自动量程”及合适的显示时间，或选择“自定义量程”调整，反复进行，直到图比例合适为止。

（4）积分。

从“积分”中选择“自动积分”，若积分结果不理想，从菜单中选“积分事件”，更改数据为合适的“斜率灵敏度、峰宽、最小峰面积、最小峰高”，从“积分”中选择积分选项，则数据被积分，如积分结果不理想则修改相应的积分参数直到满意为止。

Agilent1260⾼效液相⾊谱仪操作规程1、⽬的确保Agilent 1260⾼效液相⾊谱仪的正确使⽤及管理。

2、范围研发分析中⼼实验室Agilent 1260⾼效液相⾊谱仪。

3、责任仪器使⽤者对本标准的实施负责。

4、内容4. 1 开机4.1.1打开计算机，进⼊Windows 画⾯。

4.1.2⾃下⽽上打开1260LC各模块电源，待各模块⾃检完成后，双击电脑桌⾯上LC1260-1(Online)图标，化学⼯作站⾃动与1260LC通讯，进⼊⼯作站画⾯。

4.1.3单击【View】菜单选择【Method and Run control】项，也可单击⼯作站画⾯左下⾓【Method and Run control】项，进⼊⽅法和运⾏控制窗⼝。

4.2 安装⾊谱柱正确安装实验所需的⾊谱柱，注意⾊谱柱流速箭头⽅向，试验过程中需检查是否存在漏液。

4.3 溶剂瓶体积设置把事先配好的流动相倒⼊相应的溶剂瓶中，单击【instrument】菜单,选择【More Quat Pump】项下【Bottle filling】，在参数设置处输⼊各溶剂瓶（A、B、C、D）内溶液实际体积和停泵体积，单击【OK】键，即可。

4.4 设置【Seal wash】单击【instrument】菜单,选择【More Quat Pump】项下“control”, 在seal wash这栏中选择“On”, 清洗功能开始运⾏，并设置清洗时间，每隔5min清洗0.1min。

4.4 脱⽓逆时针旋开Purge阀，单击【instrument】菜单,选择【More Quat Pump】项下“control”, 在“pump”这栏中选择“On”,泵开始运⾏。

设置“solvents”⼀栏中相应参数，将试验中所⽤到的管道逐⼀脱⽓，直⾄管内（由溶剂瓶到泵⼊⼝）⽆⽓泡为⽌所需时间，3ml/min冲洗⼤约需5min～10 min ,,完成后选择“off” , 单击OK键关泵，顺时针旋紧Purge阀。

安捷伦1260操作规程安捷伦（Agilent）1260操作规程一、仪器概述安捷伦1260高效液相色谱仪是一种用于液相色谱分析的仪器，具有高灵敏度、高分辨率和高效率的特点。

该仪器由进样器、色谱柱、色谱泵、检测器等组成。

二、仪器准备1. 确保仪器的电源已连接并接通。

2. 检查进样器、色谱柱和检测器是否安装正确。

3. 检查液相色谱仪的液相系统是否已进行适当的液相填充，以及是否有足够的溶剂。

三、方法设置1. 打开色谱软件，并选择合适的方法模板。

2. 根据分析需求，在方法设置中输入样品信息、进样量、流速等参数。

3. 设置检测器的波长、增益和测量范围。

四、进样操作1. 打开进样器的盖子，将待测样品加入样品瓶中。

2. 点击软件中的进样按钮，设置样品名称和进样量。

3. 将样品瓶放入进样器，并关闭盖子。

4. 点击软件中的进样按钮，开始进样。

5. 进样完成后，从进样器中取出样品瓶，并将它放入垃圾桶中。

五、色谱柱操作1. 打开色谱柱的阀门，并将柱端与色谱柱连接。

2. 检查色谱柱是否没有泄漏，如果有泄漏，则需重新连接。

3. 检查色谱柱的温度，确保它处于合适的温度范围内。

六、液相泵操作1. 打开液相泵的电源，并连接到电脑上。

2. 设置合适的流速和梯度梯度。

3. 点击软件中的启动按钮，开始进行分析。

七、数据分析1. 使用色谱软件进行数据采集和分析。

2. 根据需要选择适当的数据处理方法，如峰面积计算、定量分析等。

3. 导出分析结果并保存。

八、仪器维护1. 分析结束后，关闭液相泵、进样器、色谱柱和检测器等设备的电源。

2. 清洗色谱柱和进样器，保持其清洁。

3. 定期检查仪器的连接线和电源线是否有松动或损坏。

九、安全操作1. 在操作仪器时，注意安全，避免接触到有害化学品。

2. 在操作过程中，严禁随意触摸仪器或移动连接线。

3. 在操作过程中，如遇到异常情况，请及时停止分析并向管理员报告。

通过以上操作规程，可以有效地使用安捷伦1260高效液相色谱仪进行样品分析。

安捷伦1260高效液相色谱仪操作规程及使用注意事项安捷伦1260高效液相色谱仪操作规程及使用注安捷伦1260高效液相色谱仪操作规程及使用注意事项一、操作规程? 开机1(把经过滤、脱气的各流动相装入贮液瓶中。

2(打开计算机，打开主机各模块电源(从上至下)，再双击桌面“LC1260(联机)”图标，进入化学工作站。

3(旋开排气阀(逆时针)，右键单击“四元泵”图标出现快捷键，点击“方法”选项进入泵编辑画面。

将泵流量设为“5mL/min”，溶剂A设为“100%”，打开泵，排出管路中的气体，直到由贮液瓶到泵入口整个管路中无气泡为止，此过程约需要5min。

4(依次切换到溶剂B、C、D，分别排气。

? 数据采集1. 编辑样品信息:由“运行控制”进入“样品信息”，设定操作者姓名，样品数据，文件名等。

2. 编辑完整方法:从“方法”菜单中选择“编辑完整方法”项，单击“确定”进入“方法注释”，编辑好单击“确定”。

在“选择进样源”中选择“手动进样”单击“确定”，在“设置方法”中进行参数设定。

3. 四元泵参数设定:在“流速”处输入流量，如1mL/min，在“溶剂”处依据需要选中B、C、D并输入相应的百分数，在右侧注释栏中标明各溶剂的名称;设置“停止时间”和“后运行时间”,在“压力限值”处输入柱子的最大耐高压以保护柱子，在“时间表”添加编辑梯度。

4. TCC(柱箱)参数设定:在“温度”左侧下面的方框内输入所需温度,并选中它,右侧选中“与左侧相同”，使柱箱的温度左右一致。

5. VWD检测器参数设定:在“波长”右侧的空白处输入所需的检测波长，在“峰宽(响应时间)”下方点击下拉式三角框，选择合适的响应时间，再设置“停止时间”和“后运行时间”。

6. 仪器曲线设置:默认即可。

7. 关闭排气阀(顺时针)，冲洗色谱柱20~30min，待柱前压力基本稳定后，打开检测器灯，观察基线情况。

8. 将进样器转动手柄逆时针转到LOAD位置，在环路全量进样时(定量环体积为20uL)，用50~100 uL的液相进样针将2~5倍定量环体积的样品缓慢注入进样器中，再将进样器转动手柄顺时针方向迅速转到INJECT位置，将定量环中样品引入系统中。

标准操作规程STANDARD OPERATING PROCEDURE的准确性，特制定此规程。

2 范围：本规程适用于Agilent 1260高效液相色谱仪的使用、维护和保养。

3 责任者：化验员4 程序：4.1 开机4.1.1 打开计算机，输入用户名和密码，进入Windows 7画面。

4.1.2 打开1260 LC 各模块电源(不分先后)。

待各模块自检完成后，双击“仪器1联机”图标，化学工作站自动与1260 LC通讯，进入工作站。

（注意：在“仪器1脱机”关闭的情况下，“仪器1联机”方能打开。

）4.1.3 从“视图”菜单中选择“方法和运行控制”画面，来调用所需的界面，正常情况会默认进入此界面。

4.1.4 保对应溶剂瓶装入所要使用的流动相，左击“四元泵”模块下的“溶剂瓶”图标或右击“四元泵”下选择“瓶填充”，输入溶剂的实际体积和瓶总体积，可输入停泵的体积。

单击“确定”。

（注意：此操作很重要，以免气泡进入系统）。

4.1.5 轻轻旋开泵上的冲洗阀（缓缓旋开约1/4即可，不可用力太过）。

右击“四元泵”图标，出现参数设定菜单，单击“方法”选项，进入泵编辑画面。

设流量，从0 ml/min 逐渐变为3ml/min，溶剂A设到100%；单击“确定”。

右击“四元泵”图标，选择“控制”选项，选中“打开”，单击“确定”，则系统开始排气，直到管线内（由溶剂瓶到泵入口）无气泡为止；切换到通道同法继续排气，直到所有要用通道无气泡为止（只需排所用到的通道即可）。

4.1.6 右击“四元泵”图标，出现参数设定菜单，单击“方法”选项，进入泵编辑画面。

设流量为：0ml/min，单击“确定”，轻轻关闭排气阀（旋紧即可）。

4.2 数据采集方法、系列编辑：4.2.1 编辑完整方法：4.2.1.1 从“方法”菜单中选择“编辑完整方法”项，选中除“数据分析”外的三项，单击“确定”，进入下一界面“方法注释”。

4.2.1.2 方法信息：在“方法注释”中写入方法的相关信息。

一、开机1、开机前准备：流动相使用前必须过0.45um的滤膜（有机相的流动相必须为色谱纯；水相必须用新鲜注射用水，不能使用超过3天的注射用水，以防止长菌或长藻类）；把流动相放入溶剂瓶中。

A瓶：为水相B瓶：为有机相。

2、打开电脑，选Win 2000，进入Win 2000界面。

3、双击CAG Boodp server图标，放大CAG Boodp server小图标，出现窗口，5min 内打开液相各部件电源开关，等待1100广播信息后，表示通讯成功连接，关闭CAG Boodp serve窗口。

4、双击online图标，仪器自检，进入工作站。

该页面主要由以下几部分组成：——最上方为命令栏，依次为File，Run Control，Instrumen…等；——命令栏下方为快捷操作图标，如多个样品连续进行分析、单个样品进样分析、调用文件保存文件……等；——中部为工作站各部件的工作流程示意图；依次为进样器-输液泵-柱温箱-检测器-数据处理-报告；——中下部为动态监测信号；——右下部为色谱工作参数：进样体积、流速、分析停止时间、流动相比例、柱温、检测波长等。

4、从“View”菜单中选择“Method and control”画面。

二、编辑参数及方法1、开始编辑完整方法：从“Method”菜单中选择“New method”，出现DEF-LC.M，从“Method”菜单中选择“Edit entire method”，选择方法信息、仪器参数及收集参数、数据分析参数和运行时间表等各项，单击OK，进入下一画面。

2、方法信息：在“Method Comments”中加入方法的信息，如方法的用途等。

单击OK，进入下一画面。

3、泵参数设定：进入“Setup pump”画面，在“Flow” 处输入流量，如1ml/min；在“Solvent B”处输入有机相的比例如70.0，（A=100-B），也可在Insert 一行“Timetable”，编辑梯度；输入保留时间；在“Pressure Limits Max”处输入柱子的最大耐高压，以保护柱子。

标准安捷伦1260液相色谱仪操作规程安捷伦1260液相色谱仪操作规程一、仪器开机1、更换流动相（水需要超纯水，有机试剂需要色谱纯），其中水需要每次使用时更换，有机试剂长时间不用也需要更换2、开机：打开电脑、打开液相所有模块电源、点击电脑桌面上的工作站联机图标3、打开工作站上的所有电源，待其就绪（所有灯变绿）4、拧开排空阀，四元泵里设置流速5 ml/min，A 100%；3分钟后，设置B 100%；3分钟后设置流速至合适流速，关闭排空阀二、运行样品1、新建方法或调用已有方法2、设置方法参数四元泵：设置流速、流动相比例、采集时间，若需梯度则设置梯度，确定自动进样器（ALS）：设置进样量，确定柱温箱（TCC）：设置柱子温度，确定紫外检测器(VWD)：设置紫外波长，确定设置好后保存方法3、在线信号中点击“改变”，可添加泵的压力，以及VWD的信号4、等待系统平衡，所有灯变绿，泵的压力稳、VWD的信号稳定（约20分钟）5、进样：（1）单针进样：运行控制—样品信息，设置进样位置，保存路径等后运行方法（2）序列进样：序列—序列参数，编辑保存路径；序列—序列表，编辑序列表，然后运行序列6、待仪器自动停止分析（四元泵中已设置采集时间）或手动点击“停止”图标（四元泵中未设置采集时间）三、关机1、冲柱流动相中含缓冲盐：先用10%甲醇、90%水冲30分钟，再用90%甲醇、10%水冲30分钟（四元泵里设置比例）后关机流动相中不含缓冲盐：用90%甲醇、10%水冲30分钟（四元泵里设置比例）后关机2、关机关闭各模块，关闭仪器电源，关闭工作站，关闭电脑四、数据处理1、调用需要处理的信号2、自动积分，或者手动积分，删除不要的峰3、打印面积百分比结果，记录每个峰的峰面积、保留时间，在excel中用已知浓度（标准样品）的峰面积作工作曲线，得到工作曲线方程4、未知样品的峰面积来算得其浓度。

安捷伦1260高效液相操作规程及注意事项一开机1)打开主机各模块电源(从下至上),待各模块完成自检后,再双击桌面“仪器2联机”图标,进入化学工作站,2)把过滤白头放入流动相溶剂瓶中。

3)旋开排气阀(逆时针),右单击“四元泵”图标出现快捷键,点击“方法”选项进入泵编辑画面。

将泵流量从1mL/min梯度上升至5mL/min,排出管路中的气体2—3分钟,直到管线内由溶剂瓶到泵入口无气泡为止,查看柱前压力(若大于10bar,则应更换排气阀内过滤白头),关闭排气阀。

4)重复上述步骤,依此切换到B、C、D溶剂分别排气。

5)将泵的流量设到实验用流速,按照色谱柱使用说明用相应溶液冲洗色谱柱20—30分钟。

6)点击四元泵下面的瓶图标,输入溶剂的实际体积和瓶体积,点击“确定”。

7)把缓冲液换成流动相,待柱前压力基本稳定后,打开检测器灯,观察基线情况,进入平衡系统。

二数据采集方法编辑若已创建方法,可在“方法”菜单选择“调用方法”,选择相应的方法。

若无,需按下面步骤建立:(1)从“方法”菜单中选择“编辑完整方法”,钩选“方法信息”、“仪器/采集”、“运行时选项表”三项,点击确定;(2)出现“方法信息”对话框,如有需要可将方法的描述信息输入,也可选择不输入任何信息,点击确定;(3)泵参数设定:在“流量”处输入流量,如1ml/min,在“溶剂B”处输入80.0,(A=100-B-C-D) ,也可“插入”一行“时间表”,编辑梯度。

在“压力限”处输入柱子的最大耐高压,如300bar,以保护柱子。

点击“确定”进入下一参数设定。

(4)柱温箱参数设定:手动输入规定的温度即可。

(5)紫外检测器(VWD)参数设定:在“波长”下方的空白处输入所需的检测波长,如254nm,在“峰宽(响应时间)”下方点击下拉式箭头,选择合适的响应时间, 如>0.1min(2s)。

在“时间表”中可以“插入”一行,输入随时间切换的波长,如1min,波长=300nm。

安捷伦1260型高效液相色谱仪操作规程开机1.1 打开计算机，输入用户名和密码，进入Windows XP画面。

1.2 打开1260 LC 各模块电源(不分先后)。

待各模块自检完成后，双击“仪器2联机”图标，化学工作站自动与1260 LC通讯，进入工作站。

（注意：在“仪器2脱机”关闭的情况下，“仪器2联机”方能打开。

）1.3 从“视图”菜单中选择“方法和运行控制”画面，来调用所需的界面，正常情况会默认进入此界面。

1.4 确保对应溶剂瓶装入所要使用的流动相，左击“四元泵”模块下的“溶剂瓶”图标或右击“四元泵”下选择“瓶填充”，输入溶剂的实际体积和瓶总体积，可输入停泵的体积。

单击“确定”。

（注意：此操作很重要，以免气泡进入系统）。

1.5 轻轻旋开泵上的冲洗阀（缓缓旋开约1/4即可，不可用力太过）。

右击“四元泵”图标，出现参数设定菜单，单击“方法”选项，进入泵编辑画面。

设流量6ml/min，溶剂A设到100%；单击“确定”。

右击“四元泵”图标，选择“控制”选项，选中“打开”，单击“确定”，则系统开始排气，直到管线内（由溶剂瓶到泵入口）无气泡为止；切换到通道同法继续排气，直到所有要用通道无气泡为止（只需排所用到的通道即可）。

1.6 右击“四元泵”图标，出现参数设定菜单，单击“方法”选项，进入泵编辑画面。

设流量为：0ml/min，单击“确定”，轻轻关闭排气阀（旋紧即可）。

2. 数据采集方法、系列编辑：2.1 编辑完整方法：2.1.1. 从“方法”菜单中选择“编辑完整方法” 项，选中除“数据分析”外的三项，单击“确定”，进入下一界面“方法注释”。

2.1.2. 方法信息：在“方法注释”中写入方法的相关信息。

此项可忽略不写，单击“确定”，进入下一界面“选择进样源/位置”。

2.1.3. 自动进样器参数设定:选择“Als”的进样方式，单击“确定”，进入下一界面“设置方法”。

2.1.4. 方法参数设定：在“设置方法”界面选择“四元泵”选项，在“流量”处输入所需流量，如：1ml/min，在溶剂“B”、“C”、“D”处输入流动相所占比例(A=100-B-C-D)，也可在右侧“时间表”项下选择“添加”，编辑梯度。

Agilent 1260 LC型高效液相色谱仪标准操作规程一、目的：建立Agilent 1260 LC型高效液相色谱仪标准操作规程，保证正确使用。

二、适用范围：适用于Agilent 1260 LC型高效液相色谱仪标准操作。

三、职责：研发部对本标准的实施负责。

四、正文：1 仪器组成及电源：1.1 仪器组成：本仪器由四元泵、真空脱气机、DAD检测器、安捷伦化学工作站组成。

1.2 电源：泵为110V稳压电源，检测器为220V稳压电源，工作站为220V稳压电源。

1.3开机运行前，更换溶剂瓶中的流动相，若管道为第一次使用，先用针管排空各管道中的气泡。

2 仪器硬件开启：自上而下或自下而上顺序开启各模块（真空脱气机、四元泵、自动进样器、VWD检测器、荧光检测器），打开电源指示灯，指示灯亮，显“绿色”；状态指示灯指示当前的状态，各模块进行自检（自动进样器的门板必须关上）。

3安捷伦化学工作站的操作：3.1开机运行步骤3.1.1 待各模块自检完成后，双击“仪器1联机”图标，化学工作站自动与1260LC通讯，进入工作站画面，各模块的软件图标均为绿色。

3.1.2从“视图”菜单中选择“方法和运行控制”画面，点击”视图”菜单中的”样品视图”、”系统视图”、“命令行”，来调用所需界面（或直接从“视图”菜单中选择“全部菜单”来调用全部界面。

3.1.3把流动相放入溶剂瓶中。

3.1.4打开“Purge”阀，点击泵图标，点击“设置泵”，进入泵编辑画面，设置流速为3-5ml/min，点击“确定”，则系统开始排空管道内的气泡，切换通道继续排空，直至所有要用的通道无气泡为止。

3.1.5点击泵图标，选“控制”选项，选中“关闭”关泵，关闭“Purge”阀。

3.1.6点击泵图标，设置流速冲洗柱子。

3.1.7点击泵下面的瓶图标，输入溶剂的实际体积和瓶体积，点击“确定”。

3.2数据采集方法编辑3.2.1从“方法”菜单中选择“编辑完整菜单”项，选中除“数据分析”外三项，点击“确定”，进入下一画面。

安捷伦1260型高效液相色谱仪操作规程开机1.1 打开计算机，输入用户名和密码，进入Windows XP画面。

1.2 打开1260 LC 各模块电源(不分先后)。

待各模块自检完成后，双击“仪器2联机”图标，化学工作站自动与1260 LC通讯，进入工作站。

（注意：在“仪器2脱机”关闭的情况下，“仪器2联机”方能打开。

）1.3 从“视图”菜单中选择“方法和运行控制”画面，来调用所需的界面，正常情况会默认进入此界面。

1.4 确保对应溶剂瓶装入所要使用的流动相，左击“四元泵”模块下的“溶剂瓶”图标或右击“四元泵”下选择“瓶填充”，输入溶剂的实际体积和瓶总体积，可输入停泵的体积。

单击“确定”。

（注意：此操作很重要，以免气泡进入系统）。

1.5 轻轻旋开泵上的冲洗阀（缓缓旋开约1/4即可，不可用力太过）。

右击“四元泵”图标，出现参数设定菜单，单击“方法”选项，进入泵编辑画面。

设流量6ml/min，溶剂A设到100%；单击“确定”。

右击“四元泵”图标，选择“控制”选项，选中“打开”，单击“确定”，则系统开始排气，直到管线内（由溶剂瓶到泵入口）无气泡为止；切换到通道同法继续排气，直到所有要用通道无气泡为止（只需排所用到的通道即可）。

1.6 右击“四元泵”图标，出现参数设定菜单，单击“方法”选项，进入泵编辑画面。

设流量为：0ml/min，单击“确定”，轻轻关闭排气阀（旋紧即可）。

2. 数据采集方法、系列编辑：2.1 编辑完整方法：2.1.1. 从“方法”菜单中选择“编辑完整方法” 项，选中除“数据分析”外的三项，单击“确定”，进入下一界面“方法注释”。

2.1.2. 方法信息：在“方法注释”中写入方法的相关信息。

此项可忽略不写，单击“确定”，进入下一界面“选择进样源/位置”。

2.1.3. 自动进样器参数设定:选择“Als”的进样方式，单击“确定”，进入下一界面“设置方法”。

2.1.4. 方法参数设定：在“设置方法”界面选择“四元泵”选项，在“流量”处输入所需流量，如：1ml/min，在溶剂“B”、“C”、“D”处输入流动相所占比例(A=100-B-C-D)，也可在右侧“时间表”项下选择“添加”，编辑梯度。

安捷伦（agilent1260）高效液相色谱仪操作规程1.目的：规范Agilent 1260高效液相色谱仪维修、保养、校正操作。

2.适用范围：本公司化验室Agilent 1260高效液相色谱仪的维修、保养。

3.有关责任：化验室精密仪器室4.引用标准：仪器说明书及Agilent化学工作者现场操作培训教材5.规程内容：5.1开机前准备5.1.1根据实验要求配制流动相，须经0.45μm滤膜过滤，之后再进行脱气处理，使用前必须用超声波振荡l0-15min，按无机相和有机相分开别装入溶剂瓶A（装有洗盐装置，最好固定盛放无机盐水相）、B中；对照品和样品溶液进样前要经0.45μm滤膜过滤。

5.1.2若流动相中含有缓冲盐,则必须以每分钟2～3滴的速度虹吸10%的异丙醇水冲洗seal-wash，以防有盐结晶在泵头产生而损坏泵头。

5.2.采样前准备5.2.1打开计算机,进入Windows 系统, 从上到下依次打开各模块电源。

5.2.2待各模块自检完成后，双击桌面上的“仪器1联机”图标，将自动进入化学工作站画面。

5.2.3从“视图”菜单中选择“方法和运行控制”画面,也可单击工作站画面左侧的“方法和运行控制”项，进入方法和运行控制窗口。

5.2.4打开Purge阀（逆时针），右击“泵”图标出现参数设定菜单单击“设定泵”选项进入泵编辑画面。

5.2.5设“流量”逐步增大流速至5ml/min ，A通道设到100%，单击“确定”。

5.2.6单击“泵”图标，出现参数设定菜单，单击“泵控制“选项选中“开”单击“确定”则系统开始Purge，直到管路内由溶剂瓶A到泵入口无气泡为止；切换B通道(B通道设到100%)继续Purge直到所有通道管路内均无气泡为止。

(查看柱前压力，若大于10Bar，则应更换排气阀内滤芯/过滤白头。

)5.2.7将泵的流量设到0.5ml/min，若使用双泵则应设定溶剂配比，如A=80%，B=20%；关闭排气阀（顺时针）；再将流量设到0.8ml/min，2分钟后设定至方法所需流速，冲洗色谱柱20-30min。

Agilent 1260（四元泵）高效液相色谱仪使用、清洁及维护保养操作规程Agilent 1260（四元泵）高效液相色谱仪使用、清洁及维护保养操作规程1目的建立1260（四元泵）高效液相色谱仪使用、清洁及维护保养操作规程，规范人员操作。

2 适用范围适用于Agilent（四元泵）高效液相色谱仪的使用与维护。

3 责任与监督检验人员负责执行本规程，部门负责人监督本规程的实施。

4 规程细则4.1仪器原理高效液相色谱法系采用高压输液泵将规定的流动相泵入装有填充剂的色谱柱，对供试品进行分离测定的色谱方法。

注入的供试品，由流动相带入色谱柱内，各组分在柱内被分离，并进入检测器检测，由积分仪或数据处理系统记录和处理色谱信号。

4.2仪器操作4.2.1系统组成：本系统由四元梯度泵、VWD检测器、自动进样器、柱温箱及Openlab Chemstation工作站和台式电脑等组成。

4.2.2操作前准备：4.2.2.1流动相的选择分类：组成分——单组分和多组分极性-极性、弱极性、非极性常用溶剂：甲醇、水、乙腈、乙醇、乙酸乙酯、四氯化碳等。

（溶剂最好为HPLC级，水为纯化水）其中多采用二元或多元组合溶剂作为流动相，通过调节各组分的比例改变流动相的极性，已达到最佳的分离效果，对于部分情况还可以加入缓冲盐，调节出峰时间和达到改善峰型的效果。

4.2.2.2流动相的选择为了除去流动相中的杂质，保护系统和色谱柱，在流动相使用完，装入新的溶剂前应使用抽滤瓶对溶剂进行过滤。

4.2.2.3流动相的超声与脱气为了除去溶解在流动相中的气泡，降低基线噪音，在HPLC开机前应把各溶剂瓶在超声机中超声10-15min左右。

对于溶解在流动相中的极微气体，安捷伦1260HPLC四元泵中集合了脱气机，可以进一步对混合后的流动相进行脱气处理。

4.2.2.4流动相冷却流动相在超声机中长时间超声后，由于水分子振动摩擦，使水温上升，因此流动相瓶中的溶剂也会被加热。

安捷伦1260型高效液相色谱仪操作规程一、开机1、开机前准备：流动相使用前必须过0.45um的滤膜（有机相的流动相必须为色谱纯；水相必须用新鲜注射用水，不能使用超过3天的注射用水，以防止长菌或长藻类）；把流动相放入溶剂瓶中。

A瓶：为水相B瓶：为有机相。

2、打开电脑，选Win 2000，进入Win 2000界面。

3、双击CAG Boodp server图标，放大CAG Boodp server小图标，出现窗口，5min 内打开液相各部件电源开关，等待1100广播信息后，表示通讯成功连接，关闭CAG Boodp serve窗口。

4、双击online图标，仪器自检，进入工作站。

该页面主要由以下几部分组成：——最上方为命令栏，依次为File，Run Control，Instrumen…等；——命令栏下方为快捷操作图标，如多个样品连续进行分析、单个样品进样分析、调用文件保存文件……等；——中部为工作站各部件的工作流程示意图；依次为进样器-输液泵-柱温箱-检测器-数据处理-报告；——中下部为动态监测信号；——右下部为色谱工作参数：进样体积、流速、分析停止时间、流动相比例、柱温、检测波长等。

4、从“View”菜单中选择“Method and control”画面。

二、编辑参数及方法1、开始编辑完整方法：从“Method”菜单中选择“New method”，出现DEF-LC.M，从“Method”菜单中选择“Edit entire method”，选择方法信息、仪器参数及收集参数、数据分析参数和运行时间表等各项，单击OK，进入下一画面。

2、方法信息：在“Method Comments”中加入方法的信息，如方法的用途等。

单击OK，进入下一画面。

3、泵参数设定：进入“Setup pump”画面，在“Flow” 处输入流量，如1ml/min；在“Solvent B”处输入有机相的比例如70.0，（A=100-B），也可在Insert 一行“Timetable”，编辑梯度；输入保留时间；在“Pressure Limits Max”处输入柱子的最大耐高压，以保护柱子。