肝细胞癌螺旋CT增强表现与组织VEGF表达的相关性

2011年3月第49卷第9期肝细胞癌螺旋CT增强表现与组织VEGF表达的相关性*陈金春１陈海斌１李小洁１温新东２鲁君敏３喻迎星４（１．瑞安市人民医院红十字分院，浙江瑞安３２５２００；２．温州医学院附属第一医院，浙江温州３２５０００；３．绍兴市第四人民医院，浙江绍兴３１２０００；４．浙江省中医医院，浙江杭州３１００００）［摘要］目的研究肝细胞癌螺旋CT增强表现与组织VEGF表达的相关性。

方法回顾性分析57例手术病理证实的肝细胞癌患者不同临床分期和螺旋CT增强后各影像学特征（形态、大小、包膜、强化特征、有无癌栓和淋巴结转移）及其癌组织VEGF表达阳性率，并进行统计学分析。

结果Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期肝癌患者其组织VEGF表达总阳性率分别为53.9%、78.6%、100.0%，三期间比较差异显著（P＜0.05），染色强度Ⅰ期＜Ⅱ期＜Ⅲ期（P＜0.05）；巨块型、单发结节型、多发结节型、弥漫型和包膜完整、不完整、无包膜和环状强化、均匀强化、不均匀强化和有癌栓、无癌栓和有淋巴转移、无淋巴转移者组织VEGF 表达阳性率分别为66.7%、74.2%、100.0%、100.0%和25.0%、80.0%、100.0%和25.0%、54.5%、90.5%和100.0%、75.0%和100.0%、70.7%，各组内比较差异显著（P＜0.05），多发结节型、弥漫型比较无明显差异（P＞0.05）；染色强度巨块型＜单发结节型＜多发结节型＜弥漫型（P＜0.05），包膜完整＜不完整＜无包膜（P＜0.05），环状强化＜均匀强化＜不均匀强化（P＜0.05），有癌栓＞无癌栓（P＜0.05），有淋巴转移＞无淋巴转移（P＜0.05）；≤2cm、＞2～≤5cm、＞5～≤10cm、＞10cm者组织VEGF表达阳性率分别66.7%、79.3%、78.6%、72.7%，其总阳性率及染色强度比较均无明显差异（P＞0.05）。

结论肝细胞癌螺旋CT增强后良、恶性征象与癌组织VEGF表达有明显相关性，恶性程度高，癌组织VEGF表达阳性率就越高，染色强度越强，检测肝癌组织VEGF表达可初步了解肝癌的恶性程度。

［关键词］肝细胞癌；螺旋CT；增强表现；VEGF［中图分类号］R445［文献标识码］B［文章编号］1673-9701（2011）09-18-03近年来随着免疫学、分子生物学和细胞生物学等基础研究的发展与渗透，对肝细胞癌（hepatocellular Carcinoma，HCC）的认识已经深入到分子和基因水平，从分子和基因水平解释肿瘤的组织病理学特征成为可能，将有助于解释HCC影像学表现的多样性和复杂性[1]。

本研究回顾性分析57例HCC不同临床分期和螺旋CT增强后的影像学表现与癌组织血管内皮生长因子（vas-cular endothelial growth factor，VEGF）表达阳性率的关系，以探讨检测肝癌组织VEGF表达对肝癌生物学行为、预后判断的可行性和临床价值。

１资料与方法１．１一般资料选择2007年1月10日～2009年8月30日我院（瑞安市人民医院）收治的肝癌患者57例，其中男51例，女6例。

年龄28～72岁，平均（46.8±14.3）岁，中位年龄48岁。

有慢性肝炎病史37例（占64.91%），伴肝硬化病7例（占12.28%，上腹部钝痛4例（占7.02%），AFP升高49例（占85.96%），CEA升高27例（占47.37%），CA199升高25例（占43.86%），黄疸6例（10.53%）。

临床分期：Ⅰ期13例，Ⅱ期28例，Ⅲ期16例。

组织类型：梁状型（tra-becular type）31例，假腺管型（pseudoglandular type）12例、实体型（compaet type）9例，纤维硬化型（seirrhous type）5例。

Edmondson 组织分级：Ⅰ级12例；Ⅱ级27例；Ⅲ级15例；Ⅳ级3例。

其中52例经手术病理确诊，5例经CT引导穿刺活检细胞学证实。

１．２螺旋ＣＴ检查方法和观察指标1.2.1设备及对比剂使用PHIL IPS16排螺旋CT机扫描，造影剂用扬子江药业集团有限公司生产的碘海醇注射液（商品：名欧苏，批号：07012106，规格30gI/100mL），用量75～100mL （1.5mL/kg体重）；经肘前静脉用压力注射器单相注入，注射速度3mL/s。

1.2.2CT扫描技术和参数1）患者准备：扫描前对患者进行呼吸训练，并使用腹带，以减少因呼吸运动造成的层面変化。

2）三期扫描：造影前常规上腹部扫描，注入造影剂后分三期扫描（动脉期延迟18～25s，静脉期延迟50～60s，平衡期延迟120s）。

采集螺距为1，层厚0.5cm，层间距0.5cm。

1.2.3螺旋CT观察项目观察病灶分型、大小、形态、包膜、有无癌栓及淋巴结转移等影像学特征。

由2位主治医生读片，取其统一的意见，大小测量取平均值。

１．３组织ＶＥＧＦ表达检测1.3.1检测方法和试剂所有组织标本均经体积平分，10％甲醛固定、脱水，石蜡包埋，4μm切片，采用免疫组化S-P法检测肝癌组织中VEGF的表达，鼠抗人VEGF抗体试剂盒购自郑州宝赛生物工程公司。

1.3.2VEGF阳性结果判断阳性结果细胞浆呈棕色，胞核蓝紫色。

以高倍镜（×400）观察5个视野，每个视野观察100个细胞。

染色强度分为阴性（－）：细胞不显色或背景深，染色不清晰；弱阳性（+）：25％～50％细胞显色；中度阳性（++）：50％～70％细胞显色，着色较深；强阳性（+++）：＞75％细胞显色，着色深。

１．４统计学处理数据采用SPSS13.0统计软件包处理，等级资料用卡方检验，样本率的比较用方差检验，P＜0.05两者有显著差异。

＊浙江省温州市卫生局科技项目（项目编号：２００８０９２）·临床研究·18中国现代医生CHINA MODERN DOCTOR2011年3月第49卷第9期表１肝癌组织中ＶＥＧＦ表达与临床分期的关系［ｎ（％）］Ⅰ期１３１（７．７）１（７．７）５（３８．５）６（４６．２）７（５３．９）＊Ⅱ期２８６（２１．４）７（２５．０）９（３２．１）６（２１．４）２２（７８．６）＊Ⅲ期１６９（５６．３）６（３７．５）１（６．３）０（０．０）１６（１００．０）＊临床分期例数组织ＶＥＧＦ表达＋＋＋＋＋＋－总阳性注：三期总阳性率及染色强度比较，＊Ｐ＜０．０５；三期染色强度比较，Ｐ＜０．０５２结果２．１肝癌组织中ＶＥＧＦ表达与临床分期的关系肝癌组织中VEGF 表达阳性率为45/57例（78.1%），Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期肝癌组织中VEGF 表达总阳性率分别为91.7%、54.7%、28.4%，三期间比较差异显著（P ＜0.05）；染色强度Ⅰ期＜Ⅱ期＜Ⅲ期（P ＜0.05），见表1；VEGF 阴性和阳性表达分别见图1、2。

２．２肝细胞肝癌螺旋ＣＴ增强表现与组织ＶＥＧＦ表达的关系不同形态、包膜形状、强化特征、有无癌栓及转移者各自组织VEGF 表达总阳性率比较差异显著（P ＜0.05）；多发结节型与弥漫型总阳性率比较无显著差异（P ＞0.05），染色强度巨块型＜单发结节型＜多发结节型＜弥漫型（P ＜0.05），包膜完整＜不完整＜无包膜（P ＜0.05），环状强化＜均匀强化＜不均匀强化（P ＜0.05），有癌栓＞无癌栓（P ＜0.05），有淋巴转移＞无淋巴转移（P ＜0.05）；不同肿块大小其组织VEGF 表达总阳性率及染色强度间比较无明显差异（P ＞0.05），见表2；肝癌螺旋CT 增强表现见图3。

３讨论３．１肝癌临床分期与组织ＶＥＧＦ水平的相关性VEGF 广泛分布于人和动物体内的大脑、肾脏、肝脏、脾脏、胰腺和骨骼等组织，正常成人体内维持在一个低水平，只有在生理需要或病理情况下，如胚胎形成、骨骼生长等及肿瘤形成过程中出现VEGF 的过度表达，促使血管生成急剧增加[2]。

An 等[3]研究发现，VEGF 在肝癌细胞和组织中的内皮表面均有表达，表达水平为正常肝组织的7倍，VEGF 由肝癌细胞和肝实质细胞分泌，是调节局部血管生成的重要因子。

肝癌组织中的VEGF 的表达主要是VEGF121和VEGF165，VEGF165可作为HCC 术后复发的独立指标[4]。

研究发现Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期肝癌组织中VEGF 表达总阳性率分别为91.7%、54.7%、28.4%，三期间比较差异显著（P ＜0.05）；染色强度Ⅰ期＜Ⅱ期＜Ⅲ期（P ＜0.05）。

VEGF 对肿瘤的影响机制可能与以下因素有关：①促进肿瘤血管生成，VEGF 能增加血管通透性，促进血管内皮细胞增殖，促进血管支持物生长；②促进肿瘤淋巴管生长，参与此功能的主要为VEGF-C 、VEGF-D 及受体VEGFR-3。

③影响肿瘤细胞动力，VEGF 可诱导凋亡蛋白Bcl-2的表达，直接影响肿瘤细胞凋亡。

④VEGF 可诱导造血肝细胞的分化和成熟，增强肿瘤细胞对放疗的耐受性，影响免疫功能。

由此可见，VEGF 与肝癌组织的生长、浸润、转移有密切关系。

３．２肝癌螺旋ＣＴ增强后表现与组织ＶＥＧＦ表达的相关性随着螺旋CT 双期扫描等技术的应用和发展，不仅使肝癌的早期发现和诊断率得到很大提高，而且使治疗方案的选择、疗效的判断及预后的估计等有了更重要的依据[5]。

影像学表现的多样性由肿瘤的生长方式决定，肿瘤的生长依赖新生血管的形成，肿瘤血管的形成是肿瘤生长和转移的病理基础。

研究发现肝癌不同形状、包膜、强化特征、有无癌栓、转移与组织VEGF 表达的阳性率有显著差异（P ＜0.05），多发结节型、弥漫型比较无明显差异（P ＞0.05），其染色强度巨块型＜单发结节型＜多发结节型＜弥漫型（P ＜0.05），包膜完整＜不完整＜无包膜（P ＜0.05），环状强化＜均匀强化＜不均匀强化（P ＜0.05），有癌栓＞无癌栓（P ＜0.05），有淋巴转移＞无淋巴转移（P ＜0.05）；血管内皮细胞生长因子与肿瘤新生血管形成及肿瘤细胞生长密切相关，恶性程度越高，其VEGF 表达的阳性率越高，染色强度越强。

但肝癌肿块的大小与组织VEGF 表达的关系各家说法不一。

2002年朱月莉[6]用免疫组化SP 法将肝癌患者分两组≤5cm 22例，＞5cm 19例，VEGF 蛋白阳性率分别为77.3％和42.1％，两者有显著差异（P ＜0.05）。

2004年蒋道荣[7]报道，用免疫组化法发现肝癌组织中VEGF 阳性率为63.9%，而VEGF 表达的水平与肿瘤直径无明显相关性。

2008年董敬东等[8]也用免疫组化法肝癌分两组≤5cm 15例，＞5cm 14例，VEGF 蛋白阳性率分别为60％和71.4％，两者无显著差异（P ＞0.05）。

我们根据肿瘤大小分≤2cm 、＞2～≤5cm 、＞5～≤10cm 、＞10cm 四组[9]，其组织VEGF 表达总阳性率及染色强度比较均无明显差异（P ＞0.05）。