高胰岛素-正葡萄糖钳夹技术在比格犬中的建立-董立厚

高胰岛素-正常血糖钳夹试验1966年Andres依据葡萄糖胰岛素的负反馈原理设计了葡萄糖钳夹技术，经过不同的静脉通路，同时输入外源性胰岛素和葡萄糖，将血糖维持在设定的稳态，该技术可对胰岛素的分泌及作用进行定量分析。

1979年DeFronzo等对该技术作了详细研究并应用于人体,从此推动了葡萄糖钳夹技术在世界范围内的应用。

根据不同的研究目的，葡萄糖钳夹技术分为高血糖葡萄糖钳夹、正常血糖葡萄糖钳夹及低血糖葡萄糖钳夹等不同方法。

高胰岛素正常血糖葡萄糖钳夹技术由于其定量准确、可重复性好等优点，已成为评价机体胰岛素敏感性的“金标准”。

该平台由于能很好地排除内源胰岛素及升糖因素的影响，并能同时客观地反映外源胰岛素制剂的药代动力学(PK)/药效动力学(PD)特点，在研发新型胰岛素制剂以及仿制胰岛素产品时也成为目前国际公认的可靠方法。

在临床试验中，高胰岛素正常血糖葡萄糖钳夹技术是评价外源性胰岛素制剂的客观平台，该平台本身成功构建及良好维持是该技术的关键。

目前在药物研发中，使用高胰岛素正葡萄糖钳夹技术存在一些常见的问题，需要在今后应用该技术中加以关注。

2、关注要点2.1 成功建立高胰岛素正葡萄糖钳夹技术的条件：(1)形成稳定高胰岛素状态,达到完全抑制肝脏内源性葡萄糖输出的目的;(2)将血糖钳夹在正常水平,变异系数小于5%;(3)试验中内源性胰岛素分泌被抑制,升糖激素无明显释放。

2.2 高胰岛素正常血糖葡萄糖钳夹技术在临床试验中的应用需关注如下几点：2.2.1 血浆胰岛素保持优势浓度，充分抑制肝糖输出在规定时间内,使血浆胰岛素水平迅速升高并保持于优势浓度(一般接近100mU/L)，人体内胰岛素浓度高于生理水平时肝糖输出可以被充分抑制，葡萄糖输注率(GIR)方能真实反映外周组织的葡萄糖利用率,使得客观评价胰岛素制剂的药效动力学参数成为可能。

2.2.2 监测血糖间隔时间每5分钟监测一次静脉血糖值，根据血糖值调整葡萄糖液输注率,使受试者血糖值维持在目标值，变异系数应小于5%。

胰岛素钳夹实验技巧胰岛素钳夹实验技巧背景介绍胰岛素是一种重要的激素，能够调节血糖水平。

胰岛素钳夹实验是用来研究胰岛素对血糖水平的影响的常用实验方法。

本文将介绍一些胰岛素钳夹实验的技巧，帮助你顺利进行此实验。

实验前准备在进行胰岛素钳夹实验之前，需要做一些准备工作：•动物模型的选择：根据实验的目的和动物种类的特点，选择合适的动物模型（如小鼠或大鼠）。

•实验仪器的准备：确保实验仪器（如钳夹仪、采血针等）处于良好工作状态。

•试剂的准备：准备好胰岛素溶液和其他相关试剂，确保其纯度和浓度符合实验要求。

实验步骤1.动物麻醉：根据实验需要，使用适量的麻醉剂使动物处于麻醉状态，确保操作过程安全无虞。

2.控制血糖水平：在实验开始前，测量动物的空腹血糖水平，并确保其在正常范围内。

如有需要，进行必要的调整（如胰岛素注射或葡萄糖注射等）。

3.建立动脉和静脉通路：使用适当的方法建立动脉和静脉通路，以便进行胰岛素钳夹实验时的血液采样和胰岛素注射。

4.基础血样采集：在实验开始前，收集一定量的基础血样，用于后续血糖测量。

5.胰岛素注射：根据实验设计，进行定量的胰岛素注射，并确保注射技术准确。

6.钳夹实验：在胰岛素注射后，使用钳夹仪逐渐提高血糖水平，监测血糖动态变化，并记录相关数据。

7.血样采集与血糖测量：根据实验设计，在不同时间点采集血样，并使用合适的方法测量血糖水平。

8.数据处理与分析：对实验得到的数据进行统计分析，并根据需要进行图表展示。

实验注意事项在进行胰岛素钳夹实验时，需要注意以下事项：•操作精确：实验过程中的所有操作都需要准确、精细。

特别是胰岛素注射和钳夹操作，都需要严格控制药物和力度的大小。

•实验时间安排：根据实验的需要和动物的特性，合理安排实验的时间和顺序，以减少动物的压力和疲劳。

•安全措施：在实验过程中，严格遵守实验室的安全规范，包括佩戴好防护手套、眼镜等，并妥善处理实验废弃物。

•数据记录：及时、准确地记录实验中得到的数据和观察结果，以备后续分析和讨论。

口服胰岛素肠溶胶囊的药代动力学与药 效动力学研究实验
一、高胰岛素--正葡萄糖钳夹技术
（一）、历史背景 1966年Andres等根据葡萄糖一胰岛素的负反馈原理，创立了一种可定量分析胰岛
素分泌及作用的方法——葡萄糖钳夹技术。1979年De Fronzo等对该技术从理论上作了
详细的阐述，并给予技术指导，推动了世界范围的广泛应用。萄糖钳夹技术根据研究 目的的不同又划分为高糖钳、正糖钳及低糖钳等不同方法。 （二）、技术原理 1、葡萄糖一胰岛素负反馈体系 血糖升高时，胰岛素分泌增加，并通过增加摄取、储存和利用葡萄糖等方式，下调 血糖；血糖下降，胰岛素分泌降低，胰高血糖素等升糖激素增加，促进代谢分解，加 速糖原分解和葡萄糖异生作用，升高血糖。
升高，而后以较低的速度持续输注维持一定血胰岛素浓度。在静脉通道对侧前肢取血 测量血糖，每隔5min取血测量血糖一次，通过调节葡萄糖输注率以维持血糖水平恒定。 经一段时间后、血糖恒定维持于平衡状态。给胰岛素制剂后,葡萄糖输注率随着胰岛素 产生的作用变化，以此来评价胰岛素制剂的药效动力学特征。
3、正糖钳技术指标 ① 钳夹稳定状态下血糖(SSPG)：SSPG需控制在正常空腹血糖±10％范围内。 ② 钳夹稳定状态下胰岛素(SSINS)：较高的血浆外源性胰岛素水平才能抑制内源性肝 糖及胰岛素的生成，满足实验要求。 ③ 血糖变异系数(CVBG)：钳夹实验期间CVBG可反映钳夹技术的稳定性与准确性。
（三）、特点
Hale Waihona Puke 1、避免了内源性胰岛素缺乏(如糖尿病患者)及低血糖(如胰岛素耐量试验中)对胰岛素
敏感性测定的影响。 2、将内源性干扰减至最小，增加了实验的可控性与准确性，降低了结果的变异性。 （四）、缺点 1、不同受试者的应激反应和血管紧张度等诸多因素会对稳态的建立产生一定的影响。 2、该技术复杂耗时、费用昂贵，实验中需频繁取血。 （五）、实验方法 1、建立静脉输液通道及采血通道 在前臂静脉或正中静脉穿刺并留置导管建立输液通道，用于输入胰岛素和葡萄糖 溶液。葡萄糖和胰岛素输注通道经三通管与静脉通道联接。采血通道由输液器、三通

血糖钳技术评价两种胰岛素抵抗动物模型丁世英;申竹芳;陈跃腾;谢明智【期刊名称】《中国糖尿病杂志》【年(卷),期】2001(9)5【摘要】目的建立血糖钳方法,检验所建高脂、高果糖饮食诱发的胰岛素抵抗模型以及谷氨酸钠(monosodiumglutamate,MSG)所致的肥胖性大鼠胰岛素抵抗模型.方法腹腔注射小剂量链脲霉素(streptozotocin,STZ),30mg/kg轻度损伤胰岛β细胞,造成大鼠糖耐量异常后加喂高果糖高脂肪饲料,并饮用10%果糖水,造成胰岛素抵抗.吡格列酮20mg/kg@d-1治疗后,以血糖钳方法测定葡萄糖输注速率(glucose infusion rate,GIR);另一模型为具胰岛素抵抗特征的MSG肥胖性大鼠.新生Wistar大鼠出生第二天起皮下注射L-谷氨酸钠4g/kg@d 1,连续7天,造成肥胖.10月龄时,用中药复方千金黄连丸加味提取物,相当于生药10g/kg@d-1治疗,并以血糖钳方法测定对葡萄糖输注速率的影响,且分析了反映胰岛素敏感性的GIR值同血脂、脂肪重、体重、血胰岛素水平及胰岛素敏感指数等指标的相关性.结果两模型组同相应正常对照组相比,胰岛素敏感性均明显降低,给药后均有显著提高.且GIR反映的敏感性同胰岛素敏感指数呈较好的正相关,而与空腹血胰岛素水平、血甘油三酯、血总胆固醇以及腹脂重、腹脂/体重值呈负相关.结论高脂高果糖饮食诱发的大鼠模型及MSG肥胖性大鼠均具有明显的胰岛素抵抗,分别以吡格列酮以及中药复方提取物治疗后,抵抗性均有明显改善.【总页数】4页(P286-289)【作者】丁世英;申竹芳;陈跃腾;谢明智【作者单位】中国医学科学院中国协和医科大学药物研究所;中国医学科学院中国协和医科大学药物研究所;中国医学科学院中国协和医科大学药物研究所;中国医学科学院中国协和医科大学药物研究所【正文语种】中文【中图分类】R587【相关文献】1.苦瓜精粉对高血糖动物模型血糖影响的实验研究 [J], 谢金鲜;李爱媛;周芳;梁炜杰;韦月琼;李岳2.胰岛素钳试验评定两种胰岛素抵抗大鼠模型 [J], 司晓晨;程海波;卞慧敏;尚文斌3.两种处方饮食对2型糖尿病患者血糖及胰岛素抵抗的影响 [J], 洪忠新;华鑫4.红芪多糖对四氧嘧啶高血糖动物模型血糖、糖耐量和肿瘤坏死因子-α水平的影响 [J], 王丽娟;金智生;马骏;王志旺;吴国泰5.血糖钳方法评价调脂降糖片对2型糖尿病大鼠胰岛素抵抗的增敏作用 [J], 孔令东;朱良争;徐海珍;宋菊敏因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

关于高胰岛素正常葡萄糖钳夹技术的建立【摘要】目的：建立能精确测定胰岛素敏感性的高胰岛素正常葡萄糖钳夹技术. 方法：应用高胰岛素��正常葡萄糖钳夹技术对10名正常体质量、正常糖耐量的健康志愿者进行方法学研究. 结果：钳夹试验开始后，血浆胰岛素浓度迅速上升并维持在100 mU/L左右，空腹血糖维持在正常水平(5.0 mmol/ L)，试验过程中内源性胰岛素和肝糖源输出得到完全抑制，血液升糖激素浓度 (包括皮质醇和生长激素) 与基础值相比无明显上升. 钳夹稳态期，葡萄糖输注率为(11.56±1.74) mg/(kg・min). 结论：高胰岛素�舱�常葡萄糖钳夹技术已成功建立. 在高胰岛素�舱�常葡萄糖稳态条件下，葡萄糖输注率等于机体的葡萄糖利用率，葡萄糖输注率可以作为评价组织对外源性胰岛素敏感性的指标.【关键词】胰岛素葡萄糖钳制技术胰岛素抗药性胰岛素敏感性0引言高胰岛素�舱�常葡萄糖钳夹技术 (hyperinsulinemic��euglycemic clamp) 是目前世界上公认评价机体胰岛素敏感性的金标准，已在基础及临床医学研究领域中得到广泛应用，并且已扩展应用于许多病理状态、药物或非药物防治措施的机制研究中. 建立和开展高胰岛素�舱�常葡萄糖钳夹技术对于糖尿病基础和临床研究具有重要意义，但由于此方法操作复杂、价格昂贵且费时，国内仅有数家医院开展此技术. 我院内分泌科自2006年引进葡萄糖钳夹系统以来，根据DeFronzo等［1］所建立经典钳夹技术的原理并结合国内外近年来的研究进展，成功建立了高胰岛素�舱�常葡萄糖钳夹技术.1对象和方法1.1对象10 (男5，女5)名正常健康志愿者，年龄27.0 ± 4.4 (23~37)岁，体质量指数20.3 ± 1.2 (19.2~23.2) kg/m2，无糖尿病、高血压病家族史，血脂谱正常，肝、肾功能及血尿酸浓度均在正常范围，未服用任何可能影响胰岛素敏感性的药物，口服75 g葡萄糖耐量试验均为正常糖耐量者 (按2003年ADA标准).试验前3 d受试者每日碳水化合物饮食不少于200 g，体质量保持稳定. 试验前向受试者解释试验的性质、目的及可能发生的不良反应，所有受试者均自愿参加试验并签署知情同意书.1.2方法受试者检查前空腹12 h，早8:00到达检查室，测量身高、体质量，排空小便后清醒静卧于检查床30 min后开始试验. 先分别于受试者双侧前臂行静脉穿刺，利用三通管组成2条静脉通道. 一侧用于输注胰岛素及200 mL/L葡萄糖液 (连接于Injectomat C IS和INCA��ST容积泵，德国Fresenius公司)；另一侧用于试验中采血 (将此侧前臂置于60℃恒温仪中，以保证静脉血动脉化［2］)，不采血时缓慢静滴生理盐水，采血前临时关闭输液器.钳夹开始10 min内以4 mU/（kg・min）速率输注人胰岛素溶液 (诺和灵R，40000 U/L，丹麦Novo Nordisk公司) 使血液胰岛素浓度迅速升高，随后110 min内以2 mU/（kg・min）速率持续输注. 在此期间每5 min测一次静脉血糖值(BIOSEN5030血糖分析仪，葡萄糖氧化酶电极法，德国)，根据血糖值调整200mL/L葡萄糖液输注率，使受试者血糖值维持在5.0 mmol/L左右. 每10 min采静脉血测定血清胰岛素浓度，每30 min测定血清C肽、皮质醇和生长激素浓度 (化学发光法，药盒购自天津德普诊断产品有限公司). 试验结束时收集试验期间尿标本，测定尿糖值 (测定方法同血糖测定). 所有血标本均经离心分离血清，-80℃冰箱保存至同批测定.统计学处理：试验结束后计算各受试者试验中血糖值均数(x)、标准差(s)及变异系数(CV)，计算试验中每10 min的平均葡萄糖输注率(glucose infusion rate， GIR)、机体总葡萄糖利用率 (钳夹开始 20~120 min内平均GIR) 和最大葡萄糖利用率 (钳夹稳态期最后30 min平均GIR). 全部数据均采用SPSS 13.0软件处理，计量资料以x±s表示，不同性别之间比较采用两独立样本t检验.2结果全部受试者均成功完成钳夹试验，检查结束后均未发生低血糖反应及其他异常反应，静脉穿刺部位未发生感染及静脉血栓形成. 结果显示高胰岛素正常葡萄糖钳夹技术成功建立.2.1外源性胰岛素�财咸烟谴�谢稳态形成基础血浆葡萄糖浓度为(4.26±0.39) mmol/L，在高胰岛素�舱�常葡萄糖钳夹过程中，血糖稳定在(4.99±0.15)mmol/L，稳态期血糖CV为(3.09±1.29)%. 基础血清胰岛素浓度为(3.81±2.20) mU/L，钳夹试验开始后血清胰岛素浓度迅速升高，于10 min时达到高峰 (133.70±21.91)mU/L，随后维持在(91.57±13.86)mU/L 至试验结束. 基础血清C肽浓度为(1.92±0.34)μg/L，整个钳夹过程中C肽浓度为(1.32±0.35)μg/L，各个时点的C肽浓度与基础状态相比呈逐渐下降趋势 (图1). 钳夹稳态期与基础状态相比较，升糖激素如血皮质醇、生长激素的浓度无明显上升，且均呈逐渐下降的趋势 (图2).2. 2高胰岛素�舱�常葡萄糖钳夹过程中的血糖及葡萄糖输注率变化钳夹试验过程中受试者血糖浓度稳定在(4.99±0.15)mmol/L，试验开始40 min内GIR上升较快，达到(9.45±3.17)mg/（kg·min），此后上升趋于平缓，在90~120 min时均保持在稳态 (图3). 钳夹开始20~120 min内GIR为(10.75±2.38)mg/（kg・min），稳态期GIR为(11.56±1.74)mg/（kg・min），不同性别之间GIR ［男(10.53±1.57)mg/（kg・min），女(12.25±1.59)mg/（kg・min）］差异无统计学意义（P=0.12）.3讨论1966年Andres依据糖代谢特点设计了高胰岛素�舱�常葡萄糖钳夹技术，1979年DeFronzo等［1］对该技术作了详细研究并应用于人体，从此推动了葡萄糖钳夹技术在世界范围内的应用，成为目前公认评价机体胰岛素敏感性的“金标准”. 本研究按照DeFronzo等［1］的方法进行设计，结果显示形成稳定高胰岛素状态，达到完全抑制肝脏内源性葡萄糖输出的目的；血糖钳夹在正常水平，变异系数小于5%；试验中内源性胰岛素分泌被抑制，升糖激素无明显释放，符合高胰岛素�舱�常葡萄糖钳夹技术成功建立的标准［1］. 正常人体内胰岛素浓度高于生理水平时肝糖输出可以被完全抑制，故钳夹试验中当达到高胰岛素稳态时外源性葡萄糖输注率 (GIR) 等于外周组织的葡萄糖利用率 (M值)，此时GIR可作为评价机体胰岛素敏感性的指标［1］. 贾伟平等［3］建立扩展高胰岛素��正常葡萄糖钳夹技术时稳态期胰岛素浓度为(63.00±4.86) mU/L时肝糖产生为0，故计算M值时可忽略肝糖的产生. 当对存在胰岛素抵抗的患者进行正常葡萄糖钳夹试验时，经典试验中采用的胰岛素输注率所达到的稳态期胰岛素浓度并不能完全抑制肝糖输出［4］.研究表明，无论是糖尿病患者还是其他胰岛素抵抗严重的患者，当采用较快的胰岛素输注率使稳态期胰岛素浓度达到200 mU/L以上时，肝糖输出几乎被完全抑制，可以避免肝糖输出影响试验结果［5- 6］. 本组10名受试者钳夹试验时均采用2 mU/（kg・min)的胰岛素输注率，稳态期胰岛素浓度与DeFronzo经典试验结果类似［1］. 不同实验室采用相同胰岛素输注率时稳态期胰岛素浓度相差较大，可能与试验具体操作、胰岛素测定方法及受试者空腹胰岛素浓度不同等因素有关. 钳夹稳态期胰岛素浓度不同，GIR值也不同，一般稳态期胰岛素浓度越高，GIR值越大［1， 3， 7-10］. 当对存在胰岛素抵抗的患者进行正常葡萄糖钳夹试验时，稳态期胰岛素浓度较高，评价胰岛素敏感性时可采用稳态期胰岛素浓度加以较正［11］.综上所述，高胰岛素�舱�常葡萄糖钳夹试验中达到胰岛素�财咸烟谴�谢稳态后的外源性葡萄糖输注率等于外周组织的葡萄糖利用率，葡萄糖输注率(GIR) 可作为评价机体胰岛素敏感性的指标. 近年来钳夹试验中微量精确输液泵和计算机技术的应用大大简化了试验操作难度并提高了成功率，高胰岛素正常葡萄糖钳夹技术将在糖尿病的预测、糖尿病发病机制研究等方面发挥重要作用.【参考文献】［1］ DeFronzo RA， Tobin JD， Andres R. Glucose clamp technique: A method for quantifying insulin secretion and resistance ［J］. Am J Physiol， 1979， 237 (3): E214-E223.［2］ Abumrad NN， Rabin D， Diamond MP， et al. Use of a heated superficial hand vein as an alternative site for the measurement of amino acid concentrations and for the study of glucose and alanine kinetics in man ［J］. Metabolism， 1981， 30 (9): 936-940.［3］贾伟平，陈蕾，项坤三，等. 扩展高胰岛素�舱�葡萄糖钳夹技术的建立［J］. 中华内分泌代谢杂志， 2001， 17 (5): 268-271.［4］ Dunaif A， Segal KR， Futterweit W， et al. Profound peripheral insulin resistance， independent of obesity， in polycystic ovary syndrome ［J］. Diabetes， 1989，38 (9):1165-1174.［5］ Parvanova AI， Trevisan R， Iliev IP， et al. Insulin resistance and microalbuminuria: A cross��sectional， case control study of 158 patients with type 2 diabetes and different degrees of urinary albumin excretion ［J］. Diabetes， 2006，55 (5):1456-1462.［6］ Inzucchi SE， Maggs DG， Spollett GR， et al. 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高胰岛素-正葡萄糖钳夹技术的研究进展
董立厚;宋海峰
【期刊名称】《中国新药杂志》
【年(卷),期】2007(16)19
【摘要】高胰岛素-正葡萄糖钳夹技术(简称正糖钳技术)巳被公认为测定胰岛素敏感性的金标准,并在糖尿病及其治疗药物的研究中得到日益广泛且深入的应用.该技术通过同时输注外源性胰岛素与葡萄糖,升高血浆胰岛素水平,同时维持血糖在基础稳态水平.该技术减少了内源性因素对实验的影响,具有准确可靠、重复性好、避免低血糖发生等优点.现介绍该技术的原理、方法、应用等,以促进该技术在我国的进一步完善、发展及应用.
【总页数】4页(P1561-1564)
【作者】董立厚;宋海峰
【作者单位】军事医学科学院放射与辐射医学研究所,北京,100850;军事医学科学院放射与辐射医学研究所,北京,100850
【正文语种】中文
【中图分类】R977.15
【相关文献】
1.高胰岛素-正葡萄糖钳夹技术的护理问题分析与对策 [J], 苏志红;朱利勇;孙林丽;曹海梅;李鹏洲
2.高胰岛素-正葡萄糖钳夹技术静脉置管方法的改进 [J], 周利影;宋立媛;吴效科;王
荣
3.应用扩展高胰岛素-正葡萄糖钳夹技术检测肥胖伴糖耐量异常个体的胰岛素敏感性 [J], 包玉倩;贾伟平;陈蕾;陆俊茜;朱敏;陆蔚;项坤三
4.高胰岛素-正葡萄糖钳夹技术检测原发性高血压患者胰岛素敏感性的护理 [J], 潘小美;李丽娟;徐安芬
5.高胰岛素-正葡萄糖钳夹技术检测原发性高血压患者胰岛素敏感性的护理 [J], 潘小美; 李丽娟; 徐安芬
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实验性Beagle犬肥胖症并2型糖尿病模型的建立付唆林;朱惠明;郑丽【期刊名称】《世界华人消化杂志》【年(卷),期】2011(19)24【摘要】目的:为肥胖症和2型糖尿病的手术和内镜介入治疗研究建立一种大型动物实验模型.方法:选用10只健康♂成年Beagle犬,随机分成两组,对照组5只全程(16wk)给予标准饲料喂养,模型组5只全程给予高脂高热量饲料喂养,并于第8周给予小剂量链脲佐菌素(STZ)静脉注射.定时检测动物体质量、体长、空腹血糖、静脉葡萄糖实验(IVGTT)、血脂等与肥胖症及2型糖尿病相关临床指标.结果:在第8周,模型组平均体质量是16.9kg±0.8kg,较对照组体质量(14.8kg±1.03kg)有显著升高(P<0.01),Lee指数与对照组比较也有显著差异(P<0.05);模型组血清胰岛素、C-肽较对照组明显上升(P<0.01).STZ注射后1wk,模型组空腹血糖明显高于对照组(P<0.05),IVGTT-2h血糖比注射前增高(143mg/dL±7.4mg/dLvs127mg/dL±4.2mg/dL,P<0.05),血清胰岛素、C-肽分泌比注射前明显下降(P<0.01).STZ注射后8wk,模型组空腹血糖显著高于对照组(P<0.01),IVGTT-2h血糖较注射前显著增高(323mg/dL±12.1mg/dLvs127mg/dL±4.2mg/dL,P<0.01).本实验模型组Beagle犬成模率为100%,实验期间Beagle犬未见死亡.结论:联合高脂高热量喂养和小剂量STZ注射可在Beagle犬上成功建立肥胖症并2型糖尿病动物模型,此模型接近人类2型糖尿病的发病过程和代谢特征,可用于肥胖症和2型糖尿病的手术和内镜介入治疗的研究.【总页数】6页(P2534-2539)【关键词】2型糖尿病;肥胖症;动物模型;Beagle犬【作者】付唆林;朱惠明;郑丽【作者单位】暨南大学临床医学博士后流动站;暨南大学第二附属医院消化科;南昌大学第三附属医院消化科【正文语种】中文【中图分类】R286.715【相关文献】1.Beagle犬下颌重度牙槽嵴萎缩动物模型的建立 [J], 吕影涛;苏媛;马伟群;刘淑英;徐平平;;;;;2.Beagle犬下颌重度牙槽嵴萎缩动物模型的建立 [J], 吕影涛;苏媛;马伟群;刘淑英;徐平平3.放疗后颌骨骨内种植的Beagle犬动物模型的建立 [J], 黄元瑾;刘曙光;杨勃;刘伟珍;张迪4.手术建立Beagle犬遥测动物模型的经验体会 [J], 齐卫红;李欣;张琳;王三龙5.犬实验性颈总动脉动脉瘤的血管内支架治疗系列研究之一:犬实验性颈总动脉动脉瘤模型建立 [J], 丁永红;戴大英;陈克敏;罗其中;张善生因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

胰岛素抵抗程度的评估胰岛素抵抗是一种广泛存在的现象，但不同个体胰岛素抵抗的程度，即对胰岛素的敏感性可有很大的差异，即存在明显的异质性。

在临床和科研工作中，常需要评价机体的胰岛素敏感性，即评价胰岛素抵抗的程度。

目前开展的评估方法主要分为两大类：精确检测机体胰岛素敏感性的方法和简易评价机体胰岛素敏感性的方法。

（一）精确检测机体胰岛素敏感性的方法1.正常血糖-高血浆胰岛素钳夹技术葡萄糖钳夹技术（简称钳夹技术）是目前评价机体胰岛素敏感性的黄金标准。

该技术于1979年由Defronzo等首创。

钳夹技术包括两种类型：高血糖-正常血浆胰岛素钳夹技术（高糖钳夹技术）和正常血糖-高血浆胰岛素钳夹技术（正糖钳夹技术）。

高糖钳夹技术主要用于定量评价胰岛B细胞对葡萄糖的敏感性，即B细胞功能。

而正糖钳夹技术则用于评价胰岛素外周靶组织对胰岛素的敏感性。

正糖钳夹技术是目前直接测定机体胰岛素敏感性的最精确的方法。

其原理是在实验中通过输注外源性胰岛素人为造成外源性高胰岛素血症状态（100 μU/ml），同时输注葡萄糖溶液，通过不断测定血糖（每5 min 1次）并调节葡萄糖输注的速度，使血糖始终保持在正常血糖水平。

当血糖保持在正常水平并保持稳定时（即稳定状态），葡萄糖输入的速度即等于机体周围组织对葡萄糖的摄取或廓清率（M值），输入的葡萄糖愈多，表明组织对胰岛素愈敏感，反之表明胰岛素抵抗愈严重。

正糖钳夹技术包括常规和扩展两种亚型，扩展型需采用同位素示踪技术和骨骼肌活检技术以精确评价外周靶组织的胰岛素刺激的葡萄糖摄取和利用。

由于钳夹技术费时较多，一般需要6～8 h，并需要采用20次以上，同时需要精确输注泵、快速血糖检测仪（不使用而是直接采血）等特殊设备，费用昂贵，因此不能大规模地用于临床和流行病调查，一般在科研中使用。

目前国内在上海、北京和重庆等地已有开展。

2．微小模型法微小模型法（minimal model）又称Bergman 微小模型法，由Bergman等提出，其方法为改良的静脉葡萄糖耐量试验。

1.计算第一时相胰岛素分泌（first-phase insulin release,1PH）：
1PH =∑Ins(2,4,6,8,10 mins).
2.计算第二时相胰岛素分泌（second-phase insulin release,2PH）；
2PH=∑Ins（20-150 mins）/14
3 . 最 大 胰 岛 素 分 泌 量 （ maximum secretion,INS120-150）:
5
高葡萄糖Байду номын сангаас夹技术 的建立与应用
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原理及应用 1
通过输注外源性葡萄糖使血糖浓度较空 腹状态迅速升高,并在一定时间内维持相 对平稳的高糖状态。在这种持续的高糖 状态下，可以观察到胰岛素在糖刺激后 的快速分泌相（第一相），以及随后出 现的与高糖持续时间一致的第二相分泌， 并能测定稳态下机体最大的分泌胰岛素 的能力，从而能完整的评估胰岛B细胞的 储备和分泌胰岛素的功能。
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实验物品
1、输液管（输液泵专用）。 2、三通管3个。 3、连接管2条。 4、静脉留置针2个。 5、针筒：1ml，5ml，60ml针筒各若干个。
10
受试者准备
试验前晚8点钟后禁食，可少量饮水，早晨8点 到实验室，排空小便后仰卧。
试验前，将试验的性质、目的以及可能产生的不 良反应告知受试对象，并填写知情同意书。
受试者应排除肝肾疾病。 试验前三天，受试对象每日至少进食250克以上
碳水化学物，维持体重稳定。
11
主要试剂
1、葡萄糖液：50%。 2、葡萄糖液：10%。 3、氯化钠溶液：0.9%。
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高葡萄糖钳夹操作流程 1
1. 配备20%葡萄糖液：可在10%葡萄糖液 中加入50%葡萄糖混合配制。

高胰岛素-正葡萄糖钳夹技术在比格犬中的建立及应用董立厚, 宋海峰( 军事医学科学院放射与辐射医学研究所, 北京 100851)【摘要】目的: 在比格犬中建立高胰岛素-正葡萄糖钳夹技术。

方法: 以5只健康比格犬为实验对象进行高胰岛素-正葡萄糖钳夹实验, 考察血糖、胰岛素、 C 肽及胰高血糖素等指标。

结果: 成功将血糖控制在目标水平, 变异系数小于5%; 实验过程中血清胰岛素最后稳定在40.0 ± 3.8 mI U·L-1, 显著高于基础胰岛素水平; 血清C肽浓度显示内源性胰岛素受到了明显的抑制, 胰高血糖素没有显著升高。

结论: 在比格犬体内建立高胰岛素-正葡萄糖钳夹技术, 并将其成功用于胰岛素制剂药效动力学的评价。

【关键词】: 高胰岛素-正葡萄糖钳夹技术; 药效动力学; 比格犬The euglycemic clamp technique was established in beagle dogs [Abstract] Objective:To establish euglycemic clamp technique in beagle dogs. METHODS: The euglycemic clamp technique was applied in healthy beagle dogs and the blood glucose, insulin, C-peptide, insulin and glucagon were monitored during the clamp period. RESULTS: The blood glucose level was controlled within the basal level, coefficient of variation being less than 5% during the clamp period. The serum insulin concentration finally reached to the level of 40.0 ±3.8 mI U·L-1stably and a significant inhibition was showed in endogenous insulin by the determination of C-peptide. But there was not significant increase of serum glucagon compared with basal values. CONCLUSIONS:Methodology confirmed that the euglycemic clamp technique is successful in beagle dogs【作者简介】董立厚( 1979 —) , 男, 河北清河县, 博士研究生, 研究方向: 生物技术药物药代动力学通讯联系人, 宋海峰, , Tel: (010)66930259and can be applied in study of pharmacodynamics of insulin preparations. KEY WORDS: euglycemic clamp technique; pharmacodynamics; beagle dogs 高胰岛素-正葡萄糖钳夹技术[1]由于定量准确、可重复性好、避免低血糖等优点, 已成为胰岛素敏感性评价的金标准[2]。

六 高胰岛素正葡萄糖钳夹技 术高葡萄糖钳夹操作流程
4.分别在两侧上肢静脉留置穿刺针，以生 理盐水维持通道，以备抽血及输注胰岛 素及20%葡萄糖。 5.分别于-30，-15，0分钟留取基础血样后， 一侧上肢置于一温度为50°C，湿度为 70%的恒温箱中以获得动脉化的静脉血 样，另一侧静脉通道用于输注胰岛素及 20%葡萄糖。
高葡萄糖钳夹操作流程4
6. 标本采集；于开始输注葡萄糖0-10分钟 内每2分钟取血测定胰岛素，以后每10 分钟取血一次，测定胰岛素。每30分钟 取血一次测定胰高糖素。实验结束后收 集实验过程中的尿液，测定尿糖含量。 7.留取部分实验中输注的葡萄糖液测定精 确的葡萄糖浓度。
结果处理 1
一） 评价B细胞功能： 1.计算第一时相胰岛素分泌（first-phase insulin release,1PH）： 1PH =∑Ins(2,4,6,8,10 mins). 2.计算第二时相胰岛素分泌（second-phase insulin release,2PH）； 2PH=∑Ins（20-150 mins）/14 3 . 最 大 胰 岛 素 分 泌 量 （ maximum insulin secretion,INS120-150）: INS120-150=∑Ins（120-150 mins）/4
葡萄糖钳夹技术的建立与应用
钳夹技术
高葡萄糖钳夹技术 高胰岛素正葡萄糖钳夹技术
DeFronzo RA,Tobin JP,Andres R.Am J Physiol,1979,237:E214-S223
相关背景知识
糖尿病是高度异质性疾病，
目前认为主要是由于胰岛素 抵抗合并胰岛B-细胞分泌胰 岛素缺陷或B-细胞分泌缺陷 伴或不伴胰岛素抵抗引起。

高胰岛素-正常血糖钳夹技术评价重组甘精胰岛素注射液的药物效价曾敏莉;周远大;何海霞;杨辉【期刊名称】《四川生理科学杂志》【年(卷),期】2004(026)004【摘要】目的：建立狗高胰岛素-正常血糖钳央技术评价重组甘精胰岛素注射液的药物效价，对重组甘。

精胰岛素注射液治疗糖尿病的药效学进行了评价。

方法：高胰岛素-正常血糖钳夹术的建立，将健康合格一级Beagle犬麻醉后，进行股动脉和股静脉插管。

然后同时向静脉输注胰岛素和葡萄糖。

首先从动脉抽取血液，用血糖仪测定基础血糖(BBG)。

然后以恒定的速度输注胰岛素，【总页数】2页(P186-187)【作者】曾敏莉;周远大;何海霞;杨辉【作者单位】重庆医科大学附属第一医院临床药理研究室,重庆,400016;重庆医科大学附属第一医院临床药理研究室,重庆,400016;重庆医科大学附属第一医院临床药理研究室,重庆,400016;重庆医科大学附属第一医院临床药理研究室,重庆,400016【正文语种】中文【中图分类】R9【相关文献】1.应用高葡萄糖钳夹技术评价女性非酒精性脂肪性肝病胰岛β细胞功能和胰岛素抵抗 [J], 查英;刘军;盛励;陈灶萍;杨玲娣;陈钦达;廖晓寰;孟令平2.高胰岛素-正常血糖钳夹技术的护理及改进分析 [J], 郑晓岩3.高胰岛素正常血糖葡萄糖钳夹技术进行国产与进口重组人胰岛素注射液的生物等效性临床研究 [J], 张锦娟;孙飞;吴彩斌;戚瑞;任丽丽4.Wistar大鼠的正常血糖-高血浆胰岛素钳夹技术 [J], 李晨钟;张素华;舒昌达;任伟5.清醒状态大鼠高胰岛素-正常血糖钳夹术的建立及其意义 [J], 罗四川;李启富;刘红梅因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

文章编号:0253-3626(2004)05-0615-03高胰岛素-正葡萄糖钳夹技术的建立汪志红1,李启富1,张素华1,刘秀容1,刘智萍1,罗四川2,黄健康1,何　军1(1.重庆医科大学临床学院内分泌科,重庆　400016;2.重庆市急救中心内科,重庆　400012)【摘　要】目的:建立高胰岛素-正常葡萄糖钳夹技术。

方法:应用高胰岛素-正常葡萄糖钳夹技术对8例正常体重、正常糖耐量者进行了方法学的研究。

结果:在优势胰岛素浓度、血浆葡萄糖浓度稳定在正常空腹水平状态下,内源性胰岛素释放和肝糖产生被抑制,升糖激素(皮质醇、生长激素、胰高糖素)无明显增高。

(2)在高胰岛素-正常葡萄糖钳夹稳态期,葡萄糖利用率为9.25±0.25mg/(kg.min)。

结论:高胰岛素-正常葡萄糖钳夹技术已成功建立。

在外源性胰岛素-葡萄糖代谢的稳定状态下,机体葡萄糖利用率显著增加。

【关键词】高胰岛素-正葡萄糖钳夹技术;胰岛素抵抗;胰岛素敏感性【中国图书分类法分类号】R587.1 【文献标识码】A 【收稿日期】2003-10-24Establishment of hyp erinsulinemic euglycemic clamp techniqueW A N G Zhihong,et al(Depart ment of Endocri nology,College of Cli nical Medici ne,Chongqi ng Medical U niversity)【Abstract】Objective:To establish a hyperinsulinemic euglycemic clamp technique for the study of insulin sensitivity in Chinese. Methods:A hyperinsulinemic euglycemic clamp technique was used to the study of methodology in8normal weight subjects with nor2 mal glucose tolerance.Results:(1)When a higher level of insulin was created during maintaining fasting euglycemia,the secretion of endogenous insulin and hepatic glucose production were completely inhibited.The secretion of counter-regulatory hormones(cortisol, growth hormone and glucagon)was not significantly stimulated..(2)During the steady-state of hyperinsulinemic euglycemic clamp, the glucose disposal rate was9.25±0.25mg/(kg.min)Conclusion:The hyperinsulinemic euglycemic clamp technique was established successfully in Chinese.During the steady-state of exogenous insulin and glucose metabolism,glucose utilization increased.【K ey words】Hyperinsulinemic euglycemic clamp technique;Insulin resistance;Insulin sensitivity 众多研究表明,胰岛素抵抗(IR)和胰岛B细胞功能缺陷是2型糖尿病发病和病程中的两个重要环节。

清醒大鼠高胰岛素-正血糖钳夹技术的建立和应用冯悦华;罗光华;陈立新【摘要】Objective To establish the hyperinsulinemic-euglycemicclamp(HEC) technique in conscious rats, and to explore the effect of acute infusion of lipid on glucose infusion rate (GIR) in rats. Methods Ten SD rats were random-ly divided into two groups, 5 rats for each group. The right jugular vein and left carotid artery were catheterized and under-went a HEC with infusion of lipid (intralipid group) for 6 hours, and with continuing infusion of 5%glucose (control group). The plasma levels of free fatty acid(FFA) and GIR were measured by HEC method. Results The levelof FFA concentration increased by 17.6-fold, and GIR was reduced by27%in the intralipid group compared to those of control group (P<0.001). Conclusion The rat model of HEC has been successfully established by intravenous intralipid infusion, which can be con-firmed by HEC technique.%目的：建立大鼠高胰岛素-正血糖钳夹模型，并探讨短期输注脂肪乳对清醒状态下大鼠葡萄糖输注率（GIR）的影响。

高葡萄糖钳夹技术的建立汪志红;龚莉琳;张素华;李启富;刘秀容;何军【期刊名称】《重庆医学》【年(卷),期】2005(34)1【摘要】目的建立测定胰岛β细胞胰岛素(Ins)分泌功能的精确方法-高葡萄糖钳夹技术.方法应用高葡萄糖钳夹技术对12例正常人进行了方法学的研究.结果 (1)血浆葡萄糖浓度在钳夹开始后的指定时间内(14min)达到试验所要求的高糖平台,并能维持此水平至实验结束(13.05±0.18)mmol/L;(2) 在持续高糖状态下Ins分泌呈双相,第1时相Ins分泌量(1Ph)为(295.38±20.92)mU/L ,第2时相Ins分泌量(2Ph)为(83.13±5.18)mU/L;(3)高糖钳夹稳态期Ins敏感性(ISI)为(13.23± 1.98)mg*kg-1*min-1/mU/L,较正糖钳夹值为高.结论 (1)高葡萄糖钳夹技术已成功建立;(2)高葡萄糖钳夹能测定双相Ins分泌及最大Ins分泌,评价胰岛β细胞功能;(3)高葡萄糖钳夹还能测定Ins敏感性,了解机体的Ins抵抗状况.【总页数】3页(P13-15)【作者】汪志红;龚莉琳;张素华;李启富;刘秀容;何军【作者单位】重庆医科大学附属第一医院内分泌科,400016;重庆医科大学附属第一医院内分泌科,400016;重庆医科大学附属第一医院内分泌科,400016;重庆医科大学附属第一医院内分泌科,400016;重庆医科大学附属第一医院内分泌科,400016;重庆医科大学附属第一医院内分泌科,400016【正文语种】中文【中图分类】R587.1;R446.112【相关文献】1.两步法高胰岛素-正常葡萄糖钳夹技术的建立 [J], 罗四川;李启富;黄健康;汪志红;刘秀容;张素华;舒昌达2.高葡萄糖钳夹技术的建立 [J], 朱敏;贾伟平;包玉倩;陆俊茜;项坤三3.高胰岛素-正常葡萄糖钳夹技术的建立 [J], 程时武;陆菊明;杨国庆;李一君;潘长玉;翟淮伟4.高胰岛素正常血糖葡萄糖钳夹技术进行国产与进口重组人胰岛素注射液的生物等效性临床研究 [J], 张锦娟;孙飞;吴彩斌;戚瑞;任丽丽5.高胰岛素-正葡萄糖钳夹技术的建立 [J], 汪志红;李启富;张素华;刘秀容;刘智萍;罗四川;黄健康;何军因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

喂养型胰岛素抵抗动物模型的建立与评价都健;赵玉岩;谢辉;赵谨【期刊名称】《中国医科大学学报》【年(卷),期】2002(031)005【摘要】目的:以钳夹技术评估高脂膳食建立胰岛素抵抗(IR)动物模型的可行性.方法:以脂肪热比为59%(其中猪油占39%),蛋白质热比为21%(其中酪蛋白占31%),碳水化合物热比为20%(其中玉米淀粉占30%)的特殊高脂膳食,喂养4周后建立SD大鼠钳夹技术.结果:高脂膳食喂养大鼠4周后,葡萄糖输注率(GIR)显著低于正常膳食喂养大鼠(P<0.01),且GIR水平与大鼠体重显著负相关(γ=-0.752,P<0.01).结论:建立SD大鼠的钳夹技术各项指标可靠、准确、稳定;高脂膳食喂养4周后,钳夹技术证明大鼠胰岛素敏感性下降,提示复制IR大鼠模型成功.【总页数】4页(P343-346)【作者】都健;赵玉岩;谢辉;赵谨【作者单位】中国医科大学第一临床学院内分泌科,辽宁,沈阳,110001;中国医科大学第一临床学院内分泌科,辽宁,沈阳,110001;沈阳市红十字会医院内分泌科;中国医科大学第83期日语医学班【正文语种】中文【中图分类】R587【相关文献】1.高脂高糖喂养诱导妊娠期胰岛素抵抗大鼠模型的建立与评价 [J], 李变锋;辛亚萍;王崇贤;张苏河2.胰岛素抵抗动物模型和运动干预模型的建立与评价 [J], 李蕾;李之俊;魏安奎;白洋3.脾虚湿阻型单纯性肥胖动物模型建立及客观性评价 [J], 陈浩; 刘志勇; 侯吉华; 李龙雪; 朱文婷; 舒坤; 张琦4.腹泻型肠易激综合征动物模型建立及评价 [J], 贺星;刘卫;唐郡;朱斌;李超;郑岩;崔立红5.一种脊髓型颈椎病慢性压迫性动物模型的建立及评价 [J], 李成立;曲军杰;陈松;张为因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

胰岛素促进犬缺血心肌GLUT4移位和葡萄糖摄取殷仁富;陈金明;吴宗贵;仇韶华;李元新;胡晓月【期刊名称】《第二军医大学学报》【年(卷),期】2001(22)2【摘要】目的 :观察胰岛素能否刺激缺血心肌葡萄糖转运子 4(GL U T4)移位和葡萄糖摄取。

方法 :利用自动分析仪测定血浆葡萄糖、乳酸和游离脂肪酸浓度 ,应用Western印迹法分析并检测 GL U T4含量。

结果 :胰岛素使缺血心肌细胞质膜 GL U T4明显增加 ,从(2 5± 4) %增至(4 0± 6 ) % (P<0 .0 5 ) ;细胞器膜 GL U T4则相应减少。

同时伴随葡萄糖摄取量明显增加,是单纯缺血心肌葡萄糖摄取量的2倍。

结论 :胰岛素刺激可引起 GL UT4移位 ,使缺血心肌葡萄糖摄取增加。

提示心肌缺血时。

【总页数】3页(P112-114)【关键词】胰岛素;心肌缺血;葡萄糖;葡萄糖转运子4;CLUT4;犬【作者】殷仁富;陈金明;吴宗贵;仇韶华;李元新;胡晓月【作者单位】第二军医大学长征医院心血管内科【正文语种】中文【中图分类】R542.2;R977.15【相关文献】1.胰岛素促进狗缺血心肌葡萄糖转运子1移位和葡萄糖摄取 [J], 殷仁富;陈金明;吴宗贵;仇韶华;李元新;胡晓月2.在体心肌缺血与胰岛素对犬心肌细胞GLUT移位和葡萄糖摄取的相加作用 [J], 殷仁富;陈金明;吴宗贵;仇韶华;李元新;胡晓月3.胰岛素增强犬在体缺血心肌细胞GLUT4移位与葡萄糖摄取的研究 [J], 殷仁富;陈金明;吴宗贵;仇韶华;王咏梅;武玉美;孔宪涛4.心肌细胞缺氧通过激活AMPK促进GLUT4移位和葡萄糖摄取 [J], 殷仁富;陈金明;吴宗贵;仇韶华;李元新5.胰岛素与低血流缺血刺激犬心肌GLUT4基因表达呈相加作用 [J], 殷仁富;赵君;陈金明;吴宗贵;仇韶华;王咏梅;武瑞美因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。