石蜡包埋组织中4种DNA提取方法的比较研究

石蜡包埋脱钙骨组织中结核杆菌DNA不同提取方法比较潘鑫艳;王丽;杨长绍;黎贵芸;杨举伦;蔡琳【摘要】目的探讨石蜡包埋的10%硝酸脱钙骨组织中简易有效的结核杆菌DNA 提取方法并进行验证.方法以20例石蜡包埋、10%硝酸脱钙的坏死性肉芽肿炎疑为骨结核的组织标本为研究对象,常规法直接采用德国QIAGEN公司的QIAamp DNA FFPE Tissue Kit方法提取DNA,而改良法中加入QIAamp DNA Micro Kit试剂盒中的carrier RNA,以两种方法分别提取20例标本中结核杆菌DNA,通过荧光定量PCR,比较常规试剂盒提取法和改良提取法对结核杆菌检测结果的影响.结果改良法提取的DNA[(35.32±3.48)ng/μl]比常规法[(6.68±3.72)ng/μl]提取的DNA显著增多(P＜0.05),改良法提取的DNA经荧光定量PCR检测结核杆菌的阳性率(55%)明显高于常规法(15%,P＜0.01).结论改良法提取石蜡包埋脱钙骨组织中结核杆菌DNA具有高效简便的特点,是较为理想的方法,值得在puncture和极微小石蜡样本中推广.【期刊名称】《西南国防医药》【年(卷),期】2014(024)002【总页数】4页(P160-163)【关键词】脱钙骨组织;结核杆菌DNA;荧光定量PCR【作者】潘鑫艳;王丽;杨长绍;黎贵芸;杨举伦;蔡琳【作者单位】650032,昆明,成都军区昆明总医院病理科;650032,昆明,成都军区昆明总医院病理科;650032,昆明,成都军区昆明总医院病理科;650032,昆明,成都军区昆明总医院病理科;650032,昆明,成都军区昆明总医院病理科;650032,昆明,成都军区昆明总医院病理科【正文语种】中文【中图分类】R378.911目前，骨结核的诊断主要有影像学和血沉检查。

而近年来，随着分子生物学技术的不断发展，荧光定量PCR成为检测结核分枝杆菌应用最多的方法[1-2]。

四种石蜡包埋组织DNA提取方法的比较袁亚婷;江岳鑫;尹小文;江兴堂【摘要】背景:由于在甲醛固定石蜡包埋组织的制作及保存过程中对DNA造成的损害,影响了后续的聚合酶链反应等研究.选择一种简便有效且经济实用的石蜡包埋组织DNA提取方法成为研究者们关注和亟待解决的问题.目的:比较甲醛固定石蜡包埋组织中4种提取DNA的方法对DNA质量的影响,探讨一种操作简便、污染少、经济实用的石蜡包埋组织中提取DNA的方法.方法:取手术切除的普通甲醛固定石蜡包埋的非小细胞肺癌组织标本20例,分别以二甲苯脱蜡-酚氯仿法、改良TES水浴脱蜡-酚氯仿法、试剂盒法和改良TES水浴脱蜡-试剂盒抽提DNA法提取其DNA,然后进行电泳分析、紫外分光光度计测定A260/A280比值及PCR扩增.结果与结论:改良TES水浴脱蜡-酚氯仿法和改良TES水浴脱蜡-试剂盒抽提DNA法可获得较大的DNA片段,且两种方法与试剂盒法所提取DNA的A260/A280值相比较,均有显著性意义(P<0.05),4种方法的提取效率差异无显著性意义(P>0.1),以改良TES水浴脱蜡-酚氯仿法所得DNA为模板,扩增的目的条带亮度与阳性对照相当.结果证实改良TES水浴脱蜡-酚氯仿法简便有效,所用试剂价格低廉,是一种经济实用的石蜡包埋组织DNA提取方法.【期刊名称】《中国组织工程研究》【年(卷),期】2010(014)024【总页数】5页(P4430-4434)【关键词】甲醛;石蜡包埋组织;DNA提取【作者】袁亚婷;江岳鑫;尹小文;江兴堂【作者单位】厦门大学医学院,福建省厦门市,361004;厦门大学医学院,福建省厦门市,361004;厦门大学附属中山医院呼吸内科,福建省厦门市,361004;厦门大学附属中山医院呼吸内科,福建省厦门市,361004【正文语种】中文【中图分类】R3180 引言甲醛固定石蜡包埋组织(formalin-fixed paraffin-embedded tissue，FFPET)具有便于运输，可长期保存等特点，是最常用的人类病历档案标本[1]。

两种石蜡包埋组织DNA提取方法的比较张晓萍;刘辉;袁健;冯振兴;李勇【期刊名称】《兰州大学学报（医学版）》【年(卷),期】2009(35)1【摘要】目的比较两种不同的DNA提取方法对DNA质量的影响.方法选取石蜡包埋的病理组织24例,采用二甲苯脱蜡法和改良TES水浴法提取DNA.通过对所提DNA的浓度、纯度及完整性的检测,比较两种DNA提取方法的优劣.结果二甲苯脱蜡法提取样品D260/D280比值在1.6～1.8之间的为62.5%,电泳条带清晰可见;改良TES水浴法提取样品D2eo/D280比值在1.6～1.8之间的为41.2%,电泳条带模糊不清.结论二甲苯脱蜡法提取DNA简单快速,需要的组织样品少,是一个值得推荐的石蜡包埋组织DNA的提取方法 .【总页数】3页(P35-37)【作者】张晓萍;刘辉;袁健;冯振兴;李勇【作者单位】甘肃省人民医院,检验科,甘肃,兰州,730000;兰州大学公共卫生学院,甘肃,兰州,730000;兰州军区疾病预防控制中心,甘肃,兰州,730020;兰州大学公共卫生学院,甘肃,兰州,730000;甘肃省人民医院,检验科,甘肃,兰州,730000【正文语种】中文【中图分类】R361【相关文献】1.石蜡包埋组织中DNA提取方法的比较 [J], 王卡娜;李红芳;杨爱宏;许飞雪;杨永秀2.探讨两种石蜡包埋组织DNA提取方法 [J], 黄玉梅;赵瑾;刘波;田俏梅;吴白平3.石蜡包埋组织中3种DNA提取方法的比较及优化 [J], 蒋金芳;庞丽娟;李洪安;李锋;齐妍4.四种石蜡包埋组织DNA提取方法的比较 [J], 袁亚婷;江岳鑫;尹小文;江兴堂5.MSP扩增中3种石蜡包埋组织DNA提取方法的比较 [J], 周卫宁;刘慧;吴永平因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

石蜡包埋组织DNA提取方法
一脱蜡：
1、切取石蜡组织5-10片（5um—7um）放入1.5ml的离心管中；
2、加入1ml二甲苯，55°10min，离心轻弃上清，重复两到三次（因组织而定）；
3、加入1ml无水乙醇，室温三分钟，重复二次，离心弃上清，并干燥待酒精挥发。

二消化：
例：设置250ul体系，加入2x裂解液125ul、10%SDS 5ul、蛋白酶k25ul（1mg /ml）、纯水95ul（以上根据裂解液、SDS、蛋白酶K的配置浓度不同和组织量多少而需重新设置），55°消化过夜（按组织的消化情况而定，若没消化完全可适量加入蛋白酶k），直至组织完全液化。

三抽提：
1、加纯水至500ul，加入Tris饱和酚250ul，颠倒混匀，静置5min，再加入250ul 氯仿，颠倒混匀静置5min ，瞬时离心，
2、取出上清液至1.5ml离心管中，加入500ul氯仿，轻混匀，室温静置5min瞬时离心；取上清400ul（吸取液体量可比总体积小，避免吸到蛋白）
四沉淀DNA ：
1、加入3M醋酸钠40ul（醋酸钠的量是吸取上清体积的十分之一），轻混匀，加入880ul无水乙醇（两倍体积）混匀，-20°过夜。

五收集DNA
1、13000rpm 15min，离心轻弃上清
2、加入75% 1ml酒精轻洗，即刻13000rpm 5min 轻弃上清，空气干燥（可用55℃），待干燥为止。

六加入50-100ul纯水溶解，30分-1小时。

关于甲醛固定石蜡包埋组织提取DNA质量的探讨*杜 靖1**,古丽孜亚 卡克巴依1,海米提 阿布都力木2***(新疆医科大学1厚博学院机能教研室,2基础医学院组胚教研室,新疆 乌鲁木齐 830011)摘要:目的:探讨甲醛固定石蜡包埋组织(F FP ET)提取D NA后PCR扩增产物检测率的提高。

方法:应用从FF PET提取的D NA,PCR反应扩增 Glo bin(110bp),分析纯化前后DN A P CR产物的检测率。

结果:纯化后的DN A模板PCR反应取得高质量目的基因。

结论:纯化后能有效去除不能通过蛋白酶K消化和有机萃取法去除的PCR反应抑制因子,利于P CR反应成功。

关键词:石蜡包埋组织;DN A;PCR;纯化中图分类号:R36;R34 文献标识码:A 文章编号:1009 5551(2008)09 1146 02Further study on the quality of DNA extracted from formalin fixed andparaffin embedded tissuesDU Jing,Guliziya Kakebayi,Haimiti Abudulimu(Dep ar tment of Medical P hy siology&Biochemistry,X inj iang M edical Univ er sity,Ur um qi830011,China)Abstract:Objective:Study the effect of DNA purificatio n after extraction from formalin fixed and paraffin em bedded tissues(FFPET)on PCR amplification efficiency.Methods:Co mpared the PCR amplification ef ficiency of DNA sam ples ex tr acted fro m formalin fix ed and paraffin embedded tissues and the DNA samples further purified by U NIQ 10spin colum n after extractio n using specific primers and optim ized PCR condi tions for g lobulin(110bp).Results:Further purificatio n of DNA sam ples w ith U NIQ 10spin co lum n af ter DNA ex traction increased PCR am plificatio n efficiencies for the g ene studied in all sam ples w ere com pared to the DNA samples w itho ut further purification step.C onclusion:Further purification of DNA sam ples w ith U NIQ 10spin column after extraction remov es the PCR inhibiting factors that could not be re m oved by proteinase K in the DNA tem plates fr om formalin fix ed and par affin embedded tissues,and in creases the sensitivity o f PCR amplification.Key words:FFPET;DNA;PCR;purification肿瘤的分子生物学研究是当今的热门课题之一,聚合酶链反应(Poly rmerase chain r eaction, PCR)技术应用于病理诊断和辅助诊断工作,其价值已不断受到重视。

从石蜡包埋组织中获取高质量基因组DNA的方法改进:石蜡包
埋
摘要：从石蜡包埋组织中制备基因组DNA(gDNA)难
度大、获取样本量很少，传统方法为二甲苯脱蜡法，为了简化操作，获得更高质量
的gDNA，我们采用水浴法替代二甲苯进行脱蜡，亲和层析纯化石蜡包埋肝细胞癌(HCC)组织标本中基因组DNA，以纯化gDNA为模板PCR扩增看家基因，结果显示改
良水浴法提取的gDNA质量、数量均显著高于传统二甲苯脱蜡法，PCR产物量也得
到显著提高，与传统方法相比，改良水浴法简单、快捷，可以更有效的回收石蜡包
埋组织中的gDNA。

关键词：石蜡包埋组织；聚合酶链反应；异DNA提取中
图分类号：R737.31 文献标识码：A 文章编号：1007－7847(2009)04－0343－03 本文为全文原貌未安装PDF浏览器用户请先下载安装原版全文。

石蜡包埋组织中DNA提取方法的比较王卡娜;李红芳;杨爱宏;许飞雪;杨永秀【期刊名称】《中国实验诊断学》【年(卷),期】2009(013)006【摘要】目的通过比较两种从石蜡包埋组织中提取基因组DNA的方法,确定一种高效、经济而简便的方法指导实际工作.方法按照两种方法(脱蜡法与非脱蜡法)提取DNA,比较所提DNA的质量,PCR扩增β-Globin基因作为基因分析的对照扩增,并对其中非脱蜡法进行改良.结果两种方法所提取的DNA均能达到相关分子学实验的要求,PCR扩增带清晰,结果较为相似.结论非脱蜡法也能提取出适用于PCR技术要求的DNA,方法简便、经济.【总页数】4页(P753-756)【作者】王卡娜;李红芳;杨爱宏;许飞雪;杨永秀【作者单位】兰州大学附属第一医院,妇产科,甘肃,兰州,730000;兰州大学附属第一医院,妇产科,甘肃,兰州,730000;兰州大学附属第一医院,妇产科,甘肃,兰州,730000;兰州大学附属第一医院,妇产科,甘肃,兰州,730000;兰州大学附属第一医院,妇产科,甘肃,兰州,730000【正文语种】中文【中图分类】R361+.2【相关文献】1.石蜡包埋组织中4种DNA提取方法的比较研究 [J], 张旭垠;易晓芳;丁景新;丰有吉2.甲醛固定石蜡包埋组织中DNA的三种提取方法比较 [J], 田子强;刘俊峰;张少为;李保庆;王福顺;曹富民;张月峰3.石蜡包埋组织中3种DNA提取方法的比较及优化 [J], 蒋金芳;庞丽娟;李洪安;李锋;齐妍4.石蜡包埋组织PCR检测中DNA提取方法的比较及改进 [J], 朱丽华;李琳;章广玲;周天戟5.MSP扩增中3种石蜡包埋组织DNA提取方法的比较 [J], 周卫宁;刘慧;吴永平因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

文章编号:100126325(2004)0320335204甲醛固定石蜡包埋组织中DNA的三种提取方法比较田子强,刘俊峰,张少为,李保庆,王福顺,曹富民,张月峰(河北医科大学第四医院胸外科,石家庄050011)摘要:为了寻找最佳的自普通10%甲醛固定石蜡包埋组织中提取DNA的方法,取我院2000年手术切除的10%甲醛固定石蜡包埋的食管癌标本10例,分别以蛋白酶K消化酚氯仿抽提法,蛋白酶K消化氯化钠盐析法和不同pH 值下加热提取法提取其DNA,然后进行电泳和PCR扩增分析。

结果显示,蛋白酶K消化酚氯仿抽提法,蛋白酶K消化氯化钠盐析法所得DNA产量和质量均高于不同pH值下加热提取法。

从而认为蛋白酶K消化氯化钠盐析法简便快捷,不用接触有毒的化学药品,是理想的DNA提纯方法。

关键词:DNA提取;PCR;石蜡包埋组织;10%甲醛固定组织中图分类号:R36112 文献标识码:A 10%甲醛固定手术标本已有数十年的历史,目前国内大多数医院及科研机构均用普通10%甲醛固定手术标本。

已有研究证明普通10%甲醛固定石蜡包埋组织中的DNA降解相对严重,从这些蜡块中提取高质量的DNA更加困难,本文的目的是为了探索自普通10%甲醛固定石蜡包埋组织中提取DNA的最佳方法:1　材料与方法111　取材随机选取我院2000年手术切除的10%甲醛固定石蜡包埋后在通风干燥处妥善保存的食管癌标本10例,仔细检查无霉菌和细菌污染后,常规切片HE 染色,显微镜下观察确保组织结构清晰,无自溶,坏死和大片出血后,切取10μm厚切片,每2片放入一个115m L无菌管中,每例标本共取28片,分别放入14个无菌管中。

112　蛋白酶K消化酚氯仿抽提法取相应10例标本各1管提取DNA,参照Sam2 brook(1989)的方法[1],主要步骤为二甲苯脱蜡后,向管中加入500μL的TES溶液,30μL蛋白酶K(10gΠL)溶液,30μL20%的S DS,混匀后56℃旋转消化72h,每24h加入等量蛋白酶K一次。

第16卷　第10期 医学研究生学报 Vol .16　No .10　2003年10月 Journal of Medical Postg raduates Oct .2003·论 著·石蜡组织DNA 提取方法的比较周　敏,　谢海龙,　马恒辉,　周晓军(南京军区南京总医院南京大学医学院临床学院病理科,江苏南京210002)摘要:　目的:选择一种高效、简便、稳定的从蜡块中提取基因组DNA 进行聚合酶链反应(PCR )扩增的方法。

　方法:分别采用四种不同的方法从石蜡组织中提取DNA ,比较所提取的DNA 质量,PCR 扩增cyclin D1基因的效率。

对其中的一种方法进行了改良。

　结果:四种方法提取的DNA 质量都能达到相关分子生物学实验的要求,但在操作程序、扩增效率等方面存在差异。

　结论:微波脱蜡法操作简单、快速、扩增成功率高,适合于应用P CR 技术对病理标本进行相关研究。

关键词:　DNA 提取;　石蜡组织;　聚合酶链反应;　cy clin D1基因中图分类号:　Q 523 文献标识码:　A 文章编号:　1008-8199(2003)10-0726-04Comparison of the DNA extraction methods for polymerase chain reaction amplificationfrom formalin -fixed and paraffin -embeded tissuesZHOU Min ,XIE Hai -long ,MA Heng -hui ,ZHOU Xiao -jun (Department of Pathology ,Nanjing General Hospital of Nanjing Command /Clinical School of Medical College of Nanjing University ,Nanjing 210002,Jiangsu ,China )A bstract :　Objectives :To choose a relatively ideal method for genomic DNA ex traction from paraffin -embeded tissues .The methods should have advantages of hig h DNA yied ,high DNA quality ,easy -performance and stabilization .　Methods :Four methods were used to ex tract DNA from paraffin -em -beded tissues .The results w ere compared in view of the advantages mentioned above .Modification w as made to one of the four methods .　Results :All of the four methods could give high quality of DNA ,but they were different in terms of the DNA yied ,time -and -lab input and the success rate of the PCR .　Conclusions :The microw ave -based DNA ex tract method is simple ,quick and reliable ,so it is considered applicable to archival tissue for PCR -based studies .Key words :　DNA ex traction ;　Paraffin -embeded tissue ;　PCR ;　Cy clin D10　引 言医院病理科保存的大量石蜡包埋组织,是分子生物学研究材料的可靠来源,可用聚合酶链反应(PCR )进行回顾性研究或检测,并已在肿瘤研究、遗传与感染性疾病、分子流行病学等研究领域取得了大量成果。

综述从石蜡包埋组织中提取DNA及对PCR的影响从多年存档的常规福尔马林固定－石蜡包埋病理标本中提取高质量DNA可以解决在短期内难以搜集到大量有用标本的难题。

但在福尔马林固定过程中常常出现DNA降解，不易获得大分子量DNA，使绝大多数分子生物学实验受限，因此从福尔马林固定－石蜡包埋组织中提取高质量DNA 可以解决分子生物学实验过程中缺少实验材料的难题，本节就不同的提取DNA的方法、标本固定过程对PCR模板的影响、DNA提取各步骤应注意的事项及如何获得满意的PCR扩增结果进行综述。

第一节、固定液、固定时间对DNA模板的影响DNA[1]。

Gall 等用6种固定液固定脑组织，它们分别为：①含缓冲液的10%的福尔马林；②1%多聚甲醛；③丙酮；④AMeX固定法；⑤Carnoy固定液；⑥Bouin固定液。

然后以相同的方法提取DNA，用于扩增317bp的β-肌纤蛋白基因。

发现第1、4、5种固定液中提取的DNA可以获得满意的扩增结果；而第2、3种固定液扩增效果较差；所有用第6种固定液固定的标本提取的DNA均未见特异性目的基因扩增条带[2]。

其他报道也证明：就固定组织中提取的模板质量及PCR有效扩增而言，甲醛固定优于多聚甲醛、B5及Bouin氏液[3-5]，含缓冲液的10%[6]，而用AmeX 方法固定，不仅能保护在福尔马林固定过程中破坏的抗原，而且可以提取到大分子量的DNA进行Southern杂交。

此外固定时间也明显影响DNA的提取质量。

Ohara等在室温下用市售的10%福尔马林溶液（终浓度为3.7%甲醛和1%甲醇）固定等量的MT-2细胞，时间分别为4小时、1、4、10天、1个月。

提取DNA后经0.8%琼脂糖凝胶电泳显示：细胞固定时间少于4天的，可以见到较明显的大分子量条带；而固定超过4天仅见碎小片段[6]。

Roger10%福尔马林，将标本固定不同时间后（6、24、48、72小时、1、2、3、4周），提取DNA，用于C-K-ras基因（135bp）的扩增，发现：固定时间少于48小时，扩增效果无影响；固定72小时至1周，仅信号强度有些减弱；若超过1周则扩增效果明显减低[8]。

不同方法提取石蜡包埋组织DNA的比较分析武贵臻;夏米西努尔·伊力克;杨曦;马琦;阿布力孜·阿布杜拉【期刊名称】《新疆医科大学学报》【年(卷),期】2009(032)002【摘要】目的:比较福尔马林固定石蜡包埋组织(FFPET)中3种提取DNA的方法对DNA质量和回收率的影响,探讨一种高效、简便、实用的石蜡组织中DNA提取方法. 方法:选取新疆医科大学第一附属医院2004～2007年手术切除的10%甲醛固定石蜡包埋甲状腺癌组织标本,分别以试剂盒法、改良TES水浴脱蜡-酚氯仿法、改良TES水浴脱蜡-试剂盒法提取其DNA,然后进行电泳分析. 结果:改良TES水浴脱蜡-酚氯仿提纯DNA法所得样本DNA的OD260/OD280比值为(1.82±0.15),改良TES水浴脱蜡-试剂盒提纯DNA法为(1.86±0.17),两者比较无明显差异(P>0.05);分别与试剂盒法(1.75±0.14)相比,差异有统计学意义(P<0.01).改良TES 水浴脱蜡-试剂盒提纯DNA法、改良TES水浴脱蜡-酚氯仿提纯DNA法所得DNA产量和质量均高于试剂盒法. 结论:改良TES水浴脱蜡-试剂盒提纯法简单快捷,是较理想的石蜡包埋组织DNA提纯方法.【总页数】3页(P128-130)【作者】武贵臻;夏米西努尔·伊力克;杨曦;马琦;阿布力孜·阿布杜拉【作者单位】新疆医科大学基础医学院,新疆地方病分子生物学实验室,新疆,乌鲁木齐,830011;新疆医科大学基础医学院,生物学教研室,新疆,乌鲁木齐,830011;新疆医科大学基础医学院,生物学教研室,新疆,乌鲁木齐,830011;新疆医科大学基础医学院,生物学教研室,新疆,乌鲁木齐,830011;新疆医科大学基础医学院,新疆地方病分子生物学实验室,新疆,乌鲁木齐,830011【正文语种】中文【中图分类】R34;R-331【相关文献】1.Chelex-100法提取甲醛固定石蜡包埋组织DNA的研究 [J], 徐冬冬;黄花;张明阳;王韵2.不同处理方式及试剂盒对石蜡包埋组织提取DNA影响 [J], 管力;白丽燕;王瑞晓;刘晓刚;3.福尔马林浸泡组织及石蜡包埋组织的DNA提取 [J], 张红玲;王杰;戴佳琳;黄映康;黄江4.探讨两种石蜡包埋组织DNA提取方法 [J], 黄玉梅;赵瑾;刘波;田俏梅;吴白平5.石蜡包埋组织DNA快速提取法应用于分子病理检测价值评价 [J], 杨秀媚因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

四种微量石蜡组织DNA提取方法的比较作者：黄幼生，宋伟伟，邓晓佳，罗志飞，解娜【摘要】目的：探讨从微量福尔马林固定石蜡包埋组织（formalin fixation and paraffin embedded tissues，FFPET)中提取DNA的简单而高效的方法。

方法：采用Chelex100提取法、酚氯仿抽提法、单纯消化法、水煮法4种方法提取组织DNA；应用聚合酶链反应扩增100～500bp长度DNA片段，然后进行电泳分析，1年后重复PCR电泳分析。

结果：小于200bp长度DNA片段扩增，Chelex100提取法、单纯消化法阳性率分别为88.8%、78.8%，明显优于酚氯仿抽提法（15.0%）（P&lt;0.01）及水煮法（21.3%）（P&lt;0.01）。

随着扩增长度的增加，PCR扩增效率逐渐降低，Chelex100提取法PCR反应总阳性率为82.5%，单纯消化法为66.5%，水煮法为13.4%，酚氯仿抽提法为13.4%。

1年后重复PCR总阳性率分别为80.1%、31.7%、2.5%、9.2%。

结论：Chelex100提取法方便简单，适用于微量石蜡组织DNA扩增分析；单纯消化法及水煮法在一定条件下适用于微量石蜡组织短片段DNA的扩增。

【关键词】石蜡组织;DNA提取;Chelex100提取法［ABSTRACT］ Objective: To explore the simple and effective method for DNA extraction from microamount formalin fixation and paraffin embedded tissues (FFPET). Methods: The DNA was extracted by four different methods: Chelex100 extraction, phenol chloroform purification, simple digestion method andwater cooking method. The DNA fragment with 100500 bp length was amplified by PCR. It was analyzed by electrophoresis, and the procedure including PCR and analysis was repeated 1 year later. Results: For amplification of DNA less than 200 bp, the positive rates of Chelex100 group and simple digestion group were 88.8% and 78.8%, respectively, which were significantly effective than phenol chloroform purification group (15.0%) (P&lt;0.01) and water cooking group (21.3%) (P&lt;0.01). The amplication efficacy decreased as the length increase. The total positive rates of PCR were 82.5% in Chelex100 group, 66.5% in simple digestion group, 13.4% both in water cooking group and phenol chlorform group. And the positive rates in repeated assessment were 80.1%, 31.7%, 2.5% and 9.2%. Conclusions: Chelex100 extration method is easy and applicable in amplification analysis of DNA extracted from mircoamount paraffin embedded tissues; while simple digestion method and water cooking method are suitable to analysis of short length DNA fragment extracted from mircoamount paraffin embedded tissues.［KEY WORDS］ Paraffin embedded tissue; DNA extraction; Chelex100 extraction医院病理科存在大量各种疾病甲醛固定石蜡包埋组织（formalinfixed and paraffin embedded tissues， FFPET），为分子病理研究提供了大量的信息来源。

近年来,现代分子生物学越来越广泛的被应用于人类疾病研究的诸领域,但试验时经常遇到短期内难以得到大量的新鲜组织标本的难题,而医院病理科档案中积存的大量石蜡包埋组织,是一个可靠的分子生物学研究的材料来源,这就需要从能长期保存的石蜡包埋的癌组织中抽提 DNA。

根据现有的资料,从石蜡包埋组织中提取DNA的方法,一般主要包括脱蜡、消化和纯化3个步骤[1-2]。

普通甲醛固定石蜡包埋组织中提取质量较差的原因有两个,一是经过各种理化因素刺激及残留的酶作用后产生降解,二是经过多种化学药物作用后,组织细胞内的变得更加脆弱,致使其在提取过程中对理化环境的变化更加敏感,更易断裂[3]。

因此对不同的提取方法及提取条件进行比较和筛选是非常有意义的。

本文针对三种不同的前处理方式(切片,玻片,刮片),选择市面上两种试剂盒(Tiangen和Qiagen),对石蜡包埋组织提取DNA质量进行了比较。

以期达到能根据自己实验室条件,对石蜡包埋组织进行相应的前处理和有针对性的选择合适的提取试剂盒。

1 材料与方法1.1 标本选取邯郸市中心医院2014年2月手术切除的肺癌组织,组织块全部为癌组织,质地均一,经10%中性甲醛固定,12h后石蜡包埋,室温存档。

1.2 主要试剂和仪器二甲苯,德国Qiagen的QIAamp DNA FFPE Tissue kit和Tiangen的TIAN quick FFPE DNA kit,天根生化DNA核酸纯化试剂盒,BD 1000超微量核酸蛋白分析仪,凝胶成像系统(上海培清),PCR仪(美国ABI公司),测序仪(美国ABI公司),PCR Mix(Taq聚合酶,2×buffer,MgCl2,dNTP)均购自艾德莱。

引物序列EGFR18:上游CAAATGAGCTGGCAAGTGCCGTGTC下游GAGTTTCCC AAACACTCAGTGAAAC,400bp;EGFR19:上游CCCAGCAAT ATCAGCCTTAGGT下游GGCCAGTGCTGTCTCTAAGG,434bp;GFR21:上游CTCAGAGCCTGGCATGAAC下游GCTGC不同处理方式及试剂盒对石蜡包埋组织提取DNA 影响管力 白丽燕 王瑞晓 刘晓刚(邯郸康业医学检验所 河北邯郸 056000)摘要:目的:比较石蜡包埋组织三种不同的前处理方式用不同试剂盒提取DNA效果,以期达到能根据各自实验室条件差异,选择合适的样本处理方式及相应的试剂盒,获得高质量DNA。

石蜡包埋乳腺癌组织DNA提取方法康毓芝;王永兴;杨宝珍;韩恩善【期刊名称】《现代检验医学杂志》【年(卷),期】2012(027)005【摘要】目的探讨一种乳腺癌患者石蜡包埋组织乳腺癌组织DNA提取方法并进行验证.方法选择无自溶、退变或组织结构不清、大片出血的70例10 ml/dl甲醛固定石蜡包埋乳腺癌组织,在避免交叉污染的情况下,经过TES溶液水浴脱蜡后,先后用PBS缓冲液(pH7.2)及无水、95 ml/dl,75 ml/dl浓度梯度的乙醇60℃温浴4 h;加入含蛋白酶K的裂解液56℃消化72 h后,酚氯仿法抽提DNA.通过聚合酶链反应(PCR)、琼脂糖凝胶电泳及紫外分光光度仪测定A260nm/A280nm值,分析所提取DNA的质量.结果 62例(88.57%)石蜡组织标本DNA获得成功提取,所得DNA 样本A260nm/A280nm比值为1.78±0.16,采用此条件处理的样本可获得足够数量的完整DNA,抽提率高,可满足后续临床研究需要.结论改进的石蜡包埋组织提取DNA方法简单、经济,是较理想的非试剂盒法石蜡包埋组织DNA提取方法.【总页数】3页(P95-96,99)【作者】康毓芝;王永兴;杨宝珍;韩恩善【作者单位】陕西省肿瘤医院检验科,西安,710061;陕西省肿瘤医院检验科,西安,710061;宁夏医科大学附属医院中心实验室,银川,750004;宁夏医科大学附属医院病理科,银川,750004【正文语种】中文【中图分类】R737.9;R446.8【相关文献】1.石蜡包埋软骨组织中DNA提取方法的改良 [J], 乔梁;周盛;杨军;滕华建;蒋青2.探讨两种石蜡包埋组织DNA提取方法 [J], 黄玉梅;赵瑾;刘波;田俏梅;吴白平3.甲醛固定石蜡包埋胃癌组织中三种DNA提取方法的比较 [J], 郭丽;祁荣;臧旭;郑瑞;付佳4.石蜡包埋组织中3种DNA提取方法的比较及优化 [J], 蒋金芳;庞丽娟;李洪安;李锋;齐妍5.石蜡包埋脱钙骨组织中结核杆菌DNA不同提取方法比较 [J], 潘鑫艳;王丽;杨长绍;黎贵芸;杨举伦;蔡琳因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。