2005生物技术试题答案
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2004年下半年《园艺生物技术》试题答案
一、名词解释
1、细胞全能性——每个植物活细胞都具有该物种的生命特征特性，在合适的离体条件下，可以展现这些特征特性
2、外植体——用于接种培养的各种离体的植物材料，包括胚胎材料、各种器官、组织、细胞甚至原生质体。
3、脱分化——指外植体中已经分化的细胞，在切割损伤和培养物内外因素的作用下，逐渐丧失原有的结构与功能，形成无组织的细胞团或愈伤组织的现象。
脱分化细胞可以直接再分化为其他类型细胞或胚状体。
4、人工种子——指将植物离体培养中产生的胚状体（体细胞胚或胚类似物）包裹在含有养分和具有保护功能的物质中而形成，在适宜条件下能够发芽出苗，长成正常植株的颗粒体。
5、愈伤组织——外植体经过脱分化后，形成无特定结构和功能的细胞团。
6、植物遗传转化——指通过某种途径将外源基因导入受体植物基因组中，并使之在受体植物细胞内实现功能表达。
二填空
1、生物技术可以分为细胞工程，基因工程，酶工程，发酵工程及生化工程五个部分。
2、植物细胞工程的基本原理有细胞全能性，植物的再生作用，脱分化、再分化。
3、植物组织培养中一般存在以下规律：当生长素/细胞分裂素比值高时，利于根
分化；比值低，利于芽的分化。
4、配置培养基时，培养基灭菌后的pH值一般为会下降。
5、根据培养基中是否添加有生长调节物质和附加物，可将培养基分为基本培养基_和__完全培养基_。
6、下列常用分子标记技术的中文意思分别是：RFLP，限制性片段长度多态性；RAPD，随机扩增多态性DNA；SSR，简单序列重复（或微卫星）；AFLP，扩增片段长度多态性；SNP，单核苷酸多态性。
7、在植物遗传转化的研究中，最为广泛应用的一种方法是利用农杆菌的Ti 质粒介导基因转化。
8、胚状体具有_胚芽_和胚根_两极性，是再生完整植株的最快途径。
9、离体繁殖的三大难题是：污染、褐化和玻璃化。
10、离体培养中，加入活性炭的作用是:吸附有毒物质。
三选择题
1、消毒酒精的最佳使用浓度为：（3）
（1）50-55% （2）60-65%
（3）70-75% （4）90-95%
2、下列因素中，影响玻璃化的最关键的一项是：（1）
（1）培养基的水分状况（2）培养基的ＰH值
（3）培养基的糖浓度（4）培养基的盐浓度
3、MS培养基的母液种类是：（2）
（1）大量元素、铁盐、维生素、椰乳
（2）大量元素、微量元素、铁盐、有机物质
（3）大量元素、微量元素、铁盐、氨基酸
（4）大量元素、微量元素、有机物质、维生素
4、下列遗传转化技术中，不属于直接转化的一项是：（4）
（1）PEG转化技术（2）电击穿孔转化技术
（3）基因枪转化技术（4）病毒介导的转化技术
5、培养基灭菌的温度和时间分别为：（4）
（1）112℃，10-15min （2）112℃，15-20min
（3）121℃，5-10min （4）121℃，15-20min
6、常用的几种消毒剂灭菌效果的顺序：（1）
（1）升汞>次氯酸钠>过氧化氢（2）升汞>过氧化氢>次氯酸钠（3）酒精>次氯酸钠>过氧化氢（4）酒精>过氧化氢>次氯酸钠7、外植体大小与接种成活率及脱毒效果的关系是：（4）
（1）外植体大，成活率高，脱毒效果好
（2）外植体大，成活率低，脱毒效果差
（3）外植体小，成活率高，脱毒效果好
（4）外植体小，成活率低，脱毒效果好
8、大多数热带园艺植物的适宜培养温度大约为：（3）
（1）18-22℃（2）23-27℃
（3）28-32℃（4）33-37℃
9、一般情况下，应把培养基的PH值调节到：（2）
（1）5.2-5.8 （2）5.8-6.2
（3）6.2-6.8 （4）6.8-7.2
10、下列常用的DNA分子标记中，与PCR技术无关的一项是：（3）
（1）RAPD （2）SSR
（3）RFLP （4）AFLP
四简答题
1、简述茎尖脱毒的原理
答：（1）病毒在植株上的分布是不均一的，茎尖分生组织几乎不带病毒；
（2）分生组织的细胞生长速度快，病毒在植物体内繁殖的速度相对较慢；（3）病毒的传播是靠筛管组织进行转移，或通过细胞间连丝传递给其他细胞，而茎尖区筛管组织不发达（或几乎没有），因此病毒的传递扩散也受到一定限制。
2、简述外植体的主要种类及其特点
答：茎尖——生长速度快，繁殖率高，而且不容易产生遗传变异。
茎段（带节或不带节）——多数情况下需经过脱分化阶段，其变异率会有所提高。
叶片——取材容易，操作方便，而且能够大幅度扩大外植体的来源，一般需要通过诱导愈伤组织并经再分化才能产生植株，变异率较高
花球和花蕾——具有较强的再生能力，胚胎发生能力较强，一般可通过诱导胚状体的途径实现植株再生。
花药——较专一地用于单倍体植株的诱导。
实际操作的难度大。
子叶、下胚轴——其再生能力和胚胎发生能力较强，多数情况下能够直接诱导不定芽或胚状体，而且诱导率较高，遗传较稳定，因而被广泛应用于离体培养。
种子、根、块茎、花瓣等——花瓣比叶片更接近于卵细胞这一最幼态的区域，因而花瓣可能具有更强的再生能力，种子本身就是一个结构完整的微小生命体，只要提供适宜的培养条件，直接生长发育个体植株，不需要脱分化和再分化的过程。
胚胎材料的另一特点，是具有较强的胚胎发生能力。
果实、汁胞——再生的难度可能比较大。
3、离体繁殖中分为哪四个阶段，各阶段中的关键问题是什么？
（1）无菌培养物的建立
适当的培养基、适当的外植体、材料灭菌及操作防菌、防止褐化、防止愈伤组织生长过快
（2）继代增殖阶段选择有效的繁殖途径、使用适当的培养基、防止转接污染
生根成苗阶段
（3）确定生根方式：试管内生根、试管外生根；注意练苗
（4）移栽成活阶段
4、简述PCR的原理
PCR实际上是在模板DNA、引物和4种脱氧核糖核苷三磷酸存在的条件下依赖于DNA聚合酶进行的酶促合成反应。
PCR全过程包括三个基本步骤：变性（即双链DNA模板加热变性成单链）、退火（又称复性，即在低温下引物与单链DNA互补配对）和延伸（在适宜温度下Taq DNA聚合酶催化引物沿着模板DNA延伸）。
这三个基本步骤构成的循环重复进行，可以使特异性DNA的扩增率达到数百万倍。
五问答题
1、褐变发生的原因是什么？影响因素有哪些？应该如何防止或减轻离体培养中
的褐变？
答：原理：外植体含有较多的酚类化合物，在氧气存在的情况下，多酚氧化酶催化酚类化合物氧化成褐色的醌类物质，醌类物质在酪氨酸酶的作用下，使外植体细胞中的蛋白质聚合，生长停止，最终死亡影响因素：基因型、生理状态及发育年龄、培养基（蔗糖、铵态氮、无机盐、分裂素）、培养条件、每代的培养时间防止措施：
（1）选择适当的外植体及培养条件（包括对取样植株进行预处理，切割外植体的方法技巧等）；
（2）选择适宜的培养条件；
（3）使用抗氧化剂；
（4）使用吸附剂
（5）连续转移（固体培养基）；
（6）不断添加新鲜培养液（悬浮培养）
2、就你所知，DNA分子标记有哪些种类，在遗传育种中有何应用？种类：
第一类为基于DNA－DNA杂交的DNA标记
第二类为基于PCR的DNA标记
第三类为基于PCR技术与限制性酶切技术结合的DNA标记，
第四类为基于单核苷酸多态性的DNA标记，即SNP标记应用：（1）品种鉴别与分类
（2）遗传多样性检测
（3）亲缘关系与系谱分析
（4）分子图谱构建与基因定位
（5）辅助育种
（6）特殊种质鉴定。
