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DB34/T 3399—20199附 录 E（资料性附录）常见药物对常见细菌药敏折点的参考值表E.1 常用药物对气单胞菌属细菌的药敏折点的参考值药物MIC折点（mg/L） 纸片药物 含量 （μg） 抑菌圈折点 （mm） S≦R> S≧ R< 磺胺及增效剂磺胺甲噁唑/甲氧苄啶- - 23.75/1.2517 12 甲氧苄啶 8 16 5 16 12 氟喹诺酮类恩诺沙星 0.5 2 10 22 18 环丙沙星 1 4 5 21 15 酰胺醇类 甲砜霉素 8 16 30 18 12 氟苯尼考 8 16 30 16 12 大环内酯类 红霉素 0.5 8 15 23 13 氨基糖甙类 新霉素 2 8 10 18 15 四环素类 土霉素4 16 30 19 14 强力霉素（多西环素）4 16 30 16 12 β-内酰胺类氨苄青霉素--10--表E.2 常用药物对假单胞菌属细菌的药敏折点的参考值药物MIC折点（mg/L） 纸片含量 （μg） 抑菌圈折点 （mm） S≦R> S≧ R< 磺胺及增效剂磺胺甲噁唑/甲氧苄啶- - 23.75/1.2517 12 甲氧苄啶 8 16 5 16 12 氟喹诺酮类恩诺沙星 0.5 2 10 22 18 环丙沙星 1 4 5 21 15 酰胺醇类 甲砜霉素 8 16 30 18 12 氟苯尼考 8 16 30 16 12 大环内酯类 红霉素 0.5 8 15 23 13 氨基糖甙类 新霉素 2 8 10 18 15 四环素类 土霉素4 16 30 19 14 强力霉素（多西环素）4 16 30 16 12 β-内酰胺类氨苄青霉素--10--DB34/T 3399—201910表E.3 常用药物对肠杆菌科细菌的药敏折点的参考值药物MIC折点（mg/L）纸片含量（μg）抑菌圈折点（mm）S≦ R> S≧ R<磺胺及增效剂 磺胺甲噁唑/甲氧苄啶 2 4 23.75/1.25 16 13 甲氧苄啶 2 4 5 18 15氟喹诺酮类 恩诺沙星 0.25 2 10 23 16 环丙沙星 0.25 2 5 26 20酰胺醇类 甲砜霉素 4 8 30 17 17 氟苯尼考 2 8 30 19 14大环内酯类 红霉素 8 32 15 14 10 氨基糖甙类 新霉素 2 8 10 16 12四环素类土霉素 2 8 30 21 13 强力霉素（多西环素） 2 8 30 21 13β-内酰胺类 氨苄青霉素 0.25 1 10 21 17 表E.4 常用药物对链球菌属细菌的药敏折点的参考值药物MIC折点（mg/L）纸片含量（μg）抑菌圈折点（mm）S≦ R> S≧ R<磺胺及增效剂 磺胺甲噁唑/甲氧苄啶 1 2 23.75/1.25 18 15 甲氧苄啶 2 4 5 20 17氟喹诺酮类 恩诺沙星 0.5 2 10 24 18 环丙沙星 0.5 2 5 22 18酰胺醇类 甲砜霉素 2 8 30 22 18 氟苯尼考 2 8 30 24 18大环内酯类 红霉素 0.5 4 15 21 18 氨基糖甙类 新霉素 4 16 10 15 12四环素类土霉素 1 2 30 23 20 强力霉素（多西环素） 1 2 30 23 20β-内酰胺类 氨苄青霉素 0.25 1 10 22 18_________________________________。
实验6 抗生素等对细菌的药敏性检测antimicrobial susceptibility testing in vitro（圆盘滤纸片法disc diffusion test）一、实验目的：1、了解抗生素及化学试剂对微生物生长的影响2、掌握不同化学试剂的作用原理、常用浓度及使用方法二、实验原理许多微生物可以产生抗生素，能选择性的抑制或杀死其他微生物。
凡是抗菌谱即抗菌范围不广泛的抗生素称为窄谱抗生素，如青霉素只对革兰氏阳性菌有抗菌作用，而对革兰氏阴性菌、结核菌、立克次体等均无疗效，故青霉素就属于窄谱抗生素。
原来窄谱的抗生素如青霉素经过改造，产生了许多半合成的青霉素，扩大了原来的抗菌范围，如氨苄青霉素，不但对革兰氏阳性菌有效，而且对革兰氏阴性菌也很有效，对伤寒杆菌、痢疾杆菌效果也不错。
不同化学药品或同一化学药品对不同微生物的杀菌能力不同，此外，试剂浓度、作用时间及环境条件不同，其效果也不同。
应用前需进行试验，灵活选择。
三、实验器材1、菌种：培养24~28 h大肠杆菌、金黄色葡萄球菌斜面菌种。
2、培养基和试剂：牛肉膏蛋白胨培养基，大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的菌液3、仪器与其他用品：无菌平皿，无菌吸管（1ml），酒精灯，接种环，涂布棒，无菌滤纸片，无菌镊子，记号笔, 消毒棉球和培养箱。
四、实验步骤（以金黄色葡萄球菌操作为例）（1）菌液制备：将待检菌接种于普通营养琼脂平板，37℃培养16～18小时，然后挑取普通营养琼脂平板上的纯培养菌落，悬于3ml生理盐水中，混匀后与菌液比浊管比浊。
以有黑字的白纸为背景，调整浊度与比浊管（0.5麦氏单位）相同。
（2）倒平板：将牛肉膏蛋白胨琼脂培养基溶化后倒平板，注意平皿中培养基厚度均匀，倒3套平板。
（平板厚度均匀，滤纸片大小一致）（3）涂平板：无菌操作，用无菌棉棒儿蘸取菌液（金葡）。
将多余菌液在液面上方管壁内轻轻旋转挤出，涂布在MH琼脂平板整个平面三次，每次旋转60度，最后沿周边绕两圈，保证涂均匀。
检验科细菌耐药性监测SOP文件一、耐甲氧西林葡萄球菌（Methicillin-Resistant Staphylococci,MRS）MRS是引起临床感染的常见病原菌，同时也是引起医院感染的重要病原菌之一，其耐药特点是耐受甲氧西林的同时，还对临床广泛应用的多种抗生素呈现多重耐药，因而该菌所致感染已成为临床治疗的一大难题。
（一）MRS测定方法1、纸片扩散法接种物：直接悬液法从非选择琼脂平皿上挑取少许单个菌落至无菌生理盐水调至浓度0.5 McFarland,具体操作同常规纸片法药敏试验。
苯唑西林纸片，1R g/片，检测MRS平板应置于35℃ （而不是37℃）孵育24h （而不是16〜18h）。
结果判断：金黄色葡萄球菌：S：三13mm；I：11〜12mm；R:W10mm。
凝固酶阴性葡萄球菌：S：三18mm；R W17mm。
对于苯唑西林纸片周围的抑菌圈内有任何小菌落或稀薄“菌膜”生长都应列为MRS。
2、琼脂筛选法：如果纸片试验结果中介时，可做琼脂筛选法，培养基为MH琼脂+6R g/ml苯唑西林+4%NaCl,调整菌液浓度0.5McFarland,于35℃孵育24h,凡有任何生长即使一个菌落均报MRS。
（二）MRS监测意义对于MRS,应报告对所有头抱菌素类和其他B -内酰胺酶类耐药，喹喏酮类药物，除氟哌酸外，环丙氟哌酸，氟嗪酸有较好抗菌活性（耐药率10〜23%之间），利福平敏感率在90%以上，未见耐万古霉素菌株，但已有万古霉素中介金黄色葡萄球菌。
二、高水平耐药的肠球菌（HLAR）及耐万古霉素的肠球菌（VRE）（一）药敏测定方法1、常规测定方法：采用K-B纸片扩散法，头抱菌素不用做（均为耐药），氨苄，庆大霉素，替考拉宁，万古霉素一定要做。
2、高水平氨基糖甙类耐药性测定：⑴高含量纸片扩散法：通常测定庆大霉素和链霉素的高度耐药性，具体操作如常规纸片法药敏试验。
药敏纸片：庆大霉素：120R g/片；链霉素300p g/片结果判断：R：W6mm；I：7~9mm；S：三10mm⑵含单一高浓度抗生素琼脂平皿法：稀释法：庆大霉素：R：三500R g/ml；链霉素：R：2000p g/ml3、万古霉素耐药性测定：纸片扩散法，具体操作如常规纸片法药敏试验，万古霉素纸片为：30p g/片，检测平皿置35℃24h （而不是16〜18h）,并注意抑菌圈内有无小菌落或薄膜生长。
药敏纸片的制备及药敏试验方法抗菌药物对预防或治疗动物疾病发挥了巨大的作用，但随着抗菌药物在兽医临床的广泛使用，尤其为了防治疾病，常常以亚剂量水平的药物添加于饲料中，以致长期使用后病原微生物产生了耐药性，使本来对治疗病原微生物感染有效的抗菌药物失去作用，给兽医临床上有效地预防和治疗疾病的发生带来一定的困难。
通过制作自家药敏纸片进行试验,可快速进行药物的筛选,获得对病原微生物敏感的药物, 对指导临床合理用药，提高治疗效果，节约养殖过程的用药费用，有着重要的意义。
一. 药敏纸片的制备1.材料抗菌药物、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、冰醋酸、新华1号定性滤纸、50mL容量瓶、无菌过滤器或一次性过滤器等2．方法2.1 PBS的配制A.制备0.2mol/L储备液0.2mol/LNa2HPO4 ：35.61g Na2HPO4.2H2O+1000 mL蒸馏水或71.62g Na2HPO4.12H2O+1000 mL蒸馏水0.2mol/L NaH2PO4 :31.2g NaH2PO4.2H2O+1000 mL蒸馏水或27.6g NaH2PO4.H2O+1000 mL蒸馏水B.将两种储备液按下表比例，配制成不同pH值的PBS,室温保存备用0.2mol/L磷酸缓冲液的配制2.2 抗菌药物原液的配制和保存期限抗菌药物溶剂浓度（ g/mL）－20℃4℃青霉素pH6.0 PBS 1280 3个月1周半合成青霉素类pH6.0 PBS 1280 3个月1周头孢菌素类pH7.8 PBS 1280 3个月1周氨基糖苷类pH7.8 PBS 1280 3个月4周四环素类pH4.5 PBS 12803个月1周多粘菌素B硫酸盐pH6.0 PBS 12803个月2周林可或氯林可霉素pH7.8 PBS 12803个月2周12803个月2周红霉素先用少量乙醇溶解，再用pH7.8 PBS1280长期长期氯霉素先用少量乙醇溶解，再用pH6.0 PBS12803个月1周利福平先用甲醇溶解，再用pH6.0PBS万古霉素蒸馏水12803个月2周两性霉素B 蒸馏水12803个月1周12803个月2周5－氟胞嘧啶先用少量二甲基甲酰胺溶解，再用蒸馏水1280长期长期甲氧苄氨嘧啶先用0.1mol/L乳酸溶解再用蒸馏水稀释2560长期长期各种磺胺药先用NaoH溶解再用蒸馏水稀释2.2.2 配制方法A.按抗菌药物原液中药物百分含量的要求，计算出纯抗菌药物的重量，方法是：抗菌药物终浓度×终体积。
拉氧头孢药敏纸片
组成：
纯棉滤纸，含拉氧头孢 30μg/片。
适用范围：本产品采用纸片扩散法（K-B法）体外检测细菌对拉氧头孢药物的敏感性。
1.1 产品规格：20片/瓶。
1.2 主要组成成分：纯棉滤纸，含拉氧头孢30μg/片。
2.1 外观
外观应满足如下要求：
2.1.1包装完整，无破损；外观应整洁，文字符号标识清晰；
2.1.2药敏纸片呈圆形，白色、边缘无缺口，表面平整，无裂痕；
2.2 纸片直径
拉氧头孢药敏纸片的直径应为：6.35mm±0.05mm。
2.3 抑菌环直径
用质控菌株进行纸片扩散法试验，95%的结果（抑菌环直径）应符合该质控菌株可接受范围(大肠杆菌ATCC 25922:28～35mm)。
注：抑菌环直径可接受范围参照CLSI M100 规定。
2.4 批内重复性
用同一批号拉氧头孢药敏纸片对质控菌株进行抑菌能力试验检测20个纸片，最大抑菌环与最小抑菌环直径之差不大于2.5mm。
2.5 批间重复性
用3个不同批号的拉氧头孢药敏纸片，对同一质控菌株进行抑菌能力试验，每个批号各检测10个纸片，同一平板上最大抑菌环与最小抑菌环直径之差的平均数不大于4mm。
2.6 稳定性
-20℃～0℃密封贮存。
有效期：12个月。
到失效期的药敏纸片进行抑菌圈直径检测，结果应符合2.3的要求。
