微生物鉴定与药敏试验流程 (1)

全自动微生物药敏原理一、微生物分离与鉴定全自动微生物药敏试验首先需要对微生物进行分离与鉴定。

这一步骤通常包括以下几种方法：1. 直接涂片法：将标本直接涂片，然后用显微镜观察微生物形态，种类和数量，以便进行初步的诊断和药敏试验。

2. 分离培养法：将标本接种到培养基上，经过一定时间的培养，使得微生物在培养基上繁殖，并且形成肉眼可见的菌落。

根据菌落的形态，颜色，大小等特征，可以对微生物进行鉴定。

3. 免疫学方法：利用抗原-抗体反应的特异性，对微生物进行鉴定。

这种方法具有快速、准确、灵敏度高等优点，但需要使用抗体，成本较高。

4. 分子生物学方法：利用DNA探针、PCR等技术对微生物进行鉴定。

这种方法具有高灵敏度、高特异性等优点，但需要使用昂贵的仪器和试剂。

二、药敏试验在完成微生物分离与鉴定后，需要进行药敏试验。

药敏试验的目的是测定微生物对各种抗生素的敏感程度，以便选择最合适的抗生素进行治疗。

药敏试验的方法通常包括以下几种：1. 纸片扩散法：将含有不同抗生素的药敏纸片贴在培养基上，观察细菌的生长情况。

如果细菌对某种抗生素敏感，则在药敏纸片周围会出现抑菌圈。

通过比较不同药敏纸片周围的抑菌圈大小，可以判断细菌对各种抗生素的敏感程度。

2. 稀释法：将细菌接种在含有不同浓度的抗生素的培养基上，观察细菌的生长情况。

通过比较不同浓度抗生素下细菌的生长情况，可以判断细菌对各种抗生素的敏感程度。

3. E-test法：将含有一定浓度抗生素的E-test试纸贴在培养基上，观察细菌的生长情况。

如果细菌对某种抗生素敏感，则在E-test试纸周围会出现明显的抑菌圈。

通过比较不同E-test试纸周围的抑菌圈大小，可以判断细菌对各种抗生素的敏感程度。

三、数据分析完成药敏试验后，需要对试验数据进行统计分析。

数据分析的方法通常包括以下几种：1. 定量分析：将药敏试验数据转化为定量指标，如敏感率、耐药率、中介率等。

这些指标可以反映微生物对各种抗生素的敏感程度，为临床治疗提供参考。

AmpC酶的产生与抗生素诱导有关，三代头孢、克拉维酸、亚胺培南均为强诱导剂。
药物 AMP AMC TZP KZ COX CTX FEP ATM ETP FM
MIC(µg/ml) 敏感性
药物
MIC(µg/ml)
≥32
R
IPM
≤1
≥32
R
AK
16
≥128
R
GN
4
≥64
LOREM
R
IPSUM
DOTOLBOR
头孢泊肟≤17mm（或MIC≥8ug/ml)
确 头孢他啶≤22mm（或MIC≥2ug/ml) 证 头孢噻肟≤27mm（或MIC≥2ug/ml)
头孢曲松≤25mm（或MIC≥2ug/ml) 氨曲南≤27mm（或MIC≥2ug/ml)
头孢他啶/克拉 维酸-头孢他啶
和 头孢噻肟/克拉 维酸-头孢噻肟
初 头孢泊肟≤22mm（或MIC≥8ug/ml)
氨苄，美洛，替卡
• 头孢噻吩 肠杆菌科
拉定，氨苄，克罗
• 万古霉素s 所有
替考拉宁s
• 奈啶酸 肠杆菌科
所有FQs
报告结果方式
✓ 敏感（S）
▫ 用常规用量治疗有效 ▫ 常规用药时达到的平均血药浓度超过细菌的MIC
5倍以上。
✓ 耐药（R）
▫ 用常规用量治疗不能抑制细菌的生长 ▫ MIC高于药物在血、体液中可能达到的浓度
✓ MRSA对当前所有使用的b-内酰胺类药物均耐药（除具 有抗MRSA活性的新的头孢菌素外，如：头孢洛林）。
✓ 值得注意的是：由于罕见非mecA介导的苯唑西林耐药 机制，即mecA阴性但苯唑西林MIC是耐药（ mecA ≥4 µg/ml）的菌株，应报告苯唑西林耐药。

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微生物检测流程
微生物检测的流程包括以下步骤：
1. 采集样本：在无菌环境中采集少部分食品样本，对样本实施均质处理，稀释样液，接种，然后恒温培养处理后的样本，取出观察食品样本。

2. 染色和观察：必要时，还需对标本行染色后再观察，这可对致病菌性质、来源进行鉴别，更能排除污染因素，使标本致病菌检出率得到大幅度提升。

3. 分离培养：若在镜检环节发现标本上吸附的细菌，就需对标本实施分离纯化并将其接种于适宜的培养基上，再将空气与温度调整至适合细菌生长的数值，获得便于进一步鉴定细菌。

4. 细菌鉴定：通过细菌形态、菌落特点、酶类检测、血清学试验、生化反应等方式鉴定分析分离获得的标本，明确致病原因。

5. 药敏试验：对分离致病菌行体外抗菌药物敏感性试验，预测其治疗作用，明确相关细菌耐药性，协助医生在临床诊断治疗中针对部分感染性疾病时采取合适药物，提升临床疗效。

6. 报告：要求在24小时内出具镜检报告，在24小时或次日出具初步鉴定与直接药敏结果；通常最后鉴定与细菌药敏结果不超过3天，除血培养外，任何一项送检标本需均在24小时内预报。

如需更多信息，可以查阅食品安全类书籍或者咨询微生物专家。

用物
准备
待测水样、泥土、无菌吸管，平皿，无菌生理盐水
素质要求
让学生熟悉细菌在自然界和人体的分布情况
操
作
步
骤
1.空气中细菌的检查
（1）方法：取普通平板（或血平板）1个，选室内或室外的一处空间，在离地面1m左右高度的桌面（或台面）上，打开平板盖，让培养基暴露于空气中，10min之后，迅速盖好盖子，在底部写上标记，放35℃培养18~24h，观察结果。
2.尿囊腔接种
将蛋胚在检卵灯上照视，并在绒毛尿囊膜血管较少的地方作记号。用碘酒消毒气室蛋壳，并用钢针在记号处钻一小孔。用带18mm长针头的1ml注射器吸取病毒液，针头刺入孔内，经绒毛尿囊膜入尿囊腔，注入0．1ml病毒液。用石蜡封孔后于37℃孵卵器孵育72小时。
3.羊膜腔接种
将孵育10—11天的蛋胚照视，画出气室范围，并在胚胎最靠近卵壳的一侧做记号。用齿钻在气室顶端磨一三角形，用镊子揭去蛋壳和壳膜，并滴加灭菌液体石蜡一滴，用镊子，刺穿下层壳膜和绒毛尿囊膜没有血管的地方，用26号针头的注射器，刺入羊膜腔内，注入病毒液 0．1ml。将卵壳的小窗封住，于37℃孵卵器内孵育48—72小时。
扣分标准
扣分
目的
了解鸡胚培养常见的几种接种方法；
掌握鸡胚尿囊腔接种的操作技术。
用物
准备
受精卵、孵卵器，检卵灯，齿钻，磨壳器，钢针，蛋座木架，注射器，2．5%碘酒，70%酒精，镊子，剪刀，封蜡（固体石蜡加 1/4凡士林，溶化），灭菌培养皿，灭菌盖玻片等。
素质要求
要求能够对不同的病毒通过鸡胚进行培养
操
作
用物
准备
菌种、葡萄糖蛋白胨培养基，甲基红
素质要求
能利用甲基红试验对大肠杆菌进行鉴定

微生物实验方法学性能验程序1、目的规范微生物实验室方法学性能验证程序，确保检测系统性能满足临床需求。

2、适用范围微生物实验室开展的细菌培养、鉴定和药敏试验。

3、职责微生物检验人员均需熟知并遵守本程序。

4.程序4.1 对于自建或非配套系统，检验程序验证内容宜包括精密度、线性、准确度、分析灵敏度、分析特异度、生物参考区间。

通常，培养方法的性能特征不包括精密度、线性和生物参考区间。

4.2 未经修改的配套商业鉴定系统4.2.1 新的鉴定系统使用前，反查阅已发表的完整。

科学的系统评估文献，作为性能验证的初级证据，再按优先顺序依次选择标准菌株、质控菌株或其他已知菌株对商业鉴定系统（包括自动、半自动、手工）没种板（条/卡/管）的鉴定/药敏结果的符合性进行验证。

4.2.2微生物鉴定试验：选择至少20个已经临床菌株（可包括合适的质控菌株），尽量覆盖本地区临床上常分离的病原菌，大型医院应结合临床选择更多类型的菌株。

按照检测系统标准作程序进行鉴定，正确率或符合率3日内检出。

4.2.4药敏试验:以质控标准菌株连续检测20~30日，每一组药物/细菌超出参考范围（抑菌圈直径或MIC）的频率应不超过（≤）1/20或3/30;也可采用替代质控方案，即连续5日，每日对每一组药物/细菌重复测定3次，每次单独制备接种物，15个数据超出参考范围（抑菌圈直径或MIC）的结果不超过（≤）1个，若失控结果为2~3个，则如前述，再进行5日，每日3次重复试验，30个数据失控结果应不超过（≤）3个。

药敏试验方法的评估还要确保耐药菌株的检出。

4.3 若性能验证后发现部分试验解果不符合实验室预期性能的要求，应首先先对试验条件、质量控制结果和操作过程进行梳理，解决相关存在的问题后重新试验，若重新试验的结果仍然不符合要求，应和试剂厂商沟通，优化试剂的试验条件后验证，若仍然不理想，则应该更换试剂。

若发现不合格原因是检测系统中试剂外的其他因素，则需对这些因素重新优化或者组合，必要时另外选择方法。

抗生素的种类 一.目的：
四、氨基糖苷类抗生素 按其来源分为：①由链霉菌属发酵滤液提 取获得，有链霉素、卡那霉素、妥布霉素、 核糖霉素、巴龙霉素、新霉素；②由小单 胞菌属发酵滤液中提取，有庆大霉素、福 提霉素；③半合成氨基糖苷类，有阿米卡 星、奈替米星、地贝卡星等。
抗生素的种类 一.目的：
五、喹诺酮类抗生素 第一代为窄谱抗生素，有新恶酸、奈啶 酸和恶喹酸。 第二代为广谱类抗生素，抗菌强度依次 为环丙沙星、氧氟沙星、洛美沙 星、氟咯沙星、培氟沙星、诺氟 沙星。 第三代为超广谱类抗生素，有司帕沙星、 妥舒沙星、左氟沙星等。
纸片的名称，然后用棉试子蘸取菌液，在试管内
壁轻挤去多余菌液后均匀涂布于整个平板表面3次， 每次旋转平板60度，最后沿平板内缘涂一周。放 置约5分钟后用镊子分别挟取所选择的药敏纸片贴 上。室温放置10分钟左右，恒温箱培养24h。
验操实作
• (4)、MH平板涂布均匀，放置5分钟再贴纸 片，纸片放置应该迅速准确，不得在平板 上拖动纸片，纸片间的距离和位置要均匀。 离平板边缘不小于15mm，两纸片间距离不 小于24mm。
实验原理 1.原理：
实验操作（接种与培养）
• (1)、取待测菌平板，观察菌落形态，涂片镜检， 革兰阴性杆菌做氧化酶试验，革兰阳性球菌做触 决定选择何组、何种药敏纸片。
酶实验。并根据实验结果对该菌株作出初步判断，
药敏试验选择纸片
• 触酶阳性的G＋球菌：青、苯唑、克林、庆大、环
丙沙星、万古、红霉素、头孢唑林 庆大、环丙沙星、万古
(一）苛养菌药敏试验抗生素的选用
A组一级试验并常规报告的抗微生物药 , 如肺炎链球菌用红霉素和青霉素。 B组一级试验有选择报告的抗微生物药 , 如肺炎链球菌用头孢噻肟或头孢曲松 。 C组补充试验有选择报告的抗微生物药， 如肺炎链球菌用头孢呋辛 。

2). 采血量：成人每次每瓶最好采血8-10ml，小儿每次每瓶 可采血1-5ml。
3). 采血次数：成人每天采血2-3次，通常间隔半小时或1小 时，在患者不同部位采血。
4). 培养方法：通常每次将血液分别加入需氧和厌氧两种培 养瓶中35C同时进行培养。每天观察结果。3天后如果 无菌生长则报告“培养48小时无菌生长”； 7天后如果 无菌生长则报告“培养7天无菌生长”。 上一页 下一页 返回
初步的推测性鉴定。
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（二）病原菌的分离培养 1. 很多细菌的形态和染色性缺乏明显特征，仅凭形态学不
能做确切的诊断，需经细菌的分离培养，甚至纯培养后 ，对细菌进行生化和血清学鉴定，方能明确感染的细菌 。 2. 原则上应对所有送检标本做分离培养，以便获得单个菌 落后进行纯培养，从而对细菌做进一步的生物学、免疫 学、致病性或细菌的药物敏感性等方面的检查，最终做 出确切的报告。 3. 细菌培养时应选择适宜的培养基，以便提供特定细菌生 长所需的必要条件。分离培养后根据菌落的大小、形态 、颜色、表面性状、透明度和溶血性等对细菌做出初步 的识别，然后根据生化反应结果及血清学试验对分离菌 做出鉴定。
（五）病原菌的核酸检测
1. 传统的微生物学鉴定技术主要根据微生物形态学和生化 等表型特征来进行。但有些试验耗时长、费用高或难以 顺利完成。随着分子生物学技术的发展，多种检测病原 菌核酸的实验技术已经被建立。这不但能有助于感染性 疾病的确诊，还能确定病原菌的基因型，使微生物学的 检测技术从细菌生物学检查进展到细菌分子生物学的鉴 定。
2. 分子生物学诊断技术常用于检测不能在体外培养或目前 的培养技术不敏感、费用高昂或耗时长的病原体。目前 常用的方法主要有聚合酶链反应 (polymerase chain reaction，PCR) 及核酸杂交技术( nucleotide hybridization)包括Southern印迹杂交(Southern blot)、Northem印迹杂交(Northern blot)、斑点杂交 (dot blot)和原位杂交(in situ hybridization，ISH) 等。

微生物学检查步骤临床微生物学实验室接到标本后应立即进行微生物学检验。

主要包括直接镜检、检测特异性抗原或病原体成分、进行分离培养和鉴定、体外药敏试验等。

（一）直接镜检1.初步诊断；2.指导进一步检出步骤和鉴定方法的选择；3.评价标本的质量。

（二）快速诊断快速检测病原体成分主要是指特异性抗原和核酸检测。

特异性抗原检测包括免疫荧光技术、胶乳凝集试验、酶免疫技术、对流免疫电泳、化学发光免疫测定等。

（免疫学检验技术）核酸检测包括核酸探针杂交、PCR技术。

（分子生物学检验技术）其他快速检测法还有气-液相色谱法、化学发光、生物发光测定法和基因或蛋白微型阵列芯片技术等。

（三）直接药敏试验鉴定结果快，但结果不明确，故分离出纯培养物后应再作体外药物敏感试验。

（四）常规检验1.分离培养：通常由正常无菌部位采取的标本接种血平板，置于空气或含5％～10％CO2的气缸中培养，大部分细菌可于24～48h生长良好。

若原始培养为阴性，但据镜检结果和临床信息提示可能有病原菌存在，则应再采集大量标本，离心浓缩或溶解离心法处理，取沉淀接种营养丰富的需氧或厌氧培养基来培养。

对于存在正常菌群部位采集的标本，分离时应采用选择培养基以利于病原菌生长，也可加某些抗生素抑制污染菌的生长。

对于某些感染标本中发现的细菌，如尿路感染的尿液中检出大肠埃希菌，可能是病原菌，也可能是污染菌或正常菌群，其临床意义的确定有赖于定量培养法。

2.鉴定：分离出的细菌一般应经过细菌形态、菌落特点、生化反应、血清学试验、动物接种等鉴定。

目前尚有某些微量鉴定系统，其鉴定快速、简便，值得推广。

如用于鉴定肠杆菌科的20E，鉴定非发酵菌的20NE及鉴定厌氧菌的20A等。

3.体外纯菌药物敏感性试验：常用方法包括抑菌试验、杀菌试验、医学。

教育网整理联合药敏试验和检测细菌产生的抗生素灭活酶等。

（五）报告①直接镜检要求2h报告，说明标本是否合格，发现微生物情况和特点；②初步鉴定和直接药敏结果于24h或次晨报告，报告可能的病原菌和直接药敏结果；③最后鉴定和细菌药敏结果一般不超过3天，还规定除血培养外，所有送检标本必须在24h内预报。

竭诚为您提供优质文档/双击可除微生物药敏实验报告篇一：微生物学实验报告20XX级制药专业工业微生物学实验报告姓名:刘甜甜学号:20XX304090班级:制药12-2班指导老师：王健日期：20XX.6.11一、实验目的1、抑制或杀死微生物的一些物理、化学及生物的因素抑菌、杀菌的原理。

2、掌握物理、化学及生物的因素抑菌、杀菌的试验方法。

3、了解细菌的形态特征、染色特点。

4、了解细菌在普通培养基、选择培养基、血平板上的菌落特征。

5、掌握细菌分离划线培养的方法。

6、掌握细菌的初步生化反应。

7、掌握细菌密集划线法，掌握细菌K-b药敏纸片法。

二、实验内容1细菌gram’sstain染色，镜检，观察记录细菌形态和特色特征ˉˉ1.1实验原理：染色原理：g+菌与g菌细胞壁不同，g+菌比g菌细胞内核糖核酸镁盐含量高，g+ˉ菌比g等电点低。

1.2实验步骤：1.2.1.制片：○1涂片：取半滴生理盐水置一洁净玻片上，以无菌操作技术自平板上去菌落少许，与生理盐水混匀，均匀涂布约1cm2大小，自然干燥；②固定：取含菌膜的玻片与酒精灯火焰上来回三次，使菌膜牢固附于玻片表面；1.2.2染色：①初染：取结晶紫一到两滴覆盖于菌膜表面，轻微摇动，维持30〃~40〃,细流水冲洗，切勿直接冲洗涂片区域；②媒染：取卢氏碘液1~2滴覆盖菌膜表面，轻微摇动，维持30〃~40〃,用上法细流水冲洗；③脱色：取95%酒精2~3滴于菌膜表面，轻微摇动，局部接近无色即可,用上法细流水冲洗；④复染：取1：10稀释石炭酸复红覆盖涂片区域，轻微摇动，用上法细流水冲洗；⑤吸水纸初步吸干玻片水分，然后自然干燥；1.2.3镜检：于涂片区域加半滴香波油，油镜（100倍目镜）下。

三、分离培养1实验原理：四区划线法是把混杂着在一起的微生物或同一微生物群体的不同细胞用接种环在平板培养基表面通过分区划线稀释而得到较多独立分布的单个细胞，经培养繁殖后生成个菌落。

有时这些单菌落并非由单个细胞繁殖而来，故必须反复分离多次才能得到纯种。

制作步骤：
1、纸片的准备 2、药液的配制 3、抗菌药敏纸片制作
质控：标准菌株的抑菌 圈直径应落在预期范围 内，如果超出该范围， 应视为失控而予以纠正。
简易药敏片的制法
纸片的准备：
1、取新华1号定性滤纸，用打孔机打成6毫米直径的圆 形小纸片。取圆纸片50片放入清洁干燥的青霉素空瓶中， 瓶口以单层牛皮纸包扎。经15磅15-20分钟高压消毒后， 放在37℃温箱或烘箱中数天，使完全干燥。
3、为经验用药提供所选药物的参考依据，可预测抗菌 治疗的效果。“敏感”治疗可能有效；“耐药” 肯定 失败
4、新抗菌药的研究
以下情况不需进行药敏测定：
标本污染细菌，非致病菌引起 已知某些抗菌药对某菌有良好的抗菌作用且很少
有耐药菌产生 已知细菌全部耐药的药物 对营养要求高而不易生长的细菌
二、常用的药敏测定方法
3、E测定法（E test）：
与扩散法相似，但药物包被于长塑料条上，能够精确测定 MIC值。适于一些特殊病原菌的药敏测试，但价格较为昂贵。品（单品药、药厂的成品药、中药）、恒温培养箱、药敏片、 培养基、平皿（直径90mm）、烧杯、蒸馏水、滤纸、打孔器（文 具店有售）、
1、纸片琼脂扩散法（3/3）
3、培养观 察
将平 皿培养基 置于37℃ 温箱中倒 置培养24 小时后， 观察效果
2、牛津杯法
第一步同“纸片法”细菌涂抹平板。 以无菌操作将灭菌的不锈钢小管（内径6nm、外径8nm、
高10 nm的圆形小管，管的两端要光滑，也可用玻璃管、 瓷管），放置在培养基上，轻轻加压，使其与培养基接 触无空隙，并在小管处标记各种药物名称。每个平板可 放4-6支小管。待分钟后，分别向各小管中滴加一定数 量的各种药液，勿使其外溢。

SOP_06-15 临床微生物实验室管理程序一、目的：为贯彻《传染病防治法》、《临床输血技术规范》、《传染病防治实施办法》，《医院感染管理规范》、《微生物和生物医学实验室SW AQ》，以确保临床微生物实验与AQ。

二、适用范围：微生物实验室。

三、支持性文件：《临床实验室管理办法》、《全国临床检验操作规程》、《微生物和生物医学实验室SWAQ》等四、执行人员：微生物实验与值班人员。

五、操作程序：微生物实验室管理程序微生物实验室临床微生物室是进行细菌学实验的场所，在此完成标本接种、孵育、分离、细菌鉴定和药敏试验等工作。

实验室的内部装饰，应注意与外界有良好的隔离条件，并具备紧急的消防、AQ、急救设施。

细菌室应该符合以下条件：1、实验室必须安装严密的门窗，以防外部污浊气体和昆虫进入室内污染环境。

室内禁用电扇，以避免加速气体流动，造成细菌播散。

2、细菌室必须装有供空气消毒的紫外线灯，置于离操作台面1m的高度，每天开始工作前照射20min。

对紫外线灯的消毒效果要定期检查，及时更换失效的灯管。

3、室内备有工作人员洗手使用的肥皂和自来水源。

此水源不可与处理标本相关的水源共用。

须设置消毒剂水盆，供操作后浸手用。

4、室内必须常备消毒剂，如来苏或过氧乙酸，一旦发生菌液溅落试验台面或地面，应能立即进行消毒处理。

5、室内操作台须每日用消毒剂擦洗，地面至少每周用消毒剂擦洗1次。

6、室内对接收的标本和消毒过的器具，要分别指定地点放置，特别是对无菌和有菌的器具要明显隔开。

用过的试管、平皿必须及时高压灭菌处理。

7、不能或不便高压灭菌的标本和废弃物品须焚化处理。

8、细菌室根据当地的气温特点，安装空调机，以适合细菌实验工作。

9、设置必要的消防设备。

无菌实验室对无菌实验室以及在其中操作的要求如下：1、无菌室应完全封闭，人员出入应有两道门，其间应隔有缓冲区。

无菌室与外界开有一拉门小窗，供传递器具用。

2、在无菌室中仅限于分装无菌的培养基等操作，不进行有菌标本的分离及其他操作。

微生物培养、药敏试验得流程及意义一、微生物培养及药敏试验得总述微生物培养就就是使用体外试验得方法检测可能导致感染得病原菌，并给以药敏结果，为临床医生针对某一特定得临床感染提供依据。

而药敏试验则就是承接微生物培养得一项工作，即对于培养得到得病原菌进行体外试验检测细菌对于抗菌药物得耐药性，来预测抗菌药物得临床治疗效果，从而为临床医生提供选用抗菌药物得依据来治疗感染。

对于检测到得可能得致病菌进行药敏试验时选择得药物就是参照美国得CLSI推荐得标准制定得。

尤其，使用全自动微生物分析仪进行药敏试验时有固定得药敏组合，不就是人为可以随意添加或减少得。

（一）微生物得培养与药敏试验得流程基本为：①将标本进行处理（不就是所有得标本都需要处理）；②将标本接种于不同得培养皿中在不同条件得培养箱中进行培养（不同得标本所含菌得种类不同，不同菌得生长条件不同，因此需要接种于不同得培养皿中）；③24h后观察培养皿中细菌得生长情况：a、此时若无细菌培养，继续放回培养箱中培养24h，若仍然无细菌生长则判定为阴性结果，因此阴性结果出具得时间为48h以后。

b、若有细菌生长，要根据形态与气味等对细菌进行初步得判定，若能判定出细菌得种类，则进行相应得药敏试验。

贴有药敏片得培养皿在培养箱中培养24h后进行药敏结果得解读，然后报告结果，这种微生物培养及药敏结果报告出具得时间就就是48h以后。

由于不同得细菌得生长得速度不同，有些细菌在培养24h后不能完全判定结果甚者24h培养后无法观察到明显得细菌生长得则需要继续培养24h，即连续培养48h后同样根据菌落得形态、气味等来观察判定细菌得种类然后进行药敏试验。

这种微生物培养与药敏试验结果出具需要72h以后。

而血液、骨髓等标本则就是利用不同于上述培养方式得方法进行培养。

它有专门得培养瓶与仪器。

这种仪器会自动监测培养瓶中得变化来判定有无细菌生长，若有细菌生长仪器会发出警报。

在培养5天内任何时间发出警报得培养瓶都要抽取瓶中得物质在培养皿中进行接种培养，同样在菌种鉴定后进行药敏试验；若在培养5天内不发出警报得培养瓶则视为阴性结果。

第 1 页共5 页梅里埃ATB微生物药敏鉴定分析仪操作规程1 主要技术指标梅里埃ATB微生物鉴定／药敏分析系统融合了自动化、电脑化及微生物微量生化反应测试方法，可同时进行微生物分析鉴定（ID）与药敏（MIC）检测，使细菌鉴定／药敏分析规范化、标准化、现代化。

1.1完善的分析系统：微生物鉴定分析系统，微生物药敏分析系统统计分析／院内感染监测专家系统联网功能1.2药物种类：呋喃类，磺胺类，喹诺酮类，青霉素类大环内酯类，氨基糖甙类，头孢菌素类1.2鉴定范围：肠杆菌科，非发酵菌，葡萄球菌属，真菌，微球菌属，链球菌属，肠球菌属，弧菌属1.3院内感染检测环境空气，物体表面，医疗用品，消毒剂及保存液，血液透析2 适用范围梅里埃ATB微生物分析系统(包括微生物鉴定和药敏分析两大功能)；是对己分离培养出来的细菌、真菌等微生物进行种、属鉴定，并同时测定该菌对各种抗菌药物敏感/耐药程度的专用设备。

3 工作原理自1880年郭霍(Koch)发明固体培养基，对细菌的研究技术有了重大的第 2 页共5 页突破之后，一个多世纪以来，人类对细菌的研究和认识已经得到了极大的成就，对细菌分类的理论根据和方法已趋成熟，命名已经统一，对繁浩的各种细菌众多的生物学、物理学特性己基本明确，从20世纪初开始，形成了利用各种细菌之间生物学、物理学特性的差异或不同，来区别和鉴定细菌种类的方法，不断丰富发展，沿用至今，成为细菌鉴定的常规方法。

但由于细菌种类繁多，生物学性状错综复杂，实验操作繁琐、费时，不仅初学者不易掌握，有经验者也常感困惑。

20世纪70年代，由于电子计算机的发展，有人首先利用信息编码来签定细菌，将复杂的各种细菌的生物学性状建立数据库，被检菌的各种生物性状测出后，输入电脑与贮存信息相比较即刻可判断未知菌的种属。

八十年代初己设计出各种多项生物学试验的套装组合，与电脑贮存的项目内容相对应，即细菌的编码鉴定法，很快在全球得到了重视，迅速推广应用。

• 非发酵革兰阴性杆菌
是指一群不能利用葡萄糖或仅能以氧化形式利用葡萄糖的 革兰阴性杆菌。
包括：铜绿假单胞菌、不动杆菌属、沙麦芽窄食单胞菌、 洋葱克雷伯菌
大肠埃希菌
接种及生化
可见中等大小、圆形、凸起的灰白色菌落少数呈 β-溶血 ，发酵乳糖，硝酸盐还原试验阳性
镜检与趋向性试验
革兰氏阴性杆菌，氧化酶试验阴性
金葡菌的菌落小
生长因子
把可疑菌密涂于脑心浸液琼脂平 皿上，把X、V和X+V因子纸片贴 在平皿上，细菌只在X+V因子周 围生长，不在X因子或V因子周围
微生物检验的意义与流程
临床细菌工作者需要从各种标本中分离识别细菌是属 于病原菌、条件致病菌或正常菌群，要正确鉴定分离 出的微生物的归属或种。因为只有明确归属的细菌， 才有可能根据特定的形态、培养和生化特征，确立未 知细菌的分类属相，药敏实验的判断规则，并作为感 染疾病治疗的依据。
标本采集 镜检接种 培养鉴定 药敏实验
人体口腔、鼻咽部的正常菌群，并不会引起疾病。当机体抵抗 力下降时，可引起大叶性肺炎、支气管肺炎，如处理不当可导 致血流播散，导致败血症。
肺炎链球菌
涂片：革兰阳 性球菌，矛头 状尖端相背或 短链排列，有
荚膜 M1
M4
菊糖发酵试验 阳性、 胆汁溶
菌试验阳性
血平板上为灰白 色、扁平光滑、 湿润半透明、草 绿色溶血环。培 养久后，菌落中
镜检染色
革兰阴性杆菌，菌体呈多形体，球杆状 和长丝状，成对或成链排列，有鞭毛
鉴定
氧化酶、触酶试验阳性，有动力精氨酸水 解酶阳性，氧化分解葡萄糖，但不发酵
临床
术后伤口感染、褥疮、脓肿、烧伤后感染、化脓性 中耳炎，菌血症和院感的主要致病菌

微生物培养、药敏试验的流程及意义一、微生物培养及药敏试验的总述微生物培养就是使用体外试验的方法检测可能导致感染的病原菌，并给以药敏结果,为临床医生针对某一特定的临床感染提供依据。

而药敏试验则是承接微生物培养的一项工作,即对于培养得到的病原菌进行体外试验检测细菌对于抗菌药物的耐药性,来预测抗菌药物的临床治疗效果,从而为临床医生提供选用抗菌药物的依据来治疗感染。

对于检测到的可能的致病菌进行药敏试验时选择的药物是参照美国的CLSI推荐的标准制定的.尤其，使用全自动微生物分析仪进行药敏试验时有固定的药敏组合，不是人为可以随意添加或减少的。

(一）微生物的培养和药敏试验的流程基本为：①将标本进行处理（不是所有的标本都需要处理）；②将标本接种于不同的培养皿中在不同条件的培养箱中进行培养（不同的标本所含菌的种类不同,不同菌的生长条件不同，因此需要接种于不同的培养皿中);③24h后观察培养皿中细菌的生长情况：a。

此时若无细菌培养，继续放回培养箱中培养24h，若仍然无细菌生长则判定为阴性结果，因此阴性结果出具的时间为48h以后.b.若有细菌生长，要根据形态和气味等对细菌进行初步的判定,若能判定出细菌的种类，则进行相应的药敏试验。

贴有药敏片的培养皿在培养箱中培养24h后进行药敏结果的解读，然后报告结果，这种微生物培养及药敏结果报告出具的时间就是48h以后。

由于不同的细菌的生长的速度不同,有些细菌在培养24h后不能完全判定结果甚者24h 培养后无法观察到明显的细菌生长的则需要继续培养24h，即连续培养48h后同样根据菌落的形态、气味等来观察判定细菌的种类然后进行药敏试验。

这种微生物培养和药敏试验结果出具需要72h以后.而血液、骨髓等标本则是利用不同于上述培养方式的方法进行培养.它有专门的培养瓶和仪器。

这种仪器会自动监测培养瓶中的变化来判定有无细菌生长,若有细菌生长仪器会发出警报。

在培养5天内任何时间发出警报的培养瓶都要抽取瓶中的物质在培养皿中进行接种培养，同样在菌种鉴定后进行药敏试验；若在培养5天内不发出警报的培养瓶则视为阴性结果。