微生物鉴定与药敏试验流程 (1)
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全自动微生物药敏原理
全自动微生物药敏原理一、微生物分离与鉴定全自动微生物药敏试验首先需要对微生物进行分离与鉴定。
这一步骤通常包括以下几种方法：1. 直接涂片法：将标本直接涂片，然后用显微镜观察微生物形态，种类和数量，以便进行初步的诊断和药敏试验。
2. 分离培养法：将标本接种到培养基上，经过一定时间的培养，使得微生物在培养基上繁殖，并且形成肉眼可见的菌落。
根据菌落的形态，颜色，大小等特征，可以对微生物进行鉴定。
3. 免疫学方法：利用抗原-抗体反应的特异性，对微生物进行鉴定。
这种方法具有快速、准确、灵敏度高等优点，但需要使用抗体，成本较高。
4. 分子生物学方法：利用DNA探针、PCR等技术对微生物进行鉴定。
这种方法具有高灵敏度、高特异性等优点，但需要使用昂贵的仪器和试剂。
二、药敏试验在完成微生物分离与鉴定后，需要进行药敏试验。
药敏试验的目的是测定微生物对各种抗生素的敏感程度，以便选择最合适的抗生素进行治疗。
药敏试验的方法通常包括以下几种：1. 纸片扩散法：将含有不同抗生素的药敏纸片贴在培养基上，观察细菌的生长情况。
如果细菌对某种抗生素敏感，则在药敏纸片周围会出现抑菌圈。
通过比较不同药敏纸片周围的抑菌圈大小，可以判断细菌对各种抗生素的敏感程度。
2. 稀释法：将细菌接种在含有不同浓度的抗生素的培养基上，观察细菌的生长情况。
通过比较不同浓度抗生素下细菌的生长情况，可以判断细菌对各种抗生素的敏感程度。
3. E-test法：将含有一定浓度抗生素的E-test试纸贴在培养基上，观察细菌的生长情况。
如果细菌对某种抗生素敏感，则在E-test试纸周围会出现明显的抑菌圈。
通过比较不同E-test试纸周围的抑菌圈大小，可以判断细菌对各种抗生素的敏感程度。
三、数据分析完成药敏试验后，需要对试验数据进行统计分析。
数据分析的方法通常包括以下几种：1. 定量分析：将药敏试验数据转化为定量指标，如敏感率、耐药率、中介率等。
这些指标可以反映微生物对各种抗生素的敏感程度，为临床治疗提供参考。
常用临床病原学检测
AmpC酶的产生与抗生素诱导有关，三代头孢、克拉维酸、亚胺培南均为强诱导剂。
药物 AMP AMC TZP KZ COX CTX FEP ATM ETP FM
MIC(µg/ml) 敏感性
药物
MIC(µg/ml)
≥32
R
IPM
≤1
≥32
R
AK
16
≥128
R
GN
4
≥64
LOREM
R
IPSUM
DOTOLBOR
头孢泊肟≤17mm（或MIC≥8ug/ml)
确 头孢他啶≤22mm（或MIC≥2ug/ml) 证 头孢噻肟≤27mm（或MIC≥2ug/ml)
头孢曲松≤25mm（或MIC≥2ug/ml) 氨曲南≤27mm（或MIC≥2ug/ml)
头孢他啶/克拉 维酸-头孢他啶
和 头孢噻肟/克拉 维酸-头孢噻肟
初 头孢泊肟≤22mm（或MIC≥8ug/ml)
氨苄，美洛，替卡
• 头孢噻吩 肠杆菌科
拉定，氨苄，克罗
• 万古霉素s 所有
替考拉宁s
• 奈啶酸 肠杆菌科
所有FQs
报告结果方式
✓ 敏感（S）
▫ 用常规用量治疗有效 ▫ 常规用药时达到的平均血药浓度超过细菌的MIC
5倍以上。
✓ 耐药（R）
▫ 用常规用量治疗不能抑制细菌的生长 ▫ MIC高于药物在血、体液中可能达到的浓度
✓ MRSA对当前所有使用的b-内酰胺类药物均耐药（除具 有抗MRSA活性的新的头孢菌素外，如：头孢洛林）。
✓ 值得注意的是：由于罕见非mecA介导的苯唑西林耐药 机制，即mecA阴性但苯唑西林MIC是耐药（ mecA ≥4 µg/ml）的菌株，应报告苯唑西林耐药。
药物 AMP AMC TZP KZ COX CTX FEP ATM ETP FM
MIC(µg/ml) 敏感性
药物
MIC(µg/ml)
≥32
R
IPM
≤1
≥32
R
AK
16
≥128
R
GN
4
≥64
LOREM
R
IPSUM
DOTOLBOR
头孢泊肟≤17mm（或MIC≥8ug/ml)
确 头孢他啶≤22mm（或MIC≥2ug/ml) 证 头孢噻肟≤27mm（或MIC≥2ug/ml)
头孢曲松≤25mm（或MIC≥2ug/ml) 氨曲南≤27mm（或MIC≥2ug/ml)
头孢他啶/克拉 维酸-头孢他啶
和 头孢噻肟/克拉 维酸-头孢噻肟
初 头孢泊肟≤22mm（或MIC≥8ug/ml)
氨苄，美洛，替卡
• 头孢噻吩 肠杆菌科
拉定，氨苄，克罗
• 万古霉素s 所有
替考拉宁s
• 奈啶酸 肠杆菌科
所有FQs
报告结果方式
✓ 敏感（S）
▫ 用常规用量治疗有效 ▫ 常规用药时达到的平均血药浓度超过细菌的MIC
5倍以上。
✓ 耐药（R）
▫ 用常规用量治疗不能抑制细菌的生长 ▫ MIC高于药物在血、体液中可能达到的浓度
✓ MRSA对当前所有使用的b-内酰胺类药物均耐药（除具 有抗MRSA活性的新的头孢菌素外，如：头孢洛林）。
✓ 值得注意的是：由于罕见非mecA介导的苯唑西林耐药 机制，即mecA阴性但苯唑西林MIC是耐药（ mecA ≥4 µg/ml）的菌株，应报告苯唑西林耐药。
微生物鉴定及药敏分析系统的操作流程
微生物鉴定及药敏分析系统的操作流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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微生物检测流程
微生物检测流程
微生物检测的流程包括以下步骤：
1. 采集样本：在无菌环境中采集少部分食品样本，对样本实施均质处理，稀释样液，接种，然后恒温培养处理后的样本，取出观察食品样本。
2. 染色和观察：必要时，还需对标本行染色后再观察，这可对致病菌性质、来源进行鉴别，更能排除污染因素，使标本致病菌检出率得到大幅度提升。
3. 分离培养：若在镜检环节发现标本上吸附的细菌，就需对标本实施分离纯化并将其接种于适宜的培养基上，再将空气与温度调整至适合细菌生长的数值，获得便于进一步鉴定细菌。
4. 细菌鉴定：通过细菌形态、菌落特点、酶类检测、血清学试验、生化反应等方式鉴定分析分离获得的标本，明确致病原因。
5. 药敏试验：对分离致病菌行体外抗菌药物敏感性试验，预测其治疗作用，明确相关细菌耐药性，协助医生在临床诊断治疗中针对部分感染性疾病时采取合适药物，提升临床疗效。
6. 报告：要求在24小时内出具镜检报告，在24小时或次日出具初步鉴定与直接药敏结果；通常最后鉴定与细菌药敏结果不超过3天，除血培养外，任何一项送检标本需均在24小时内预报。
如需更多信息，可以查阅食品安全类书籍或者咨询微生物专家。
微生物学检验--操作流程及评分标准
用物
准备
待测水样、泥土、无菌吸管，平皿，无菌生理盐水
素质要求
让学生熟悉细菌在自然界和人体的分布情况
操
作
步
骤
1.空气中细菌的检查
（1）方法：取普通平板（或血平板）1个，选室内或室外的一处空间，在离地面1m左右高度的桌面（或台面）上，打开平板盖，让培养基暴露于空气中，10min之后，迅速盖好盖子，在底部写上标记，放35℃培养18~24h，观察结果。
2.尿囊腔接种
将蛋胚在检卵灯上照视，并在绒毛尿囊膜血管较少的地方作记号。用碘酒消毒气室蛋壳，并用钢针在记号处钻一小孔。用带18mm长针头的1ml注射器吸取病毒液，针头刺入孔内，经绒毛尿囊膜入尿囊腔，注入0．1ml病毒液。用石蜡封孔后于37℃孵卵器孵育72小时。
3.羊膜腔接种
将孵育10—11天的蛋胚照视，画出气室范围，并在胚胎最靠近卵壳的一侧做记号。用齿钻在气室顶端磨一三角形，用镊子揭去蛋壳和壳膜，并滴加灭菌液体石蜡一滴，用镊子，刺穿下层壳膜和绒毛尿囊膜没有血管的地方，用26号针头的注射器，刺入羊膜腔内，注入病毒液 0．1ml。将卵壳的小窗封住，于37℃孵卵器内孵育48—72小时。
扣分标准
扣分
目的
了解鸡胚培养常见的几种接种方法；
掌握鸡胚尿囊腔接种的操作技术。
用物
准备
受精卵、孵卵器，检卵灯，齿钻，磨壳器，钢针，蛋座木架，注射器，2．5%碘酒，70%酒精，镊子，剪刀，封蜡（固体石蜡加 1/4凡士林，溶化），灭菌培养皿，灭菌盖玻片等。
素质要求
要求能够对不同的病毒通过鸡胚进行培养
操
作
用物
准备
菌种、葡萄糖蛋白胨培养基，甲基红
素质要求
能利用甲基红试验对大肠杆菌进行鉴定
准备
待测水样、泥土、无菌吸管，平皿，无菌生理盐水
素质要求
让学生熟悉细菌在自然界和人体的分布情况
操
作
步
骤
1.空气中细菌的检查
（1）方法：取普通平板（或血平板）1个，选室内或室外的一处空间，在离地面1m左右高度的桌面（或台面）上，打开平板盖，让培养基暴露于空气中，10min之后，迅速盖好盖子，在底部写上标记，放35℃培养18~24h，观察结果。
2.尿囊腔接种
将蛋胚在检卵灯上照视，并在绒毛尿囊膜血管较少的地方作记号。用碘酒消毒气室蛋壳，并用钢针在记号处钻一小孔。用带18mm长针头的1ml注射器吸取病毒液，针头刺入孔内，经绒毛尿囊膜入尿囊腔，注入0．1ml病毒液。用石蜡封孔后于37℃孵卵器孵育72小时。
3.羊膜腔接种
将孵育10—11天的蛋胚照视，画出气室范围，并在胚胎最靠近卵壳的一侧做记号。用齿钻在气室顶端磨一三角形，用镊子揭去蛋壳和壳膜，并滴加灭菌液体石蜡一滴，用镊子，刺穿下层壳膜和绒毛尿囊膜没有血管的地方，用26号针头的注射器，刺入羊膜腔内，注入病毒液 0．1ml。将卵壳的小窗封住，于37℃孵卵器内孵育48—72小时。
扣分标准
扣分
目的
了解鸡胚培养常见的几种接种方法；
掌握鸡胚尿囊腔接种的操作技术。
用物
准备
受精卵、孵卵器，检卵灯，齿钻，磨壳器，钢针，蛋座木架，注射器，2．5%碘酒，70%酒精，镊子，剪刀，封蜡（固体石蜡加 1/4凡士林，溶化），灭菌培养皿，灭菌盖玻片等。
素质要求
要求能够对不同的病毒通过鸡胚进行培养
操
作
用物
准备
菌种、葡萄糖蛋白胨培养基，甲基红
素质要求
能利用甲基红试验对大肠杆菌进行鉴定
微生物实验方法学性能验程序
微生物实验方法学性能验程序1、目的规范微生物实验室方法学性能验证程序，确保检测系统性能满足临床需求。
2、适用范围微生物实验室开展的细菌培养、鉴定和药敏试验。
3、职责微生物检验人员均需熟知并遵守本程序。
4.程序4.1 对于自建或非配套系统，检验程序验证内容宜包括精密度、线性、准确度、分析灵敏度、分析特异度、生物参考区间。
通常，培养方法的性能特征不包括精密度、线性和生物参考区间。
4.2 未经修改的配套商业鉴定系统4.2.1 新的鉴定系统使用前，反查阅已发表的完整。
科学的系统评估文献，作为性能验证的初级证据，再按优先顺序依次选择标准菌株、质控菌株或其他已知菌株对商业鉴定系统（包括自动、半自动、手工）没种板（条/卡/管）的鉴定/药敏结果的符合性进行验证。
4.2.2微生物鉴定试验：选择至少20个已经临床菌株（可包括合适的质控菌株），尽量覆盖本地区临床上常分离的病原菌，大型医院应结合临床选择更多类型的菌株。
按照检测系统标准作程序进行鉴定，正确率或符合率3日内检出。
4.2.4药敏试验:以质控标准菌株连续检测20~30日，每一组药物/细菌超出参考范围（抑菌圈直径或MIC）的频率应不超过（≤）1/20或3/30;也可采用替代质控方案，即连续5日，每日对每一组药物/细菌重复测定3次，每次单独制备接种物，15个数据超出参考范围（抑菌圈直径或MIC）的结果不超过（≤）1个，若失控结果为2~3个，则如前述，再进行5日，每日3次重复试验，30个数据失控结果应不超过（≤）3个。
药敏试验方法的评估还要确保耐药菌株的检出。
4.3 若性能验证后发现部分试验解果不符合实验室预期性能的要求，应首先先对试验条件、质量控制结果和操作过程进行梳理，解决相关存在的问题后重新试验，若重新试验的结果仍然不符合要求，应和试剂厂商沟通，优化试剂的试验条件后验证，若仍然不理想，则应该更换试剂。
若发现不合格原因是检测系统中试剂外的其他因素，则需对这些因素重新优化或者组合，必要时另外选择方法。
微生物学检验(第3版)药物敏感试验
抗生素的种类 一.目的：
四、氨基糖苷类抗生素 按其来源分为：①由链霉菌属发酵滤液提 取获得，有链霉素、卡那霉素、妥布霉素、 核糖霉素、巴龙霉素、新霉素；②由小单 胞菌属发酵滤液中提取，有庆大霉素、福 提霉素；③半合成氨基糖苷类，有阿米卡 星、奈替米星、地贝卡星等。
抗生素的种类 一.目的：
五、喹诺酮类抗生素 第一代为窄谱抗生素，有新恶酸、奈啶 酸和恶喹酸。 第二代为广谱类抗生素，抗菌强度依次 为环丙沙星、氧氟沙星、洛美沙 星、氟咯沙星、培氟沙星、诺氟 沙星。 第三代为超广谱类抗生素，有司帕沙星、 妥舒沙星、左氟沙星等。
纸片的名称，然后用棉试子蘸取菌液，在试管内
壁轻挤去多余菌液后均匀涂布于整个平板表面3次， 每次旋转平板60度，最后沿平板内缘涂一周。放 置约5分钟后用镊子分别挟取所选择的药敏纸片贴 上。室温放置10分钟左右，恒温箱培养24h。
验操实作
• (4)、MH平板涂布均匀，放置5分钟再贴纸 片，纸片放置应该迅速准确，不得在平板 上拖动纸片，纸片间的距离和位置要均匀。 离平板边缘不小于15mm，两纸片间距离不 小于24mm。
实验原理 1.原理：
实验操作（接种与培养）
• (1)、取待测菌平板，观察菌落形态，涂片镜检， 革兰阴性杆菌做氧化酶试验，革兰阳性球菌做触 决定选择何组、何种药敏纸片。
酶实验。并根据实验结果对该菌株作出初步判断，
药敏试验选择纸片
• 触酶阳性的G＋球菌：青、苯唑、克林、庆大、环
丙沙星、万古、红霉素、头孢唑林 庆大、环丙沙星、万古
(一）苛养菌药敏试验抗生素的选用
A组一级试验并常规报告的抗微生物药 , 如肺炎链球菌用红霉素和青霉素。 B组一级试验有选择报告的抗微生物药 , 如肺炎链球菌用头孢噻肟或头孢曲松 。 C组补充试验有选择报告的抗微生物药， 如肺炎链球菌用头孢呋辛 。
第十三章临床微生物学检验与抗菌药物敏感性试验进展1
2). 采血量：成人每次每瓶最好采血8-10ml，小儿每次每瓶 可采血1-5ml。
3). 采血次数：成人每天采血2-3次，通常间隔半小时或1小 时，在患者不同部位采血。
4). 培养方法：通常每次将血液分别加入需氧和厌氧两种培 养瓶中35C同时进行培养。每天观察结果。3天后如果 无菌生长则报告“培养48小时无菌生长”； 7天后如果 无菌生长则报告“培养7天无菌生长”。 上一页 下一页 返回
初步的推测性鉴定。
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（二）病原菌的分离培养 1. 很多细菌的形态和染色性缺乏明显特征，仅凭形态学不
能做确切的诊断，需经细菌的分离培养，甚至纯培养后 ，对细菌进行生化和血清学鉴定，方能明确感染的细菌 。 2. 原则上应对所有送检标本做分离培养，以便获得单个菌 落后进行纯培养，从而对细菌做进一步的生物学、免疫 学、致病性或细菌的药物敏感性等方面的检查，最终做 出确切的报告。 3. 细菌培养时应选择适宜的培养基，以便提供特定细菌生 长所需的必要条件。分离培养后根据菌落的大小、形态 、颜色、表面性状、透明度和溶血性等对细菌做出初步 的识别，然后根据生化反应结果及血清学试验对分离菌 做出鉴定。
（五）病原菌的核酸检测
1. 传统的微生物学鉴定技术主要根据微生物形态学和生化 等表型特征来进行。但有些试验耗时长、费用高或难以 顺利完成。随着分子生物学技术的发展，多种检测病原 菌核酸的实验技术已经被建立。这不但能有助于感染性 疾病的确诊，还能确定病原菌的基因型，使微生物学的 检测技术从细菌生物学检查进展到细菌分子生物学的鉴 定。
2. 分子生物学诊断技术常用于检测不能在体外培养或目前 的培养技术不敏感、费用高昂或耗时长的病原体。目前 常用的方法主要有聚合酶链反应 (polymerase chain reaction，PCR) 及核酸杂交技术( nucleotide hybridization)包括Southern印迹杂交(Southern blot)、Northem印迹杂交(Northern blot)、斑点杂交 (dot blot)和原位杂交(in situ hybridization，ISH) 等。
3). 采血次数：成人每天采血2-3次，通常间隔半小时或1小 时，在患者不同部位采血。
4). 培养方法：通常每次将血液分别加入需氧和厌氧两种培 养瓶中35C同时进行培养。每天观察结果。3天后如果 无菌生长则报告“培养48小时无菌生长”； 7天后如果 无菌生长则报告“培养7天无菌生长”。 上一页 下一页 返回
初步的推测性鉴定。
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（二）病原菌的分离培养 1. 很多细菌的形态和染色性缺乏明显特征，仅凭形态学不
能做确切的诊断，需经细菌的分离培养，甚至纯培养后 ，对细菌进行生化和血清学鉴定，方能明确感染的细菌 。 2. 原则上应对所有送检标本做分离培养，以便获得单个菌 落后进行纯培养，从而对细菌做进一步的生物学、免疫 学、致病性或细菌的药物敏感性等方面的检查，最终做 出确切的报告。 3. 细菌培养时应选择适宜的培养基，以便提供特定细菌生 长所需的必要条件。分离培养后根据菌落的大小、形态 、颜色、表面性状、透明度和溶血性等对细菌做出初步 的识别，然后根据生化反应结果及血清学试验对分离菌 做出鉴定。
（五）病原菌的核酸检测
1. 传统的微生物学鉴定技术主要根据微生物形态学和生化 等表型特征来进行。但有些试验耗时长、费用高或难以 顺利完成。随着分子生物学技术的发展，多种检测病原 菌核酸的实验技术已经被建立。这不但能有助于感染性 疾病的确诊，还能确定病原菌的基因型，使微生物学的 检测技术从细菌生物学检查进展到细菌分子生物学的鉴 定。
2. 分子生物学诊断技术常用于检测不能在体外培养或目前 的培养技术不敏感、费用高昂或耗时长的病原体。目前 常用的方法主要有聚合酶链反应 (polymerase chain reaction，PCR) 及核酸杂交技术( nucleotide hybridization)包括Southern印迹杂交(Southern blot)、Northem印迹杂交(Northern blot)、斑点杂交 (dot blot)和原位杂交(in situ hybridization，ISH) 等。
微生物学检查步骤
微生物学检查步骤临床微生物学实验室接到标本后应立即进行微生物学检验。
主要包括直接镜检、检测特异性抗原或病原体成分、进行分离培养和鉴定、体外药敏试验等。
（一）直接镜检1.初步诊断；2.指导进一步检出步骤和鉴定方法的选择；3.评价标本的质量。
（二）快速诊断快速检测病原体成分主要是指特异性抗原和核酸检测。
特异性抗原检测包括免疫荧光技术、胶乳凝集试验、酶免疫技术、对流免疫电泳、化学发光免疫测定等。
（免疫学检验技术）核酸检测包括核酸探针杂交、PCR技术。
（分子生物学检验技术）其他快速检测法还有气-液相色谱法、化学发光、生物发光测定法和基因或蛋白微型阵列芯片技术等。
（三）直接药敏试验鉴定结果快，但结果不明确，故分离出纯培养物后应再作体外药物敏感试验。
（四）常规检验1.分离培养：通常由正常无菌部位采取的标本接种血平板，置于空气或含5％～10％CO2的气缸中培养，大部分细菌可于24～48h生长良好。
若原始培养为阴性，但据镜检结果和临床信息提示可能有病原菌存在，则应再采集大量标本，离心浓缩或溶解离心法处理，取沉淀接种营养丰富的需氧或厌氧培养基来培养。
对于存在正常菌群部位采集的标本，分离时应采用选择培养基以利于病原菌生长，也可加某些抗生素抑制污染菌的生长。
对于某些感染标本中发现的细菌，如尿路感染的尿液中检出大肠埃希菌，可能是病原菌，也可能是污染菌或正常菌群，其临床意义的确定有赖于定量培养法。
2.鉴定：分离出的细菌一般应经过细菌形态、菌落特点、生化反应、血清学试验、动物接种等鉴定。
目前尚有某些微量鉴定系统，其鉴定快速、简便，值得推广。
如用于鉴定肠杆菌科的20E，鉴定非发酵菌的20NE及鉴定厌氧菌的20A等。
3.体外纯菌药物敏感性试验：常用方法包括抑菌试验、杀菌试验、医学。
教育网整理联合药敏试验和检测细菌产生的抗生素灭活酶等。
（五）报告①直接镜检要求2h报告，说明标本是否合格，发现微生物情况和特点；②初步鉴定和直接药敏结果于24h或次晨报告，报告可能的病原菌和直接药敏结果；③最后鉴定和细菌药敏结果一般不超过3天，还规定除血培养外，所有送检标本必须在24h内预报。
微生物药敏实验报告
竭诚为您提供优质文档/双击可除微生物药敏实验报告篇一：微生物学实验报告20XX级制药专业工业微生物学实验报告姓名:刘甜甜学号:20XX304090班级:制药12-2班指导老师：王健日期：20XX.6.11一、实验目的1、抑制或杀死微生物的一些物理、化学及生物的因素抑菌、杀菌的原理。
2、掌握物理、化学及生物的因素抑菌、杀菌的试验方法。
3、了解细菌的形态特征、染色特点。
4、了解细菌在普通培养基、选择培养基、血平板上的菌落特征。
5、掌握细菌分离划线培养的方法。
6、掌握细菌的初步生化反应。
7、掌握细菌密集划线法，掌握细菌K-b药敏纸片法。
二、实验内容1细菌gram’sstain染色，镜检，观察记录细菌形态和特色特征ˉˉ1.1实验原理：染色原理：g+菌与g菌细胞壁不同，g+菌比g菌细胞内核糖核酸镁盐含量高，g+ˉ菌比g等电点低。
1.2实验步骤：1.2.1.制片：○1涂片：取半滴生理盐水置一洁净玻片上，以无菌操作技术自平板上去菌落少许，与生理盐水混匀，均匀涂布约1cm2大小，自然干燥；②固定：取含菌膜的玻片与酒精灯火焰上来回三次，使菌膜牢固附于玻片表面；1.2.2染色：①初染：取结晶紫一到两滴覆盖于菌膜表面，轻微摇动，维持30〃~40〃,细流水冲洗，切勿直接冲洗涂片区域；②媒染：取卢氏碘液1~2滴覆盖菌膜表面，轻微摇动，维持30〃~40〃,用上法细流水冲洗；③脱色：取95%酒精2~3滴于菌膜表面，轻微摇动，局部接近无色即可,用上法细流水冲洗；④复染：取1：10稀释石炭酸复红覆盖涂片区域，轻微摇动，用上法细流水冲洗；⑤吸水纸初步吸干玻片水分，然后自然干燥；1.2.3镜检：于涂片区域加半滴香波油，油镜（100倍目镜）下。
三、分离培养1实验原理：四区划线法是把混杂着在一起的微生物或同一微生物群体的不同细胞用接种环在平板培养基表面通过分区划线稀释而得到较多独立分布的单个细胞，经培养繁殖后生成个菌落。
有时这些单菌落并非由单个细胞繁殖而来，故必须反复分离多次才能得到纯种。
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微生物鉴定与药敏试验流程
1、实验原理
（1）微生物鉴定原理
微生物鉴定卡中含有几十种生化反应培养基，当微生物在培养基中代谢基质时导致pH值的改变而使指示剂发生变化；同时微生物生长产生各种酶，可与相应的荧光标记底物发生反应，使荧光强度发生改变。
通过检测这些变化得到待检微生物的生化特征，自动与数据库内几千种菌株的生化参数进行比对分析，并自动计算得出鉴定结果。
（2）药敏分析系统工作原理
药敏分析系统使用药敏测试板（卡）进行测试。
将抗生素微量稀释在条孔或条板中，加入菌悬液孵育后放入或在仪器中直接孵育，仪器每隔一定时间自动测定细菌生长的浊度，或测定培养基中荧光指示剂的强度或荧光原性物质的水解，观察细菌的生长情况。
得出待检菌在各药物浓度的生长斜率，经回归分析得到最低抑菌浓度MIC值。
2、实验步骤
（1）取洁净菌液管，加3mL %的无菌盐水，将纯培养的待检菌配制成浓度为~麦氏单位的菌悬液，将菌液管放入带芯片的专用架，在紧挨待检菌液管的位置放入一空的菌液管（供药敏试验用）。
（2）打开检验信息录入工作站电源，仪器自检完毕后按F2键，仪器进入操作程序。
将架放入工作站，芯片中的数据自动清零。
（3）手工输入待检菌样品编号，扫描输入鉴定卡和药敏卡的ID号，将鉴定卡和药敏卡放入相应的槽位，进样管插入相应的菌液管中。
取下架，关闭工作站电源。
（4）打开鉴定仪，仪器自检完毕后自动进入检测程序，按要求设定好参数。
（5）进样指示灯为绿色长亮时，打开进样盖，将架放到传送船上，关好进样盖。
仪器自动检测并读取样品信息，自动完成稀释、进样、封口程序，并将卡片送入孵育监测单元。
传送船回到进样口，指示灯闪烁时，取出试管架。
（6）由计算机控制的读数器定时对卡片进行扫描并读数，动态记录反应变化。
一旦卡内的终点指示孔达到临界值，则表示整个实验已完成。
（7）微生物鉴定及药敏分析完成后，检测数据自动传入数据管理系统进行计算分析，结果经人工确认后即可打印报告。