食品的测定 实验四 油脂中脂肪酸含量测定

脂肪酸含量测定及应用--青岛科标生物实验室脂肪酸（fatty acid），是指一端含有一个羧基的长的脂肪族碳氢链的有机物，直链饱和脂肪酸的通式是C(n)H(2n+ 1)COOH。

低级的脂肪酸是无色液体，有刺激性气味；高级的脂肪酸是蜡状固体，无可明显嗅到的气味。

脂肪酸是最简单的一种脂，它是许多更复杂的脂的组成成分。

脂肪酸在有充足氧供给的情况下，可氧化分解为CO2和H2O，释放大量能量，因此脂肪酸是机体主要能量来源之一。

脂肪酸是由碳、氢、氧三种元素组成的一类化合物，是中性脂肪、磷脂和糖脂的主要成分。

脂肪酸主要用于制造日用化妆品、洗涤剂、工业脂肪酸盐、涂料、油漆、橡胶、肥皂等。

产品分类植物油：大豆油、花生油、玉米油、玉米胚芽油、菜籽油、葵花子油、棉籽油、芝麻油、棕榈油、茶油等动物脂肪：猪脂、牛脂、羊脂、鸡脂、深海鱼油、鱼肝油、虾油等动物样本：贝类、鸡肉、猪肉、虾肉等坚果类：核桃、松子、开心果、芝麻、葵花子、茶生、黄豆等其他产品：奶粉、婴幼儿食品、食品添加剂、饲料及饲料原料、生物柴油、地沟油等组成介绍脂肪酸是由碳、氢、氧三种元素组成的一类化合物，是中性脂肪、磷脂和糖脂的主要成分。

脂肪酸根据碳链长度的不同又可将其分为短链脂肪酸（short chain fatty acids,SCFA），其碳链上的碳原子数小于6，也称作挥发性脂肪酸(volatile fatty acids,VFA）；中链脂肪酸（Midchain fatty acids，MCFA），指碳链上碳原子数为6-12的脂肪酸，主要成分是辛酸（C8）和癸酸（C10）；长链脂肪酸（Longchain fatty acids，LCFA），其碳链上碳原子数大于12。

一般食物所含的[1] 大多是长链脂肪酸。

脂肪酸根据碳氢链饱和与不饱和的不同可分为三类，即：饱和脂肪酸（saturated fatty acids，SFA），碳氢上没有不饱和键；单不饱和脂肪酸（Monounsaturated fatty acids，MUFA），其碳氢链有一个不饱和键；多不饱和脂肪（Polyunsaturated fatty acids，PUFA），其碳氢链有二个或二个以上不饱和键。

食品安全国家标准食品中脂肪酸的测定1范围本标准规定了食品中脂肪酸含量的测定方法。

本标准适用于食品中脂肪酸含量的测定。

本标准适用于食品中总脂肪、饱和脂肪（酸）、不饱和脂肪（酸）含量的测定。

第一法内标法2原理加入内标物的样品经水解-乙醚溶液提取其中的脂肪后，在碱性条件下皂化和甲酯化，生成脂肪酸甲酯，经毛细管气相色谱分析，内标法定量测定脂肪酸甲酯含量。

依据各种脂肪酸甲酯含量和转换系数计算出总脂肪、饱和脂肪（酸）、单不饱和脂肪（酸）、多不饱和脂肪（酸）含量。

3试剂和材料注：除非另有规定，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。

3.1试剂3.1.1盐酸(HCl)。

3.1.2氨水(NH3·H2O)。

3.1.3焦性没食子酸(C6H6O3)。

3.1.4乙醚(C4H10O)。

3.1.5石油醚：沸程30℃~60℃。

3.1.6乙醇(C2H6O) (95%)。

3.1.7甲醇(CH3OH)：色谱纯。

3.1.8氢氧化钠（NaOH）。

3.1.9正庚烷[CH3(CH2)5CH3]：色谱纯。

3.1.10三氟化硼甲醇溶液，浓度为15%。

3.1.11无水硫酸钠(Na2SO4)。

3.1.12氯化钠(NaCl)。

3.2试剂配制3.2.1盐酸溶液（8.3 mol/L）：量取250 mL盐酸，用110 mL水稀释，混匀，室温下可放置2个月。

3.2.2乙醚石油醚混合液（体积比1:1）：取等体积的乙醚和石油醚，混匀备用。

3.2.3氢氧化钠甲醇溶液（2%）：取2 g氢氧化钠溶解在100 mL甲醇中，混匀。

3.2.4饱和氯化钠溶液：称取360 g氯化钠溶解于1.0L水中，搅拌溶解，澄清备用。

3.3标准品3.3.1十一碳酸甘油三酯。

3.3.2混合脂肪酸甲酯标准溶液（37种）。

3.3.3单个脂肪酸甲酯标准：丁酸甲酯C4:0（C5H10O2）CAS NO. 623-42-7；己酸甲酯C6:0（C7H14O2）CAS NO.106-70-7；辛酸甲酯C8:0（C9H18O2）CAS NO.111-11-5；癸酸甲酯C10:0（C11H22O2）CAS NO.110-42-9；十一烷酸甲酯C11:0（C12H24O2）CAS NO.1731-86-8；月桂酸甲酯C12:0（C13H26O2）CAS NO.111-82-0；十三烷酸甲酯C13:0（C14H28O2）CAS NO.1731-88-0；肉豆蔻酸甲酯C14:0（C15H30O2）CAS NO.124-10-7；肉豆蔻脑酸甲酯C14:1（C15H28O2）CAS NO.56219-06-8；十五烷酸甲酯C15:0（C16H32O2）CAS NO.7132-64-1；顺-10-十五碳烯酸甲酯C15:1（C16H30O2）CAS NO.90176-52-6；棕榈酸甲酯C16:0（C17H34O2）CAS NO.112-39-0；棕榈油酸甲酯C16:1（C17H32O2）CAS NO.1120-25-8；十七烷酸甲酯C17:0（C18H36O2）CAS NO.1731-92-6；顺-10-十七碳烯酸甲酯C17:1（C18H34O2）CAS NO.75190-82-8；硬脂酸甲酯C18:0（C19H38O2）CAS NO.112-61-8；反油酸甲酯C18:1n9t(C19H36O2) CAS NO.1937-62-8；油酸甲酯C18:1（C19H36O2）CAS NO.112-62-9；反亚油酸甲酯C18:2n6t（C19H34O2）CAS NO.2566-97-4；亚油酸甲酯C18:2n6c（C19H34O2）CAS NO.112-63-0；γ亚麻酸甲酯C18:3n6（C19H32O2）CAS NO.16326-32-2；花生酸甲酯C20:0（C21H42O2）CAS NO.1120-28-1；顺-11-二十碳烯酸甲酯C20:1（C20H38O2）CAS NO.2390-09-2；亚麻酸甲酯C18:3n3（C19H32O2）CAS NO.301-00-8；山嵛酸甲酯C22:0（C23H46O2）CAS NO.929-77-1；二十一烷酸甲酯C21:0(C22H44O2) CAS NO.6064-90-0；顺-11,14-二十碳二烯酸甲酯C20:2(C21H38O2) CAS NO.2463-02-7；顺-8,11,14-二十碳三烯酸甲酯C20:3n6( C21H36O2) CAS NO.21061-10-9；顺芥子酸甲酯C22:1n9(C23H44O2) CAS NO.1120-34-9；顺-11,14,17-二十碳三烯酸甲酯C20:3n3(C21H36O2) CAS NO.55682-88-7；花生四烯酸甲酯C20:4n6(C21H34O2) CAS NO.2566-89-4；二十三碳酸甲酯C23:0(C24H48O2) CAS NO.2433-97-8；顺-13,16-二十二碳二烯酸甲酯C22:2(C23H42O2) CAS NO.61012-47-3；木蜡酸甲酯C24:0(C25H50O2) CAS NO.2442-49-1；顺-5,8,11,14,17-二十碳五烯酸甲酯C20:5(C21H32O2) CAS NO.2734-47-6；神经酸甲酯C24:1(C25H48O2) CAS NO.2733-88-2；顺-4,7,10,13,16,19-二十二碳六烯酸甲酯C22:6(C23H34O2)CAS NO. 2566-90-7。

实验四油脂中脂肪酸含量测定―――气相色谱法测定大豆油中脂肪酸成分一、目的与要求油脂是食品加工中重要的原料和辅料，也是食品的重要组分和营养成分。

必需脂肪酸是维持人体生理活动的必要条件，人体所必需的脂肪酸一般取自食品用油，即食用油脂。

气象色谱法测定油脂脂肪酸组分是现在最常用的方法，也是一些相关标准（如：GB/T17377）规定应用的检测方法。

甲酯化是分析动植物油脂脂肪酸成分的常用的前处理方法，也是常用的标准方法（GB/T 17376-1998）。

本实验要求了解气相色谱法测食用油脂肪酸组成的原理，掌握样品的前处理方法，学习食用油脂中脂肪酸组分的色谱分析技术。

二、原理本实验甲酯化方法采用国标--GB/T 17376-1998，甘油酯皂化后，释出的脂肪酸在三氟化硼存在下进行酯化，萃取得到脂肪酸甲酯用于气象色谱分析。

样品中的脂肪酸（甘油酯）经过适当的前处理（甲酯化）后，进样，样品在汽化室被汽化，在一定的温度下，汽化的样品随载气通过色谱柱，由于样品中组分与固定相间相互用的强弱不同而被逐一分离，分离后的组分，到达检测器（detceter）时经检测口的相应处理（如FID的火焰离子化），产生可检测的信号。

根据色谱峰的保留时间定性，归一法确定不同脂肪酸的百分含量。

三、仪器与试剂（一）仪器1．气相色谱仪：具氢火焰离子化检测器（FID）。

2．恒温水浴锅3．移液管4．胶头滴管5．小圆底烧瓶6．冷凝管7. 样品瓶（二）试剂1.正己烷：分析纯，沸程60～90℃或30～60℃，重蒸。

2.氢氧化钾甲醇溶液3.三氟化硼甲醇溶液4.饱和食盐水5.市售大豆油四、实验步骤（一）样品预处理甲酯化：取2~4滴大豆油样品于xml的圆底烧瓶中，加入3ml的KOH甲醇溶液，70℃水浴加热回流5min；取出冷却至室温（可用水冷），加入5ml三氟化硼溶液，70℃水浴加热回流5min；取出冷却至室温，加入3ml正己烷，70℃水浴加热回流5min；取出冷却至室温，加入适量饱和食盐水溶液，静止3~5min，取上层油样1ml于试样瓶中，进GC分析。

食品中脂肪酸的测定基础知识：油脂是食品的重要组分和营养成分。

油脂中脂肪酸组分的测定最常用的方法是气相色谱法。

样品前处理采用酯交换法（甲酯化法），图谱解析采用归一化法。

气相色谱(GC) 是一种把混合物分离成单个组分的实验技术它被用来对样品组分进行鉴定和定量测定。

一个气相色谱系统包括：• 可控而纯净的载气源能将样品带入GC系统• 进样口同时还作为液体样品的气化室• 色谱柱实现随时间的分离• 检测器当组分通过时检测器电信号的输出值改变从而对组分做出响应• 某种数据处理装置氢火焰离子化检测器(FID) ：氢气和空气燃烧所生成的火焰产生很少的离子。

在氢火焰中，含碳有机物燃烧产生CHO+离子，该离子强度与含量成正比。

该检测器检出的是有机化合物，无机气体及氧化物在该检测器无响应。

当纯净的载气（没有待分离组分）流经检测器时产生稳定的电信号就是基线。

1——载气(氮气)；2——氢气；3——压缩空气；4——减压阀(若采用气体发生器就可不用减压阀)；5——气体净化器(若采用钢瓶高纯气体也可不用净化器)；6——稳压阀及压力表；7——三通连接头；8——分流／不分流进样口柱前压调节阀及压力表；10——尾吹气调节阀；11——氢气调节阀；12——空气调节阀；13——流量计(有些仪器不安装流量计)；14——分流／不分流进样口；15——分流器；16——隔垫吹扫气调节阀；17——隔垫吹扫放空口；18——分流流量控制阀；19——分流气放空口；20——毛细管柱；21——FID检测器；22——检测器放空出口；方法来源：GB 5009.168-2016 食品安全国家标准食品中脂肪酸的测定1、范围本方法规定了食品中脂肪酸含量的测定方法。

本方法适用于游离脂肪酸含量不大于2%的油脂样品的脂肪酸含量测定。

2、原理样品中的脂肪酸经过适当的前处理（甲酯化）后，进样，样品在汽化室被汽化，在一定的温度和压力下，汽化的样品随载气通过色谱柱，由于样品中组分与固定相间相互作用的强弱不同而被逐一分离，分离后的组分到达检测器（detceter）时经检测口的相应处理（如FID的火焰离子化），产生可检测的信号。

一、实习背景随着现代食品工业的快速发展，人们对食品安全和质量的要求越来越高。

脂肪酸作为食品中重要的成分之一，其含量和组成直接影响食品的营养价值和品质。

为了提高食品安全检测水平，培养具备脂肪酸分析检验能力的技术人才，我国相关部门在各大院校设立了脂肪酸分析检验实习课程。

本人有幸参加了此次实习，现将实习情况汇报如下。

二、实习目的1. 熟悉脂肪酸分析检验的基本原理和方法；2. 掌握脂肪酸分析检验仪器设备的操作技巧；3. 培养实际操作能力和分析问题、解决问题的能力；4. 提高对食品安全和质量的认识。

三、实习内容1. 脂肪酸概述实习期间，我们首先学习了脂肪酸的基本概念、分类、性质及在食品中的应用。

了解脂肪酸在人体健康、食品加工和食品品质评价等方面的重要性。

2. 脂肪酸分析检验方法（1）气相色谱法（GC）实习过程中，我们重点学习了气相色谱法在脂肪酸分析检验中的应用。

通过实验操作，掌握了样品前处理、色谱柱选择、检测器使用、数据处理等关键技术。

（2）高效液相色谱法（HPLC）高效液相色谱法在脂肪酸分析检验中具有广泛的应用。

我们学习了HPLC的基本原理、操作流程及实验技巧，并通过实际操作掌握了该方法在脂肪酸分析检验中的应用。

（3）红外光谱法（IR）红外光谱法是一种快速、简便的脂肪酸分析检验方法。

实习期间，我们学习了红外光谱法的基本原理、操作技巧及在实际应用中的注意事项。

3. 脂肪酸分析检验仪器设备实习期间，我们熟悉了脂肪酸分析检验中常用的仪器设备，如气相色谱仪、高效液相色谱仪、红外光谱仪等。

掌握了仪器设备的操作方法和维护保养知识。

4. 实际案例分析在实习过程中，我们参与了多个脂肪酸分析检验的实际案例，如植物油、乳制品、肉类等食品中脂肪酸含量的测定。

通过实际操作，提高了分析问题和解决问题的能力。

四、实习成果1. 掌握了脂肪酸分析检验的基本原理和方法；2. 熟练操作了气相色谱仪、高效液相色谱仪、红外光谱仪等仪器设备；3. 提高了分析问题和解决问题的能力；4. 深入了解了食品安全和质量的重要性。

一、实验目的进一步熟悉酸价测定的原理，掌握酸价测定的方法。

二、实验原理油脂暴露于空气中一段时间后，在脂肪水解酶或微生物繁殖所产生的酶作用下，局部甘油酯会分解产生游离的脂肪酸，使油脂变质酸败。

通过测定油脂中游离脂肪酸含量反映油脂新鲜程度。

游离脂肪酸的含量可以用中和1g油脂所需的氢氧化钾mg数，即酸价来表示。

通过测定酸价的上下来检验油脂的质量。

酸价越小，说明油脂质量越好，新鲜度和精炼程度越好。

典型的测量程序是，将一份分量的样品溶于有机溶剂，用浓度的氢氧化钾溶液滴定，并以酚酞溶液作为颜色指示剂。

酸价可作为油脂变质程度的指标。

油脂中的游离脂肪酸与KOH发生中和反响，从KOH标准溶液消耗量可计算出游离脂肪酸的量，反响式如下：RCOOH+KOH——RCOOK+H2O三、实验器材1、仪器和用具碱式滴定管〔25mL〕；锥形瓶〔150mL〕；量筒〔50mL〕；称量瓶；电子天平。

2、试剂氢氧化钾标准溶液 c〔KOH〕=0.1mol/L：称取5.61g枯燥至恒重的分析纯氢氧化钾溶于100ml蒸馏水〔此操作在通风橱中进行〕;中性乙醚—乙醇〔2:1〕混合溶剂：乙醚和无水乙醇按体积比2:1混合，参加酚酞指示剂数滴，用0.3%氢氧化钾溶液中和至微红色；指示剂 1%酚酞乙醇溶液：称取1g酚酞溶于100 mL95%乙醇中。

四、测定步骤称取均匀试样3~5g于锥形瓶中，参加中性乙醚—乙醇混合溶液50mL，摇动使试样溶解，再加2~3滴酚酞指示剂，用0.1mol/L碱液滴定至出现微红色在30不消失，记下消耗的碱液毫升数〔V〕。

五、计算油脂酸价某〔mg KOH/g油〕按下式计算：V某c 某56.11某=m式中V———滴定消耗的氢氧化钾溶液体积，mL；c———氢氧化钾溶液的浓度，mol/L； 56.11———氢氧化钾的摩尔质量，g /mol；m———试样质量，g。

两次试验结果允许差不超过0.2 mg KOH/g油，求其平均数，即为测定结果，测定结果取小数点后第一位。

几种食用油中脂肪酸含量的测定与分析
植物油是人类常见的食品油，主要由多种不同类型的脂肪酸组成，即称之为油脂。

科学家们研究发现，不同的植物油中的脂肪酸的含量表和其有效性是不同的，因此测定和分析不同类别植物油中脂肪酸含量是特别有必要的。

对各类植物油中脂肪酸含量进行测定和分析通常采用薄层色谱(TLC)法。

该技
术利用离子交换层析法，将样品中的各种脂肪酸分离出来，而在分离的同时可以准确的测量每一种脂肪酸的百分比。

通常，将各类植物油放在氧化硫酸钠溶液中加热，以漂白植物油原料，然后用薄层色谱装置将每种脂肪酸按照分子量或碳数从高到低分成多个带。

利用紫外激发冷冻蒸发-气相色谱联用技术，可以检测精确而快速地
测定不同植物油脂肪酸的含量。

在油脂分析中，脂肪酸可以分为极性和非极性两类。

根据各种脂肪质的分类可
以分为硬脂肪酸、芳烃脂肪酸和游离脂肪酸三类，它们之间的比例在不同植物油中是不同的。

比如十六烷酸和亚油酸组成的硬脂肪酸被普遍应用于食用油中，而二十二烷酸、二十四烷酸、二十六烷酸和芳烃脂肪酸组成的芳烃甘油酸在食用油中的含量比较低。

另外还有一些游离脂肪酸，它们具有良好的营养价值和抗氧化性能。

综上所述，测定和分析不同类别植物油中脂肪酸含量是评价食用油的重要指标。

只有精准的测定和分析，根据具体植物油的类别，才能准确识别其脂肪酸的成分，从而为人们提供更健康的食用油。

脂肪含量的测定实验报告脂肪含量的测定实验报告引言脂肪是人体内重要的能量储存物质，也是细胞膜的组成成分之一。

因此，准确测定脂肪含量对于了解人体健康状况、饮食结构以及疾病预防具有重要意义。

本实验旨在通过简单的实验方法，测定食物中的脂肪含量，并探讨不同食物的脂肪含量差异。

实验材料与方法实验所需材料包括：不同食物样品、酶解液、酚酞指示剂、酒精、硫酸钠、硫酸铜等。

首先，将食物样品研磨成细粉，然后称取一定量的样品，加入酶解液中进行酶解。

待酶解完成后，加入酚酞指示剂，用酒精进行提取，最后加入硫酸钠和硫酸铜溶液，通过比色法测定脂肪含量。

实验结果与分析经过实验测定，我们得到了不同食物样品的脂肪含量数据，并进行了统计和分析。

结果显示，坚果类食物（如核桃、杏仁）的脂肪含量较高，而蔬菜类食物（如胡萝卜、西兰花）的脂肪含量较低。

这与我们的预期相符，坚果类食物通常富含脂肪，而蔬菜类食物则相对较低。

进一步分析发现，不同食物的脂肪含量差异可能与其营养成分和组织结构有关。

坚果类食物通常富含脂肪和蛋白质，而蔬菜类食物则富含纤维素和维生素。

脂肪在不同食物中的含量差异可能受到种类、生长环境以及加工方法等多种因素的影响。

此外，本实验采用的测定方法也可能对结果产生一定影响。

比色法是一种常用的测定方法，但其准确性可能受到样品处理过程中的误差以及仪器的精度等因素的影响。

因此，在实际应用中，需要结合多种方法和技术手段，以提高脂肪含量测定的准确性和可靠性。

实验总结与展望通过本次实验，我们成功测定了不同食物中的脂肪含量，并初步探讨了其差异的原因。

脂肪含量的测定对于饮食结构的调整、健康管理以及疾病预防具有重要意义。

然而，本实验仅仅是初步的探索，还有许多问题和挑战需要进一步研究。

未来的研究可以从以下几个方面展开：首先，可以进一步扩大样本数量和种类，以更全面地了解不同食物的脂肪含量差异。

其次，可以结合其他分析方法和技术手段，如质谱分析、核磁共振等，以提高脂肪含量测定的准确性和可靠性。