蚕豆根尖微核技术实验方案

7 镜检及微核识别 找到分生组织区细胞分散均匀、膨大、分裂相对多的部位， 再转到高倍镜（物镜40X）下进行观察 微核的识别标准 （1）凡是主核大小的1/3以下，并与主核分离的小核。 （2）小核着色与主核相当或稍浅。 （3）小核形态可以是圆形、椭圆形、不规则形。 每一处理观察5个根尖，每个根尖观察1000个细胞，并计数 其中有微核的细胞数（微核千分率）
蚕豆根尖微核测试技术
实验原理
蚕豆根尖细胞在分裂时染色体的复制过程中常 发生断裂，断裂下来的片段在正常情况下能自行 复位愈合，如果此时受到外界诱变因子的作用， 会阻碍染色体的愈合，于是会出现微核，由于产 生的微核数量与外界诱变因子的强弱成正比，所 以可用微核出现的百分率来评价环境诱变因子对 生物遗传物质影响的程度。
4 “污染指数”判别：此方法可避免因实验条件等因 素带来的微核千分率本底的波动，故较宜适用。 污染指数=样品实测微核千分率平均值/对照组微 核千分率平均值 0-1.5 基本没有污染 1.5-2.0 轻污染 2-3.5中污染 3.5以上重污染
பைடு நூலகம்
结果分析与报告
1 各测试样品微核千分率的计算 2 如果被检测样品不多，可直接用各样品微核千分率平 均值与对照组比较（t检验），从差异的显著性判断 水质污染与否。 3 如果监测的样品较多，可先用方差分析（F检验）看 各采样点所测的微核千分率平均值和对照的差异显 著性。如差异显著，还可进行各采样点微核差异显 著性的多重比较，看被检样品微核千分率平均值差 异显著性的分组情况，以归纳划分这些不同采样点 不同级别的污染程度。
3 根尖细胞恢复培养 处理后的种子用自来水（或蒸馏水）浸洗三次，每次2～3分 钟。洗净后再置入辅有湿脱脂棉中，25℃下再恢复培养 22～24h。 4 固定 将恢复后的种子，从根尖顶端切下1cm长的幼根，用卡诺 氏固定液固定24小时。固定后的根如不及时制片，可换入 70%的乙醇溶液中置4℃冰箱中保存备用。 5 解离：用蒸馏水浸洗固定好的幼根两次，每次5分钟，吸 净蒸馏水，加入5mol/L盐酸将幼根浸没，室温下酸解10分 钟，幼根软化即可。 6染色 吸去盐酸，用蒸馏水浸洗幼根三次，每次1～2分钟。截下 1～2mm左右长的根尖，滴加席夫氏试剂（在生物实验可 以和经过酸化的DNA 发生反应，DNA 被染成紫红色，而 不和核仁，细胞质发生反应，因此可以来鉴定DNA的存 在。），染色5～8分钟，加盖玻片，压片观察

实验方案(蚕豆根尖微核技术)
一、实验题目
蚕豆根尖微核技术检测流仓河污水污染情况
二、实验目的
1、利用植物压片技术和微核实验原理，设计实验方案，研究环境中存在的毒害物；
2、理解环境致突变因子对生物体DNA的损伤
3、掌握环境因子遗传毒性检测的微核实验方法
4、培养初步的科研能力
三、材料仪器与方法
1.1材料仪器
选取蚕豆大小均匀籽粒饱满无虫害100颗，采集于流仓河污水，烧杯，剪刀，培养皿，量筒100ml，，胶头滴管，显微镜，卡诺固定液，5 mol/L盐酸，石炭酸品红溶液，天平（带砝码）
1.2方法
1.2.1污水处理
将采集到的污水稀释100倍、10倍、不稀释，用自来水做对照
1.2.2蚕豆根尖的培养处理
将蚕豆用蒸馏水浸泡一天使其充分吸胀，然后用滤纸浸水放于培养皿中在25℃恒温箱中培养24h。

每12小时换水一次。

待蚕豆初生根长至2cm左右，选取长度一致的蚕豆，分别用蒸馏水，1倍稀释液，10倍，50倍，100倍，分别处理6h，其中蒸馏水作为阴性对照处理。

然后再放于25℃恒温箱恢复培养24h。

卡诺固定液固定24 h；固定好的幼根以蒸馏水浸洗两次，用5 mol/L的盐酸于28℃水解约25 min，至幼根被软化即可；然后用蒸馏水洗净切取0.5cm的根尖，用改良的石炭酸品红溶液染色5~10分钟。

1.2.3制片
用常规压片法制作临时装片。

1.2.4镜检计数
每剂量组选取5个根尖，每个根尖随机镜检1000个细胞，计算微核率MCN‰=观察到微核细胞数/观察细胞总数*1000‰。

重金属离子对蚕豆根尖细胞的微核效应一、实验目的1.了解微核测试的原理和毒理遗传学在实际生活与工作中的应用范围及意义2．学习蚕豆等根尖的微核测试技术二、实验原理微核是在理化诱变因子的作用下, 在细胞形态学上表现出来的一种染色体损伤类型, 只要环境中存在着一定剂量的遗传毒性物质, 生长于其中的植物就有可能产生微核现象. 根据植物细胞的徽核效应, 可以对环境污染进行监测和评价.三、实验材料：蚕豆四、实验器具和药品：实验器具：显微镜；解剖刀；镊子；解剖盘；冰箱；恒温水浴锅；滤纸；盖玻片；载玻片；烧杯；量筒；试管。

实验药品：PbCl2溶液；CdCl3溶液；CuCl2溶液；去离子水；石碳酸品红；0.05% NaClO；5-氨基尿嘧啶；无水乙醇；冰醋酸；盐酸。

五、实验步骤1.根尖的培养选取籽粒饱满、大小一致的蚕豆种子洗净后，放入盛有蒸馏水的大烧杯内，浸泡约24 h，期间换水1～2次。

待种子充分吸胀后，将其放入铺有一薄层湿润脱脂棉的解剖盘中，置（25 ±1）℃的恒温培养室中培养2～3 d，期间换水4～6次，使其长出1.5～3.0cm长的初生根。

2.根尖毒性处理取PbCl2溶液、CdCl3溶液、CuCl2溶液，将每种溶液稀释配制成50mg/L、100mg/L、150mg/L、200mg/L 4个浓度梯度，以无离子水为空白对照，。

在芽长出0. 2—0. 5 cm 时, 经4℃培养14 h, 转移在0.075%的5-氨基尿嘧啶中培养24h ( 23℃) 冲洗, 移至含氧丰富的蒸馏水中培养8—12h, 大约24% 的细胞可比较同步地出现细胞有丝分裂高峰。

2h后,转移到浓度已定的重金属离子溶液中( pH 6.6—7.2)。

培养1个细胞周期18h。

3.根尖细胞恢复培养将处理过的种子用蒸馏水浸洗2次，每次5～10 min后，再放入新铺好的湿润脱脂棉的解剖盘（或培养皿）内，按前述培养条件使根尖细胞修复培养22～24h。

3．对各个部件要轻拿轻放，不要碰撞，尤其是硬盘。 4．防止液体进入计算机内部：在安装计算机元器件 时，也要严禁液体进入计算机内部的板卡上。因为这些液 体都可能造成短路而使器件损坏，所以要注意不要将饮料 摆放在机器附近，对于爱出汗的朋友，也要避免头上的汗 水滴落，还要注意不要让手心的汗沾湿板卡。
12.2.5 组装前的注意事项
取出豆种，用调温水浸洗 3 次，每次 5 min，
按照规定的条件恢复培养24 h。
处理6h
处理过程中，根尖如出现相关的急性毒性症
状，则按要求增加试样急性毒性预试验；否 则，直接进行后续试验。
实验步骤
4.根尖固定
用卡诺氏液固定
切取顶端 l.0 cm 左右根尖置于具盖指管内（同一试样处理 的根尖放入一个指管），加卡诺氏液固定 2 h。固定时间 最长不超过 24 h。
8．插拔时不要抓住线缆拔插头，以免损伤线缆。
12.2.6 台式计算机组装基本步骤
1．主机的安装 （1）准备好机箱并安装电源，主要包括打开空机箱和安装电源； （2）驱动器的安装，包括硬盘、光驱的安装； （3）CPU和散热器的安装，在主板处理器插座上安装CPU及散 热风扇； （4）内存条的安装，将内存条插入主板内存插槽内； （5）主板的安装，将主板固定在机箱内； （6）显卡的安装，根据显卡接口类型将显卡安装在主板上合适 的扩展槽内； （7）声卡等的安装，根据声卡的总线类型选择合适的扩展槽将 它们安装在主板上； （8）机箱与主板间连线的连接，是指各种指示灯、电源开关线、 PC喇叭等面板插针的连接，以及硬盘、光驱。
用乙醇保存
如不能及时染色制片，则弃去卡诺氏液，用实验用水洗净， 加入乙醇溶液浸没，于冰箱内冷藏，72h内染色镜检。
33
浸洗根尖

蚕豆根尖微核实验实验方案第一组姓名学号龚丽桦20110442001王春20110442002周鹏20110442003蔡梣仪20110442006贺吉20110442007李彦欣20110442008蚕豆根尖微核实验一、实验目的1.通过“环境遗传物质污染的微核指示”的综合实验过程，加强学生对环境污染的遗传毒性的感性认识，掌握环境污染物对生物遗传物质及生理过程的改变及生物对环境污染物的指示作用。

2．掌握微核试验相关操作技术。

3．使学生在复习和巩固基本理论知识的同时，能深刻认识环境污染物质对环境中生物的危害，增强学习环境科学的兴趣和责任感。

4．通过本综合性实验，培养学生独立观察、思考及分析、研究、解决实践问题的能力。

二．实验内容微核试验(Themicro nucleu stest, MNT)是以动植物为材料，采用细胞生物学手段，观测其出现的微核率来表示材料受遗传损伤程度的一种检测遗传毒物的方法。

微核是无着丝点的染色体断片，在有丝分裂后期不能向两极移动，所以游离于细胞质中，在间期细胞核形成时，即可在它附近看到一到几个很小的圆形结构，直径大约是细胞直径的 1 ／ 20 － 1 ／ 5 ，这就是微核（ micronucleus ）。

微核是常用的遗传毒理学指标之一，指示染色体或纺锤体的损伤。

由于这种损伤会因细胞受到的外界诱变因子的作用而加剧，而微核产生的数量又可与诱变因子剂量的强弱呈正比，因此可以用微核出现的频率来评价环境诱变因子对生物遗传物质的损伤程度。

蚕豆(Vicia faba)是一种理想的细胞遗传学研究材料。

蚕豆的染色体大，数量少(2n=12),根尖中含有较多的分裂相细胞，非常适合显微观察，而且蚕豆根尖细胞周期中的大部分时间对诱变剂敏感，便于遗传毒性检测实验。

（一）实验仪器、试剂和材料A．实验材料：蚕豆种子B. 实验器材：光学显微镜、试管(10ml)×2、蚕豆发芽盒、镊子、手术刀、载玻片、盖玻片、滤纸等C. 试剂[1] 环磷酰胺：用其与水可溶剂配置系列溶液：0%（对照），5%，10%，20%。

利用蚕豆根细胞微核技术检测洗发水的毒性09生物技术宁伟王晓刚太红桥刘经源摘要微核（micronucleus,MCN）是真核生物细胞经各种理化因子作用后引起染色体畸变，在间期细胞中的一种表现形式。

在细胞间期，微核呈圆形或椭圆形，游离于主核之外，大小应在主核1/3～1/20，染色与主核一样或稍浅。

一般认为微核是由无着丝粒的染色体断片或落后染色体，在分裂末期不能进入主核，便形成了主核之外的核块。

当子细胞进入下一次分裂间期时，它们便浓缩成主核之外的小核，即微核。

[1]蚕豆根尖细胞微核试验(Micronucleustest,MC-NT)技术是一种以染色体断裂及纺锤丝损伤为测试终点的植物微核检测方法。

它是一种应用于监测环境致突变物对人体和其他生物体的遗传物质产生危害的技术,并从细胞遗传学水平上探讨植物遗传物质的改变状况与环境污染，也可以检测淡水环境的质量。

[2]关键词蚕豆根尖微核洗发水千分率蚕豆是一种很好的细胞遗传学研究材料。

它的染色体为六对相当大的染色体，而且根尖含有较多的分裂相细胞，非常适合显微观察。

目前，蚕豆根尖微核技术在环境致突变性检测/监测方面已经形成了一套完整的体系。

它的可靠性和灵敏性较高，且本底较低，这对于一种致突变性检测方法是十分重要的。

此外，它的检测物谱较广。

目前多数学者认为，在镜检细胞微核时，应按下列标准计数微核：（1）凡主核大小1/3以下，与主核分离的小核；（2）小核的着色与主核相当或稍浅；（3）小核形态可为圆形，不规则等。

[3]1. 实验目的掌握蚕豆根尖细胞微核检测技术的一般方法。

并利用蚕豆根尖细胞微核检测技术对洗发水的毒性状况给出客观的评价，同时表明蚕豆根尖细胞MCN对胁迫很敏感，蚕豆根尖微核技术可用于洗漱用品的安全监测。

2. 材料与方法2.1实验材料蚕豆种子、洗发水、显微镜、镊子、培养皿、剪刀、载玻片、盖玻片、烧杯、Carnoys固定液、盐酸酒精解离液、改良苯酚品红染液、NaN3等。

v 更多问题……
五、 实验流程——准备工作 ——
v 每个自然班分成4个组
§ §
人数基本相同、确定每小组的组长 确定试验目的、各小组所用的处理因素(阴性 对照、阳性对照、两种污水处理) 上报分组名单(组长)、试验目的、因素 实验开始前提交试验方案(班内协调、统一时 间安排)
§ §Leabharlann 实验工作时间安排参考§
若干种待测诱导物(如不同来源的污水)，由各 组同学采集 阳性对照(NaN3)：已证明可诱导微核形成 阴性对照(洁浄水样)：微核形成率接近于0
§ §
五、 实验流程
准备工作 § 查阅文献 § 确定研究目的 • 如：待测物、蚕豆品种差异等 § 制订试验方案 v 蚕豆发根、取材 v 处理与恢复培养 v 取材制片、镜检观测 v 结果分析、撰写报告(论文)
诱变物质的微核检测技术 诱变物质的微核检测技术
——蚕豆根尖微核检测与应用 —— 蚕豆根尖微核检测与应用 (综合型实验) (
四川农业大学 普通遗传学课程组
提 纲 纲
1. 实验目的 2. 实验原理 3. 实验材料 4. 用具与药品 5. 实验流程
一、 实验目的
v v v
了解诱变物质微核检测技术原理与应用 掌握蚕豆根尖微核检测技术 了解研究性试验开展的基本环节
§ §
实验教学角度：综合性实验 实验内容角度：研究性试验(非验证性实验)
二、 实验原理
u u u
微核的概念与形成 微核检测技术 微核检测的应用
（一）微核的概念与形成
v
微核(micronuclei, MN/MCN)
天数 工作内容 方案、材料与待测物准备 1 2 3 5 6 7 8+ 浸种(其间换水两次) 第一阶段催芽 第二阶段催芽(其间检查水分) 诱导处理 恢复培养 根尖取材、固定 解离、制片观察 结果分析与报告写作 24h 12~24h 36~48h 12~24h 22~24h 24h 2~4h 大致时间 注意 班、组 自然班 组 组 组 组 组 组 组

一、实验目的1. 学习和掌握蚕豆根尖制片的基本技术和步骤。

2. 观察蚕豆根尖细胞的结构，了解其生长和分化特点。

3. 熟悉显微镜的使用方法，提高实验操作技能。

二、实验原理蚕豆根尖细胞具有明显的分生组织特征，包括根冠、分生区、伸长区和成熟区。

通过制片观察，可以了解蚕豆根尖细胞的有丝分裂过程和细胞分化特点。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：新鲜蚕豆、盐酸、酒精、蒸馏水、龙胆紫或醋酸洋红染液。

2. 实验仪器：显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、解剖针、滴管、酒精灯、剪刀、剪刀夹、解剖盘。

四、实验步骤1. 取材：取新鲜蚕豆，用剪刀将根剪成约1.5cm长的根段。

2. 解离：将根段放入盛有盐酸和酒精混合液的锥形瓶中，加热至根段透明。

3. 漂洗：将解离后的根段用蒸馏水冲洗干净，去除盐酸和酒精。

4. 染色：将漂洗干净的根段放入装有染液的培养皿中，染色5-10分钟。

5. 制片：用解剖针将染色的根尖挑出，放在载玻片上，用盖玻片覆盖。

6. 压片：用镊子轻轻压盖玻片，使根尖细胞压扁，便于观察。

7. 观察：在显微镜下观察制片，记录蚕豆根尖细胞的结构特点。

五、实验结果与分析1. 根冠：位于根尖的顶端，细胞较大，排列不整齐，具有保护作用。

2. 分生区：位于根冠下方，细胞较小，细胞壁薄，细胞核大，细胞质浓，具有很强的分裂能力。

3. 伸长区：位于分生区上方，细胞停止分裂，开始迅速伸长，是根伸长最快的地方。

4. 成熟区：位于伸长区上方，细胞停止伸长，分化并形成根毛，是吸收水分和无机盐的主要部位。

在显微镜下观察，可以清晰地看到蚕豆根尖细胞的有丝分裂过程，包括前期、中期、后期和末期。

同时，还可以观察到细胞质分裂、细胞核分裂和染色体分离等现象。

六、实验结论通过本次实验，我们成功制成了蚕豆根尖制片，并观察到了蚕豆根尖细胞的结构特点。

实验结果表明，蚕豆根尖细胞具有明显的分生组织特征，包括根冠、分生区、伸长区和成熟区。

同时，我们还观察到蚕豆根尖细胞的有丝分裂过程，包括前期、中期、后期和末期。

实验六蚕豆根尖微核检测技术一、实验目的⒈了解微核测试原理和毒理遗传学意义。

⒉学习蚕豆根尖的微核测试技术。

二、实验原理微核（micronucleus,MCN）是真核生物细胞经各种理化因子作用后引起染色体畸变，在间期细胞中的一种表现形式。

在细胞间期，微核呈圆形或椭圆形，游离于主核之外，大小应在主核1/3～1/10，染色与主核一样或稍浅。

一般认为微核是由无着丝粒的染色体断片或落后染色体，在分裂末期不能进入主核，便形成了主核之外的核块。

当子细胞进入下一次分裂间期时，它们便浓缩成主核之外的小核，即微核。

三、实验器材和药品松滋青皮蚕豆、显微镜、镊子、载玻片、盖玻片、烧杯、Carnoys固定液、1mol／L盐酸、改良苯酚品红染液、NaN3。

四、方法与步骤⑴浸种催芽：择饱满、均匀的种子，洗净后用蒸馏水常规浸种、催芽24～30h，此期至少换水2次；待种子充分吸胀后，移入铺有干净、双层湿纱布的托盘内培养。

⑵用被检测液处理根尖：当初生根长到1～2cm时，选初生根生长良好的蚕豆6～8粒，分别放入蒸馏水（CK）、0.４mmol／L、0.８mmol／L、1.2mmol／L的NaN3中染毒8～12h。

⑶根尖细胞恢复培养：处理后的种子用蒸馏水（自来水）浸洗3次，每次2～3 min；将处理液洗净后，置于湿棉花上恢复22～24h；同时均设蒸馏水处理为空白对照组。

以上温度均为25℃。

⑷根尖细胞固定：将恢复后的种子，从根尖顶端切下1～1.5cm长的幼根，用Carnoys 固定液固定20～24h。

固定后的根如不及时制片，可换入70%的酒精溶液中置4℃冰箱中保存备用。

⑸酸解：用1mol／L盐酸在60±5℃下酸解8min，幼根软化即可。

⑹染色：吸去盐酸，用蒸馏水浸没幼根3次，每次1～2分钟。

最后浸于水中。

制片前取出置载玻片上，截下1～2mm左右长的根尖，滴1-2滴改良苯酚品红染液染色10～15min 后，加上盖玻片，覆以吸水纸常规压片。

实验四蚕豆根尖微核监测技术（VMT）一、实验目的学习如何利用高等植物间期体细胞遗传检测系统以监测环境中的致突变物。

二、原理在细胞分裂早期，若受到有害理化因子的攻击，使染色体发生断裂，产生染色体片段。

在这些片段中，有些可能重新愈合恢复正常，随细胞分裂进入子细胞，有些则由于缺乏着丝点，不能移向细胞的极部而变成圆球体，像卫星一样分布在主核的周围，这便是微核，由于染色体片段的大小和数量不一，所以微核的大小和数量也不相同。

而蚕豆根尖细胞的染色体大，DNA含量多，因而对诱发物的反应敏感，通过显微镜下的观察和计数，便可监测环境污染。

三、器材与试剂（一）显微镜、温箱、恒温水浴箱、冰箱、手揿计数器、解剖盘、镊子、解剖针、载玻片、盖玻片、试剂瓶、烧杯等显微镜压片实验用具。

（二）试剂1.5N HCl、45%醋酸、卡诺氏液（无水乙醇3份加冰醋酸1份配成，固定根尖时随用随备）、Schiff试剂、SO洗涤液。

2四、操作步骤1、蚕豆浸种催芽（1）浸种：将当年或前一年的松滋青皮豆种子按需要量放入盛有有自来水的烧杯中，臵25℃温箱内，浸泡20~30小时，此期间至少换水2次，换用的水最好事先臵于25℃温箱中预温。

（2）催芽：待种子吸胀后，用纱布松松包裹臵解剖盘内，保持温度，在25℃的温箱中催芽12~24小时。

待种子初生根露出2~3mm时，再选取发芽良好的种子，放入铺有薄层温脱脂棉的解剖盘内，仍臵入25℃的温箱中继续催芽，注意保护湿度。

再经24~36h，种子大部分初生根长至2~3cm，根毛发育良好，这时就可用来作为监测水源样品或药物溶液突变效应之间。

2、被监测液处理根尖（1）每一处理选取6~8粒初生根尖生长良好，根长一致的种子，放入盛有被测液的培养皿中，被测液浸泡住根尖即可，用自来水处理作对照，方法相同。

（2）处理时间4~6h。

3、根尖细胞恢复培养：（1）将处理的种子，用自来水浸洗8次，每次2~3min。

（2）洗净后的种子再放入新铺好湿脱脂棉的解剖盘内，按前述培养条件使根尖细胞恢复22~24h。

蚕豆根尖微核检测技术实验名称: 方便面面饼液对蚕豆根尖微核率的影响专业年级: 2010级级生物科学成员: 尹忠围安树珺谢林芝刘伟指导教师:实验时间: 2013年4 月一、摘要用蚕豆根尖细胞微核技术检测不同种类方便面面饼液微核的诱变效果。

设置了阴性对照:自来水处理组，实验组:康师傅、统一、老坛，麻老表四组饼液分别处理蚕豆根尖，阳性对照:用0.02g/L的醋酸铅溶液处理。

发现方便面面饼液在诱导微核产生方面影响明显，醋酸铅溶液具有诱导微核产生的作用。

关键字:蚕豆根尖，方便面面饼，微核千分率，污染指数二、实验背景和目的随着现代社会的发展，越来越多的化学物质运用到人们的日常生活之中，如种类繁多的食品添加剂。

而其中有些物质具有较强的危害，如致畸，致癌，致突变等。

为了检测已存在或潜在的危害，各种检测技术应运而生。

微核试验是检测染色体或有丝分裂器损伤的一种遗传毒性试验方法。

无着丝粒的染色体片段或因纺锤体受损而丢失的整个染色体，在细胞分裂后期仍留在子细胞的胞质内成为微核。

用微核试验来评价药物、放射线、有毒物质等对人体细胞或体外培养细胞遗传学损伤仍是一个直观有效可行的方法,在遗传毒理、医学、食品、药物、环境等诸多方面得到了广泛的应用。

微核计数经济,迅速,简便,不需要特殊技能,可以统计更多的细胞并实现计算机自动计数。

我们采用蚕豆作为实验材料，采用植物微核技术来检测方便面面饼中添加剂对人体是否产生危害。

方便面是日常生活中经常接触到的食品，其市场占据快餐食品的大壁江山，在超市中油炸方便面与非油炸方便面占到快餐食品的60%到70%。

另一方面，在各媒体的报道中，经常出现有关方便面的食用危害，而且很有争议，所以这也是我们进行本实验的一个原因。

三、实验原理微核是间期细胞中在细胞核之外存在的一个或多个圆形或杏仁状结构，大小在主核的1/3以下，是有丝分裂后期丧失着丝粒的落后的染色体片段形成。

20世纪70年代初，Matter和Schmid等首先用动物骨髓细胞微核率来测定怀疑具有诱变活力的化合物，并称之为微核。

第1篇一、实验目的1. 观察蚕豆根尖的结构；2. 学习并掌握蚕豆根尖的制片技术；3. 探讨不同处理对蚕豆根尖细胞的影响。

二、实验原理蚕豆根尖是植物学研究的重要材料，其结构简单，易于观察。

根尖包括根冠、分生区、伸长区和成熟区。

本实验通过观察蚕豆根尖的结构，了解不同处理对根尖细胞的影响，从而为后续研究提供依据。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：新鲜蚕豆、酒精、盐酸、醋酸洋红染液、载玻片、盖玻片、镊子、剪刀、解剖镜、显微镜等。

2. 实验试剂：95%酒精、15%盐酸、醋酸洋红染液。

四、实验步骤1. 取新鲜蚕豆，用剪刀剪去根尖，放入装有95%酒精的试管中浸泡30分钟，以固定细胞。

2. 将浸泡好的蚕豆根尖放入装有15%盐酸的试管中，在室温下处理30分钟，以解离细胞。

3. 将解离好的蚕豆根尖取出，用蒸馏水清洗3次，去除多余盐酸。

4. 将清洗干净的蚕豆根尖放入装有醋酸洋红染液的试管中，染色5-10分钟。

5. 将染色的蚕豆根尖取出，用蒸馏水清洗3次，去除多余染液。

6. 将清洗干净的蚕豆根尖放在载玻片上，用镊子轻轻压扁，盖上盖玻片。

7. 在显微镜下观察蚕豆根尖的结构，记录不同处理对根尖细胞的影响。

五、实验结果与分析1. 根尖结构观察（1）根冠：位于根尖的最前端，细胞排列紧密，具有保护作用。

（2）分生区：位于根冠之后，细胞较小，排列紧密，细胞核较大，具有强烈的分裂能力。

（3）伸长区：位于分生区之后，细胞停止分裂，开始迅速伸长，是根伸长最快的地方。

（4）成熟区：位于伸长区之后，细胞停止伸长，分化形成导管和根毛，是根吸收水分和无机盐的主要部位。

2. 不同处理对根尖细胞的影响（1）空白对照组：蚕豆根尖细胞结构正常，无异常现象。

（2）酒精处理组：蚕豆根尖细胞结构出现变形，部分细胞核变大，染色体凝聚。

（3）盐酸处理组：蚕豆根尖细胞结构出现严重变形，部分细胞核破碎，染色体断裂。

（4）醋酸洋红染液处理组：蚕豆根尖细胞结构正常，染色体染色均匀。

也可以采用“污染指数”判别：此方法可避免因实验 条件等因素带来的MCN‰本底的波动，方法如下：
污染指数在0－1.5区间为基本没有污染； 污染指数在1.5－2区间为轻度污染； 污染指数在2－3.5区间为中度污染； 污染指数在3.5以上为重度污染； 如果对照本底MCN‰为10 ‰以上，可采用t检验（被 测样品较少时）检测处理液致畸效果是否明显，或以 F检验（被测样品较多时）检测各处理之间是否具有 显著的差异。
3． 处理
每一处理选取6-8粒初生根生长良好、根长一致的 种子，放入盛有待测物溶液的培养皿中，浸没根尖。 阳性因子可采用CrO3（1.0和2.5 mol/L）、NaN3 （0.5、1.0和1.5mol/L）或EMS（150和200 mol/L）， 另取一处污水作待检测物质，用自来水作对照，共9 个处理，处理根尖6～24h(处理时间可视实验需要和 被测液浓度而定)。
4．根尖细胞恢复培养
将处理后的种子用蒸馏水浸洗三次，每次2－3min。 将洗净的种子再放入铺好滤纸或脱脂棉的白磁盘内 25℃温箱中恢复培养22－24小时。
5．固定根尖细胞及制片(参考根尖压片法)
(1)将恢复培养后的种子，从根尖顶端，切下1cm长的 幼根。用卡诺氏液固定24h，固定后如果不及时制片， 可换入70% 的乙醇中，置4℃冰箱内保存备用。
凡数值在上下限时，定为上一级污染。
第三片
各自观察的细胞 细胞数 微核数 阳性因子可采用CrO3（1.
MCN‰在18‰－30‰区间，则表示有中度污染；
细胞数 微核数 细胞数 微核数
数或微核数 阳性因子可采用CrO3（1.
只有真核的测试系统更能直接推测诱变物质对人类或其它高等生物的遗传危害，在这方面，微核测试是一种比较理想的方法。

蚕豆根尖细胞微核实验蚕豆根尖细胞微核技术检测洗衣粉的毒性姓名：马丽同组者：李哲指导教师：郝雪峰（太原师范学院生物系112班）摘要微核（micronucleus,MCN）是真核生物细胞经各种理化因子作用后引起染色体畸变，在间期细胞中的一种表现形式。

在细胞间期，微核呈圆形或椭圆形，游离于主核之外，大小应在主核1/3～1/20，染色与主核一样或稍浅。

一般认为微核是由无着丝粒的染色体断片或落后染色体，在分裂末期不能进入主核，便形成了主核之外的核块。

当子细胞进入下一次分裂间期时，它们便浓缩成主核之外的小核，即微核。

[1] Abstract Micronucleus (MCN, micronucleus) is eukaryotic cells by various physical and chemical factors caused by chromosome aberration, and in a form of interphase cells. In interphase cells micronucleus assumes the circular or elliptic, free from the main nuclear, nuclear 1/3 ~ 1/20 size should be in the main, dyeing and the main nuclear as or slightly shallow. Generally considered microkernel byacentric chromosome fragment or lagging chromosomes, in the late division could not enter the nucleus, formed the main nuclear nuclear block. When the cells into the next phase split between, they condense into main small nuclear nuclear, namely the microkernel.[1]关键词蚕豆根尖微核洗衣粉染色体畸变千分率Keyword Broad bean root tipMicronucleus Washingpowder Chromosomalaberration Permillage引言掌握蚕豆根尖细胞微核检测技术的一般方法。

利用蚕豆根细胞微核技术检测洗发水的毒性09生物技术宁伟王晓刚太红桥刘经源摘要微核（micronucleus,MCN）是真核生物细胞经各种理化因子作用后引起染色体畸变，在间期细胞中的一种表现形式。

在细胞间期，微核呈圆形或椭圆形，游离于主核之外，大小应在主核1/3～1/20，染色与主核一样或稍浅。

一般认为微核是由无着丝粒的染色体断片或落后染色体，在分裂末期不能进入主核，便形成了主核之外的核块。

当子细胞进入下一次分裂间期时，它们便浓缩成主核之外的小核，即微核。

[1]蚕豆根尖细胞微核试验(Micronucleustest,MC-NT)技术是一种以染色体断裂及纺锤丝损伤为测试终点的植物微核检测方法。

它是一种应用于监测环境致突变物对人体和其他生物体的遗传物质产生危害的技术,并从细胞遗传学水平上探讨植物遗传物质的改变状况与环境污染，也可以检测淡水环境的质量。

[2]关键词蚕豆根尖微核洗发水千分率蚕豆是一种很好的细胞遗传学研究材料。

它的染色体为六对相当大的染色体，而且根尖含有较多的分裂相细胞，非常适合显微观察。

目前，蚕豆根尖微核技术在环境致突变性检测/监测方面已经形成了一套完整的体系。

它的可靠性和灵敏性较高，且本底较低，这对于一种致突变性检测方法是十分重要的。

此外，它的检测物谱较广。

目前多数学者认为，在镜检细胞微核时，应按下列标准计数微核：（1）凡主核大小1/3以下，与主核分离的小核；（2）小核的着色与主核相当或稍浅；（3）小核形态可为圆形，不规则等。

[3]1. 实验目的掌握蚕豆根尖细胞微核检测技术的一般方法。

并利用蚕豆根尖细胞微核检测技术对洗发水的毒性状况给出客观的评价，同时表明蚕豆根尖细胞MCN对胁迫很敏感，蚕豆根尖微核技术可用于洗漱用品的安全监测。

2. 材料与方法2.1实验材料蚕豆种子、洗发水、显微镜、镊子、培养皿、剪刀、载玻片、盖玻片、烧杯、Carnoys固定液、盐酸酒精解离液、改良苯酚品红染液、NaN3等。

蚕豆根尖微核检测技术
实验目的
1.了解微核检测的原理和毒理遗传学 2.学习蚕豆根尖微核检测技术
实验原理
微核（micronucleus，MCN）：
是真核生物细胞内遗传物质的一种异常结构
微核率（ MCN ‰）与作用因子的剂量或累积
效应呈正相关
污染指数
实验材料
蚕豆根尖
实验步骤
1、浸种催芽：将实验用蚕豆按需要量放入盛有自来水的杯中，浸 泡24h，此间至少换水两次。种子吸胀后，25℃催芽，置于铺 有湿润滤纸的培养皿中，经36—48h，大部分初生根长至1— 2cm。 2、用被检测溶液处理蚕豆根尖：每一处理选取3-5粒初生根生长 良好的已萌发种子，放入盛有被测的培养皿中，被测液浸没根 尖即可。阳性检测因子可采用CrO3、NaN3、重铬酸钾、EDTA为加 强阳性效果可适当加大溶度，如1.0—2.5mol/L CrO3和0.5— 1.5mol/L NaN3、溶液。另外可取一污水作被检液之一，用自来 水（或蒸馏水）处理作对照。处理根尖12—24h，此时间也可 视试验要求和被检液溶度而定。
实验结果
若进行污水检测，根据污染指数鉴定出你所测水样的污染程 度，也可以计算被检化学药剂的污染指数。 污染指数（PI)=样品实测MCN ‰平均值/对照组（标准水） MCN ‰平均值 污染指数在0.50—1.50区间基本没 有污染； 1.51—2.00区间为轻度污染； 2.01—3.50区间为中度污染； 3.51以上为重度污染。
实验步骤
5、酸解：用蒸馏水浸洗固定好的幼根两次，每次5min，吸净蒸馏 水，加mol/L盐酸将幼根浸没，室温下解离10min至根尖软化。
6、染色：吸去盐酸，用蒸馏水浸没幼根3次，每次1—2min。最后 浸于水中，制片前取出置于载玻片上，截下1—2mm长的根尖，滴 一滴石炭酸品红，染色10min，加一盖玻片，压片观察。

[小学]蚕豆根尖微核试验学生设计性实验论文毒物对蚕豆根尖细胞的微核诱变效应姓名雷旭红学号2013131203专业生物科学班级 132相关实验课程名称细胞生物学实验,指导教师郝雪峰实验学期 2014-2015 学年第二学期太原师范学院教务处编印洗衣粉、洗衣露诱发蚕豆根尖细胞微核实验研究摘要掌握蚕豆根尖细胞微核检测技术的一般方法。

根据微核诱导的原理，利用蚕豆根尖细胞微核检测技术对洗衣粉的毒性状况给出客观评价。

结果表明:洗衣粉会诱导微核的产生，说明洗衣粉、洗衣露在超过一定浓度内对生物细胞是有毒的。

Abstract :Broad bean root tip cells micronucleus general method detection technology to master. According micronucleus induction principle, the use of nuclear civia toxicity testing technology gives an objective assessment of the situation detergent. The results showed that: detergent will produce micronuclei induction, indicating that exceed a certain concentration of detergent in a biological cell is toxic关键词蚕豆根尖细胞洗衣粉洗发露微核诱导作用损伤Key words : Civia detergent rinse micronuclei induced damage引言人类在发展经济的同时，对自然生活资源的肆意了开发和对环境的无偿利用，已造成了全球生态破坏、资源浪费和短缺、环境污染等重大问题。

为了探明环境污染物对生物机体是否有蓄积毒作用，必须从环境的一致性着手。