上海地区烟粉虱生物型的鉴定
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NY/T ××××—2012烟粉虱测报技术规范(试行稿)1 范围1.1 本规范规定了棉田烟粉虱发生程度分级指标、越冬虫源基数调查、成虫迁入监测、系统调查、大田普查、预测方法,以及数据汇总、汇报方法等方面的技术和方法。
1.2 本规范适用于长江流域、黄河流域和西北内陆棉区非自然露地越冬区棉田烟粉虱的测报调查和预报。
2 术语与定义2.1 烟粉虱若虫分类:1龄和2龄若虫统称低龄若虫,3龄、4龄若虫和伪蛹统称为高龄若虫。
2.2 发生危害期的划分:全年的发生危害期划分为两个阶段,即蕾期烟粉虱和花铃期烟粉虱,简称蕾虱和花铃虱。
2.3 百株三叶成虫量(头/百株三叶):指选取一定株数棉花,在每株指定部位选3张叶片,用翻转叶片法调查叶片上成虫的数量,折算成百株三叶成虫量。
2.4 距蔬菜保护地距离:指棉田边缘与蔬菜保护地边缘最近点的直线距离。
3 发生程度分级指标发生程度分级指标:分蕾期和花铃期,以百株三叶烟粉虱成虫虫量为指标定发生程度。
发生程度分为5级,轻发生(1级)、偏轻发生(2级),中等发生(3级),偏重发生(4级),大发生(5级)。
具体分级指标如下:表1 烟粉虱发生程度分级指标4 越冬虫量调查4.1 调查时间在蔬菜保护地揭膜前一周左右调查。
正常年份各棉花揭膜时间,长江流域棉区在4月上中旬;黄河流域棉区5月中旬,西北内陆棉区在6月上旬。
4.2 调查地点棉田周边的保护地蔬菜上,重点调查葫芦科、十字花科、豆科、茄科和菊科等蔬菜。
按距离棉田小于500m、500~1000m和大于1000m分别调查各类蔬菜保护地,每类保护地调查2个。
4.3 调查方法保护地内蔬菜上随机取5点,每点随机选4株蔬菜,每株分别取上部、中部、下部叶片各1张,调查成虫和高龄若虫的数量。
对叶片着生密集较难区分上、中、下部叶片的蔬菜,可取上、中部嫩叶2张和下部老叶1张,调查烟粉虱虫量。
成虫调查采用翻转叶片法,将叶片轻轻翻转,动作要既轻又快,集中精力迅速目测背面叶片上的大概成虫量,然后仔细查看叶片中的成虫数量,再加上估计已飞走的虫量,计为整个叶片上的成虫数量。
烟粉虱的生物学特性测报及防控技术研究进展【摘要】本文主要研究了烟粉虱的生物学特性及防控技术研究进展。
在研究背景中指出烟粉虱对农作物造成的危害,研究目的是为了探讨有效的防控方法。
正文部分介绍了烟粉虱的生物学特性和危害,重点讨论了化学防治技术和生物防治技术的研究进展。
化学防治技术包括使用农药进行防治,而生物防治技术则是利用天敌和微生物来控制烟粉虱的数量。
结论部分展望了未来的研究方向,并总结了目前防控烟粉虱的技术和措施。
通过本文的研究,为研究者和农民提供了有效的防控烟粉虱的参考。
【关键词】烟粉虱、生物学特性、危害、防控技术、化学防治、生物防治、研究展望、总结1. 引言1.1 研究背景烟粉虱(Aphis gossypii Glover)是一种广泛分布的重要农业害虫,主要危害烟草、瓜类、果树等作物,严重影响作物的生长发育和产量。
烟粉虱以吸食植物汁液为生,引起叶片萎缩、卷曲和蜡质分泌物的产生,严重时可导致作物生长迟缓甚至死亡。
随着现代农业技术的发展,对烟粉虱的防控技术也在不断完善和提升。
化学防治技术是目前主要的防治方式之一,常用的化学药剂包括有机磷、拟除虫菊酯等,可以有效控制烟粉虱的数量。
但随着农药的大量使用,也会带来环境污染和残留问题,因此生物防治技术逐渐受到关注和重视。
本文旨在系统总结烟粉虱的生物学特性及其危害,分析烟粉虱的防控技术研究进展,重点探讨化学防治技术和生物防治技术的应用及发展趋势,以期为烟粉虱的防治提供科学依据和技术支持。
的论述将是对该领域研究的重要补充,有助于更全面地了解烟粉虱及其防控技术的现状和问题所在。
1.2 研究目的本研究的具体目的包括:1.系统总结烟粉虱的生物学特性,包括其生活习性、繁殖特点和危害规律;2.分析烟粉虱对烟草生长发育的影响,揭示其危害机制;3.综述烟粉虱的防控技术研究进展,探讨已有技术在实际应用中存在的问题和局限性;4.重点就化学防治技术和生物防治技术的研究现状进行深入分析,提出改进和完善的建议,为烟草病虫害防控提供参考依据。
上海粉虱种类及烟粉虱生物型分子鉴定的开题报告
一、研究背景
粉虱属于真虫纲、半翅目、粉虱科,是全世界广泛分布的害虫之一,对农业、园林、林业等经济作物造成了严重威胁。
其中,上海粉虱和烟
粉虱是我国比较常见的两种粉虱之一,其危害性很大,引起广大科学家
的高度关注。
烟粉虱除能危害烟类作物外,还可危害茶叶等作物,而上
海粉虱则对水稻等作物危害较为严重。
当前,对上海粉虱和烟粉虱的分类和鉴定主要是采用形态学鉴定的
方法,但由于形态学特征易受环境因素影响,以及人为差异等因素的影响,导致形态学鉴定的结果不够准确和稳定。
因此,使用生物型分子鉴
定技术对上海粉虱和烟粉虱的分类和鉴定具有重要的现实意义和科学意义。
二、研究目的
本研究的主要目的是开展对上海粉虱和烟粉虱生物型分子鉴定的研究,为这两种粉虱的分类和鉴定提供新的技术手段,提高其准确性和稳
定性。
三、研究内容
1.收集样本:采集上海粉虱和烟粉虱样本,并进行初步鉴定。
2.提取DNA:采用DNA提取试剂盒法对样本进行DNA提取。
3.选择分子标记:选取适合的分子标记进行分析,如核糖体DNA (rDNA) 、线粒体 DNA(mtDNA)等。
4.序列分析:进行PCR扩增和序列分析。
5.序列比较与进化分析:对序列进行比较与进化分析,确定样本分
类地位。
四、研究意义
本研究对上海粉虱和烟粉虱的生物型分子鉴定提供了新的技术手段,提高了其分类和鉴定的准确性和稳定性,对防治这两种害虫具有重要的
现实意义和科学意义。
同时,该研究为其他类似的害虫分类和鉴定提供
了参考和指导。
上海地区烟粉虱生物型的最新鉴定王欢;李凯【期刊名称】《上海农业学报》【年(卷),期】2015(000)002【摘要】以mtDNA CO Ⅰ序列标记对上海8个区县的烟粉虱进行了生物型鉴定。
序列分析显示,所测33个种群165个样本中,仅发现2种烟粉虱单倍型,即 Q型与 B 型。
B 型仅存于远郊崇明的花椰菜种群与奉贤的南瓜种群,比例为6%;其余各种群均为 Q 型,占94%。
结果显示:Q 型烟粉虱已全面取代 B 型烟粉虱,成为上海地区主要优势生物型。
%The biotypes of Bemisia tabaci from 8 districts of Shanghai suburbs were identified by mtDNA CO Ⅰ sequence marking.The sequence analysis showed that there were only 2 mtDNA haplotypes(Q and B bio-types)found in the 165 individuals of 33 populations.The B biotype was merely living on both broccoli populationin Chongming County and pumpkin population in Fengxian District and accounted for 6%;The Q biotype accoun-ted for 94% and became the major biotype of Bemisia tabaci in Shanghai area.【总页数】4页(P75-78)【作者】王欢;李凯【作者单位】上海农林职业技术学院,上海 201699;东华大学生物科学与技术研究所,上海 201620【正文语种】中文【相关文献】1.上海地区烟粉虱生物型的鉴定 [J], 史苹香;王冬生;滕海媛;章巧利;张天澍;袁永达;王建国2.安徽合肥地区烟粉虱生物型鉴定及其系统发育分析 [J], 严丹侃;张海珊;章东方3.新疆主要农区烟粉虱生物型鉴定及其对11种常用杀虫剂的抗性监测 [J], 贾尊尊;王小武;付开赟;丁新华;郭文超;吐尔逊·阿合买提;姜卫华;卡德·艾山4.陕西地区烟粉虱生物型的鉴定及其危害分析 [J], 赵瑞华;邓振山;贺晓龙5.陕西菜田2种粉虱数量结构及烟粉虱生物型鉴定 [J], 刘晨;张伟兵;洪波;张锋;张淑莲;李英梅因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
在北京和河北局部地区 Q型烟粉虱取代了 B型烟粉虱潘慧鹏;戈大庆;王少丽;吴青君;徐宝云;谢文;张友军【摘要】利用烟粉虱[Bemisia tabaci(Gennadius)]B生物型和Q生物型mtDNACOⅠ基因片段的特异性引物及烟粉虱mtDNA COⅠ基因片段通用引物,对2009年采自北京市海淀区、昌平区和河北廊坊市的蔬菜所3个基地的烟粉虱种群的生物型进行了鉴定,同时以本实验室在温室内长期饲养的B型烟粉虱种群作为对照.结果表明,2009年在3个地区所采集的烟粉虱全部为Q型,而在2004年这3个基地发生为害的烟粉虱全部为B型,表明Q型烟粉虱已经取代了B型烟粉虱在这些地区发生为害.【期刊名称】《植物保护》【年(卷),期】2010(036)006【总页数】5页(P40-44)【关键词】烟粉虱;B生物型;Q生物型;线粒体细胞色素氧化酶Ⅰ;取代【作者】潘慧鹏;戈大庆;王少丽;吴青君;徐宝云;谢文;张友军【作者单位】中国农业科学院蔬菜花卉研究所,北京,100081;中国农业科学院蔬菜花卉研究所,北京,100081;中国农业科学院蔬菜花卉研究所,北京,100081;中国农业科学院蔬菜花卉研究所,北京,100081;中国农业科学院蔬菜花卉研究所,北京,100081;中国农业科学院蔬菜花卉研究所,北京,100081;中国农业科学院蔬菜花卉研究所,北京,100081【正文语种】中文【中图分类】S433.3烟粉虱[Bemisia tabaci(Gennadius)]属半翅目,粉虱科,是一种世界性的多食性害虫,以植物韧皮部汁液为食,通过直接刺吸为害、传播植物病毒、引起植物生理混乱、分泌蜜露诱发真菌病害给作物生产造成巨大的经济损失[1-2]。
依据其寄主范围、生殖力、为害习性和传毒能力等方面的差异,至少可以分为24种生物型[3],其中B 型烟粉虱是近20年来传播世界各地并暴发成灾的重要入侵害虫[3-6],在我国华北和其他地区发生并造成严重的危害[7],应用分子生物学等手段研究发现在北京市发生为害的烟粉虱主要是B型烟粉虱[8-11]。
呋虫胺对不同虫态烟粉虱的室内毒力测定孟臻;王菲菲;张典利;刘政军;姬小雪【摘要】采用琼脂保湿浸叶法和药膜法进行室内毒力测定评价呋虫胺对烟粉虱卵、若虫和成虫的防治效果.结果表明:呋虫胺对烟粉虱卵、若虫和成虫LC50分别为10.55、24.68、75.91 mg/L;而对照药剂吡虫啉对烟粉虱卵、若虫和成虫LC50分别为25.77、56.07、111.83 mg/L,呋虫胺对烟粉虱各个虫龄的杀虫活性均优于吡虫啉,并且呋虫胺对卵和若虫有较高的杀灭活性,因此适合在烟粉虱发生初期使用,有利于控制烟粉虱种群扩大、减少药剂使用量.【期刊名称】《生物灾害科学》【年(卷),期】2018(041)002【总页数】3页(P131-133)【关键词】烟粉虱;吡虫啉;呋虫胺;毒力测定【作者】孟臻;王菲菲;张典利;刘政军;姬小雪【作者单位】山东农业大学植物保护学院,山东泰安271018;山东滨农科技有限公司,山东滨州256600;山东农业大学植物保护学院,山东泰安271018;山东泰阳生物科技有限公司,山东泰安 271000;山东农业大学植物保护学院,山东泰安271018【正文语种】中文【中图分类】S433.39烟粉虱(Bemisia tabaci)又名棉粉虱,在世界范围内普遍发生,其寄主植物种类高达74科500种以上[1]。
在我国主要为害蔬菜、烟草等经济作物。
烟粉虱的繁殖能力强,在我国南方一年可发生数十代,并且存在世代重叠现象,严重影响我国的农业生产。
目前对烟粉虱的防治还是主要依靠化学药剂,由于烟粉虱对各种药剂抗性发展严重,急需寻找高效低毒、环境友好的替代药剂[2]。
新烟碱类杀虫剂是近30 年间主要开发的一类新型杀虫剂。
由于用量少、持效性强、对大多数节肢动物的高神经毒性以及独特的选择性作用机制,使得其在不到 20年的时间里,一跃成为全世界使用最为广泛、发展最快的一类杀虫剂[3]。
目前常用的烟碱类杀虫剂有吡虫啉、噻虫嗪、噻虫啉等药剂,以吡虫啉为代表的第一代烟碱类杀虫剂使用多年,烟粉虱早已对其产生抗性;以噻虫啉为代表的第二代烟碱类杀虫剂对环境友好,是目前发展的主要对象,但昂贵的价格限制了它们的使用[4];而第三代烟碱类杀虫剂呋虫胺为烟粉虱的防治提供了新思路。
烟粉虱的生物学特性测报及防控技术研究进展【摘要】烟粉虱是影响烟草产量和品质的重要害虫之一,本文通过对烟粉虱的生物学特性、测报技术和防控技术进行研究,总结了烟粉虱的防控技术研究进展和未来的发展前景。
研究发现烟粉虱在不同生长阶段具有不同的特性,同时传播病毒也对烟草产生不利影响。
研究人员利用生物学测报技术有效监测烟粉虱的数量和分布,为烟草防控工作提供了重要依据。
在防控技术方面,化学防治、生物防治和物理防治等方法被广泛应用。
未来,研究人员将继续深入探讨烟粉虱的生物学特性和防控技术,为烟草生产提供更有效的保障。
本文总结了当前研究成果,展望未来研究方向,为烟粉虱的防控提供了参考。
【关键词】烟粉虱、生物学特性、测报、防控技术、研究进展、前景展望、研究总结、展望未来、研究背景、研究目的1. 引言1.1 研究背景烟粉虱(Aphis gossypii Glover)是一种害虫,主要危害烟草作物。
其危害表现为吸食叶片汁液,导致叶片黄化、脱落甚至死亡,严重影响了烟草的生长和产量。
烟粉虱以其繁殖迅速、抗逆性强的特点,给烟草种植业生产带来了严重的威胁。
随着环境污染的加剧和气候变暖的影响,烟粉虱的生存条件得到了进一步的改善,其种群数量和危害程度逐渐增加。
为了有效防控烟粉虱,减少其对烟草产量的影响,开展烟粉虱的生物学特性测报及防控技术研究成为当务之急。
通过对烟粉虱的生物学特性进行深入研究,可以更好地了解其生活习性、产卵规律、寄主选择等行为特点,为后续的防控工作提供科学依据。
探索有效的防控技术,如生物防治、化学防治、物理防治等手段,并结合烟粉虱的生物学特性制定防控方案,可以有效减少其危害,保障烟草产量和质量。
1.2 研究目的1. 深入了解烟粉虱的生物学特性,包括其生命史、生长发育、寄主选择等方面的特点,为制定针对性的防控策略提供基础数据支持。
2. 探讨烟粉虱的生物学测报方法,包括监测技术、虫口密度评估等内容,为早期预警和精准防控提供技术支持。
烟粉虱的生物学特性测报及防控技术研究进展烟粉虱是一种常见的害虫,广泛分布在烟草、蔬菜和水果等作物上,给农作物生长发育和产量带来了严重的危害。
针对烟粉虱的生物学特性测报及防控技术的研究,科研工作者们积极探索新的方法和技术,取得了一系列的进展。
本文将对烟粉虱的生物学特性测报及防控技术的研究进展进行综述。
一、烟粉虱的生物学特性测报1. 体型特征烟粉虱成虫体长1.5-3mm,黑色或褐色,触角2节,翅展开宽1.5-2mm,翅膜透明。
幼虫小臼齿细长,颜色与成虫相同。
2. 繁殖特性烟粉虱繁殖力强,发育周期短,一般在20-30天内便能完成一个世代的繁殖。
女成虫寿命为30-45天,每日产卵20-30颗,寿命期内可产卵200-300颗。
3. 迁飞能力烟粉虱具有较强的迁飞能力,能够在冬季通过迁移的方式逃避寒冷。
一般在初春融雪之后,便会从树木上迁移到作物上产卵,成为新一代病虫害。
二、烟粉虱的防控技术1. 生物防治技术生物防治技术是目前烟粉虱防控的主要手段之一。
利用天敌昆虫、天敌菌等对烟粉虱进行防治,能够有效地控制烟粉虱的数量。
例如利用瓢虫等天敌昆虫对烟粉虱进行捕食,也可以利用真菌等天敌菌对烟粉虱进行感染。
2. 化学防治技术化学防治技术是目前烟粉虱防控的主要手段之一。
通过使用杀虫剂进行喷洒,能够有效地控制烟粉虱的数量。
但是需要注意的是,化学防治技术存在一定的环境污染和对人体健康的危害,因此需要谨慎使用,要遵循农药使用的相关规定。
3. 农艺防治技术农艺防治技术是通过调整种植结构、改进种植方式、合理施肥等农业措施来减少烟粉虱的发生。
例如合理选择作物品种,控制密植,在病虫害高发期适时进行田间管理等方法,都可以有效地减少烟粉虱的发生。
烟粉虱的防控技术主要包括生物防治技术、化学防治技术和农艺防治技术。
这些技术的应用能够有效地控制烟粉虱的数量,保护农作物的生长发育。
三、研究进展在烟粉虱的生物学特性测报及防控技术的研究中,科研工作者们取得了一系列的进展,主要体现在以下几个方面:1. 发现新的天敌近年来,科研工作者们发现了一些新的天敌昆虫,例如寄生性蜂、捕食性虻等,它们对烟粉虱具有较好的防治效果。
江西农业大学学报2012,34(2):276-281http://xuebao.jxau.edu.cn Acta Agriculturae Universitatis Jiangxiensis E-mail:ndxb7775@sina.com上海地区烟粉虱生物型的鉴定史苹香1,2,王冬生2,滕海媛2,章巧利2,张天澍2,袁永达2,王建国1*(1.江西农业大学农学院,江西南昌330045;2.上海市农业科学院生态环境保护研究所/上海市设施园艺技术重点实验室,上海201403)摘要:烟粉虱是一种由许多生物型组成的复合种,是一种世界性的重要害虫。
不同生物型的烟粉虱在寄主范围、传毒能力、抗药性等许多生物学特性方面存在差异。
利用mtDNA COI基因作标记对上海地区的烟粉虱生物型进行了分析鉴定。
结果表明,所测上海10个代表性地区中,闵行区只检测到B型烟粉虱,嘉定、青浦和徐汇区只检测到Q型烟粉虱,其余各地区B型和Q型两种生物型烟粉虱共存。
所测上海地区共45个种群中,有31个种群为Q型,占所测种群的68.9%,14个种群为B型,占31.1%。
而且,大棚采集种群多为Q型(Q型占87.0%)。
结果说明Q型烟粉虱已在上海地区广泛存在、大量发生,并有取代B型烟粉虱成为上海地区烟粉虱主要危害类型的可能。
关键词:烟粉虱;生物型;鉴定中图分类号:S433.3文献标志码:A文章编号:1000-2286(2012)02-0276-06The Identification of Biotypes of Bemisia tabaci in Shanghai AreaSHI Ping-xiang1,2,WANG Dong-sheng2,TENG Hai-yuan2,ZHANG Qiao-li2,ZHANG Tian-shu2,YUAN Yong-da2,WANG Jian-guo1*(1.College of Agronomy,Jiangxi Agricultural University,Nanchang330045,China;2.Shanghai Key La-boratory of Protected Horticultural Technology,Institute of Eco-environment and Plant Protection,SAAS,Shanghai201403,China)Abstract:The Bemisia tabaci(Gennadius)species complex is one of the most devastating agricultural pests in the world,which is composed of numerous biotypes.These biotypes show different biological traits with respect to host range,virus-transmission capabilities and insecticide resistance.In this study,the45Be-misia tabaci populations from10different regions of Shanghai were collected and analyzed based on the gene sequence of Mitochondrial cytochrome oxidase I(mtDNA COI).The results show that the populations from Jiading,Jinshan and Xuhui districts were only Q biotype,and only B biotypes was found in Minhang district,but B and Q biotypes co-exist in other districts.Moreover,among the total45populations of Bemisia tabaci i-dentified in this study,31populations were Q biotype,68.9%proportion and B biotype31.1%respectively.In addition,most populations collected from greenhouse were Q biotype(87.0%).The results indicated that Q biotype spreads widely in Shanghai area and may replace the B biotype as a major crop pest in Shanghai area.Key words:Bemisia tabaci;biotypes;identification收稿日期:2011-12-06修回日期:2011-12-28基金项目:国家科技支撑计划项目(2010BAK69B18)、国家自然科学基金(30960223)和上海市科委崇明科技攻关专项(10DZ1960100)作者简介:史苹香(1988—),女,硕士生,主要从事入侵生物研究,E-mail:shipx2344@163.com;*通讯作者:王建国,教授,博士,E-mail:ppdjxau@gmail.com。
第2期史苹香等:上海地区烟粉虱生物型的鉴定烟粉虱Bemisia tabaci (Gennadius )又名棉粉虱、甘薯粉虱,属半翅目,粉虱科,小粉虱属,是一种世界性重要害虫,广泛分布于亚洲、欧洲、非洲、美洲等的多个国家和地区,可危害多种寄主植物,还可传播多种植物病毒。
烟粉虱是一个快速进化的复合种,包含多个生物型,截止目前已有26个生物型[1-3]被鉴定,不同生物型烟粉虱在寄主范围、传毒能力、抗药性等方面存在显著差异,其中B 型和Q 型是两种入侵性较强的生物型。
烟粉虱在我国早有记载[4],但一直不是主要害虫。
20世纪90年代后期以来,烟粉虱在国内相继爆发,成为我国农林业主要害虫之一。
罗晨[5]、吴杏霞[6]、邱宝利[7]利用分子生物学方法研究发现早期在我国造成严重危害的烟粉虱主要为B 型烟粉虱。
但自2003年首次在云南昆明发现Q 型烟粉虱以来[8],Q 型烟粉虱已在我国多个地区[9-11]发现,而且在部分地区已成为优势种群,并逐步取代B 型烟粉虱成为主要危害种群[11-14]。
20世纪80年代初期,烟粉虱是上海郊区常发棉田害虫,但密度较低,危害不重[15]。
陈连根[16]报道,上海自1994某单位从国外引进一品红后,烟粉虱大发生,用药难以控制。
褚栋等[17]2005年鉴定上海闵行地区烟粉虱为B 型。
但是上海地区烟粉虱的具体发生状况以及Q 型烟粉虱在上海地区有无分布尚缺具体报道,是否Q 型烟粉虱在上海地区已大量发生,正逐步取代B 型烟粉虱成为上海地区农作物主要危害种群有待研究。
分子标记如RAPD 、AFLP 、ITS 、mtDNACOI 、16S rDNA 等方法已被广泛用于烟粉虱研究,其中mtD-NACOI 分子标记被认为是不同生物型鉴定及其遗传分化研究中的最有效方法之一,已被用于多个国家和地区烟粉虱生物型的鉴定及遗传分化研究[18-21],本研究利用mtDNACOI 作为分子标记对上海地区烟粉虱生物型进行了鉴定,旨在了解上海地区烟粉虱发生及分布情况,为上海地区烟粉虱的综合防治提供依据。
1材料与方法1.1供试材料实验所用材料为2010年8月至2011年7月采自上海市金山、嘉定、青浦、浦东、闵行等9个区,及崇明县共10个地区不同寄主植物共45个种群烟粉虱成若虫(表1),将采集的烟粉虱标本直接浸泡于无水乙醇中,-20ħ冰箱保存备用。
1.2单头烟粉虱总DNA 的提取参照滕海媛等[22]DNA 提取试剂盒法提取单头烟粉虱总DNA 。
1.3PCR 扩增及检测PCR 扩增所用引物为C1-J -2195(5'-TTGATTTTTTGGTCATCCAGAAGT -3')和L2-N -3014(5'-TCCAATGCACTAATCTGCCATATTA -3')。
扩增产物是mtDNACOI 基因3'末端大小为840bp 左右的部分序列。
PCR 反应体系为20uL ,含10ˑBuffer (含Mg 2+)1.5μL ,dNTP Mixture (2.5mmol /L )0.6μL ,Taq 酶(2.5U /μL )0.4μL ,引物(10μmol /L )各1.0μL ,模板DNA2.0μL 。
反应体系于94ħ变性5min ,后进行35个循环:94ħ变性1min ;50ħ退火1min ;72ħ延伸1min 。
循环结束后72ħ延伸5min 。
反应产物置于4ħ冰箱保存。
扩增产物以15g /L 琼脂糖凝胶电泳分离,Gelview 染色后在凝胶成像仪上观察,记录结果。
1.4测序与数据分析PCR 产物送生工生物工程(上海)有限公司直接进行双向测序。
测序结果用Lasergene 软件结合测序峰图进行拼接校对,然后利用BLAST 与GenBank 中同源序列进行比较,下载世界不同地区代表性烟粉虱种群基因序列。
用ClustalW 多序列对位排列程序进行序列对比分析。
以温室白粉虱为外群,运用MEGA4.0软件,根据Kimura2-paramter 模型计算不同地理种群及不同生物型烟粉虱的进化分歧矩阵,采用邻接法(Neighbour -Joining ,NJ )构建系统树,系统树各分支的置信度(boostrap )均进行1000次的重复检验。
2结果与分析2.1PCR 扩增结果与序列组成分析所测样品均得到800bp 以上片段,通过Clustal W 对所测45个烟粉虱种群进行序列分析发现,有·772·江西农业大学学报第34卷表1烟粉虱供试样品及生物型鉴定结果Tab.1Samples of Bemisia tabaci used in this study and consequence of identification采集地点Sampling locations 样品代码Sample code 寄主植物Host plant 采集时间(年-月)Collection date 生物型Biotypes 宝山区Baoshan DistrictBS -BC 大棚白菜2011-07Q BS -TJ 大棚甜椒2011-07Q BS -QZ 大棚茄子2011-07Q BS -DG 露地冬瓜2011-07B BS -JD 露地豇豆2011-07B BS -XHL露地西葫芦2011-07B 崇明县Chongming County CM -LS 大棚芦笋2010-11Q CM -JH 大棚菊花2010-11Q CM -FQ 大棚番茄2010-11B CM -NG 露地南瓜2010-11Q CM -KJC露地苦苣菜2010-11Q 嘉定区Jiading District JD -TJ 大棚甜椒2010-11Q JD -HYC 大棚花椰菜2010-11B JD -XRK露地向日葵2010-11Q 金山区Jinshan District JS -FQ 大棚番茄2011-07Q JS -HG 大棚黄瓜2011-07Q JS -TJ 大棚甜椒2011-07Q JS -QZ -D 大棚茄子2011-07Q JS -QZ -L 露地茄子2011-07Q JS -XHL露地西葫芦2011-07Q 青浦区Qinpu District QP -QZ 大棚茄子2010-11Q QP -TJ 大棚甜椒2010-11Q QP -LB 露地萝卜2010-11Q QP -GL露地甘蓝2010-11Q 浦东新区Pudong new district PD -NG 大棚南瓜2010-11Q PD -MH 露地棉花2010-11Q PG -DG 露地冬瓜2010-11Q PD -HYC 露地花椰菜2010-11B PD -GL露地甘蓝2010-11B 奉贤区Fengxian District FX -HG 大棚黄瓜2011-06Q FX -FQ 大棚番茄2011-07Q FX -TJ -11大棚甜椒2011-07Q FX -QZ 大棚茄子2011-07Q FX -TJ -10大棚甜椒2010-11Q FX -YPH 一品红2010-11Q FX -GS 大棚甘薯2010-08Q FX -GL露地甘蓝2010-08B 松江区Songjiang District SJ -TJ 大棚甜椒2010-11Q SJ -HYC 露地花椰菜2010-11B SJ -GL 露地甘蓝2010-11B SJ -XRK露地向日葵2010-11B 闵行区Minhang District MH -HYC 露地花椰菜2010-10B MH -QZ 大棚茄子2011-06B MH -XG露地香瓜2011-06B 徐汇区Xuhui District XH -XRK露地向日葵2010-09Q·872·第2期史苹香等:上海地区烟粉虱生物型的鉴定14个种群所得到的COI 基因序列完全一致,为计算方便仅选取其中一条序列进行分析(编号为:SH -1),其A +T 含量为68.6%,远远高于G +C (31.4%)含量。