重组木聚糖酶生产低聚木糖的实验研究

利用木聚糖酶酶解小麦麸皮制备低聚木糖工艺参数的研究王立东;张丽萍
【期刊名称】《黑龙江八一农垦大学学报》
【年(卷),期】2012(024)001
【摘要】研究利用木聚糖酶酶解小麦麸皮制备低聚木糖。

采用正交旋转组合实验优化设计,确定木聚糖酶酶解制备小麦麸皮低聚木糖的最佳工艺参数。

结果表明,底物浓度为10.5%,加入酶量为1 000 IU/g底物,水解温度为53℃,水解时间为5.5 h,最终得到酶解液中低聚木糖的平均聚合度为2.18,总还原糖含量为5.83 mg/mL。

并通过HPLC分析确定酶解液中主要含有木二糖、木三糖、木四糖、木五糖等低聚木糖组分,且低聚木糖（木二～木五）的相对含量达64.41%。

说明此水解条件能够较好的制备低聚木糖。

【总页数】8页(P61-68)
【作者】王立东;张丽萍
【作者单位】黑龙江省农产品加工工程技术研究中心,大庆163319;黑龙江省农产品加工工程技术研究中心,大庆163319
【正文语种】中文
【中图分类】TS201.2
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木聚糖酶生产及酶学性质的研究一、本文概述木聚糖酶是一类能够水解木聚糖及其相关多糖的酶类，广泛存在于自然界中，尤其是在植物、微生物和动物体内。

由于其在生物质转化、食品加工、饲料工业以及医药等领域的重要应用价值，木聚糖酶的研究与生产日益受到关注。

本文旨在全面综述木聚糖酶的生产方法、纯化技术以及酶学性质的研究进展，以期为木聚糖酶的进一步研究和应用提供理论支持和实践指导。

本文将对木聚糖酶的生产方法进行详细阐述。

这包括从天然来源中提取木聚糖酶，以及通过微生物发酵、基因工程等生物技术手段生产木聚糖酶。

在此基础上，还将探讨不同生产方法的优缺点，以及影响木聚糖酶产量的关键因素。

本文将关注木聚糖酶的纯化技术。

纯化是获得高质量、高活性木聚糖酶的关键步骤，本文将介绍常见的纯化方法，如硫酸铵沉淀、离子交换层析、凝胶过滤层析等，并分析各方法的优缺点及适用范围。

本文将重点研究木聚糖酶的酶学性质。

这包括木聚糖酶的分子量、最适pH值、最适温度、动力学参数等基本性质，以及酶的稳定性、抑制剂和激活剂等影响因素。

通过对这些酶学性质的研究，可以更深入地了解木聚糖酶的作用机制和催化性能，为其在各个领域的应用提供理论依据。

本文旨在通过系统研究木聚糖酶的生产及酶学性质，为木聚糖酶的进一步研究和应用提供全面、深入的理论支持和实践指导。

二、木聚糖酶的生产方法木聚糖酶作为一种重要的工业酶，其生产方法主要包括微生物发酵法、化学合成法和基因工程法。

其中，微生物发酵法因其产量高、成本低、条件温和且易于工业化生产等优点，成为目前木聚糖酶生产的主要方法。

微生物发酵法生产木聚糖酶主要利用能够产生木聚糖酶的微生物，如真菌、细菌和放线菌等，通过优化培养基成分、发酵条件和菌种选育等手段，提高木聚糖酶的产量和活性。

目前，黑曲霉、米曲霉和里氏木霉等真菌是木聚糖酶的主要生产菌种。

在发酵过程中，碳源、氮源、无机盐和生长因子等营养成分对木聚糖酶的产量和活性具有重要影响。

常用的碳源包括木聚糖、葡萄糖、果糖等，氮源则包括蛋白胨、酵母粉、豆饼粉等。

第40卷第2期2020年4月林㊀产㊀化㊀学㊀与㊀工㊀业Chemistry and Industry of Forest Products Vol.40No.2Apr.2020㊀㊀收稿日期:2019-10-24㊀㊀基金项目:江苏省重点研发专项(BF2015007)㊀㊀作者简介:连之娜(1982 ㊀),女,山东威海人,实验员,博士生,主要从事功能性聚糖的开发与利用研究㊀∗通讯作者:余世袁,教授,博士生导师,主要从事木质纤维资源生物炼制的研究与开发工作;E-mail :syu@㊂doi:10.3969/j.issn.0253-2417.2020.02.004木聚糖高温自水解和醇沉分离制备低聚木糖LIAN Zhina ㊀连之娜,王艳娥,罗京,勇强,余世袁∗(南京林业大学林木遗传与生物技术省部共建教育部重点实验室;江苏省林业资源高效加工利用协同创新中心;化学工程学院,江苏南京210037)摘㊀要:采用乙醇两步沉淀分离木聚糖酶水解残渣的高温自水解液,得到3种不同聚合度范围的木聚糖组分,并就3种木聚糖组分对青春双歧杆菌的增殖效果进行评价㊂研究结果表明:在180ħ㊁40min 的条件下,高温自水解液中主要含聚合度(D p )为2~6的低聚木糖(XOS ),XOS 占水解液中总木聚糖的57.36%,XOS 得率为26.54%㊂乙醇两步沉淀方式可实现木聚糖高温自水解液中不同聚合度范围木聚糖组分的有效分离,分别得到S1(D p 24~122)㊁S2(D p 7~19)和S3(D p 1~6)这3种木聚糖组分,高聚合度木聚糖组分S1和中等聚合度木聚糖组分S2较难被青春双歧杆菌所利用,增殖效果不明显;XOS 纯度高达95.91%的低聚合度木聚糖组分S3对青春双歧杆菌增殖效果最明显,36h 菌体质量浓度达0.25g /L ,菌体增殖倍数达4.72倍,残糖量为43.48%,总有机酸质量浓度达1.96g /L ㊂关键词:低聚木糖;高温自水解;聚合度;乙醇沉淀;双歧杆菌中图分类号:TQ35;TS201.1㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀文献标识码:A㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀文章编号:0253-2417(2020)02-0033-09引文格式:连之娜,王艳娥,罗京,等.木聚糖高温自水解和醇沉分离制备低聚木糖[J ].林产化学与工业,2020,40(2):33-41.Preparation of Xylooligosaccharides by Ethanol Precipitation Separation from Autohydrolysis of Enzymatic Hydrolysis Residuce of XylanLIAN Zhina,WANG Yanᶄe,LUO Jing,YONG Qiang,YU Shiyuan(Key Laboratory of Forestry Genetics &Biotechnology,Ministry of Education;Jiangsu Co-innovation Center of Efficient Processing and Utilization of Forest Resources,College of Chemical Engineering,Nanjing Forestry University,Nanjing 210037,China)Abstract :Enzymatic hydrolysis residue of xylan was autohydrolyzed,and the autohydrolysate was then fractionated by two-step ethanol precipitation.The obtained three kinds of xylan fractions with varied degree of polymerization (D p )were evaluated through in vitro proliferation by Bifidobacterium adolescentis .The autohydrolysis was carried out at 180ħfor 40min to obtain autohydrolysate mainly contained xylooligosaccharides (XOS)with D p of 2-6.The content of XOS was 57.36%of the xylan in the autohydrolysate,and the yield of XOS was 26.54%of the xylan in the feedstock.Two-step ethanol precipitation could fractionate the xylan in the autohydrolysate into sample S1,S2and S3,with the range of D p of 24-122,7-19and 1-6,respectively.Low D p of sample S3contained mainly XOS which was 95.91%and exhibited significant prebiotic activity.After 36h incubation,the cell concentration was 0.25g /L,4.72times of the initial,with the sugar residue of 43.48%,and with the concentration of short-chain fatty acids of 1.96g /L.Key word :xylooligosaccharide;autohydrolysis;degree of polymerization;ethanol precipitation;Bifidobacterium adolescentis 木聚糖是由若干个木糖单元聚合而成,习惯上将低聚合度(聚合度2~6)的木聚糖称为低聚木糖(XOS)㊂XOS 是一种功能性低聚糖,在人体消化道内不会被代谢,到达大肠后能显著增加有益菌数量,对改善肠道微生态环境㊁润肠通便和治疗腹泻等效果明显,近年来在国内外备受关注[1-2]㊂XOS 还具有34㊀林㊀产㊀化㊀学㊀与㊀工㊀业第40卷增强免疫力㊁促进钙吸收㊁降低结直肠癌变㊁抗氧化性和降低血压等多种功效[3],且相比于其它功能性低聚糖,其有效用量最少,耐酸耐热,极具市场竞争力,因而被广泛应用在医药㊁食品㊁保健品㊁饲料等领域[3-4]㊂工业上的XOS通常为木质纤维原料中的木聚糖酶水解所得,然而在酶水解过程中仅有一部分木聚糖能够被降解为XOS,剩余的难被降解的木聚糖则成为木聚糖酶水解残渣㊂若能将这部分木聚糖酶水解残渣高值化利用,将会大大提高木聚糖的利用率和产品开发应用价值㊂高温自水解是一种得率高,无化学试剂添加㊁绿色环保的XOS生产方法[5-7],但是高温自水解液中的木聚糖聚合度分布范围较广,除了XOS,还含有较高聚合度(聚合度大于6)的高聚木糖[8-9]㊂不同聚合度的木聚糖对益生菌的对比增殖效果研究报道较少,益生效果并不明确㊂因此,需要采用一定的分离手段将不同聚合度范围的木聚糖进行分离,并探究其益生效果㊂乙醇沉淀分离聚糖工艺成熟,操作简便,适合大批量操作,且乙醇少量残存对食品级产品无影响,在聚糖分离中应用较多[10-11]㊂本研究对木聚糖酶水解残渣进行高温自水解,通过乙醇两步沉淀分离,获得XOS和聚合度较高的3种木聚糖组分,以这3种木聚糖组分作碳源增殖青春双歧杆菌,对比评价其增殖益生效果,以期为进一步扩大木聚糖的利用提供有效的理论依据㊂1㊀实验1.1㊀材料、试剂与仪器木聚糖酶水解残渣,由某生产低聚木糖的公司提供,是玉米秸秆经碱抽提㊁酶水解后未被降解的高聚合度木聚糖,即难被酶水解的高聚木糖㊂木二糖㊁木三糖㊁木四糖㊁木五糖和木六糖标准品,购于Megazyme公司;纤维二糖标准品㊁无水醋酸钠㊁50%氢氧化钠和木糖标准品,购于Sigma-Aldrich公司;葡聚糖标准品㊁糠醛㊁羟甲基糠醛,均购于Fluca公司;甲酸㊁乙酸㊁乳酸㊁丙酸㊁丁酸和乙醇(纯度99.7%),均为市售分析纯㊂青春双歧杆菌(Bifidobacterium adolescentis)真空冷冻干燥菌种冻干粉(严格厌氧菌株),由中国普通微生物菌种保藏管理中心(CICC)提供,编号6070㊂活化及增殖培养基:大豆蛋白胨5g/L,胰蛋白胨5g/L,酵母提取物10g/L,CaCl20.008g/L,NaCl0.08g/L,K2HPO40.04g/L,KH2PO40.04g/L, NaHCO30.4g/L,MgSO40.019g/L,0.05%L-半胱氨酸盐酸盐作为还原剂加入灭过菌的培养基中㊂高压反应釜,大连自控设备厂;高速冷冻离心机,美国Eppendorf公司;Bug Box厌氧培养箱,英国Ruskinn公司;Agilent1260型高效液相色谱(HPLC)仪,带有示差检测(RID),美国Agilent公司;色谱柱CarboPac PA200(250mmˑ3mm),色谱保护柱CarboPac PA200(50mmˑ3mm),色谱柱Bio-Rad Aminex HPX-87H(300mmˑ7.8mm),色谱保护柱Bio-Rad Cation H Refill Cartridges(30mmˑ4.6mm), Chromeleon6.80色谱工作站,Dionex ICS-3000离子色谱仪,带有四电位脉冲安培检测器(PAD),美国Thermo Fisher公司;Ultrahydrogel120(300mmˑ7.8mm)色谱柱和Ultrahydrogel250(300mmˑ7.8mm)色谱柱,美国Waters公司㊂1.2㊀木聚糖酶水解残渣的高温自水解将131g木聚糖酶水解残渣(含木聚糖100g)与水按1ʒ50(gʒmL)混合,加入1.0L高压反应釜,分别在170㊁180㊁190和200ħ条件下保温20㊁30㊁40和50min㊂反应结束后在高速冷冻离心机中于8000r/min下离心10min,取上清液,即为高温自水解液㊂1.3㊀水解液的乙醇沉淀分离1.3.1㊀不同体积分数的乙醇㊀向高温自水解液中加入一定量的乙醇,使乙醇最终体积分数分别达到10%㊁20%㊁30%㊁40%㊁50%㊁60%㊁70%㊁80%和90%,置于摇床上,于20ħ下150r/min混合15min,再放于摇床上,20ħ静置15min,于8000r/min㊁20ħ下离心10min,收集上清液㊂沉淀再次分别使用对应沉淀分离时的乙醇润洗,并重复上述操作,于8000r/min㊁20ħ下离心10min,将沉淀置于冻干机中去除残余的乙醇,最后用蒸馏水溶解沉淀并定容至10mL㊂1.3.2㊀两步沉淀分离㊀向高温自水解液中加入乙醇,使乙醇终体积分数达到60%,置于摇床上,于第2期连之娜,等:木聚糖高温自水解和醇沉分离制备低聚木糖35㊀20ħ下150r/min混合15min,再按1.3.1节方法得到沉淀及上清液,所得沉淀用蒸馏水溶解,记为样品S1;向60%乙醇沉淀高温自水解液离心分离所得上清液中继续加入乙醇,使乙醇终体积分数达到90%,置于摇床上,于20ħ下150r/min混合15min,再按1.3.1节方法得到沉淀及上清液,所得沉淀用蒸馏水溶解,记为样品S2,上清液记为样品S3㊂1.4㊀检测分析1.4.1㊀木聚糖含量的测定㊀向木聚糖溶液中加入H2SO4,使其质量分数达到4%,置于121ħ高温灭菌锅中反应1h,木聚糖降解为木糖[12]㊂采用带有示差检测(RID)的HPLC仪分析木糖含量,色谱条件:色谱柱Bio-Rad Aminex HPX-87H,色谱保护柱Bio-Rad Cation H Refill Cartridges,流动相0.005mol/L的H2SO4,流速0.6mL/min,柱温55ħ,上样量10μL,外标法测定㊂低聚木糖(XOS,聚合度2~6)采用高效阴离子交换色谱法测定,色谱条件:色谱柱CarboPac PA200 (250mmˑ3mm),色谱保护柱CarboPac PA200(50mmˑ3mm),流动相100mmol/L的NaOH与500mmol/L的NaAc配比梯度洗脱[13],流速0.3mL/min,柱温30ħ,pH-Ag/AgCl复合参比电极, Chromeleon6.80色谱工作站㊂XOS以木二糖㊁木三糖㊁木四糖㊁木五糖和木六糖为外标分别测定其含量,聚合度较高(聚合度大于6)的高聚木糖根据色谱柱CarboPac PA200的分离原理,按照保留时间逐渐延迟,可监测各成分的存在及变化情况㊂各聚糖质量浓度分别按以下公式计算:C(木聚糖)=(C2-C1)ˑ0.88C(XOS)=C(木二糖)+C(木三糖)+C(木四糖)+C(木五糖)+C(木六糖)C(高聚木糖)=C(木聚糖)-C(XOS)式中:C1 酶解前木糖的质量浓度,g/L;C2 酶解后木糖的质量浓度,g/L㊂1.4.2㊀降解副产物含量的测定㊀木聚糖高温自水解液中甲酸㊁乙酸㊁羟甲基糠醛和糠醛的含量采用带有示差检测(RID)的HPLC仪分析,外标法测定,色谱条件同1.4.1节㊂1.4.3㊀低聚木糖聚合度的测定㊀乙醇沉淀分离后的样品S1㊁S2和S3组分采用Agilent1260型HPLC 仪,以Ultrahydrogel120和Ultrahydrogel250色谱柱串联,采用相对分子质量(M r)342纤维二糖以及M r 分别为1000㊁5000㊁12000㊁25000和50000的葡聚糖为标准样品,测定各分离组分M r㊂色谱条件:流动相为去离子水,流速0.6mL/min,柱温60ħ,示差检测㊂低聚木糖的聚合度(D p)按下式计算:D p=M r/1501.5㊀青春双歧杆菌的体外增殖向Bug Box厌氧培养箱内通入混合气(10%H2㊁5%CO2及85%N2)以除去箱体内的氧气,在厌氧条件下活化青春双歧杆菌并进行体外增殖㊂活化时以10g/L葡萄糖为碳源,增殖时分别以乙醇沉淀分离得到的S1㊁S2和S3组分为碳源,初始碳源质量浓度3g/L木聚糖㊂将活化36h的青春双歧杆菌种母液转入增殖培养基中,调节初始pH值7.0,控制培养温度37ħ,在增殖0㊁2㊁4㊁8㊁12㊁24和36h 时取样分析㊂1.6㊀增殖效果分析1.6.1㊀菌体浓度的测定㊀吸取青春双歧杆菌活化36h的种母液,于3000r/min条件下离心10min,所得菌体先用生理盐水洗涤3次,再加入无菌水洗涤2次,最终加入无菌水混匀,配制不同浓度梯度的菌液,用分光光度计在600nm波长下测定吸光度,同时用红外水分测定仪测定不同浓度菌液烘干后的菌体干质量,根据吸光度和菌体干质量绘制菌体质量浓度与吸光度之间的标准曲线㊂定时取样青春双歧杆菌增殖液,于8000r/min条件离心10min,所得菌体用生理盐水洗涤3次,混匀,于600nm波长下测定吸光度,根据标准曲线计算增殖后青春双歧杆菌的菌体质量浓度㊂1.6.2㊀有机酸产量的测定㊀青春双歧杆菌增殖过程代谢产生的乳酸㊁乙酸㊁丙酸和丁酸等有机酸含量采用Agilent1260型HPLC仪分析,色谱分析条件同1.4.1节㊂其中,总有机酸的含量即为4种有机酸含量之和㊂36㊀林㊀产㊀化㊀学㊀与㊀工㊀业第40卷2㊀结果与讨论2.1㊀高温自水解液的组分分析所用原料木聚糖酶水解残渣成分为:木聚糖76.61%,葡聚糖10.79%,阿拉伯聚糖3.45%,木质素7.26%,灰分0.61%㊂经不同高温自水解条件所得自水解液中各糖组分及降解副产物的质量分数如表1所示㊂表1㊀工艺条件对高温自水解液成分的影响Table1㊀Effect of process conditions on the composition of autohydrolysate温度/ħtemp.时间/mintime木糖/%xylose XOS/%木聚糖/%xylan副产物by-products/% HCOOH HAc羟甲基糠醛hydroxymethyl furfural糠醛furfural17020 1.12ʃ0.02 2.03ʃ0.0326.92ʃ0.120.61ʃ0.020.27ʃ0.030.00ʃ0.000.18ʃ0.02 30 1.42ʃ0.03 2.73ʃ0.0229.49ʃ0.130.82ʃ0.040.33ʃ0.020.02ʃ0.000.22ʃ0.03 40 2.11ʃ0.05 5.02ʃ0.0529.31ʃ0.080.98ʃ0.030.33ʃ0.040.05ʃ0.010.56ʃ0.01 50 2.20ʃ0.038.30ʃ0.0829.43ʃ0.15 1.63ʃ0.060.82ʃ0.030.06ʃ0.010.96ʃ0.0518020 2.62ʃ0.059.15ʃ0.0533.74ʃ0.12 1.93ʃ0.050.93ʃ0.020.08ʃ0.00 1.27ʃ0.03 30 4.96ʃ0.0520.90ʃ0.0643.32ʃ0.16 2.23ʃ0.07 1.00ʃ0.050.13ʃ0.02 2.23ʃ0.02 40 6.64ʃ0.0726.54ʃ0.0446.27ʃ0.08 2.37ʃ0.03 1.08ʃ0.020.17ʃ0.01 2.58ʃ0.04 509.30ʃ0.0332.94ʃ0.0750.60ʃ0.11 2.54ʃ0.02 1.26ʃ0.010.31ʃ0.03 3.75ʃ0.011902011.37ʃ0.0543.25ʃ0.0354.06ʃ0.05 3.25ʃ0.06 1.96ʃ0.060.38ʃ0.02 3.95ʃ0.08 3020.36ʃ0.0854.72ʃ0.0549.56ʃ0.18 4.07ʃ0.03 2.43ʃ0.050.49ʃ0.057.07ʃ0.12 4037.17ʃ0.0544.37ʃ0.0238.85ʃ0.13 5.77ʃ0.08 3.64ʃ0.080.93ʃ0.0210.90ʃ0.08 5039.85ʃ0.0637.92ʃ0.0434.15ʃ0.07 6.22ʃ0.06 3.70ʃ0.05 1.16ʃ0.0412.39ʃ0.062002045.50ʃ0.1237.19ʃ0.0129.31ʃ0.02 6.51ʃ0.03 4.31ʃ0.04 1.31ʃ0.0313.20ʃ0.11 3036.76ʃ0.08 6.79ʃ0.0314.03ʃ0.048.22ʃ0.05 5.19ʃ0.03 1.71ʃ0.0523.83ʃ0.14 4022.80ʃ0.05 2.59ʃ0.01 4.04ʃ0.068.97ʃ0.02 5.84ʃ0.09 2.47ʃ0.0428.45ʃ0.07 5014.49ʃ0.05 1.57ʃ0.000.97ʃ0.019.12ʃ0.07 6.13ʃ0.05 2.95ʃ0.0629.33ʃ0.09㊀㊀从表1可以看出,随着高温自水解温度的升高,水解液中XOS和木聚糖含量均呈先上升后下降的趋势,然而降解副产物甲酸㊁乙酸㊁羟甲基糠醛和糠醛含量则呈逐渐升高的趋势㊂温度180ħ,保温时间40min条件下,自水解液中XOS质量分数26.54%,木聚糖46.27%,在此条件下所产降解副产物甲酸㊁乙酸㊁羟甲基糠醛㊁糠醛和木糖质量分数分别为2.37%㊁1.08%㊁0.17%㊁2.58%和6.64%㊂继续升温,当温度为190ħ,保温时间30min时,自水解液中XOS质量分数达到最高,为54.72%,但在此条件下所产降解副产物含量却增加很多,表明增加反应温度使得XOS含量增加,同时降解副产物含量也大幅度增加㊂因此,剧烈的自水解条件将增加降解副产物含量,为后续产品提纯带来困难[8-9]㊂木糖虽对双歧杆菌无毒害作用,但却很难被双歧杆菌所利用,木糖含量高影响低聚木糖产品的纯度和品质[14]㊂选择自水解条件时,希望得到的XOS含量较高,降解副产物(有害物质和木糖)较少,同时温度及相应的水蒸气压力在工业操作中易于实现㊂因此,温度180ħ和保温时间40min为合适的自水解条件,此时高温自水解液中XOS水解得率为26.54%(基于原料中木聚糖计算),XOS占水解液中总木聚糖的57.36%,剩下的42.64%可认为是D p大于6高聚木糖㊂由此可见,木聚糖经高温自水解所得水解液中低D p的木聚糖(即XOS)及高D p的木聚糖含量都比较高,此结果与Xiao等[12]高温自水解竹子的研究结果类似,因此需采取措施进一步分离㊂2.2㊀乙醇沉淀分离对水解液组成的影响2.2.1㊀乙醇体积分数㊀将木聚糖酶水解残渣180ħ㊁40min高温自水解,制得的1L高温自水解液中含6.03g XOS和10.52g木聚糖,通过不同体积分数乙醇沉淀分离,测得沉淀和上清液中XOS及木聚糖质量如图1所示㊂第2期连之娜,等:木聚糖高温自水解和醇沉分离制备低聚木糖37㊀图1㊀乙醇体积分数对自水解液中糖得率的影响Fig.1㊀Effects of ethanol volume fraction on saccharides yield in autohydrolysates 由图1可看出,在乙醇体积分数10%~50%时,沉淀中几乎没有木聚糖,木聚糖主要存在于上清液中,说明低聚木糖和高聚木糖未分开㊂乙醇体积分数60%时,沉淀中木聚糖0.58g(得率5.55%),未检测到XOS,上清液中木聚糖9.75g (得率92.68%),XOS 5.42g (得率89.88%),可见高聚木糖组分和XOS 仍未分开㊂乙醇体积分数90%时,所得沉淀中木聚糖4.19g (得率39.79%),XOS 0.43g (得率7.13%);上清液中木聚糖5.93g(得率56.37%),XOS 4.78g(得率79.27%)㊂相比60%乙醇,90%乙醇可以较好分离高聚木糖和XOS,但由于90%乙醇分离所得上清液中XOS 仅占高温自水解液中XOS 总量的79.27%,XOS 损失较多,因此一步乙醇沉淀不能达到分离木聚糖的目的㊂采用乙醇沉淀多聚糖过程中,M r 大的聚糖比M r 小的聚糖更难溶解,Song 等[15]采用不同浓度的乙醇溶液沉淀分离杉树中多聚糖时也得到相似的结果,原因可能在于M r 大的聚糖所含单位羟基数量比M r 小的聚糖所含单位羟基数量少[16]㊂为了将D p 范围广的高温自水解液分离为不同D p 范围的木聚糖组分,一步乙醇沉淀很难实现,需采用两步乙醇沉淀的方法㊂因此,后续实验采用乙醇两步沉淀法对高温自水解液进行分离㊂2.2.2㊀乙醇两步沉淀分离㊀分析样品S1㊁S2㊁S3中各糖组分含量及D p 范围,1L 高温自水解液中各成分的质量可见表2㊂表2㊀乙醇两步沉淀分离对高温自水解液成分的影响(1L 高温自水解液)Table 2㊀Effects of two-step ethanol precipitation on the components from autohydrolysates (1L autohydrdysates )样品samplesD p 木聚糖/g xylan 木糖/g xylose XOS 质量mass /g 纯度purity /%高温自水解液autohydrolysates 1~14610.52ʃ0.230.69ʃ0.11 6.03ʃ0.1057.32ʃ0.15S124~122 1.91ʃ0.180.00ʃ0.000.01ʃ0.000.52ʃ0.18S27~19 3.23ʃ0.220.00ʃ0.000.49ʃ0.0215.17ʃ0.06S31~6 5.38ʃ0.140.64ʃ0.08 5.16ʃ0.0695.91ʃ0.12㊀㊀采用乙醇两步沉淀分离D p 分布范围广的高温自水解液(D p 为1~146),得到D p 范围分别为24~122㊁7~19和1~6的S1㊁S2和S3这3种组分,其中木聚糖质量各占高温自水解液中木聚糖质量的18.16%㊁30.70%和51.14%,S3中XOS 得率最高,达87.61%,纯度高达95.91%㊂可见分离所得S3的D p 低㊁得率和纯度很高,适于作为产品级低聚木糖㊂因此,乙醇两步沉淀分离能够很好地实现不同D p 范围木聚糖的分离㊂Swennen 等[17]也采用乙醇两步沉淀方式分离麦粉酶解液获得不同D p 范围的木聚糖㊂2.2.3㊀离子色谱分析㊀高温自水解液及乙醇两步沉淀分离所得样品S1㊁S2和S3的分析谱图如图2所示㊂根据CarboPac PA200阴离子色谱柱分离聚糖的特性,低聚木糖先出峰,随着出峰时间逐渐延长,高聚木糖随后逐渐出峰[18-19]㊂由图2(a)可见,高温自水解液中可检测到XOS 组分(即图中X2㊁X3㊁X4㊁X5和X6),图中25.351min 及之后出现的色谱峰可推测为D p >6的高聚木糖组分㊂图2(b)~图2(d)显示,经乙醇两步沉淀分离所得S1㊁S2和S3样品中各木聚糖组分的分布情况不同㊂样品S3中糖组分主要为XOS,还有一定量的木糖(X1),出峰时间较迟㊁D p >6的木聚糖组分在S3中几乎未检测到;样品S2中糖组分出峰时间主要位于25~31min,其中27min 附近的色谱峰可认为是中等D p 的木聚糖,XOS 在S2中含量非常低,只有少量木五糖和木六糖被检测到;样品S1中组分38㊀林㊀产㊀化㊀学㊀与㊀工㊀业第40卷出峰时间主要位于30min 左右,可认为是高聚木糖组分㊂由此可见,D p 分布范围广的高温自水解液通过乙醇两步沉淀分离可得到3种不同的木聚糖组分,分别为XOS(S3)㊁中等D p 木聚糖(S2)和高D p 木聚糖(S1),实现不同D p 范围木聚糖组分的分离㊂X1.木糖xylose;X2.木二糖xylobiose;X3.木三糖xylotriose;X4.木四糖xylotetraose;X5.木五糖xylopentaose;X6.木六糖xylohexaosea.高温自水解液autohydrolysates;b.S1;c.S2;d.S3图2㊀不同样品的高效阴离子离子色谱图Fig.2㊀HPAEC-PAD chromatograms of different samples2.3㊀青春双歧杆菌的体外增殖效果对比葡萄糖是双歧杆菌最容易利用的碳源,然而葡萄糖进入动物体内到达消化道时就被消化酶降解而到达不了大肠中,其对存在于大肠内的益生菌起不到任何增殖作用,但可用于比较其它木聚糖组分的增殖效果㊂众多研究表明,XOS 很难被消化道中的消化酶降解而能直接进入动物体内肠道中,在肠道中具有显著增殖双歧杆菌的效果[20-22]㊂将乙醇两步沉淀分离所得不同聚合度的木聚糖对青春双歧杆菌进行增殖效果的研究,结果如表3和图3所示㊂表3㊀不同碳源增殖青春双歧杆菌所产有机酸的含量Table 3㊀Contents of organic acids in the incubation of B.adolescentis with different carbon sources碳源carbon source 增殖时间/h incubation time 乳酸/(g ㊃L -1)lactate acid 乙酸/(g ㊃L -1)acetate acid 丙酸/(g ㊃L -1)propionate acid 丁酸/(g ㊃L -1)butyrate acid 葡萄糖glucose 0000020.110.050.03040.120.230.05080.360.350.050120.750.890.090.0124 1.05 1.360.110.0136 1.24 1.880.130.01第2期连之娜,等:木聚糖高温自水解和醇沉分离制备低聚木糖39㊀续表3碳源carbon source 增殖时间/h incubation time 乳酸/(g ㊃L -1)lactate acid 乙酸/(g ㊃L -1)acetate acid 丙酸/(g ㊃L -1)propionate acid 丁酸/(g ㊃L -1)butyrate acid S10000.01020.040.030.02040.080.050.02080.110.070.030120.100.060.040240.110.070.040360.110.070.040S20000020.040.030.02040.060.040.02080.080.060.030120.140.070.040240.160.080.040360.170.080.040S30000020.050.050.02040.100.160.04080.210.320.050120.320.670.060240.640.880.090360.900.950.110㊀㊀从表3可以看出,青春双歧杆菌代谢葡萄糖㊁S1㊁S2和S3所产各有机酸中,乳酸和乙酸含量都较高,丙酸含量较少,丁酸在发酵过程中含量几乎不变㊂报道显示,益生菌代谢低聚糖产生的乳酸㊁乙酸㊁丙酸和丁酸等是主要的短链脂肪酸,对人体的生理功能起重要调节作用,具有改善肠功能㊁促进Ca 2+吸收㊁促进脂肪代谢和减少患肠癌的风险,其中乙酸影响机体胆固醇的产生,丙酸和丁酸是机体能量的重要来源并调节细胞生长[23]㊂如图3所示,葡萄糖增殖青春双歧杆菌效果最明显,36h 菌体质量浓度达0.35g /L,菌体增殖倍数达6.60倍,此时葡萄糖全部被消耗完㊂S1和S2增殖青春双歧杆菌效果不明显,36h 菌体质量浓度分别为0.06和0.08g /L,菌体增殖倍数分别为1.13和1.51倍,残糖量较多,分别为97.16%和93.39%,表明S1和S2较难被青春双歧杆菌所利用㊂S3增殖青春双歧杆菌效果明显,36h 菌体质量浓度为0.25g /L,菌体增殖倍数达4.72倍,残糖量为43.48%,与增殖效果最优的碳源葡萄糖相比,S3增殖效果也很显著,是一种很好的增殖青春双歧杆菌的益生元㊂S1和S2的木聚糖D p 范围分别为24~122和7~19,D p 较高,难以被青春双歧杆菌利用,而S3的木聚糖D p 范围为1~6,D p 较低,很容易被双歧杆菌利用㊂Gullón 等[24]指出低聚糖的D p 对益生菌增殖效果起主要作用,D p 越低益生效果越好㊂这可能与双歧杆菌能够分泌β-木糖苷酶但不分泌内切木聚糖酶的原因有关[25],因而限制了对高D p 木聚糖的降解和利用㊂不同碳源增殖青春双歧杆菌所产总有机酸含量不同㊂葡萄糖为碳源所产总有机酸含量最高,36h 总有机酸质量浓度达3.26g /L,此时pH 值为4.31;乙醇两步沉淀分离所得组分S1㊁S2和S3中,低聚合度的S3增殖青春双歧杆菌所产总有机酸含量最高,36h 总有机酸质量浓度达1.96g /L(pH 值5.65),虽然增殖效果不如葡萄糖,但其总有机酸产量㊁菌体增殖倍数㊁糖消耗量与以葡萄糖为碳源的产量基本相当㊂聚合度较高的S1和S2增殖青春双歧杆菌所产总有机酸质量浓度较低,分别为0.22和0.29g /L㊂由此可见,S3增殖青春双歧杆菌效果明显,而S1和S2几乎起不到增殖青春双歧杆菌的效果㊂对比不同D p 范围木聚糖对益生菌的增殖效果可以看出,木聚糖酶水解残渣在180ħ㊁40min 条件下高温自水解得到的水解液经乙醇两步沉淀分离后,上清液S3主要含D p 为2~6的XOS,能被青春双40㊀林㊀产㊀化㊀学㊀与㊀工㊀业第40卷歧杆菌有效利用,菌体增殖倍数高,有机酸产量高,是一种较好的益生元㊂D p较高的S1和S2增殖青春双歧杆菌效果不明显,菌体浓度及各有机酸产量均较低㊂a.残糖量residual sugar content;b.菌体质量浓度biomass mass concn.;c.pH值pH value;d.总有机酸质量浓度total organic acid mass concn.图3㊀不同碳源对青春双歧杆菌增殖效果的影响Fig.3㊀Effects on the proliferation with B.adolescentis by using different carbon sources3㊀结论3.1㊀木聚糖酶水解残渣在不同条件下进行高温自水解,选择180ħ㊁40min为适合的条件,该条件下XOS含量高,降解副产物产量低,高温自水解液中XOS占水解液中总木聚糖质量分数的57.36%,XOS 水解得率为原料中木聚糖质量分数的26.54%,降解副产物(有害物质)甲酸㊁乙酸㊁羟甲基糠醛和糠醛分别为原料中木聚糖质量的2.37%㊁1.08%㊁0.17%和2.58%㊂3.2㊀采用乙醇两步沉淀方式对高温自水解液进行分离,得到S1㊁S2和S3这3种木聚糖组分,其聚合度范围分别为24~122㊁7~19和1~6㊂高效阴离子交换色谱分析显示,乙醇两步沉淀方式可将聚合度范围广的高温自水解液有效地分离㊂S1为聚合度高的木聚糖组分;S2几乎不含XOS,为中等聚合度的木聚糖组分;S3主要为聚合度2~6的低聚木糖组分,XOS纯度高达95.91%㊂3.3㊀青春双歧杆菌增殖结果表明:低聚合度的S3对青春双歧杆菌增殖效果最明显,36h菌体质量浓度为0.25g/L,菌体增殖倍数达4.72倍,残糖量为43.48%,总有机酸质量浓度达1.96g/L,乳酸㊁乙酸和丙酸质量浓度分别为0.90㊁0.95和0.11g/L,丁酸未检测到,此时pH值为5.65㊂中等聚合度木聚糖组分S2和高聚合度木聚糖组分S1很难被青春双歧杆菌所利用,增殖效果不明显㊂参考文献:[1]RASTALL R A,GIBSON G R.Recent developments in prebiotics to selectively impact beneficial microbes and promote intestinal health[J].㊀第2期连之娜,等:木聚糖高温自水解和醇沉分离制备低聚木糖41Current Opinion in Biotechnology,2015,32:42-46.[2]SANANTA A K,JAYAPAL N,JAYARAM C,et al.Xylooligosaccharides as prebiotics from agricultural by-products:Production and applications [J].Bioactive Carbohydrates and Dietary Fibre,2015,5(1):62-71.[3]崔媛媛,郑文静,许琳琳,等.低聚木糖的研究进展[J].中国调味品,2017,42(9):168-172.CUI Y Y,ZHENG W J,XU L L,et al.Research the progress of 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第26卷第1期2006年3月林　产　化　学　与　工　业Che m istry and I ndustry of Forest Pr oducts Vol .26No .1Mar .2006高温预处理对木聚糖酶水解制备低聚木糖的促进作用 收稿日期:2005-07-04 基金项目:国家自然科学基金资助项目(30471361) 作者简介:顾阳(1977-),男,江苏常州人,博士生,主要从事生物质资源生物转化的研究。

G U Y 顾阳,勇强,余世袁(南京林业大学化学工程学院,江苏南京210037)摘　要:　采用160～180℃的高温对木聚糖酶解残渣中残余木聚糖进行预处理,并将预处理液酶水解。

最优反应条件为180℃预处理30m in,残余木聚糖的42.54%被有效降解,上清液中低聚木糖(XOS )的含量占上清液总糖的32.13%。

上清液经木聚糖酶酶解后,低聚木糖的含量可达到上清液总糖的84.93%。

关键词:　木聚糖酶;低聚木糖;酶水解中图分类号:T Q91;Q946.3;TS245.9 文献标识码:A 文章编号:0253-2417(2006)01-0006-05Pr o moti onal Effect of High Te mperature Pretreat m ent on Enzy maticHydr olysis of Xylan int o Xyl oolig osaccharideG U Yang,Y ONG Q iang,Y U Shi 2yuan(College of Chem ical Engineering,Nanjing Forestry University,Nanjing 210037,China )Abstract:The enzy matic hydr olysis residues of xylan was p retreated under high te mperature fr om 160℃t o 180℃,then the fil 2trate of the p retreated sus pensi on was enzy matically hydr olysed .Under the op ti m al conditi on of p retreat m ent for 30m in at 180℃,42.54%of xylan residues could be decomposed efficiently and the yield of xyl ooligosaccharides (XOS )was 32.13%of the t otal carbohydrates of the supernatant .After enzy matic hydr olysis,the yield of XOS could be up t o 84.93%of t otal carbohydrates of the supernatant .Key words:xylanase;xyl ooligosaccharide;enzy matic hydr olysis半纤维素是自然界中的第二大多糖物质,许多农林废弃物,例如玉米秸秆、麦秆和稻秆等都富含半纤维素物质[1]。

第21期顾峰源，等:低聚木糖制备的研究进展-59 -低聚木糖制备的研究进展顾峰源，姚自选，潘艳，刘练，常思源$(南京科技职业学院生物与环境学院，江苏南京210048)摘要： 木 的 的副，因其高附加值属性而收到了广泛的关注&本文综述了低聚木糖现有的三种主要制备方法&为下一步工 化中的 供理论基础&关键词： 木；生产方'酶中图分类号:TQ028文献标识码：A文章编号：1008-021X ( 2020)21-0059-02Research Progress in the Preearation of Xylooligosaccha^idesGu Fengyuan , Yao ZPuan , Pan Yan , L iulian , CCang Spuan *(School of Biology and environment , Nanjing Polytechnic Institute , Nanjing 210048, China )Abstract ： XymoOgosacchaOdes are a by-product of agricultural products and have received widespread attention due to their highvalue-added properties. The main methods for preparing xylo-oligosacchcides were reviewed. Provide a theore —cal basis for thenext step of industrial production and application in life.Key word%: Xyooogosacchaeodes ' peepaeatoon ' eneymatochydeoysos作为继基因技术以及蛋白质技术之后的又一新型工程技,工程有 学研究正 为 注，并成为引领学科发展的重要。

86 | 2020年第40卷第12期 总第287期 |低聚木糖和木聚糖酶可提高猪的生产性能张相鑫 译自All about Feed ，Vol.28(2020)，№4：24～25潘雪男 校在传统认识上，木聚糖酶有助于释放饲料中的营养成分，由此带来动物增重加快(每2 kg ～3 kg 饲料可增重 1.493 kg ～1.866 kg 体重)和饲料转化率改善(改善3％～4％)。

据估测，死亡率降低1％带来的益处是每头猪可节省高达1.5美元的成本。

目前美国许多养猪生产者都在饲料中添加木聚糖酶，因为该酶能够间接降低猪的死亡率，改善饲料转化率。

研究表明，在日粮中添加木聚糖酶，猪的死亡率大约可降低三分之一。

木聚糖酶能够分解长链阿拉伯木聚糖，释放出被结构复杂的纤维束缚的营养物质，否则这些营养物质将会被排出体外。

阿拉伯木聚糖降解后产生的终端产物因作用的木聚糖酶不同而不同，这很可能是该酶分解阿拉伯木聚糖的有效性和其他副作用的结果。

虽然有人指出阿拉伯木聚糖最好能被完全分解(即可以释放出更多的能量)，但完全分解为木糖会影响营养物质的消化。

提高日粮中图分类号：S816.79 文献标志码：C 文章编号：1001-0769(2020)12-0086-03摘 要：鉴于木聚糖酶能够间接提高仔猪的存活率和饲料转化率，美国许多养猪生产者正在饲料中添加该酶制剂。

本文详细介绍了木聚糖酶的作用方式。

关键词：木聚糖酶；存活率；饲料转化率；仔猪中木糖的含量会导致猪的生长性能下降、饮水量增加，这很可能是猪用来冲掉体内过多木糖的一种机制。

阿拉伯木聚糖经木聚糖酶水解后，可能会产生不同种类的低聚木糖，具体情况取决于该酶的作用效率和底物对酶的敏感性。

当猪的健康面临挑战时，所产生的低聚木糖可在维持肠道功能上发挥重要的作用。

1 肠道功能在猪消化道远端，短链低聚木糖经细菌发酵后可分解为小分子有机物，促使肠道有益菌大量增殖。

当低聚木糖在消化道后端经这些有益菌发酵时，它们会产生短链脂肪酸(Short-Chain Fatty Acids，SCFA)，其中包括丁酸盐，其能够增强猪胃肠道的功能，减少炎症反应，增强肠道上皮的完整性。

42 林产化学与工业第 31 卷 [ 8] 洪枫 , 余世袁 . 选择性控制酶水解玉米芯木聚糖制备低聚木糖 [ J] . 林产化学与工业 , 2005 , 25( 增刊 : 77 - 81. [ 9] MU KUND G A, KU LBHU SHAN B B, D I GAM BA R V G. B iochem ica l characterization of t w o xylanases from yeas t P seud ozyma hubeien sis p roducing on ly xylooligosaccharides[ J].B ioresou rce Techno logy, 2009 , 100: 6488 - 6495 . [ 10 ] OU YANG J , WA NG S , W ANH Y, et a. l Produ ct ion of a Trich od er ma reesei QM 9414 xylanase in P ich ia pastoris and its app lication in b iob leach ing of wheat straw pu lp [ J] . W orld Journal ofM icrob io logy and B iotechnology, 2010 , 27( 4 : 751 - 758. [ 11 ] SLU I TER A, HAM ES B, RU I A R, et a. l Laboratory analytical procedu re[ S] . NR EL B iom ass Program, 2004 . [ 12 ] M I LLER G L. U se of d in itrosal icyl ic acid reagent for d eter m in at ion of redu cing sugar[ J] . A nalyt ica l Ch e m istry, 1959 , 31 : 426- 428. [ 13 ] AK PI NA R O, GUNA T K, Y ILMA Z Y, et a.l En zymat ic processing and an tioxidan t act ivity of agricu ltural w aste au tohyd rolysis liquors [ J ]. B ioresources , 2010 , 5 ( 2 : 699 - 711 . [ 14 ] AA CHARYA A A, PRA PU LLA S G. V alue add ition to corncob : Production and characterizat ion of xylooligosacch arid es from alkali p retreated l ign insaccharide comp lex us ing A spergi llu s oryza e M TCC 5154 [ J] . B ioresource Technology, 2009 , 100 ( 2 : 991- 995 . [ 15 ] AK PI N AR O, ERDOGAN K, BOSTAN CI S. Enzym atic produ ct ion of xylooligosacch arid e from selected agricu ltu ral w astes [ J] . Food and B ioprodu cts Processing, 2009, 87 : 145 - 151 . [ 16 ] CHEN L L, ZHANG M, ZHANG D H, et a. l Pu rif icat ion and enzym atic ch aracterizat ion of tw o endoxylanases from Trichod er ma sp . K 9301 and th eir actions in xylooligosaccharide p roduction[ J] . B ioresource T echnology, 2009 , 100 : 5230 - 5236. 本刊信息。

木聚糖酶检测底物筛选及玉米芯低聚木糖的制备作者：刘代云李萌田盼来源：《福建农业科技》2021年第07期摘要：為解决木聚糖酶国标底物短缺，并筛选可用于酶法制备低聚木糖的木聚糖酶，首先以甘蔗渣和榉木来源的木聚糖替代GB/T 23874-2009《饲料添加剂木聚糖酶活力的测定》中规定的底物检测木聚糖酶活力，同时采用木霉和毕赤酵母木聚糖酶酶解不同木聚糖底物和玉米芯木聚糖，应用高效液相色谱法对酶解产物组分进行分析，并初步优化玉米芯木聚糖酶解条件。

结果表明：与GB/T 23874-2009《饲料添加剂木聚糖酶活力的测定》中规定的底物检测结果相比，榉木木聚糖（Megazyme）检测结果与原底物检测结果基本一致;而甘蔗渣木聚糖检测结果偏高，但稳定性良好，两者均可替代原底物进行木聚糖酶活力检测。

通过高效液相色谱法分析，毕赤酵母木聚糖酶水解不同底物的木二糖含量较木霉木聚糖酶的高，而木糖含量则相反。

利用3种木聚糖酶同步水解玉米芯粉木聚糖，毕赤酵母木聚糖酶水解玉米芯粉木聚糖的产物中90%以上为低聚木糖，其中木二糖占72.54%，木三糖占17.86%，接近木聚糖酶Shearzyme 500L水解产物中的低聚木糖比例，高于木霉木聚糖酶，具有制备低聚木糖的应用潜力。

毕赤酵母木聚糖酶水解玉米芯木聚糖的最优条件为反应温度60℃、pH 4.8，玉米芯底物浓度0.10 g·mL-1，酶解时间24 h，在此最优条件下玉米芯木聚糖的水解率可达76%。

关键词：木聚糖底物;木聚糖酶;低聚木糖;水解率中图分类号：TQ 925 文献标志码：A 文章编号：0253-2301（2021）07-0074-08DOI： 10.13651/ki.fjnykj.2021.07.014Screening of the Substrates for Xylanase Detection and thePreparation of Corncob XylooligosaccharideLIU Daiyun， LI Meng， TIAN Pan（Yichang Dongyangguang Biochemical Pharmaceutical Co.， Ltd.， Yichang， Hubei 443000， China）Abstract： In order to solve the shortage of xylanase substrate and screen the xylanase which could be used for the enzymatic preparation of xylooligosaccharides， firstly， the xylanase activity was detected by replacing the substrate specified in GB/T 23874-2009 ″Determination of xylanase activity in feed additives″ with xylanase derived from bagasse and beech. At the same time， The xylanase of trichoderma and pichia pastoris was used to hydrolyze different xylan substrates and corncob xylan by enzyme. The components of the enzymatic hydrolysates were analyzed by HPLC，and the enzymatic hydrolysis conditions of corncob xylan were preliminarily optimized. The results showed that compared with the detection results of the substrate specified in GB/T 23874-2009 ″Determination of xylanase activity in feed additives″， the detection results of beech xylan （Megazyme） were basically consistent with that of the original substrate. The results of bagasse xylan were higher， but the stability was good. Both of them could replace the original substrate for the detection of xylanase activity. By the analysis of HPLC， compared with trichoderma xylanase，the content of xylobiose was higher in the hydrolysis of different substrates by pichia pastoris xylanase， while the content of xylose was opposite. Three kinds of xylanase were used to hydrolyze corncob xylan simultaneously. More than 90% of the products of corncob xylan hydrolyzed by pichia pastoris xylanase were xylooligosaccharide， 72.54% and 17.86% of which was respectively xylobiose and xylotriose. being close to the proportion of xylooligosaccharide in the products hydrolyzed by Shearzyme 500L xylanase and higher than that by trichoderma xylanase， indicating that it had the application potential in the preparation of xylooligosaccharide. The optimal conditions for the hydrolysis of corncob xylan by pichia pastoris xylanase were as follows： reaction temperature of 60℃， pH of 4.8， the concentration of corncob substrate of 0.10 g·mL-1 and hydrolysis time of 24 h. Under these conditions， the hydrolysis rate of corncob xylan could reach 76%.Key words： Xylan substrate; Xylanase; Xylooligosaccharide; Hydrolysis rate木聚糖酶是一类可以将木聚糖降解成低聚木糖和木糖的水解酶，主要包含内切β1，4木聚糖酶、外切β1，4木聚糖酶和β木糖苷酶，其中内切木聚糖酶切β1，4糖苷键生成低聚木糖，β木糖苷酶水解低聚木糖释放木糖[1]。