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78猪业科学 SWINE INDUSTRY SCIENCE 2017年34卷第09期月度报道MONTHLY REPORT本刊编辑/薛惠莉猪传染性胸膜肺炎的克星——爱普克——默沙东猪传染性胸膜肺炎亚单位灭活疫苗上市猪传染性胸膜肺炎（APP）是一种严重的呼吸系统疾病，该病自1957年由英国的Pattison 等首次报道以来，已在全世界大多数养猪国家流行，并对养猪业造成了巨大的损失。
默沙东动物保健品有限公司（以下简称“默沙东”）的猪传染性胸膜肺炎亚单位灭活疫苗--爱普克为中国养猪业提供了另一个利器，更有效地协助养殖户提高饲养成绩。
2017年8—9月，默沙东“直击传胸”爱普克上市发布会分别在潍坊、郑州、南昌及惠州等地召开。
默沙东始终致力于创新，一直秉持着“科学让动物更健康”的核心文化默沙东市场部经理江怡颖在介绍默沙东时讲到，在全球动保行业排名前三的默沙东，一直是动物保健行业的领先者，秉持着“科学让动物更健康”的理念研发并提供创新的产品与服务。
在美国与加拿大，默沙东称为默克。
凭借处方药、疫苗、生物制品和动物保健品，默沙东与全球客户紧密合作，为140多个国家提供创新的医疗解决方案。
2009年，默沙东和先灵葆雅合并，拥有更为丰富的产品线和更为强劲的科研实力。
至今，默沙东动保在全球共设有15个生物制剂与3个化学药物研发中心，在中国已经拥有70种以上的产品，其中猪用产品13种涵盖了呼吸、繁殖及驱虫三大领域。
传染性胸膜肺炎到底是什么？在台湾是如何防控的？会议邀请台湾屏东科技大学兽医学系林昭男博士对猪传胸介绍及台湾防控经验进行分享，林博士指出传染性胸膜肺炎常以肺出血、坏死和纤维素性渗出为病变特征，在中大猪上死亡率较高，病猪发热，食欲不振，呼吸困难，后期呈犬坐姿势、张口伸舌、咳喘、腹式呼吸，血性泡沫从嘴和鼻孔流出，耳、鼻、眼及后躯皮肤发绀；剖检可见纤维素性胸膜肺炎。
传染性胸膜肺炎有15种血清型，研究发现其中以1、5、9、11型毒力较强，在台湾比较常见1、2、5型而国内则是以1、2、3、7型较为常见。
中国动物保健2021.05猪支原体肺炎的诊断和防治程慧（山东省平邑县畜牧发展促进中心山东临沂273300）体是支原体科、支原体属的一种。
这种病原微生物能够引起猪产生肺炎，该疾病的主要特征为猪发生咳嗽和气喘，因此猪支原体肺炎又被称作猪气喘病。
猪支原体肺炎在一年四季均能够发病，但是主要在寒冷、多雨以及潮湿或者气候突然转变的时候发生。
猪支原体肺炎一旦暴发，如果不采取合理的控制措施，这种疾病就很难再彻底断绝。
因此，该疾病对猪的危害是相当严重的，需要引起养猪人员的重点注意。
支原体；肺炎；诊断；防治猪支原体肺炎是由猪肺炎支原体导致的一种疾病，猪感染这种疾病之后主要使猪产生咳嗽、气喘以及肺发生病变。
这种疾病与猪生存的环境有很大的关系，一般情况下，猪生存的环境比较潮湿、通风条件十分差或者猪生活的相当拥挤的时候，就会导致猪产生猪支原体肺炎。
此外，猪的饲料如果发霉变质，也会导致猪产生猪支原体肺炎。
本文主要以猪支原体肺炎的发病原因、猪支原体肺炎的临床症状、猪支原体肺炎的诊断和防治出发，阐述该病。
希望本文能够为我国养猪业的工作人员提供指导，促进我国健康养猪的发展。
1猪支原体肺炎的发病原因导致猪产生该病的病原微生物是猪肺炎支原体，这种病原微生物是支原体科、支原体属的一种。
在微生物学中，导致动物产生疾病的微生物主要以细菌和病毒较为常见，支原体感染动物产生疾病的比较少，因为大多数的支原体并不会导致疾病，只有较少的支原体会导致动物产生疾病，猪肺炎支原体就是其中一种致病的支原体。
猪肺炎支原体没有细胞壁，其形态比较多样，有些呈环状，有些呈球状，有些呈现出杆状等。
猪肺炎支原体对生存的环境比较苛刻，一般情况下猪用具上的支原体在几天之内就会失去活性从而不致病。
一般情况下，一般的化学消毒剂就可以将猪肺炎支原体杀死。
该疾病的主要传染源是染病的猪以及带菌的猪，病猪通过咳嗽，以飞沫的形式将致病菌传播到空气中，健康猪呼吸到带菌的气体就会感染。
本病的自然宿主是猪，仔猪最容易感染猪支原体肺炎。
猪的支原体病控制猪场引起支原体病的病原有三种，分别是肺炎支原体、滑液支原体和鼻炎支原体。
1常见症状及治疗原则1.1支原体肺炎支原体肺炎（美国）或猪地方性肺炎（英国和其他国家）是由肺炎支原体感染引起的。
该病的另一个名称是猪地方性肺炎（SEP）。
以前，这种疾病被称为猪的病毒性肺炎（VPP），但病原体并不是病毒，而是支原体。
支原体很小，很容易透过一般的细菌滤器。
此外，支原体在实验室里很难培养成功。
基于以上原因，最初将这种病原体确定为病毒。
肺炎支原体可以感染各种日龄的猪，最小的感染日龄可以在7～10日龄。
据统计，在美国中西部有90%甚至更多的猪场感染了肺炎支原体。
支原体肺炎是一种慢性肺炎疾病，感染猪的比例很高，但死亡率很低。
病猪通常从3～10周龄间表现临床症状。
与病原携带猪接触后，潜伏期为10天，甚至更长。
病猪表现为干咳、无痰，在运动后症状更明显。
病猪可能只咳嗽1～3周，或咳嗽的持续时间不固定。
其他因素如猪流感、巴氏杆菌感染和肺脏的寄生虫同样可引起猪的咳嗽，在鉴别诊断时应该特别注意。
通常，患有支原体肺炎的猪采食量不一定降低，但是如果有广泛的病变或有继发感染时，生长速度明显减慢。
在支原体肺炎感染后如果混合感染大量的蛔虫时，幼虫迁移入肺脏后可以出现严重的咳嗽症状。
同样，在继发或混合感染肺丝虫后，也可发生严重的咳嗽。
支原体肺炎对生长速度的影响差别很大。
一般病变越严重，对生长速度的影响越大。
已经发生支原体肺炎的猪治疗效果并不理想，磺胺类药物和抗生素可有效地控制继发感染的细菌性肺炎。
良好的营养，温暖、干燥、无尘埃的环境，以及良好的的蛔虫和肺丝虫控制措施可有效降低支原体肺炎造成的损失。
如果没有继发或混合感染，即使不治疗，支原体肺炎的病变也可在55～60天后痊愈。
1.2支原体多发性浆膜炎第二种感染猪的支原体是猪鼻炎支原体。
这种支原体可以引起关节炎和胸膜以及腹膜的炎症，同样可以影响心包和心外膜。
另外，公猪的睾丸周围也受到影响。
86猪支原体肺炎的治疗梁志明(香河县农业农村局065400)摘要:现阶段,随着生猪养殖业的快速发展,猪病的发生几率也越来越高。
猪支原体肺炎作为其中之一,严重影响着猪的健康发育,严重者会导致死亡给养殖户带来巨大损失。
在这种情况下,养殖户积极做好诊治工作显得尤为重要。
基于此,本文对其进行了深入的探讨。
关键词:猪;支原体肺炎;诊断治疗;研究分析猪支原体肺炎作为生猪养殖常见病,也被称之为气喘病,其病原主要是肺炎支原体,该病属于慢性消耗性呼吸道疾病,如不及时进行治疗,极易导致死亡。
1流行病学1.1易感动物该病可发生于任何品种以及任何年龄的的猪,在这其中,哺乳仔猪以及断奶仔猪有着更高的发病几率,发病后症状明显,有着较高的死亡率。
次之是妊娠母猪以及哺乳母猪,最终是肥猪。
在我国,地方土种猪发病率相当高。
1.2发病特点猪支原体肺炎可发生于一年四季,其中冬季和春季有着更高的发病几率,主要是由于气温多变所导致的。
养殖场在首次发病后往往呈现出急性暴发性特征,症状较为严重且极易死亡。
在老疫区大多是隐性特征,大多是仔猪发病。
1.3发生原因导致猪患支原体肺炎的因素主要包括以下几个方面:首先是饲养管理不到位,环境卫生较差所导致的,养殖户在养殖的过程当中,饲料营养不均衡无法满足猪生长需求,突然更换饲料产生应激反应,以及圈舍光照通风不佳等。
其次是饲养密度不合理,过于拥挤,没有及时清理粪污导致滋生大量细菌,进而导致发病[1]。
最后该病还会继发感染肺炎球菌以及巴氏杆菌等细菌,严重加重了症状,极易导致死亡。
2临床症状2.1仔猪仔猪在发病之后,其精神状态大不如前,饮食饮水逐渐废绝,呈腹式呼吸,体温变化不明显。
2.2架子猪架子猪发病后,其体温变化并不明显,在清晨、夜间以及运动后会出现明显的咳嗽,在咳嗽的时候伸颈弓背,脑袋下垂,咳出分泌物后方可缓解。
随着病情的不断发展,发病后期会出现呼吸困难现象。
在这个时候,如果养殖户及时对症治疗并做好饲养管理工作,则能够有效缓解其症状,但是如果依然没有重视起来,再加上气温异常,将会进一步加重病情,影响生长发育,严重者会导致死亡,给养殖户带来巨大的损失。
肺炎支原体疫苗研究进展摘要：肺炎支原体（MP）是社区获得性肺炎的主要病原体之一，可引起呼吸道症状及其他肺外并发症，大环内酯类抗生素是治疗MP感染的首选药物。
近年来，随着MP感染率的逐渐增加及抗生素的广泛应用，大环内酯类药物耐药情况日趋严重。
疫苗是预防与控制病原菌流行、感染及致病的最佳科学手段。
目前，兽用MP疫苗已在国内外上市，并取得了良好的保护效果，而针对人的MP疫苗仍处于研发阶段。
文章对MP相关疫苗进行综述，以期为后续人用MP疫苗的研发提供一定的参考。
关键词：肺炎支原体；亚单位疫苗；表位肽疫苗；DNA疫苗；活载体疫苗肺炎支原体（Mycoplasma pneumoniae, MP）是社区获得性肺炎（community-acquir ed pneumonia，CAP）的主要病原体之一，结构上分3层，分别为内外层的蛋白质层及中间层的脂质层，依赖与宿主细胞的紧密结合而生存，因此细胞膜一端向外延伸形成一种复杂而特殊的黏附细胞器来促进其寄生生存[1]。
MP肺炎(Mycoplasma pneumoniae pneumoni a，MPP)是由MP感染引起的肺部炎症，常引起呼吸系统症状，以发热、咳嗽为主要临床表现，可引起肺外系统的严重表现。
MPP在我国有较高的发病率，占儿童CAP的10％~40％[2]。
大环内酯类抗生素是治疗MP感染的首选药物。
自2000年以来，耐大环内酯类MP感染率在全球迅速增加[3]，以亚洲国家尤为严重，其中中国耐药率可达69%~95%[4]。
因此，在合理使用抗生素的同时，需加大对新药的研发及新型预防措施的研究。
疫苗是预防与控制病原菌流行、感染及致病的最佳手段。
自疫苗问世以来，多种疾病发病率明显降低。
流感疫苗预防率可达59%[5]，儿童接种肺炎链球菌疫苗后可降低肺炎住院率[6]，新生儿期接种卡介苗，不仅可预防结核病，还可帮助新生儿免受其他非特异性感染[7]。
由此可见，疫苗接种可有效阻断病原菌传播，降低人群感染和发病的风险。
2024年第02期宜,必要时可以增加保温箱、保温灯等保暖措施,避免仔猪受凉。
及时清除猪舍内的粪便污物,勤换垫草,定期对猪舍、用具、保温箱等进行消毒,减少环境中病原微生物含量,提高猪群的自身抵抗力。
减少饲养过程中的应激因素,定期使用抗生素、右旋糖酐铁、复合维生素等药物进行保健,提高猪群的健康水平。
4小结猪流行性腹泻在我国发病情况依然严重,虽然目前对该病的防治尚无特效治疗方法,但依靠疫苗免疫,结合药物预防、生物安全管控、返饲、空气过滤、强化猪群的饲养管理等方面进行综合防控,同样能够取得良好的防治效果。
参考文献[1]李昱辰.猪流行性腹泻病毒经鼻腔入侵引起肠道致病机制的研究[D ].南京:南京农业大学,2018.[2]李婉.猪流行性腹泻病毒感染性克隆构建及其抗病毒药物和疫苗研究[D ].武汉:华中农业大学,2020.[3]吴中杉.规模化猪场流行性复习综合性防控措施的探讨[D ].扬州大学,2020.[4]SU N R -Q ,CA I R -J ,CH EN Y -Q ,et al .O ut br eak of por ci ne epi dem i c di ar r hea i n s uckl i ng pi gl et s ,Chi na Em er gi ng I nf ect D i s 2012,18(1):161.[5]王艳丰,张丁华,李爱心,等.我国部分地区猪流行性腹泻、传染性胃肠炎及猪轮状病毒感染的流行现状及防控措施[J ].动物医学进展,2018,39(6):120-123.[6]CH EN F Z ,K U X G ,LI Z H ,et al .G enet i c char act er i s t i cs of por ci ne epi dem i c di ar r hea vi r us i n Chi nes e m ai nl and ,r eveal i ng genet i c m ar ker s of cl as i cal and var i ant vi r ul ent par ent al /at t enu at ed s t r ai ns [J ].G ene ,2016,588(5):95-102.[7]刘衍芬,李艳飞,鄂禄祥.中药复方对人工感染猪流行性腹泻病毒仔猪的治疗效果研究[J ].黑龙江畜牧兽医,2016(9):155-158.[8]杨云乔,郑建高,姜军华,等.复方中药对猪流行性腹泻的治疗效果[J ].中国兽医学报,2017,37(7):1353-1358.猪支原体肺炎是一种常见慢性呼吸道传染病,该病具有较强的传染性,也称猪喘气病。
猪支原体肺炎灭活疫苗免疫流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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在进行猪支原体肺炎灭活疫苗免疫之前，需要做好充分的准备工作。
猪支原体肺炎的病原、症状与防治
病原
猪支原体肺炎是由猪支原体引起的疾病。
猪支原体是一种革兰氏阴性菌，它在猪类中广泛存在，是猪肺炎的主要病原体之一。
猪支原体可通过空气传播、粪口途径和直接接触等途径传播。
症状
猪支原体肺炎的症状主要包括以下几点：
1.咳嗽和喘息：病猪出现咳嗽和喘息等症状，严重时会出现气急和呼吸
困难的情况。
2.消瘦：由于猪支原体会影响猪的食欲，病猪常常出现消瘦、疲劳等情
况。
3.腹泻：部分病猪还会出现腹泻与腹部不适的症状。
4.发热：病猪常常有发热的情况。
5.感染其他病菌：猪支原体感染可以加重其他病原菌的繁殖，导致猪患
上更加严重的疾病。
防治
猪支原体肺炎是一种病原菌性疾病，预防和治疗的重点在于减少病原菌的感染和控制疾病的扩散。
常见的防治措施如下：
1.提高猪舍卫生管理水平：定期清理猪舍、消毒器具和饮水设施等，保
持卫生干净。
2.加强病猪的饲养管理：饲喂高质量的饲料，补充营养，提高猪体免疫
力。
3.疫苗接种：疫苗接种是预防猪支原体感染的重要方法，可以通过注射
疫苗来提高猪的免疫力，减少病原菌的污染和感染。
4.使用抗生素：在病情严重的情况下，可使用抗生素控制病菌的繁殖和
扩散。
5.隔离病猪：及时发现患病猪只，将其隔离，以避免疾病扩散。
总之，对于猪支原体肺炎，预防胜于治疗，一旦发现疫情，应及早采取防治措施以尽早消灭病源。
２２· 中国兽药杂志 ２００９，４３（８）：２２～２４／潘延钵，等 猪支原体肺炎灭活疫苗的免疫效果研究 潘延钵 ，赵卓 ，张海玲 ，袁立伟 ，邓玉芹 ，王秀敏 （１．北京生泰尔生物科技有限公司，北京１０２２０６；２．赛百瑞（北京）生物技术有限公司，北京１０２２０６） ［收稿日期］２００９—０４—０２［文献标识码］Ａ ［文章编号］１００２—１２８０（２００９）０８—００２２—０３【中图分类号］￥８５９．７９
［摘要］ 对猪肺炎支原体（Ｊ株）进行培养后，采用新型工艺制备了４批猪支原体肺炎灭活疫苗。 并对疫苗进行了安全性、免疫效果、免疫期检验。结果表明该灭活疫苗对猪安全有效，并且可使免 疫猪的肺炎减少率达到７５％以上，免疫期可达到６个月以上。 ［关键词］ 猪支原体肺炎；灭活疫苗；安全性；免疫效力
Ｐｏｔｅｎｃｙ Ｔｅｓｔ ｏｆ Ｉｎａｃｔｉｖａｔｅｄ Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ Ｖａｃｃｉｎｅ ＰＡＮ Ｙａｎ—ｂｏ ，ＺＨＡＯ Ｚｈｕｏ ，ＺＨＡＮＧ Ｈａｉ—ｌｉｎｇ ，ＹＵＡＮ Ｌｉ—ｗｅｉ ，ＤＥＮＧ Ｙｕ—ｑｉｎ ，ＷＡＮＧ Ｘｉｕ—ｍｉｎ （１．Ｂｅｉｊｉｎｇ Ｃｅｎｔｒｅ Ｂｉｏｌｏｇｙ Ｃｏ．Ｌｔｄ，Ｂｅｉｊｉｎｇ １０２２０６；２．ＣＶＡ（Ｂｅｉｊｉｎｇ）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｏ．１．ｚｄ，Ｂｅｉｊｉｎｇ １０２２０６；Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｉｎ ｔｈｉｓ ｓｔｕｄｙ，ｔｈｅ Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ ｗａｓ ｃｕｌｔｕｒｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ｌｉｑｕｉｄ ｍｅｄｉｕｍ，ａｎｄ ４ ｂａｔｃｈｅｓ ｏｆ ｉｎ－ ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｓｗｉｎｅ Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ ｖａｃｃｉｎｅ ｗａｓ ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｅｄ．Ｔｈｅ ｖａｃｃｉｎｅ ｈａｓ ｂｅｅｎ ｔｅｓｔｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ｒｅｓｐｅｃｔ ｏｆ ｓｅｃｕｒｉｔｙ，ｖａｃｃｉｎｅ ｅｆｆｉｃａｃｙ ａｎｄ ｄｕｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｉｍｍｕｎｉｔｙ．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｖａｃｃｉｎｅ ｗａｓ ｓａｆｅ ａｎｄ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ｔｏ ｓｗｉｎｅ，ｔｈｅ ｉｍｍｕｎｅ ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ ｒａｔｅ ｏｖｅｒ ７５％ａｎｄ ｔｈｅ ｄｕｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｉｍｍｕｎｉｔｙ ｅｘｃｅｅｄ ｈａｌｆ ａ ｙｅａｒ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ；ｉｎａｃｔｉｖａｔｅｄ ｖａｃｃｉｎｅ；ｓｅｃｕｒｉｔｙ；ｉｍｍｕｎｅ ｐｏｔｅｎｃｙ
猪支原体肺炎（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ Ｐｎｅｕｍｏｎｉａ ｏｆ Ｓｗｉｎｅ，ＭＰＳ），又称猪喘气病、猪地方流行性肺炎 （Ｅｎｚｏｏｔｉｃ Ｐｎｅｕｍｏｎｉａ ｏｆ ｐｉｇ）。该病存在于世界各 地，其死亡率虽然不高，但由于流行的广泛性、长期 性和消耗性，可使饲料转化率降低，并引起猪的多 种并发病，是造成养猪业经济损失的最重要的疾病 之一［１ Ｊ。据初步统计，该病每年给我国造成的直 接经济损失高达４Ｏ亿元 。 各猪场对猪喘气病的防治有多种方式，主要是 通过改善饲养条件来预防和注射抗生素来治疗。 多数抗生素可以抑制该病的病原，但是难以根除， 此外，为了降低对食品安全的不利影响，应尽量减 少抗生素的使用。使用疫苗加强预防不失为一种 可靠有效的途径。 目前国内自主研发的相关疫苗只有弱毒疫苗， 该疫苗由于需要胸腔接种所以不易于推广普及。 国外已有多家兽药公司研发生产了猪支原体肺炎 灭活疫苗，并在国内市场上销售，灭活疫苗可以通 过肌肉注射进行接种，易于操作，但是进口疫苗的 成本过高。因此，为了填补国内这一空白，降低猪 场对该病的预防成本，本实验室自主研发了猪支原 体肺炎灭活疫苗。灭活疫苗的主要成分为灭活抗 原和佐剂。其中佐剂的选取是影响疫苗免疫效果 的一个非常重要的因素。本实验室采用的是自主 研发的免疫佐剂一６０３佐剂，该佐剂是采用国际上 先进的纳米技术和水油亲和平衡（ＨＬＢ）技术制备 的佐剂，内含数种免疫增强剂和免疫缓释剂，使产 品在含油量显著降低的情况下，免疫增强效果更 好，作用更持久稳定。 １材料和方法 １．１材料 １．１．１ 菌种制苗用菌株：猪肺炎支原体Ｊ株，由 美国菌种中心引进，菌株号ＡＴＣＣ ２７７１５，由北京生泰 尔生物科技有限公司研究院鉴定保存。攻毒用毒
作者简介：潘延钵（１９８２年一）男，硕士，主要从事兽用生物制品的研究开发。Ｅ—ｍａｉｌ：ｐａｔｒｉｃｋｐｙｂ＠ｈｏｔｍａｉｌ．ｃｏｍ ２００９，４３（８）：２２～２４／潘延钵，等 中国兽药杂志 株：猪肺炎支原体强毒Ｊｓ株，毒力为１００ ＭＩＤ／５ ｍＬ， 该毒株是由江苏省农业科学院兽医研究所引进病肺 组织冻干毒后回归仔猪后取病肺组织冻干制成。 １．１．２ 支原体培养基培养猪肺炎支原体所用培 养基为本实验室改良的Ａ： 液体培养基。 １．１．３制苗用佐剂６０３新型纳米佐剂，由北京生 泰尔生物科技有限公司研制。 １．１．４试验用动物小白鼠：ＫＭ小白鼠１８～２２ ｇ／只，购自北大医学院动物实验部。成兔：健康成 兔，０．９～１．２ ｋｇ／只，购自北京梅里亚实验动物中 心。猪：本实验所用猪为大白×长白二元杂交仔 猪，２８～４０日龄断奶仔猪。所有试验用猪在实验前 隔离饲养１５ ｄ，两次采血检测猪肺炎支原体抗体， 两次结果为阴性时，可用于实验。 １．２方法 １．２．１疫苗的制备在液体培养基中３７℃恒温 培养猪肺炎支原体，将收获的培养产物进行ＣＣＵ 滴定，经滴定如颜色变化单位ＣＣＵ达１０。／ｍＬ以 上，用甲醛灭活后，将佐剂抗原按一定比例混合，摇 匀，即配成疫苗。共制得４批疫苗，批号为０６０１、 ０６０２、０６０３、０６０４。 １．２．２疫苗的检验 １．２．２．１无菌检验按照《中华人民共和国兽药 典》第三部规定的方法进行无菌检验。 １．２．２．２安全性检验用小白鼠对制备的４批苗 进行安全性检验。取ＫＭ小白鼠４０只，每批苗通 过背部皮下注射的方式接种小白鼠１Ｏ只， ０．２ ｍＬ／只，连续１４ ｄ观察小白鼠存活情况。应全 部键活。 １．２．２．３成兔效检通过后腿肌肉注射的方式接 种成兔，首免每批苗０．５ ｍＬ／只，１４ ｄ后同样剂量 加强免疫一次，每批苗接种５只成兔。设５只成兔 同期注射同剂量生理盐水作为对照。第二次免疫 ３０ ｄ后对成兔进行心脏采血，分离血清，５６℃灭活 血清，用ＩＨＡ法检测抗体效价。ＩＨＡ法采用猪肺炎 支原体致敏并经戊二醛及鞣酸处理过的绵羊红细 胞作为抗原供做ＩＨＡ检测猪支原体肺炎灭活疫苗 免疫成兔产生的特异抗体用，以呈现红细胞在孔底 形成薄层均匀凝集血凝反应的最高稀释度作为血 清效价终点。 １．２．２．４靶动物效检通过颈部肌肉注射的方式 给猪接种疫苗，０６０１、０６０４ ２批疫苗，每批苗免疫猪 ５头，首免２ ｍＬ／头，１４ ｄ后，以同样剂量二免，同期 对照猪不注射疫苗，每批疫苗设５头猪作为对照。 ０６０２、０６０３ ２批疫苗为同期并行试验，以上述同样 方法进行试验，设５头猪作为２批疫苗的共同对 照。首免５５ ｄ后，连同对照猪进行猪肺炎支原体强 毒攻击，气管注射，攻毒剂量为１００ ＭＩＤ／头。攻毒 ２５ ｄ后剖杀全部猪，观察肺炎病变情况，通过５５分 法记分 一 。 肺炎减少率＝（对照猪肺炎平均分一免疫猪肺 炎平均分）／对照猪肺炎平均分Ｘ １００％ １．２．３ 疫苗免疫期试验 选取０６０１、０６０２、０６０３ 共３批疫苗进行疫苗免疫期的检测，通过颈部肌肉 注射的方式给猪接种疫苗，每批苗免疫猪５头，首 免２ ｍＩＭ头，１４ ｄ后，以同样剂量二免，设５头猪作 为对照不注射疫苗。分别在首免后１个月、３个月、 ６个月进行采血，用ＩＨＡ法检测抗体。 在首免６个月后，通过气管注射的方式对全部 猪连同对照攻击强毒，攻毒剂量为１００ ＭＩＤ／头，攻毒 后２５ ｄ剖杀，检查肺炎病变情况，按５５分法记分。 ２结果 ２．１ 疫苗的检验 ２．１．１无菌检验检验结果呈阴性。 ２．１．２小白鼠安检４批苗接种的小白鼠饲养１４ ｄ，全部健活，局部或全身无不良反应。 ２．１．３成兔效检采用ＩＨＡ方法检测到免疫兔血 清中的抗体均为阳性，抗体效价均＞１：５一。各组 兔血清中抗体价测定结果见表１。
表１ ４批疫苗免疫成兔后血凝抗体价 批次 各组５只成兔抗体效价 ．４－Ｓ ０６０１ １：１０ ；１：１０ ；１：２０ ；１：１０”；１：１０ １：１２ ４－４． ０６０２ １：５ ；１：１０”；１：２０”；１：１０ ；１：１０” １：１１±４９‘
０６０３ １：１０ ；１：１０ ；１：１０”；１：２０ ；１：１０“ １：１２±４’ Ｏ６Ｏ４ １：２０“；１：１０”；１：５”；１：２０”；１：１０” １：１３±６‘ 型矍 ： ： 三 ： ： ！ ：ｉ三 ：． ： ： ： 注：同行标注 代表经ｔ检验与对照组比较，差异显著 （Ｐ＜０．０５）。
２．１．４靶动物效检在对４批疫苗的三次攻毒试 验中，攻毒１５～２０ ｄ，对照猪出现典型的猪喘气病 临床症状：咳嗽，腹部呼吸。大部分免疫猪精神状 况良好，未见临床症状，个别免疫猪有轻微的腹部 呼吸。攻毒２５ ｄ后剖杀全部猪，对照猪出现典型的 猪喘气病肺部病变，在肺脏心叶、尖叶、中间叶以及 膈叶前１／３部位，出现大面积胰样病变，病灶部位 切面多汁。免疫猪病变情况明显较轻，只有小面积 典型病变。根据病变面积每头猪按照５５分记分法 记录病变分，并计算每批疫苗免疫组猪的肺炎减少 率，结果见表２。 中国兽药杂志 ２００９，４３（８）：２２～２４／潘延钵，等 表２ ４批疫苗免疫猪攻毒后肺炎病变分及肺炎减少率
注：经ｔ检验，各试验组与对照组均差异显著（Ｐ＜０．０５）。 ２．２疫苗免疫期试验 ２．２．１ 抗体价消长情况对靶动物猪进行两次免 疫后，在半年的免疫期内分三次检测了猪血清中猪 肺炎支原体抗体效价，３批苗免疫的１５头猪在免疫 后１个月均可以测到抗体效价，第３个月抗体价略 有上升，第６个月血清抗体价略有下降（表３）。 表３免疫期内猪间接血凝抗体效价 ２．２．２免疫后第六个月靶动物的攻毒保护试验 免疫六个月后对全部猪攻击猪肺炎支原体强毒，在 攻毒２０ ｄ左右免疫猪喘气病临床症状明显轻于对 照猪。攻毒２５ ｄ后，将各组猪全部剖杀统计肺脏 病变。结果显示免疫组猪病变程度明显轻于对照 组猪，肺炎减少率达７５％以上，获得了很好的免疫 保护。结果见表４。 表４免疫第６个月猪肺炎减少率 注：经ｔ检验，各试验组与对照组均差异显著（Ｐ＜０．０５）。 ３讨论 ３．１疫苗的效力４批灭活疫苗通过安全性检验 合格后，分别在靶动物（猪）和非靶动物（兔）上进 行了免疫效力的测试，实验结果表明，四批疫苗均 能使免疫动物获得很好的免疫效果。３批疫苗免疫 期检测结果表明，免疫靶动物（猪）在６个月内能检 测到保护性抗体，攻毒试验证明免疫靶动物能有效 获得攻毒保护。 目前国内市场上的猪支原体肺炎灭活疫苗均 为进口疫苗，其中“瑞倍氏”猪肺炎支原体灭活疫苗 广泛被养殖户采用，其免疫猪可使猪喘气病的发生 率减少６０．５６％＿６ｊ。本实验室研制的４批猪支原 体肺炎灭活疫苗免疫猪的肺炎减少率均在７５％以 上，能有效预防猪喘气病。 ３．２疫苗的剂型Ｆｒｅｕｎｄ等首先证实当抗原与油 乳剂混合成油包水乳剂使用时抗体产生显著增强 并且持续时间延长 。目前国内兽用灭活疫苗很 多是采用油佐剂进行配苗。但是采用油佐剂需要 经过乳化程序进行配苗，并且油佐剂疫苗粘稠度较 高，注射不方便。本实验室研制的猪支原体肺炎灭 活疫苗采用的是６０３新型纳米佐剂，剂型为水包油 型，疫苗配苗过程不需要乳化，直接将佐剂与抗原 按比例混匀即可。所配制疫苗粘稠度低，注射方 便，且比传统的油佐剂苗具有更好的稳定性。 ３．３ 新型疫苗制品 目前市场上国内生产的用于 防治猪喘气病的疫苗只有弱毒疫苗。１９８５年中国 兽医药品监察所报道已完成猪肺炎支原体乳兔继 代弱毒株的培育，并研制出冻干乳兔疫苗、冻干大 兔苗和猪气喘病乳兔继代弱毒株鸡胚苗。但由于 弱毒苗需要经过胸腔接种的途径进行免疫，操作技 术要求较高，因而不易于市场化推广。通过肌肉注 射进行免疫的猪支原体肺炎灭活疫苗最早在上世 纪九十年代在美国得到注册 Ｊ。而目前国内猪支 原体肺炎灭活疫苗还处于研究开发阶段，还没有针 对猪支原体肺炎的灭活疫苗上市，本实验室研制的 猪支原体肺炎灭活疫苗已经进入新产品报批阶段， 将填补国内这一空白。 综上所述，本研究中利用６０３新型纳米佐剂研 制的猪支原体肺炎灭活疫苗对猪安全有效，为规模 化猪场猪喘气病的预防奠定了很好的基础。
