单克隆抗体亲和层析一步纯化重组人生长激素

亲和层析一步纯化IgM类单克隆抗体嚷克休通讯1989年第一(譬苹26朝J:6一亲和层析一步纯化IgM类单克隆抗体玉芳范春荣黄劲松(一胃药.I1,生物一硷童所,七京)本文夼绍j用免抗鼠IgM血清制备的亲知层沂柱从小鼠腹水中一步提纯单克隆抗体IgM的方法提纯的IgM压用琼脂糖电泳检测为一个区带应用迁碌条件下的SDS—PAGE拴测分离为分子量～80K的重链和～25K的轻篷两条医带,几未见其他鲁带;应用免疫印米法鉴引.进一步确证IgM,不合常见的鲁质IgG.实验过程还发现提她的IgMT-够稳定,在贮存过程有降解现象.另外厘用同一亲和柱从吸附IgG后的小鼠血清中提取多克隆抗体IgM的砬襄也是良好的,经用还原条件下的SDS—PAGE检测,同样也只分离为轻童链两睾匡带,未见混有其他奈蛋白.随着单克隆抗体(McAb)的广泛应用.对其研究也日益深入,但含McAb的细胞培养上清腹水和血清中含有大量的杂蛋白和其他犬分子物质使McAb的研究和应用受到一定的限制,固而常需进行纯化各实验室制备的McAb最常见的为IgG类和1gM类抗体,一般来说,提纯IgG类抗体的方法较多,操作较简易,而igM类抗体的纯化就较困难,常用的方法是凝胶过滤法如Nicholas等(1982)”?和B&livet等(1984)报道的方法,撵作都较繁锁,提取的IgM纯度也不高;亲和层折法虽是提取IgM的简易有效法,又常受难于得到理想免疫吸附荆的限制而无法采用我们于1986年采用一个简易微量法研制成功了兔抗鼠IgM血清:,为采用亲和层析法提取IgM创造了必要的条件,用该法一步提纯的IgM经琼脂糖电泳分析为一条区带SDS—PAGE(还原)分离为重链和轻链两条区带.几乎未樯出其他杂蛋白区带材料和方法～材料来源McAbJgM系兰州生物制品研究所赠送的HBsAgMcab小鼠腹水正常小鼠血清为昆明}1小鼠血清:SF2/0瘤株小鼠腹水,本所茁苗二室制备;免抗鼠IgM血清,本实验室研制:辣根过氧化物酶标记羊抗兔IgG血清丹麦Kern—En—Tee产品:硝酸纤维膜(卜C)浙江黄岩化工厂产品;其他化学试剂为分析纯级.=,抗鼠IgM亲和屡折柱的制备免抗鼠IgM血清8m{经50饱和度硫酸胺粗提后,用 D.1MNe,HCO3—0.5MNaCI透析平衡,J52.5gCNBr活化Se!ab;arose4B(瑞典Pha—illarcia产品)偶联,操作参照其使用说明书进行,然后装柱(1×11CEl1),用流洗缓冲渡(o.01MTris—HC】_0.001MEDTA一0.1MNaCIpH7.6)平衡待用三,蛋白含量测定分光光度法,280rim波长测光密度值(oD)四HBsAg抗体活性测定血凝法,血球诊断试剂系北京生物制品研究所生产.五,琼脂糖电泳用0.06MpH8.6巴比妥缓冲液配制l琼脂糖凝胶,按常规浇板打孔电泳染色脱色.67六,sDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)(还原)参照fJeamm(A(1970)”方法进行?分离胶浓度为10或l3%.七,免疫印染参照Towbi(1979):方法进行,先将抗原采用SDS—PAGE(还原)分离,再应用LKB2005Transphor电转移仪将聚丙烯酰胺凝胶上己分离的抗原区带转移至硝酸纤维素膜(NC)上,用2吐温20封闭,加相应的第一抗体(适当稀释)冰箱过夜次日洗涤后,加辣根过氧化物酶标记第二抗体(5O0~IOOU倍稀释)室温培育l一2小时.再加二氨基联苯胺底物液显色,换蒸馏水终止反应,观察结果结果和讨论一,IgM类McAb的提取将HBsAgMcAbIgM小鼠蝮水2ml加于抗鼠IgM亲和柱上,待样品完全进胶后置冰箱过夜,使其充分吸附,次日取出用0.01MTris-HC1—0001MEDTA一01MNaCIpH7,6缓冲液充分流冼,除去未结合的蛋白,换用01M甘氨酸一HC1pH24缓冲液洗脱吸附蛋白,分管收集,每管约4m1,并立即用lNNaOH调pH至6.0L右,测OD及HBsAB 抗体活性,由图l看出冼脱液中含单一蛋白锐峰,经活性测定为HBsAg抗体.1?3?号4.图lMcAbIgM的洗脱蟑=.提纯IgM的琼脂糖电泳图2提纯McAbIgM的琼脂电泳由于TgM的分子量比较大,故提igVJ后的标本采用无分}筛效应的琼脂糖电泳进行.并同时用HBsAgMcAhIgM/]~鼠腹水,正常小鼠血清及鼠血清IgG作对照分析结果见图2.可看出提纯的IgM除加样孔左侧呈现一条区带外,未检出对照媛水中的其他蛋白医带,以及与主要泳动在加样孔周围的鼠血清IgG也完全不同,表明经亲和星析提取出单一.的IgM类McAb舳M愎叫地嘴椽三,提纯ticAbIgti的SDS-PAGE(还原)将图l中亲和层析纯化MeAbIgM洗脱的第3,4,5管与提纯前的HBsAhMcAbtJ~鼠腹水,正常小鼠血清,小鼠血清IgG同时进行SDS—PAGE(还原)分析,并以己知分子量标志物作对照,结果见图3,可看出第3,4,5管样品皆解离为分子量一80K(相当髓)和一2sK(相当轻链)的两个区带,除长二区带外未见其他蛋白医带.而小鼠血清IgG重链(Y链)一55K.轻链也一25K,以上结果再次汪明经亲和层析一步纯化的McAbIgM,除去了原腹水中各黎蛋白达到了电泳纯:1.正常小鼠『血清2.HBAgMcAb/j,裂膛求3.挺缝的McAbIgM第3管4.提纯的McAbIgM第4管5.提纯的McAbIgM第5管6.小鼠血清IgG7.巳知蛋白分子量标志(从上到下)rrk,681~,k,45k,25k,11.rk图3提纯McAbIgM的SDS—PAGE(还原)四,用兔瘦印染法鉴定提纯的M~AbIgM按照免疫印染法先采用SDS—PAGE(还原)将提纯的McAbIgM进行分离,同时以McAbIgG(IgG)及小鼠血清IgG作对照(图4A).然后电转移至NC膜上,一式三份,一份考马斯亮监染色后作对照(图4B):一份加抗鼠IgM血清与之作用,显色(图4C);一份加抗鼠IgG血清与之作弼,显色(图4D),结果如下:(一)由图4C看出三}样品与抗鼠IgM血清作用后,待检IgM的链和轻链显色很深,确证该样品为IgM娄,但除此尚有非重轻链的两条区带(因含量较低,图4A和B皆未染出)也显色,是否杂蛋白.留持下面讨论:对照McAbIgG仅轻链显色,显示未检出IgM,但轻链与待槛IgM的轻链有交义反应:小鼠血清lgG无显色区带,表明不含igMf二)由图4D看出三珊样品与抗鼠lgG血清作用后,待橙IgM仅轻链显色,证明不含IgG.只是一次证叼其轻链与IgG的轻链出现交义反应;对照McAbI§G 因为IBG亚类.所链和轻链显色都很深,陈此尚有分子量小于链的8—9条医带显色,我们分析是由于该抗体不姑稳定,在保存过程IgG分子形成碎片,故也显色小鼠血清IgG,因JgG仅为其69成分之一其余为其他亚类,因而虽然其加样量NMcAbIgG相近(皆约1.5fig),但链的显色远~McAhI§G浅,轻链未显色就可能是NMcAhIEG的轻链非同种,图4提纯McAblgM的免疫印染图5(A)SDS—PAGE(还原)1.小鼠皿清IgG2.提纯的McAbIgM3.McAbIgGl贮存McAbIgM的sDs—PAGE(还原)1.正常小鼠皿清2.,鼠请IgG3.贮存2个多月~MeAbIgM(B)转咎有A中二种样品的NC(,芎马斯亮蓝染色)(C)转移有A中三种洋品的NC与抗鼠IgM结台船显色图谱(D)转移有A巾三种样品的NC与抗鼠IgG结台的显色图谱综上结果即本实验提纯的IgM进一步确证为IgM类,且不含血清中的主要成分IgGl,至于图4C中尚拉出非链和轻链的区带问题,我们认为并非杂蛋白,而是IgM分子的降解产物,不仅其能与抗IgM血清作用,显色,而且在我们以前的实验中曾发现新提取的该抗体,采用SDS—PAGE(还原)分析仅解离成链和弪链两条区带,但同一标本在冰箱贮存一段时间后,再次分析,就可出现上述解离为4条区带的现象,见图5,只是这钟不稳定现象是个别MeAbIgM的特点,还是IgM分子的通性,就有待进一步观察了; 五,鼠血清多克隆IgM的提取在应用抗IgM亲和层析拄提~McAbIgM之后,叉应用同一亲和柱从经SPA一4B柱吸附IgG后的小鼠血清中提取了鼠多克隆IgM.结果经用SDS—PAGE(还原)证明,提取的效果也是良好的同样只梭出IgM的重链和轻链两条区带,未见混有其他杂蛋白成分见图6.7O】.已知蛋白分子量标志(上到下)7rk86k,5,45k,11.7k2.小鼠血清IgG3.Se2/0瘤株小鼠腹水4.HBAgMcAb小鼠腹.提纯的McAbIgM6.犍纯的McAbIgM27.提取McAbIgM.c~的小鼠疆瘩8.正常小鼠血清9.拄纯的小鼠血谪IgM10.提取IgG’TnIgM后的小鼠血清固6提纯小鼠血清Ig_’vl的SDS—PAGE(还原)参考文献1.Kicholas,J.eEa1.:j.ImmItI101.Meth.53(2).150,1982. .BouvetJ.P.eta1:J.Imrattno].Meth.66,209,1984.范舂荣等《i…疫学泶》待发裘..Leamm1I,U.R.,NatrifeLondon),227,680,1970.5.Towbin,H.eta1:A.6,4350,1979. 鸡传染性法氏囊病病毒单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立乔忠詹丽娥枥静赵秋成孙世兴指导史振马丛林刘玎(i西省发科院畜牧兽医研究所土臣)(长春军事兽医大学军事兽医研宄所)鸡传染睫法氏囊病(IBD)又称甘博罗病,这是鸡的一种高度接触性传染病该病毒可引起免疫抑制,使新城疫苗的免疫效果降低或失败.使鸡对各种病原体的易感性增强,病死率增高,给养鸡业造成严重的经济损失.本文用经硫酸铵沉淀,高速度离心并经蔗糖密度梯度离心提纯的鸡传染性法氏囊病病毒免疫BALB/c小鼠取免疫鼠脾细胞与NS-l小鼠骨髓瘤细胞融台,共获儿株阳性杂交瘤细胞系,搔一次克隆化和ELISA检测,筛选出三三株(113-,5D,6D)能保持分泌IBD病毒单克隆抗体的杂炎瘤细胞系.培养上清液的ELISA效价为6.4>-il0,免疫脱水效价1.6×lEl..三株杂交瘤细胞系的染色体数为85—105条,证实为杂交细胞.本单克隆抗体的研制给鸡传染性法氏囊病的诊断和免疫提供r制剂=7l。

专利名称：一种重组人生长激素蛋白的纯化方法专利类型：发明专利
发明人：陈剑清,盖其静,王可盈
申请号：CN202011200459.8
申请日：20201102
公开号：CN112250756A
公开日：
20210122
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：一种重组人生长激素蛋白的纯化方法。

本发明提供一种重组hGH蛋白的纯化方法，具体方法如下：通过构建酵母重组子pPICZαA‑hGH‑SMD1168，重组子在适当条件下发酵，利用甲醇诱导分泌表达与人hGH蛋白完全氨基酸序列一致的重组hGH蛋白。

将发酵液上清用300 kD膜包过滤，表达的重组hGH蛋白被截留，截留液过分子筛Sephadex G200，可高效分离目的蛋白，可得到纯度95%以上的重组hGH蛋白。

解决了没有标签重组蛋白纯化困难的问题。

申请人：浙江清肽生物科技有限公司
地址：312366 浙江省绍兴市滨海新城沥海镇马欢路398号科技创业中心C号楼5楼505室
国籍：CN
更多信息请下载全文后查看。

McAb(单克隆抗体)亲和层析柱纯化重组人α干扰素作为一种具有广谱抗病毒、抑制肿瘤细胞生长及免疫调节作用的细胞因子新型药物，已在国内外广泛投入临床应用，并取得了显著的疗效。

国际上对用于临床的重组干扰素的纯度要求很高，美国NIH规定必须在90%以上，因此生产者普遍采用亲和层析纯化法。

我们研制了rHuIFN-α2a的 McAb 3F1，与CNBr活化的Se pharose 4B交联制成亲和层析柱，经1年60余次较大规模试用表明具有较理想的亲和层析纯化rHuIFN-α2a的性能，达到了国内外同类McAb的水平。

由于 McAb 3F1也能和rHuIFN-α2b结合，故极有可能亦适用于rHuIFN-α2b的亲和层析纯化。

一、性能指标1.McAb的特性：IgG1，间接ELISA效价10-7，对rHuIFN-α2a具中和活性。

2.洗脱的rHuIFN-α2a纯度：>90%。

3.洗脱的rHuIFN-α2a比活性：≥1×109IU/mg。

4.rHuIFN-α2a的回收率：≥95%。

5.亲和柱的稳定性：4℃操作和保存情况下，使用60余次1年时间性能无明显下降。

6.与国外McAb比较：各项指标绝不亚于英国Celltech公司生产的McAb NK2。

二、操作方法1.rHuIFN-α2a的粗提：表达rHuIFN-α2a的工程菌用盐酸胍裂解，过DEAE凝胶柱粗提，收集活性峰。

2.亲和层析：rHuIFN-α2a粗提物用pH7.2，0.15mol/L PBS透析过夜，上样于经pH7. 2，0.15mol/L PBS平衡的亲和层析柱，流速0.5ml/分，然后用大量PBS流洗至流出液OD280≤0.02，再用pH2.4，0.1mol/L甘氨酸-HC1洗脱，洗脱液立即转至pH7.2，0. 15mol/LPBS中透析过夜，测定蛋白浓度、纯度和活性。

三、保存方法1.亲和柱的再生：先后用10个柱床体积、含0.5mol/L NaCl的pH8.5，0.1mol/L Tri s-HCl和pH4.5，0.1mol/L醋酸钠缓冲液流洗亲和柱，再用pH7.2，0.15mol/L PBS充分平衡。

重组蛋白质的分离纯化摘要：90年代以来基因重组技术得到很大的发展，基因工程产品的分离纯化的成本约占其全部成本的60%～80%，因此重组蛋白的分离纯化技术越来越重要。

本文主要介绍了沉淀、液液萃取、层析等常用分离重组蛋白方法的原理及应用，旨在为开展蛋白质的制备及其应用研究提供理论依据。

关键词：重组蛋白质；分离；纯化；沉淀；液液萃取；层析；包涵体随着基因重组技术的发展，出现了很多基因工程产品，而作为基因工程技术的下游工程中的基因重组蛋白的分离纯化技术越来越显示其重要性。

据有人统计,基因工程产品的分离纯化成本约占到其全部成本的60%～80%[1]。

由此可见产品的分离纯化是获得目的产物的关键一步，也是比较困难的一步，它标志着生物产业的高低。

纯化重组蛋白质和普通蛋白质的不同就在于要选择合适的表达系统，因为表达系统决定了细胞培养过程中产物的性质以及可能产生的杂蛋白，而纯化重组蛋白质的主要目的是去除杂蛋白质，通常对一种重组蛋白质的纯化会采用多个系统[2]。

但是重组蛋白有几种不同的表达形式，如细胞外的分泌表达；细胞内可溶性表达以及包涵体形式的存在，因此对于重组蛋白的纯化要依据其表达形式的不同，采取不同的纯化工艺。

与传统方式相似，重组蛋白的分离纯化也是利用其物理和化学性质的差异，即以分子的大小、形状、溶解度、等电点、亲疏水性以及与其它分子的亲和性等性质建立起来的。

目前主要的纯化方法有浓缩沉淀法，层析和电泳技术。

重组蛋白质在分离纯化的过程中，必须维持一定的浓度和生物活性形式，以及防止被降解。

因此从生物体中有效分离纯化重组蛋白质一直是个难题。

90 年代以来,国内外许多科学工作者在蛋白质分离纯化技术和工艺上进行了大量的研制和开发,将原有的纯化技术水平提高到一个新的高度。

本文将简单介绍一些传统的分离纯化方法，并介绍近10 年来重组蛋白分离纯化中的新进展和一些新出现的技术。

1 沉淀分离技术1.1 盐析法其原理是蛋白质在高浓度盐溶液中，随着盐浓度的逐渐增加，由于蛋白质水化膜被破坏、溶解度下降而从溶液中沉淀出来。

重组人生长激素生产工艺流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。

文档下载后可定制随意修改，请根据实际需要进行相应的调整和使用，谢谢!并且，本店铺为大家提供各种各样类型的实用资料，如教育随笔、日记赏析、句子摘抄、古诗大全、经典美文、话题作文、工作总结、词语解析、文案摘录、其他资料等等，如想了解不同资料格式和写法，敬请关注!Download tips: This document is carefully compiled by theeditor. I hope that after you download them,they can help yousolve practical problems. The document can be customized andmodified after downloading,please adjust and use it according toactual needs, thank you!In addition, our shop provides you with various types ofpractical materials,such as educational essays, diaryappreciation,sentence excerpts,ancient poems,classic articles,topic composition,work summary,word parsing,copy excerpts,other materials and so on,want to know different data formats andwriting methods,please pay attention!重组人生长激素（rhGH）是通过基因工程技术生产的一种生物制品，用于治疗生长激素缺乏症等疾病。

抗体纯化的方法有哪些1. 亲和层析法这可是个挺厉害的法子。

它就是利用抗原和抗体之间特异性的亲和力来纯化抗体的。

就像是一把精准的钥匙开一把锁一样，只有特定的抗体才能和这个抗原结合。

比如说，把抗原固定在一个柱子上，然后让含有抗体的混合液流过这个柱子，那抗体就会被抗原抓住，留在柱子上，而其他杂质就流走啦。

然后再用一些特殊的溶液把抗体从柱子上洗脱下来，就得到比较纯的抗体了。

这种方法纯化出来的抗体纯度那是相当高的，就像从一群杂七杂八的东西里挑出了最想要的宝贝一样。

2. 离子交换层析法这个方法也挺有趣的。

它是根据抗体和杂质离子电荷的不同来分离的。

离子交换剂有阴离子交换剂和阳离子交换剂。

如果抗体带正电荷，就可以用阴离子交换剂。

把混合液加到柱子里，带负电荷的离子交换剂就会和带正电荷的抗体相互作用。

不同的抗体和杂质离子与交换剂的结合能力不一样，通过调整溶液的pH 值或者离子强度，就可以把抗体和杂质分离开来。

就像是按照大家不同的脾气秉性来把它们分开，有点像在一群小伙伴里按照不同的性格特点把他们分组一样。

3. 凝胶过滤层析法这个方法就像是给抗体和杂质过筛子。

凝胶过滤的介质有很多小孔，小分子的杂质就会进入这些小孔里，在柱子里走的路程就长。

而大分子的抗体呢，进不去这些小孔，就直接从柱子里流出来了，这样就把抗体和小分子杂质分开了。

就好像是在一个有很多小房间（小孔）的大房子里，小个头的东西会在小房间里乱窜，大个头的东西就直接从大房子里走出去了，很容易就分开了呢。

4. 疏水作用层析法这个是利用抗体表面的疏水基团和层析介质上的疏水基团相互作用来纯化的。

在高盐浓度下，抗体的疏水基团会暴露出来，然后就会和层析介质结合。

之后再降低盐浓度，抗体就会从介质上被洗脱下来。

就像是在一种特殊的环境下（高盐浓度），让抗体和介质互相认识（结合），然后改变环境（降低盐浓度），又让它们分开，有点像在不同的天气（盐浓度变化就像天气变化）下让小伙伴们先聚在一起再分开的感觉。

生长激素的分离纯化工艺生长激素是一种重要的蛋白质激素，对人体的生长发育起着重要的调节作用。

为了获得高纯度的生长激素，需要进行分离纯化工艺。

本文将介绍生长激素的分离纯化工艺步骤及其原理。

一、细胞培养及生长激素的提取生长激素通常通过基因工程技术在大肠杆菌等微生物中进行表达。

首先，将携带生长激素基因的重组质粒导入到宿主细胞中，然后进行培养。

在培养过程中，通过调节培养基成分、温度、pH值等条件，促进细胞的生长和生长激素的表达。

当细胞达到适当的生长程度后，通过破碎细胞壁的方法将细胞内的生长激素释放出来。

二、固相萃取固相萃取是生长激素分离纯化的关键步骤之一。

通常使用离子交换树脂进行固相萃取。

离子交换树脂上具有固定的功能基团，可以选择性地吸附目标物质。

将提取得到的细胞培养液经过预处理后，加入离子交换树脂固相柱中，利用生长激素与树脂上的功能基团之间的静电作用力进行吸附。

然后，通过洗脱的方式将生长激素从固相柱上洗脱下来。

三、层析分离层析分离是一种常用的生物分离技术，可以根据分子的物理化学性质实现对混合物的分离纯化。

在生长激素的分离纯化中，通常采用凝胶过滤层析和亲和层析两种方法。

1. 凝胶过滤层析凝胶过滤层析是根据生长激素与凝胶的孔径大小之间的差异进行分离的。

将洗脱得到的生长激素溶液加入到凝胶柱中，较小的生长激素分子能够进入凝胶内部，而较大的杂质分子则无法进入，从而实现了对生长激素的分离。

2. 亲和层析亲和层析是利用生物分子之间的特异性相互作用进行分离纯化的方法。

通常，将具有亲和标记的配体固定在凝胶上，然后将洗脱得到的生长激素溶液加入到凝胶柱中。

生长激素与配体之间的特异性结合使得生长激素被固定在凝胶上，而其他杂质则被洗脱出来。

四、再结晶通过层析分离得到的生长激素溶液通常含有一定的杂质。

为了获得更高纯度的生长激素，需要进行再结晶。

再结晶是通过溶剂的加入和控制温度来促使生长激素结晶，从而实现对杂质的去除。

重复结晶过程可以逐步提高生长激素的纯度。

文章编号:1007-8738(2002)04-408-04免疫亲和层析法纯化重组人促红细胞生成素的实验研究邓瑞春1,张明伟2,白云秀2,汪劲松2,毛　宁2,章金刚3,周　勇4(1军事医学科学院毒物药物研究所生化药理室,北京100850;2北京瑞得生物技术研究所;3军事医学科学院野战输血研究所;4北京中医药大学中西医结合研究所)收稿日期:2002-03-15;　修回日期:2002-04-15作者简介:邓瑞春(1960-),女,河北遵化市人,助理研究员,博士.北京市海淀区太平路27号,T el.(010)6821171关键词:重组人红细胞生成素;单克隆抗体;免疫亲和层析;酶联免疫吸附试验中图分类号:R392.12 文献标识码:B摘　要:目的　以免疫亲和层析方法纯化重组人促红细胞生成素(rhEPO )。

方法　以rhEPO 作为抗原,免疫Balb/C 小鼠,制备抗rhEPO 单克隆抗体(mAb )。

以纯化的抗rhEPOmAb 2F12与预活化的Sepharose 4B 偶联,制成抗体亲和层析柱,纯化rhEPO 。

结果　经筛选共获得4株可分泌抗rhEPOmAb 的杂交瘤细胞株,分别为:1A8、2F12、3D4和3F10。

亲和层析纯化的rhEPO 经S DS 2PAGE 显示单一条带;2g 凝胶制备的层析柱一次层析可获得1.5mg 高纯度的rhEP O 。

利用纯化的m Ab 建立的E LIS A 法,用于检测rhEP O 的蛋白含量可达ng 水平。

结论　免疫亲和层析法纯化rhEP O 的效率高、纯度好,用纯化的mAb 建立的E LIS A 法具有灵敏度高、重复性和稳定性好等优点。

Study on purification of rhEPO by the im 2munoaffinity chromatographyDENG Rui 2chun 1,ZH ANG Ming 2wei 2,BAI Yun 2xiu 2,WANG Jin 2song 2,MAO Ning 2,ZH ANG Jin 2gang 3,ZHOU Yong41Institute of T oxicology and Pharmacology ,Academy of M ilitary Medi 2cal Sciences ;2Read &F our 2Ring Institute of Biotechn ology ;3Institute of T rans fusion Medicine ,Academy of Military Medical Sciences ,Beijing 100850;4Institute of C ombination of Chinese T raditional and Western Medicine ,Beijing University of T raditional Chinese Medicine ,Beijing 100029,ChinaK eyw ords :recombinant human erythropoietin ;m onoclonal anti 2body ;immunoaffinity chromatography ;E LIS AAbstract :Aim T o purify recombinant human erythropoietin (rhEP 2O )by immunoaffinity chromatograghy.Methods rhEPO was used as antigen to immunize Balb/c mice for preparing mAbs against rhE 2PO.Purified mAb 2F12was coupled with activited sepharose 4B to prepare the immunoaffinity chromatography columu for purification of rhEPO.R esults F our hybridoma cell lines secreting mAbs against rhEPO were obtained ,namely ,1A8、2F12、3D4and 3F10.A sin 2gle band be exhibited on S DS 2PAGE gel with a yield of 90%.By using sandwich E LIS A established with these mAbs for detection of rhEPO ,Sensitivity of the E LIS A reached ng level.Conclution rhEPO purified by immunoaffinity chromatograghy have high 2efficien g ood purify and the E LIS A are sensitiveand and stabile. 重组人促红细胞生成素(rhEPO )为一种糖蛋白,相对分子质量(M r )约为30000～39000,其主要生理作用是调节红系前体细胞分化为成熟的红细胞,进而维持外周血红细胞的水平,临床上主要用于治疗肾衰后引起的贫血。

单克隆抗体纯化过程一. 引言单克隆抗体是一种特定的抗体，能够识别并结合于某个特定的抗原。

纯化单克隆抗体是制备高纯度抗体溶液的重要步骤。

本文将详细介绍单克隆抗体纯化过程，包括抗体表达、细胞培养、抗体纯化和质量控制等关键步骤。

二. 抗体表达和细胞培养2.1 抗体表达系统选择在单克隆抗体纯化过程中，选择最适合的表达系统是至关重要的。

常用的表达系统包括哺乳动物细胞、昆虫细胞和大肠杆菌等。

在选择表达系统时，需考虑到表达水平、抗体结构的完整性和规模经济等因素。

2.2 细胞培养和抗体表达表达系统选择后，需要进行细胞培养和抗体表达。

细胞培养需要满足一定的条件，包括适宜的培养基、温度、CO2浓度和湿度等。

抗体表达需要通过转染或转化等方法将目标基因导入细胞中，并使用适当的诱导剂（如重组蛋白、小分子化合物等）来促进抗体的产生。

三. 抗体纯化过程3.1 细胞培养基收获和细胞破碎在细胞培养达到一定密度后，需将培养基和细胞一起收获。

收获的方式可以是离心、过滤或使用其他无菌技术。

收获后的细胞需要进行破碎，以释放细胞内的抗体。

3.2 抗体提取和初步纯化破碎后的细胞溶液中含有大量的杂质，需要进行抗体提取和初步纯化。

一种常用的方法是亲和层析法，通过将特定配体固定在固相基质上，将目标抗体吸附在配体上，然后通过洗脱来提取纯化的抗体。

3.3 离子交换层析离子交换层析是纯化单克隆抗体的一种常用方法。

它利用抗体分子中带电离子的特性，通过在具有相反电荷的树脂上的吸附和洗脱过程来分离纯化抗体。

3.4 凝胶过滤层析凝胶过滤层析是一种根据抗体分子大小和形状的差异进行分离的方法。

利用不同孔径的凝胶过滤柱，可以将大分子的杂质和抗体分子分离开来，实现对抗体的纯化。

3.5 亲和层析亲和层析是一种基于抗体与抗原结合的特异性进行纯化的方法。

通过将具有亲和力的配体固定在树脂上，将目标抗体选择性地吸附在树脂上，然后通过洗脱来得到纯化的抗体。

四. 抗体质量控制4.1 抗体浓度和纯度的测定在抗体纯化过程中，需要对抗体的浓度和纯度进行测定。

hGH单克隆抗体的制备及双抗体夹心ELISA检测法的建立的开题报告标题：hGH单克隆抗体的制备及双抗体夹心ELISA检测法的建立摘要：本研究旨在制备对人类生长激素（hGH）高特异性、高亲和力的单克隆抗体，并建立一种基于双抗体夹心ELISA的hGH检测方法。

通过基因工程技术获得hGH的重组蛋白，将其纯化并用于单克隆抗体的制备。

采用融合细胞技术，得到单克隆抗体，并进行特异性、亲和力及稳定性检测。

建立hGH的ELISA方法，优化反应条件，确定检测范围和阈值，并对其性能进行验证。

结果显示，制备的单克隆抗体具有高特异性和亲和力，ELISA方法的灵敏度为0.1 ng/mL，检测范围为0.1-100ng/mL，可用于hGH的检测。

关键词：生长激素，单克隆抗体，ELISA，检测方法第一章绪论1.1 研究背景和意义生长激素（GH）是由垂体前叶分泌的一种蛋白质激素，在人体的生长、代谢、免疫等方面发挥着重要的调节作用。

GH的异常分泌与许多疾病如垂体瘤、儿童生长发育迟缓等密切相关。

而GH的测定可以为这些疾病的诊断和治疗提供重要的参考和指导。

ELISA是目前应用最广泛的GH测定方法之一，其基本原理是利用酶标记的抗体与待测物进行特异性结合，通过酶的反应产生信号，从而实现GH的定量测定。

1.2 研究内容和目的本研究旨在制备对hGH高特异性、高亲和力的单克隆抗体，并建立一种基于双抗体夹心ELISA的hGH检测方法。

具体研究内容包括：（1）基因工程技术制备重组hGH蛋白；（2）制备hGH单克隆抗体；（3）建立hGH的双抗体夹心ELISA方法；（4）对ELISA方法进行性能验证和优化。

第二章理论基础和研究方法2.1 hGH的结构和功能hGH是由191个氨基酸组成的多肽激素，其分子量为22 kDa。

它主要通过与垂体细胞表面的受体结合而发挥生物学活性，进而刺激胰岛素样生长因子（IGF-1）等诸多生长因子的合成和分泌，从而调节人体的生长、代谢和免疫等功能。

生物制药技术中的生长因子的表达与纯化方法详解在生物制药技术中，生长因子是一类可以促进细胞增殖、分化和发育的蛋白质信号分子。

它们在医药领域具有广泛的应用，常被用于治疗癌症、遗传性疾病和退行性疾病等。

为了获得高纯度的生长因子，生物制药技术中采用了一系列的表达和纯化方法。

本文将详细介绍生物制药技术中生长因子的表达与纯化方法。

生长因子的表达是指将相关基因导入到宿主细胞中，通过转录和翻译过程使基因表达为具有生物活性的蛋白质。

表达方法主要有原核表达和真核表达两种。

原核表达是将生长因子基因克隆到大肠杆菌等细菌的表达载体中，通过转化、培养和诱导等步骤使基因表达为目标蛋白。

在原核表达中，由于基因表达系统简单、成本较低且表达量较高，常被用于小规模的试验和研究。

然而，细菌中的表达系统无法正确翻译和修饰复杂的生长因子，因此并不适用于大规模生产。

真核表达是将生长因子基因克隆到真核细胞（如哺乳动物细胞）的表达载体中，通过转染、培养和诱导等步骤实现基因表达。

相比于原核表达，真核表达能够保留生长因子的天然结构和生物活性，因此更适用于大规模生产。

近年来，重组DNA技术的发展使得真核表达系统的建立更加高效，同时也提高了纯化效率。

表达获得的生长因子需要经过纯化才能得到高纯度的蛋白质。

生长因子的纯化方法一般包括以下几个步骤：细胞破碎、先导蛋白的去除、拟静态层析、亲和层析和尺寸排除层析。

细胞破碎是将表达获得的细胞打破，释放出蛋白质。

常用的方法有机械破碎、超声波破碎和高压破碎等。

破碎后的细胞溶液包含了大量的其他蛋白质和杂质，需要进行进一步的纯化。

先导蛋白的去除是为了排除掉无法识别的非生长因子蛋白质。

一般采用的方法是利用具有亲和性的纯化材料（如亲和树脂或金属螯合材料）结合标签或结构域与生长因子结合，以实现生长因子的分离和纯化。

拟静态层析是利用柱层析将目标蛋白与其他蛋白质分离。

常用的方法有离子交换层析、亲和层析和蛋白A/G层析等。

通过对样品的特定性质进行调整，可以实现目标蛋白质的选择性结合和洗脱。

基因工程人生长激素的纯化及鉴定
宋学文;李建民
【期刊名称】《天津医科大学学报》
【年(卷),期】1995(001)002
【摘要】将在中国仓鼠卵巢细胞（ＣＨＯ）中基因克隆表达的人生长激素（ｈＧＨ）培养物经Ｏｃｔｙｌ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＣＬ－４Ｂ疏水层析，ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００凝胶过滤层析，ＤＥＡＥ－ＣｅｌｌｕｌｏｓｅＤＥ５２离子交换层析，得到了较纯的ｈＧＨ。

通过ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ），Ｎ－末端氨基酸分析及放免分析，证明基因工程ｈＧＨ与天然ｈＧＨ性质相符。

【总页数】3页(P18-20)
【作者】宋学文;李建民
【作者单位】不详;不详
【正文语种】中文
【中图分类】R392－33
【相关文献】
1.基因工程人抗体Fab片段的纯化及鉴定 [J], 宋月英;粟宽源;高辉;杨安钢
2.幽门螺杆菌hpaA基因工程菌蛋白表达条件优化、纯化及其活性鉴定 [J], 黄学勇;段广才;范清堂;郗园林;黄志刚;宋春花
3.抗甲肝病毒基因工程单抗分离纯化与鉴定 [J], 魏敬双;陶苒;孙巍巍;贾茜;李川;梁米芳
4.人源抗乙型肝炎病毒表面抗原基因工程IgG全抗体的表达、纯化及初步鉴定 [J], 黄仕和;周志军;彭祥兵;詹骞;张爱华;闭兰;余模松;梁米芳
5.牛肠激酶基因工程菌的构建、高密度发酵、纯化及活性鉴定 [J], 李德华;苟兴华;胡海洋;徐琦;刘忠荣;吴洽庆;余晓东
因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 202010987962.6(22)申请日 2020.09.18(71)申请人 深圳科兴药业有限公司地址 518052 广东省深圳市南山区科苑路15号科兴科学园D1栋36层(72)发明人 王向阳　叶婉仪　马鸿杰　柏江涛　潘志友　(74)专利代理机构 广东金泰智汇专利商标代理事务所(普通合伙) 44721代理人 江丽娇(51)Int.Cl.C07K 14/61(2006.01)C07K 1/36(2006.01)C07K 1/34(2006.01)C07K 1/16(2006.01)C07K 1/14(2006.01)(54)发明名称一种快速制备重组人生长激素的纯化方法(57)摘要本发明提供了一种快速制备重组人生长激素的纯化方法，属于生物分离工程技术领域。

该技术方案首先对发酵所得的菌体进行裂解，使胞内产物得以释放，而后离心收集上清，对所得到的上清液，加入缓冲液并调整pH值，再微滤去除不溶性颗粒，而后以特定条件先后进行层析分离和超滤浓缩，最终得到成品。

通过对工艺方法的创新改进，本发明可以快速有效的提取纯化生长激素，得到的生长激素纯度高，同时具有工艺简单、回收率高、生产时间短等优势。

权利要求书1页 说明书4页 附图3页CN 112062830 A 2020.12.11C N 112062830A1.一种快速制备重组人生长激素的纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：收集菌体，缓冲液裂解提取，离心收集上清，加入缓冲液并调整pH值，层析分离，超滤浓缩。

2.根据权利要求1所述的一种快速制备重组人生长激素的纯化方法，其特征在于，在所述缓冲液裂解提取步骤中，用浓度为1～200mM的磷酸盐缓冲液并调节pH至5～9，室温搅拌提取0.5～3h。

3.根据权利要求2所述的一种快速制备重组人生长激素的纯化方法，其特征在于，所述缓冲液裂解提取步骤，包括：1)配制浓度为1～200mM的磷酸盐缓冲液并调节pH至5～9；2)取所述菌体以及步骤1)所得缓冲液，将二者按1～3:30的重量比在搅拌罐中混合，以100～300rpm的转速、4～30℃的温度搅拌0.5～3h。

抗衰老的原动力_HGH生命素_抗衰老有奇效_HGH生命素由美国医药高科技有限公司与安格公司联合生产的HGH舌下喷剂——HGH生命素，突破传统抗衰老理论，首次透过人体生物学理念，从內做起，增强体内HGH分泌，强化人体机能，成为二十一世纪的革命性抗衰老产品，并获美国FDA（美国食品与药物管理局）专业认可。

安格基因重组人生长激素，采用先进工艺（单克隆抗体亲和层析一步纯化重组人生长激合法）科学配比精制而成。

采用舌下喷服的方式直接入血，有效避免了肝肾对HGH代谢破坏，单位效价比更高。

本品能全面快速的提高机体各方面的综合水平，对亚健康、久病患者、体力不佳、精力衰弱；记忆力减退、情绪不稳、肌肤老化、肌肉萎缩、皱纹、脱发、脂肪堆积、性欲减低、困乏倦怠等均有明显的效果。

【主要成分】 HGH生长素、初乳精提物、洋参皂甙、多种氨基酸、C2H6O及H2O。

本产品是严格按照美国药物食品管理法规采用当今世界上最优质原料及技术精心研制，以保证本产品的安全性及高效性。

请严格按照说明要求使用，如果发现封口或瓶口破损，请勿使用。

【使用方法】舌下喷剂。

成人每日2次，每次2～3喷/次，早晨空腹及晚间睡前刷牙后，喷于舌下，停留30～60秒，喷后3～5分钟内请勿饮水。

在使用该产品后30分钟内，口腔应保持清洁。

【温馨提示】：喷后一小时内不进食，帮助生命素达到更好吸收效果。

（经舌下黏膜丰富的毛细血管网直接吸收入血液，最快捷有效的吸收方法之一）【抗老化医学专家评估报告】恢复皮肤光泽与弹性 71% 增强性功能 75%减肥，消减脂肪球 82% 记忆力恢复 62%皱纹消除 61% 改善视力 72%白发转黑 65% 降低胆固醇效率 75%丰满胸脯效率 65% 预防骨质疏松 83%改善睡眠 78% 强化免疫系统 72%精力提高 82% 降低血压效率 75%【禁忌】怀孕及哺乳妇女慎用！【规格】每瓶30ml ，含280次喷射量。

【储存】应将本品放置阴凉干燥处，最佳储存温度为4～15℃。

专利名称：一种人IL-12亲和纯化层析柱、其制备方法及利用其纯化重组人IL-12的方法
专利类型：发明专利
发明人：田志刚,郑晓东,魏海明,程永凤,程民,孙汭
申请号：CN201210093656.3
申请日：20120331
公开号：CN103360461A
公开日：
20131023
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明涉及一种制备重组人IL-12亲和纯化层析柱的工艺、由该工艺制得的重组人IL-12亲和纯化层析柱、及用该亲和纯化层析柱纯化重组人IL-12的方法。

具体地说，本发明涉及用抗人IL-12的杂交瘤细胞株制备抗人IL-12单克隆抗体，并用该抗体制备重组人IL-12亲和纯化层析柱，然后用该亲和纯化层析柱纯化重组人IL-12的工艺流程。

更具体地说，本发明涉及一种采用亲和层析柱纯化重组人IL-12的方法，其特征在于用抗人IL-12单克隆抗体的杂交瘤细胞株制备抗体，用该抗体制备人IL-12亲和纯化层析柱，然后以该亲和纯化层析柱为基础进行纯化重组人IL-12的方法。

申请人：中国科学技术大学
地址：230026 安徽省合肥市包河区金寨路96号
国籍：CN
代理机构：北京市汉信律师事务所
代理人：王文生
更多信息请下载全文后查看。

抗重组人血管生长素单克隆抗体的制备及鉴定杨太成;江悦华;冼江;吴锦银;李明【期刊名称】《中国免疫学杂志》【年(卷),期】1999(015)009【摘要】目的:制备不同类型抗重组人血管生长素(Recombinantion Human Angiogenin,rhANG)的单克隆抗体,为进一步研究抗rhANG抗体对ANG的中和作用以及对ANG依赖型肿瘤的抑瘤实验打下基础.方法:利用杂交瘤技术以rhANG 免疫Balb/c小鼠,制备二株(C6、C46)能够稳定分泌抗 rhANG抗体的杂交瘤,并对上清进行ELISA、双扩散、免疫印迹等鉴定.结果:该抗体类别C6为IgG1,C46为IgM,并特异地识别rhANG与其它细胞因子及血清蛋白无交叉反应,免疫印迹显示该抗体与分子量14.4 kD rhANG蛋白结合,不与宿主菌体蛋白反应.结论:经多种方法鉴定获得的二株杂交瘤细胞分泌的抗体为rhANG特异抗体.【总页数】2页(P412-413)【作者】杨太成;江悦华;冼江;吴锦银;李明【作者单位】广州军区总医院医学实验科,广州,510010;广州军区总医院医学实验科,广州,510010;广州军区总医院医学实验科,广州,510010;广州军区总医院医学实验科,广州,510010;广州军区总医院医学实验科,广州,510010【正文语种】中文【中图分类】R392.12【相关文献】1.抗重组人乳腺珠蛋白单克隆抗体的制备及其特异性鉴定 [J], 刘秀娜;郭建秀;罗羽;胡川闽2.抗重组人骨唾液酸蛋白单克隆抗体的制备及鉴定 [J], 王捷;刘增田;杨太成;杨静;冼江;刘大志3.抗重组人表皮生长因子单克隆抗体的制备及生物学特性鉴定 [J], 罗萍;邹全明;王晓勤;马颖4.重组抗HER2人源化单克隆抗体大规模制备及活性鉴定方法学建立 [J], 陈观平;汪一帆;应栩华5.抗重组人红细胞生成素单克隆抗体的制备与鉴定 [J], 唐祖明;梅茜;郑纪山;陆祖宏因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。