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300份亚麻种质资源主要农艺性状的鉴定及评价李秋芝;姜颖;鲁振家;曹洪勋;宋鑫玲;姜籽竹【摘要】This paper analyzes and evaluates the main agricultural characteristics of 300 flax germplasm resources from domestic and abroad area.These flax germplasm resources provide the basis for the utilization of excellent flax resources and the selection of parent.Deeply developing the research of flax resources,it can enrich the flax germplasm resources and their genetic diversity.%研究对国内外引进的300份亚麻种质资源进行鉴定分析及评价,以期为优良亚麻资源的利用和新品种选育中亲本的选择提供依据;深入开展亚麻资源研究,可充实亚麻资源库,丰富其多样性.【期刊名称】《中国麻业科学》【年(卷),期】2017(039)004【总页数】8页(P172-179)【关键词】亚麻;种质资源;农艺性状;鉴定;评价【作者】李秋芝;姜颖;鲁振家;曹洪勋;宋鑫玲;姜籽竹【作者单位】黑龙江省科学院大庆分院,黑龙江大庆163319;黑龙江省科学院大庆分院,黑龙江大庆163319;黑龙江省科学院大庆分院,黑龙江大庆163319;黑龙江省科学院大庆分院,黑龙江大庆163319;黑龙江省科学院大庆分院,黑龙江大庆163319;黑龙江省科学院大庆分院,黑龙江大庆163319【正文语种】中文【中图分类】S563.2亚麻是世界上最古老的纤维作物之一，是我国重要的麻类作物和油料作物。
遗传标记技术中aflpAFLP（Amplified Fragment Length Polymorphism）是一种遗传标记技术，广泛应用于遗传学研究和种质资源保护。
本文将从AFLP的原理、操作步骤、优势和应用等方面进行介绍。
AFLP是一种基于多态性片段长度的遗传标记技术，它结合了PCR 扩增和限制性内切酶切割的特点。
首先，通过PCR扩增目标DNA 片段，然后利用限制性内切酶对扩增片段进行切割，生成多个DNA 片段。
这些片段在聚丙烯酰胺凝胶电泳中分离并检测，形成特定的DNA指纹。
通过比较不同个体或群体之间的AFLP指纹图谱，可以揭示出遗传变异的差异。
AFLP的操作步骤相对简单，主要包括DNA提取、PCR扩增、酶切反应、连接DNA适配体、选择性扩增和聚丙烯酰胺凝胶电泳等。
首先，需要从样品中提取高质量的DNA。
随后，利用特定引物对目标DNA进行PCR扩增，产生大量的扩增片段。
接下来，使用限制性内切酶对PCR产物进行酶切反应，得到多个DNA片段。
这些片段会与连接了适配体的引物结合形成适配体-片段复合物，随后进行选择性扩增，选择性引物将引导特定片段的扩增。
最后，将扩增产物进行聚丙烯酰胺凝胶电泳分离，并使用荧光染料或放射性同位素进行检测和分析。
AFLP技术具有以下几个优势。
首先，AFLP可以同时检测多个位点的多态性，相比传统的基因标记技术，其检测效率更高。
其次，AFLP技术不需要事先了解目标基因序列，适用于未知基因组的研究。
此外，AFLP可以检测到较低频率的遗传变异，对于研究物种间或个体间的遗传关系非常有用。
最后，AFLP技术具有较高的重复性和稳定性，结果可靠性较高。
AFLP技术在遗传学研究和种质资源保护中得到了广泛应用。
在遗传学研究中，AFLP可以用于揭示物种间或个体间的遗传关系、群体遗传结构的分析以及基因组演化的研究。
在种质资源保护中，AFLP可以用于遗传多样性的评估和遗传资源的鉴定，为保护和合理利用遗传资源提供科学依据。
aflp原理AFLP原理AFLP（Amplified Fragment Length Polymorphism，扩增片段长度多态性）是一种基因分型技术，广泛应用于分子生物学和遗传学研究中。
它是通过扩增特定DNA片段并测定其长度差异，从而揭示基因组中的多态性。
AFLP技术的原理非常简单。
首先，将目标DNA进行限制性内切酶切割，生成许多DNA片段。
然后，通过引物引导的PCR反应，选择性地扩增特定的DNA片段。
最后，通过聚丙烯酰胺凝胶电泳分离扩增产物，根据其长度差异进行分型分析。
在AFLP技术中，首先需要选择适当的限制性内切酶对DNA进行切割。
这些内切酶通常是4-8个核苷酸的识别序列，通过切割DNA 的特定位点产生DNA片段。
选择不同的内切酶对DNA进行切割，可以获得不同的DNA片段，从而增加了分析基因组多态性的灵活性。
切割后的DNA片段会在两端添加适配器序列，这些适配器序列包含引物结合位点。
引物是具有特定序列的短DNA片段，用于引导PCR扩增特定的DNA片段。
在PCR反应中，引物会与适配器序列结合，并在DNA模板上进行扩增。
通过引物的选择，可以扩增出特定长度的DNA片段，以便进行后续的分析。
扩增产物的分析通常使用聚丙烯酰胺凝胶电泳进行。
在电泳过程中，DNA片段会根据其长度在凝胶中迁移，形成一系列带状图案。
这些带状图案可以通过染色或放射自显影等方法进行可视化。
通过比较不同样品的带状图案，可以得出它们之间的遗传距离和相似性。
AFLP技术具有许多优点，使其成为遗传学研究中常用的分型方法。
首先，AFLP技术可以同时分析数百个位点，具有高通量的特点。
其次，AFLP技术不需要预先了解目标基因的序列信息，适用于无序基因组的分析。
此外，AFLP技术还具有高度重复性和稳定性，能够产生可重复的结果。
在实际应用中，AFLP技术被广泛用于遗传多样性分析、亲缘关系研究、遗传图谱构建等方面。
例如，在植物遗传多样性研究中，AFLP 技术可以用于分析不同品种间的遗传差异，评估种质资源的多样性。
农艺学现代农业科技2019年第4期AFLP 在植物种质资源鉴定与遗传多样性分析中的应用王姗姗刘小娇靳玉龙白婷朱明霞王波张文会张玉红**基金项目 西藏百洽区自然基金(2016ZR-15-45)；西藏自洽区财政项0 (XZNKY-2018_C-007)。
作者简介王##(1990-),-¼.河北素县人，助理研究员，从事青棵品质分析与加工工作。
*通信作者收稿日期2018-10-23(西藏自治区农牧科学院农产品开发与食品科学研究所，西藏拉萨850000)摘要 AFLP 分子标记技术具有重复性好、稳定性强、灵敏度高、多态性好的特点，广泛用于遗传图谱构建、基因定位、辅助育种及种质资源鉴定和遗传多样性分析。
本文阐述了 AFLP 在粮油作物、蔬菜、水果、花卉及濒危作物种质资源鉴定和遗传多样性分析中的应用，以期 为育种及资源保护提供理论基础及技术支持。
关键词 AFLP ；种质资源；遗传多样性中图分类号 S32 文献标识码 A 文章编号1007-5739(2019)04-0026-02Application of AFLP in Identification and Genetic Diversity Analysis of Plant Germplasm Resource WANG Shan-shan LIU Xiao-jiao JIN Yu-long BAI Ting ZHU Ming-xia WANG Bo ZHANG Wen-huiZHANG Yu-hong *(Institute of Foog Science & Technology ,Tibet Academy of Agricultural and Animal Husbandry Sciences ,Lhasa Tibet 850000)Abstract Because of the better repeatability , stability , sensitivity and polymorphism , AFLP was widely used in genetic map construction , gene mapping,assisted breeding ,germplasm identification and genetic diversity analysis.This paper described the application of AFLP in the identification and genetic diversity analysis of plant germplasm resources , such as grain and oil crops , vegetables , fruits , flowers and endangered crops , in order to provide theoretical basis and technical support for breeding and resource conservation.Key words AFLP ； germplasm resource ； genetic diversityAFLP 分子标记技术是由荷兰科学家Zabeau 和Vos.Peter 创建发展的一种新的通过限制性内切酶片段的不同长 度检测DNA 多态性的一种DNA 分子标记技术［1|0AFLP 技 术结合了 RFLP 技术与RAPD 技术的特点，只需少量纯化的基因组DNA,不需了解基因组信息，便可对基因组DNA 进行限制性酶切和选择性扩增，并且具有重复性好、稳定性强、灵敏度高、多态性好、操作简便的特点，广泛用于遗传图 谱构建、基因定位、辅助育种及种质资源鉴定和遗传多样性分析。
木豆种质资源遗传多样性研究中的AFLP技术优化及引物筛
选
闫龙;关建平;宗绪晓
【期刊名称】《植物遗传资源学报》
【年(卷),期】2004(5)4
【摘要】以来自国际半干旱热带作物研究所 (ICRISAT)的 2份栽培木豆(Cajanuscajan)和 1份野生木豆 (Cajanusscarabaeoides)资源为试材 ,将AFLP技术体系在木豆资源研究上进行优化 ,并筛选出 2 0对多态性高的AFLP引物组合 ,推荐用于将来的木豆种质遗传多样性分析。
【总页数】4页(P342-345)
【关键词】木豆;AFLP技术;引物筛选;种质资源;遗传多样性分析;栽培;热带作物;野生;多态性
【作者】闫龙;关建平;宗绪晓
【作者单位】中国农业科学院作物品种资源研究所
【正文语种】中文
【中图分类】S793;S643
【相关文献】
1.核桃种质资源遗传多样性研究中的AFLP技术优化及引物筛选 [J], 王红霞;张志华;赵书岗;赵悦平;玄立春
2.卵形鲳鲹遗传多样性研究中AFLP技术优化及引物筛选 [J], 彭敏;陈晓汉;蒋伟明;陈秀荔;杨春玲;李咏梅
3.红麻种质资源遗传多样性和分子鉴定技术研究Ⅱ.红麻种质资源的遗传多样性和亲缘关系的AFLP分析 [J], 程舟;杨晓伶;卢宝荣;鲛岛一彦;陈家宽
4.梨种质资源遗传多样性研究中的AFLP技术引物筛选 [J], 鲁凤娟
5.马铃薯种质遗传多样性分析的AFLP反应体系优化与引物筛选 [J], 李芳弟;王舰;王芳;杨永智;周云;孙海宏;叶广继
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胡麻种质资源遗传多样性及亲缘关系的SRAP分析伊六喜;斯钦巴特尔;张辉;高凤云;赵小庆;侯建华【期刊名称】《西北植物学报》【年(卷),期】2017(037)010【摘要】In order to provide the foundation for flax conventional and molecular breeding,we explored the genetic diversity level of 161 flax germplasm resources from five different regions of the world,using SRAP molecular marker technology.The results showed that:(1) twenty pairs of SRAP primers produced 307 bands,of which 192 polymorphism,with the polymorphic rate of 62.54％,and 9.60 polymorphic loci for each pair of primers.The polymorphism information content (PIC) of each pair of primers ranged from 0.51～0.76,with an average of 0.61.(2) At the species level,effective number of alleles (Ne),Shannon's information index (Ⅰ),Nei's genetic similarity coefficient (H) were 1.582 0,1.521 1,and 0.3465,respectively;but at the population level,Ne=1.491 1,I =0.431 1,H =0.286 3,with the genetic diversity of northwestern Chinese population being the highest.(3) The order of the populations according to their diversity indices:population from the northwestern China ＞ population from the northern China ＞ American population ＞ Asian population ＞ European population.(4) The clustering analysis results showed that when the genetic similarity coefficient was 0.335 5 and 0.455 0,the 161 flax resources could be divided into two major categories and fivesubgroups,respectively,coinciding with the five different origins in the world.It can be seen from the study that flax cultivars from northwestern China showed the richest genetic diversity,suggesting that growing region was the main factor that had affected the genetic diversity of flax germplasms.There were relatively large distance of genetic relationship between the Chinese varieties and those from abroad.%利用SRAP分子标记,对国内外5个不同地区161份胡麻种质资源的遗传多样性及亲缘关系进行研究,为胡麻育种提供科学依据.结果表明:(1)20对引物扩增出307个条带,其中有192个多态性条带,多态比率为62.54％,平均每对引物组合有9.60个多态性位点,每对引物的多态性信息量(PIC)为0.51～0.76,平均为0.61.(2)有效等位基因数(Ne)、香浓信息指数(I)和Nei's遗传相似系数(H)在物种水平上分别为1.582 0、0.521 1和0.346 5,在群体水平上分别为1.491 1、0.431 1和0.286 3.(3)各群体遗传多样性指数表现为中国西北群体＞中国华北群体＞美洲群体＞亚洲群体＞欧洲群体.(4)聚类分析结果显示,在遗传相似系数为0.335 5处,将161份胡麻资源分为2大类;在0.455 0处,分为5个亚类,与国内外5个不同地区来源吻合.研究表明,中国西北地区胡麻品种(系)的遗传多样性最为丰富;地域是影响胡麻种质资源遗传多样性的主要因素;国内、外品种(系)间的遗传差异较大,表现出较远的亲缘关系.【总页数】10页(P1941-1950)【作者】伊六喜;斯钦巴特尔;张辉;高凤云;赵小庆;侯建华【作者单位】内蒙古农业大学农学院,呼和浩特010019;内蒙古农牧业科学院,呼和浩特010031;内蒙古农牧业科学院,呼和浩特010031;内蒙古农牧业科学院,呼和浩特010031;内蒙古农牧业科学院,呼和浩特010031;内蒙古农业大学农学院,呼和浩特010019【正文语种】中文【中图分类】Q346+.5;Q789【相关文献】1.武夷岩茶种质资源遗传多样性与亲缘关系的SRAP分析 [J], 夏法刚;衷兴旺;吴锋;季彪俊2.芥菜种质资源遗传多样性和亲缘关系的SRAP分析 [J], 李宁;司军;任雪松;宋洪元;李成琼3.基于SRAP和ISSR标记的薄荷种质资源遗传多样性及亲缘关系分析 [J], 王少铭;侯颖辉;罗莉斯;冷家归;李德文;;;;;4.基于SRAP标记的番木瓜种质资源遗传多样性及亲缘关系分析初报 [J], 张颖聪; 任鹏荣; 周常清; 罗金棠; 陈健5.基于SRAP的辣木种质资源遗传多样性和亲缘关系分析 [J], 林宗铿;张天翔;杨俊杰因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
药用灵芝遗传多样性的AFLP分析
郑林用;贾定洪;罗霞;杨志荣
【期刊名称】《中国中药杂志》
【年(卷),期】2007(32)17
【摘要】目的:分析不同药用灵芝栽培菌株的遗传差异,为灵芝道地性研究、种质资源鉴定、亲缘关系研究、品种选育和引种栽培提供分子生物学依据。
方法:以24个来源不同的灵芝及紫芝栽培菌株和野生菌株为材料,采用扩增酶切片断多态性AFLP 方法,用NTSYSpc 2.1软件进行UPGMA法聚类分析,构建遗传系统树。
结果:筛选14对引物,共扩增出177条多态性谱带。
聚类结果表明利用AFLP技术可将全部供试材料区分开。
结论:药用灵芝栽培菌株在分子水平上存在较大差异,并在相似系数0.676水平上聚为赤芝群和紫芝群。
【总页数】4页(P1733-1736)
【关键词】AFLP;灵芝;遗传多样性;聚类分析
【作者】郑林用;贾定洪;罗霞;杨志荣
【作者单位】四川大学生命科学院;四川省农业科学院土壤肥料研究所
【正文语种】中文
【中图分类】S567
【相关文献】
1.南繁区稻瘟病菌遗传多样性和群体遗传结构的AFLP分析 [J], 朱名海;皮磊;舒灿伟;周而勋
2.红麻种质资源遗传多样性和分子鉴定技术研究Ⅱ.红麻种质资源的遗传多样性和亲缘关系的AFLP分析 [J], 程舟;杨晓伶;卢宝荣;鲛岛一彦;陈家宽
3.荧光AFLP和拮抗实验对灵芝菌遗传多样性研究 [J], 潘丽晶;沈汉国;陈继敏;张妙彬;蔡晓平
4.金花茶遗传多样性和遗传结构AFLP分析 [J], 李辛雷;王洁;殷恒福;范正琪;李纪元
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种质资源分析中RFLPRAPDAFLPSSR的比较研究种质资源分析是研究物种的遗传多样性和亲缘关系的重要手段之一、其中，RFLP (Restriction Fragment Length Polymorphism)、RAPD (Random Amplified Polymorphic DNA)、AFLP (Amplified Fragment Length Polymorphism) 和SSR (Simple Sequence Repeat) 是四种常用的分子标记技术。
以下是对这四种技术的比较研究详解：1.RFLP：RFLP技术是一种早期的分子标记技术，通过检测DNA的限制性内切酶切割产生的DNA片段的长度差异，从而分析基因座的多态性。
RFLP技术具有高度的稳定性和可重复性，适用于分析DNA序列中的比较大的多态性位点。
然而，该技术由于耗时、耗费精力和使用的放射性同位素等缺点，已逐渐被其他技术所取代。
2.RAPD：RAPD技术是一种基于随机引物扩增多态DNA片段的技术。
其原理是随机应变的引物与目标DNA中的功构象区结合，经为引物扩增产物进行电泳分离后，通过比较DNA带型的差异来分析物种间的遗传关系。
RAPD技术具有快速、简单和经济的优点，但因为扩增产物的非特异性和多态性，其结果存在一定的误差和不可重复性。
3.AFLP：AFLP技术是一种基于PCR扩增的多态性位点标记方法。
它在RAPD的基础上引入了限制性内切酶切割，因此具有较高的清晰度和可重复性。
AFLP技术在物种间遗传多样性和亲缘关系研究中广泛应用，特别适用于对有限数量的DNA样本进行分析。
4.SSR：SSR技术是一种基于PCR扩增的微卫星位点标记方法，也被称为简单重复序列标记。
它通过特异性引物扩增不同物种DNA中的高度可变区域，然后利用电泳分离进行检测。
SSR技术具有高度多态性、遗传稳定性和高度重复性等优点，被广泛应用于种质资源分析和分子育种。
aflp技术在林木遗传改良中的应用
AFLP技术是一种高效的分子标记技术，已经被广泛应用于林木遗传改良中。
该技术可以用于研究林木的遗传多样性、亲缘关系、基因定位和基因组分析等方面。
在林木遗传改良中，AFLP技术可以用于筛选优良基因型和优良基因，以提高林木的生长速度、抗病性、适应性和木材品质等性状。
通过AFLP技术，可以对不同基因型的林木进行基因组分析，找到与目标性状相关的基因，从而实现精准育种。
AFLP技术的应用还可以帮助林木遗传资源的保护和利用。
通过对不同地区、不同种群的林木进行AFLP分析，可以了解它们的遗传多样性和亲缘关系，为保护和利用这些遗传资源提供科学依据。
AFLP技术还可以用于林木的品种鉴定和种质资源的管理。
通过对不同品种的林木进行AFLP分析，可以鉴定它们的遗传差异和亲缘关系，为品种鉴定和种质资源管理提供科学依据。
AFLP技术在林木遗传改良中的应用具有广泛的前景和重要的意义。
它可以帮助我们更好地了解林木的遗传特征和基因组结构，为林木遗传改良提供科学依据和技术支持。
作物学报 ACTA AGRONOMICA SINICA 2011, 37(4): 635 640/zwxb/ISSN 0496-3490; CODEN TSHPA9E-mail: xbzw@本研究由黑龙江省博士后留省工作启动基金(LBH-Q05035)资助。
作者联系方式: E-mail: liming@Received(收稿日期): 2010-07-21 Accepted(接受日期): 2010-11-26.DOI: 10.3724/SP.J.1006.2011.00635亚麻种质资源遗传多样性与亲缘关系的AFLP 分析李 明东北农业大学农学院, 黑龙江哈尔滨150030摘 要: 选取18个中国品种和67份来自世界各地的亚麻材料(包括油用亚麻、农家种和野生种), 采用7对引物通过扩增片段长度多态性(AFLP)分子标记分析, 获得168个具有多态性位点, 平均每对引物可扩增出24条带。
利用NTSYS 2.1采用非加权配对算术平均法(UPGMA)聚类分析, 计算遗传距离和构建遗传系统进化树。
结果显示, 85份材料在遗传相似系数0.53处分为4类, 可以将栽培种和3个野生种区分开来; 在遗传相似系数0.67处可以将纤维亚麻划为1类, 而绝大多数油用亚麻分成4类, 油用亚麻的遗传多样性远高于纤维亚麻; 国产纤维亚麻中黑字号品种相似度极高, 遗传背景狭窄, 而双字号品种多样性稍好。
还证明Linum bienne 与亚麻栽培种(Linum usitatissimum L.)关系密切, 并支持纤维亚麻来自油用亚麻的假说。
关键词: 亚麻种质资源; 遗传多样性; 亲缘关系; AFLPGenetic Diversity and Relationship of Flax Germplasm as Revealed by AFLP AnalysisLI MingFlax Laboratory of Northeast Agricultural University, Harbin 150030, ChinaAbstract: Flax (linum usitatissimum ) is one of the major fibre and oil yielding crops. AFLP is very useful molecular marker for a number of plant species. To reveal the genetic diversity and find ways to broaden the genetic background of Chinese fibre flax varieties, we analyzed 18 Chinese fibre flax cultivars and other 67 accessions (including linseed, landrace and wild species) from different countries in the world by using AFLP marker. In total, 168 polymorphic alleles were detected with seven pairs of AFLP primer. For each pair of primer, 24 alleles on the average was detected in all accessions. Unweighted pair-group method with arithmetical averages (UPGMA) cluster analysis was used to estimate the genetic distances and to construct a dendrogram by NTSYS 2.1. The results showed that all 85 accessions were classified into four groups at 0.53 of similarity coefficient, which dis-tinguish the varieties of flax (Linum usitatissimum ) from three wild flax species. All varieties of flax were classified into five sub-groups (all fibre flax accessions were in one sub-group and the most of linseed accessions divided into other four sub-groups) at 0.67, indicating linseed possessed genetic basis broader than the fibre flax. In Chinese fibre flax varieties, Heiya cultivars had high genetic similarity, and its genetic basis was narrower than that of Shuangya variety. The results also showed that there were close relationship between Linum bienne and Linum usitatissinum , and sustained the hypothesis that fibre flax has evolved from linseed.Keywords: Flax germplasm; Genetic diversity; Relationship; AFLP marker亚麻(Linum usitatissimum L.)是世界主要韧皮纤维作物和油料作物之一, 中国是世界主要纤维亚麻生产国, 连续多年纤维亚麻收获面积占世界第一[1], 但是中国纤维亚麻规模生产仅70多年, 通过杂交培育亚麻品种的历史不过50年。
黑龙江省是我国纤维亚麻的主产区, 曾占国内生产的90%, 先后培育了20多个品种(代表中国纤维亚麻育种水平), 尚不能满足亚麻生产的要求, 生产上仍广泛使用国外品种。
品种资源是作物育种的基础材料, 选择正确的亲本是获得新品种的必然途径。
过去主要通过农艺性状差异和品种系谱资料来筛选适宜的亲本, 如果某个性状表现不直观, 或者品种系谱资料缺乏(中国过去许多引进材料就是如此), 就会影响育种的效率和效果, 在收集的材料中消除冗余的种质不仅有利636作物学报第37卷于基因库管理效率, 更是提高育种效率的重要前提条件[2]。
自Grodzicker等[3]提出DNA限制性片段长度多态性(RFLP标记)可以成为一种遗传标记以来, 由于分子标记能够直接反映出DNA分子在序列上的遗传多样性, 目前被认为是最准确和应用最广泛的一种标记方法。
随着分子技术的发展, 一系列分子标记用于亚麻的品种资源、遗传多样性和进化研究, 包括RFLP[4]、RAPD[5-6]、ISSR[7]、AFLP[2]、SRAP[8]等, 目前正在探索亚麻SSR的应用[9-11]。
国内已报道了利用RAPD或ISSR对油用亚麻品种资源[12]、引进品种资源[13]和多胚材料[14]的分类研究, 但尚未见到从分子标记角度讨论中国纤维亚麻品种遗传多样性的报道, 本研究将有利于了解国产纤维亚麻遗传多样性特点, 为今后选择亲本和拓宽遗传背景提供参考。
1材料与方法1.1试验材料选用中国培育的18个纤维亚麻品种, 欧洲的9个品种以及加拿大植物基因资源中心(PGRC)收集的49份来自世界各地的纤维、油用、兼用亚麻材料、6个农家种(landrace)和3个野生种(表1)。
由于参照PGRC亚麻核心种质资源(特别是其中的纤维亚麻)以及欧洲亚麻资源分类的代表性品种[15], 所选的国外栽培种材料具有很好的代表性。
1.2样品采集与制备2006年在加拿大农业部萨斯卡通(Sasktoon)研究中心温室内种植每份材料各10~15粒, 生长4~5周后取幼嫩分枝, 速冻于–80℃低温冰箱中, 而后用冻干仪干燥4~5 d。
取每份样品干样20 mg放入effendrof管并加玻璃球3个, 利用振荡仪将样品粉碎, 用于DNA提取。
1.3DNA的提取和AFLP方法采用DNeasy Plant Mini Kit (Qiagen Inc., Mis-sissauga, ON, Canada)提取DNA, 利用荧光法(Bio-Tek Instruments FLX-800荧光仪, KCjunior软件)将提取的DNA定量, 并稀释到25 ng μL–1备用。
按照Vos等[16]介绍的方法, 利用AFLPTM Analysis System 1 (Life Technologies, Burlington, ON, Canada)进行AFLP分析。
7个Eco R I∶Mse I引物对(E-AAG∶M-CAC; E-ACT∶M-CGC; E-AGG∶M-CAC; E-AGG∶M-CGC; E-AGG∶M-CTC; E-AC∶M-CA; E-AG∶M-CT)用于本研究。
1.4统计分析将亚麻基因型谱带分析的电泳结果按照有带记为“1”, 无带记为“0”变成数据形式统计90~650 bp谱带。
将原始数据输入NTSYSpc2.1软件, 进行数据标准化, 用其中的Qualitative Data程序计算简单匹配系数, 并获得矩阵, 用SAHN程序和UPGMA方法进行聚类分析, 并通过Treeplot模块生成聚类图。
2结果与分析以7个随机引物获得276条带, 其中168个位点具有多态性, 多态率为60.9%。
平均每个引物可扩增出24条多态带, 其中最少的8条, 最多的43条。
后2对引物少1个碱基, 其获得的多态性位点更多, 效果更好。
通过NTSYS软件建立聚类图(图1), 根据材料间的相似度进行分类, 其中栽培种分成5个类群(A和B1~B4), A类又可进一步细分成5组。
2.1中国纤维亚麻与国外品种的遗传关系黑亚系列品种(除H13外)首先聚成一类(A1-1), H13与双亚1号(S1)聚在一起(A1-3), 反映黑亚系列品种的遗传同源性较大, 差异性较小。
而双亚系列品种相对于前者遗传背景较宽, 其中S1在A1-3, S3在A1-4, S7和S8在A3, S5和S6在A5-1, 分布分散。
