微免实验知识点整理(xyt)
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1.免疫:是指机体识别自我与非己,对非己抗原发生清除、排斥反应,以维持机体内环境平衡与稳定的生理功能。
2.免疫包括抗感染免疫即免疫防御功能、抗肿瘤免疫即免疫监视功能、自身稳定即免疫稳定功能3.抗原:指诱导机体免疫系统使之产生特异性免疫应答并能与相应免疫应答产物在体内或体外发生特异性结合的物质,亦称免疫原。
4.决定免疫原性的条件:异物性、大分子量、一定的化学组成、一定的分子结构5.胸腺依赖抗原(TD-Ag):该类抗原需在巨噬细胞的参与和T细胞的辅助下才能激活B细胞产生抗体。
其特点是分子量大,表面决定族种类多,但每种决定族数量有限。
6. .胸腺非依赖抗原(TI-Ag):该类抗原激活B细胞产生抗体无需TH细胞辅助。
其特点是带有重复出现的同一抗原决定族,在体内降解缓慢,但无T细胞决定族,故不能激活TH细胞。
7.免疫球蛋白:是指具有抗体活性的或化学结构与抗体相似的球蛋白。
8.免疫球蛋白的功能:1.VL和VH区是抗原决定族的结合部位;2.CL和CH1是各类、型及亚型Ig遗传标记所在部位;3.CH2有补体Clq结合点,与补体活化有关。
母体的IgG借助CH2可主动通过胎盘传递给胎儿发挥被动免疫作用;4.CH3是与表达IgGFc受体的各种免疫细胞结合的部位起促进吞噬的免疫调理作用和发挥抗体依赖的细胞介导细胞毒作用。
9.免疫球蛋白的水解片段:2个Fab段和1个可结晶片段。
10.IgG在血清中含量最高,约占血清总量的75%-80%,是唯一能通过胎盘的抗体,具有抗菌、抗病毒、中和毒素和免疫调理作用。
SigA在局部抗感染免疫中起重要作用。
IgD是B 细胞的重要表面标志。
11.单克隆抗体:即由单一B细胞克隆或其杂交瘤细胞克隆产生的抗体,只针对某一特定的抗原决定族,且纯度很高。
12.补体:是存在于人和脊椎动物血清与组织液中的一组与免疫相关的活化后具有酶活性的蛋白质。
13.CD抗原:免疫细胞表面抗原的表达常与分化发育有关,即在不同发育阶段和不同的功能分化状态有不同的表面抗原表达。
微免實驗
*革兰氏染色法的實驗步驟
标本固定→结晶紫初染→碘液媒染→乙醇脱色→稀释复红复染
*抗酸染色的實驗步驟
•石炭酸复红加入涂片
•间隙加热5分钟,勿持续加热
•冷却5分钟
•水洗
•盐酸酒精脱色30S,轻轻晃动玻片
重复脱色一次至涂片无色
•水洗
•加入吕氏美兰复染1分钟
•水洗
•吸干,观察
*免疫标记技术常用的标记物有哪些
酶、荧光素、放射性同位素、電子致密物質、胶体金等
*病毒培养有哪些方法
•细胞培养
•动物接种法
•病毒鸡胚接种培养法
*糖发酵试验
产酸产气—以㊉表示;指示剂变色,小倒管内有气泡
产酸—以+表示;指示剂变色
不能分解—以-表示;指示剂不变色
☞指示剂为酚红
*尿素酶试验
红色为阳性;不变色为阴性
*Elisa
中文:酶聯免疫吸附試驗
原理:是一種抗原抗體的免疫反應和酶的催化作用相結合的方法
Elis a雙抗體夾心法:HCG檢測
HCG檢測結果:藍色是陽性(為懷孕婦女)
*對流免疫電泳
1.+正極
2.-負極
3.Ab抗體(在+正極處) 1 2
4.Ag抗原(在-負極處)
5.有沉澱線表示阳性(4→1,3→2)。
免疫学1.免疫:指机体免疫系统识别自身与异己抗原,并通过免疫应答排除抗原性异物,以维持机体生理平衡的功能。
2.抗原:是指一类能刺激机体免疫系统产生特异性免疫应答,并能与相应的免疫效应产物(抗体和致敏淋巴细胞)在体外发生特异性结合的物质。
抗原的基本特性:1、免疫原性2、抗原性完全抗原(有免疫原性和抗原性)=半抗原(有抗原性,无免疫原性)+蛋白质载体3.抗原的异物性和特异性异物性:抗体与机体自身正常组织成分间的差异性特异性:是指抗原诱导免疫应答的特异性以及与应答产物结合发生反应的专一性抗原表位(抗原决定簇):抗原分子中决定抗原特异性的特殊化学基团。
是与TCR/BCR及抗体结合的基本单位。
抗原表位的类型:线性表位;构象表位交叉反应-不同抗原具有共同抗原决定簇4、决定抗原免疫原性的条件:(1)异物性(2)抗原分子的理化形状(3)完整性(非消化道途径进入人体,防止破坏抗原表位和载体)(4)宿主方面的因素(遗传因素;年龄、性别与健康状态)抗原进入机体的方式的影响(剂量、途径、次数、佐剂)5、抗原的种类①根据产生抗体是否需Th细胞辅助分:②根据抗原与机体的亲缘关系分:异嗜性抗原:是指一类存在于不同种属之间的共同抗原。
异种抗原(病原微生物及其产物、动物免疫血清)同种异型抗原(同一种属不同个体之间所存在的抗原,如HLA、血型抗原)自身抗原(免疫隔离部位抗原的释放、改变或修饰的自身组织细胞)③根据抗原是否在抗原提呈细胞内合成分为:内源性抗原:与MHC-Ⅰ类分子结合成复合物,被CD8+T细胞识别外源性抗原:与MHC-Ⅱ类分子结合成复合物,被CD4+T细胞识别超抗原:是一类由细菌外毒素和逆转录病毒蛋白构成的抗原性物质,该类抗原能与多数T细胞结合并为T细胞活化提供信号,极微量抗原可活化多克隆T细胞,产生极强的刺激效果,故称为超抗原。
佐剂:当其与抗原一起注射或预先注入机体时,可增强机体对抗原的免疫应答或改变免疫应答类型的非特异性免疫增强剂。
第一单元微生物的基本概念微生物一个字小而简单。
1.非细胞型微生物:病毒(活的)。
2.原核细胞型微生物:细菌(原始)。
3.真核细胞型微生物:真菌(真性)。
第二单元细菌的形态与结构细菌的基本结构:细胞壁:肽聚糖由聚糖支架与四肽侧链及五肽交联桥共同构成。
功能:维持菌体固有形态。
革阴有外膜,脂多糖是革阴细菌内毒素主要成分。
溶菌酶:切断聚糖支架的β-1,4糖苷键,抑制细菌细胞壁的合成。
青霉素:切断四肽侧链与五肽交联桥之间的连接,抑制细菌细胞壁的合成。
质粒:是细菌染色体外的遗传物质。
质粒非细菌生命活动所必须。
细菌染色体是生命所必须的。
(1)F质粒:编码细菌性菌毛(2)R质粒:控制细菌耐药性。
细菌的特殊结构:1.荚膜:抗吞噬。
2.鞭毛:运动。
3.芽胞:增强细菌抵抗外界不良环境的能力。
是灭菌效果的指征。
4.菌毛:普通菌毛:粘附作用。
性菌毛:遗传物质的传递,由F质粒表达。
初染:结晶紫染液;媒染:卢戈氏碘液;脱色:95% 的乙醇;复染:稀释复红液。
(革阴菌的细胞壁肽聚糖薄而且外面有酒精可以溶解的脂溶性的外膜,革阴成了无色,最后用红色染。
)第三单元细菌的生理细菌生长繁殖的条件:大多数细菌的最适pH为pH7.2~7.6。
结核杆菌pH6.6~6.8,霍乱弧菌pH8.8~9.0。
繁殖方式:二分裂方式进行无性繁殖。
细菌的分解和合成代谢:1.热原质:细菌在代谢过程中产生的一种物质,注入人或动物体内可引起发热反应。
细菌内外毒素的区别:革阴脂多耐热,全身裂解无抗原。
细菌的分解代谢试验:1.糖发酵试验:乳糖发酵试验常用于鉴别肠道致病菌与非致病菌。
2.大肠杆菌IMViC试验结果为:++――,产气杆菌为――++。
细菌的人工培养:菌落:由单个细菌在固体培养基中生长繁殖,形成的肉眼可见的细菌集团。
第四单元消毒与灭菌消毒保留芽孢。
紫外线:260~270nm,最佳波长为265~266nm。
杀菌机理:使同一条DNA链上相邻的两个嘧啶碱基共价结合而形成嘧啶二聚体,干扰细菌DNA的复制与转录,导致细菌死噬菌体的生物学特性:感染细菌的病毒,DNA或RNA。
微⑩免一、名词解释1、免疫:是指机体识别“自己”和“非己”的抗原,对自身抗原形成天然免疫耐受,对非己抗原发生排斥作用的一种生理功能。
机体识别和清除抗原性异物的一种生理功能,维护自身生理平衡和稳定性。
2、固有免疫:又称先天性免疫,是生物体在长期种系发育和进化过程中逐渐形成的非严格选择针对性的防御功能,固有免疫通常被视为机体免疫防御的外层防线。
3、适应性免疫:又称特异性免疫或获得性免疫,是机体与抗原接触后获得的有针对性的防御功能。
4、免疫防御:是指机体防止外来病原体的入侵及清除已侵入病原体(细菌、病毒等病原微生物)及其他有害物质(如细菌外毒素等)的能力,或称抗感染免疫。
5、免疫自稳:是指机体识别和清除自身衰老、损伤的组织和细胞的能力,也是调节免疫应答过程中各效应作用适度与相互平衡的能力。
6、免疫监视:是指机体杀伤和清除体内异常突变细胞和病毒感染细胞的能力。
7、免疫细胞激活物:早期仅指特异性激活T、B淋巴细胞的物质——抗原,之后将非特异性激活T、B淋巴细胞的超抗原,有丝分裂原以及固有免疫应答的激活物质——分子模式。
8、完全抗原:凡能独立诱导免疫细胞增殖、活化,产生免疫效应物质的抗原称为完全抗原。
9、半抗原:不能单独激活B细胞产生抗体的抗原称为半抗原。
10、抗原决定簇:是与抗原受体/抗体形成空间互补的一段分子序列。
11、免疫原性:含有抗原表位的所谓生物大分子,对T、B细胞的激活效率被称为免疫原性。
12、交叉反应:虽然一种表位决定一种抗原特异性,但有时也会出现某些抗体不仅与其诱生抗原发生特异性结合,也可与非诱生抗原发生特异性结合的现象。
13、超抗原:是一类用极少量能活化大量T细胞或B细胞,并诱导强烈免疫应答的抗原物质。
14、佐剂:与抗原同时或预先注入机体,增强机体对该抗原的特异性免疫应答或改变免疫应答类型,此类物质称为佐剂。
15、免疫球蛋白:具有抗体活性或化学结构与抗体形似的球蛋白。
16、抗体:介导体液免疫的重要效应分子,是B细胞接受抗原刺激后增值分化为浆细胞,其所分泌的的免疫球蛋白。
微免复习概要1.什么叫免疫,免疫有几大功能?免疫其原意为免除瘟疫——现代免疫的概念是指机体免疫系统识别与排除抗原性异物的一种功能。
免疫三大功能:1.免疫防御,过高超敏反应,过低免疫缺陷病。
2.免疫稳定,失调出现自身免疫病。
3.免疫监视,监视功能底下,易患恶性肿瘤。
2.免疫球蛋白质有哪些类型,各自有何特点及功能?免疫球蛋白有两种类型;1.分泌型SIg,2.膜型。
前者主要存在于血清等液体当中,发挥免疫功能。
后者存在B细胞膜上,既B细胞表面抗原受体BCR。
3.简述抗体产生的一般规律?抗体是B细胞识别抗原后活化,增殖分化为浆细胞,由浆细胞合成和分泌的能和相应抗原发生特异性结合的球蛋白。
1、初次应答:抗体产生慢,血中浓度低,亲和力低,在体内维持时间短。
2、再次应答:潜伏期短,血中浓度升高快,亲和力强,维持时间长。
两种应答。
4.主动免疫与被动免疫的主要区别?1.主动免疫也叫获得性免疫是指人通过主动有选择性地接种疫苗而获得的对外界有记忆的特异性的免疫,主要由淋巴细胞介导(T,B细胞等)。
2.被动免疫也叫先天性免疫,是指与生俱来的,不需要任何干预就有的对外界无记忆的非特异性免疫,主要由非淋巴细胞的其他免疫细胞介导(主要有树突状细胞,巨噬细胞,粒细胞等)。
5.什么叫抗原,抗原哪些特性,决定抗原免疫原性决定因素是什么?抗原:(antigen,缩写Ag)是指能刺激机体免疫系统产生特异性免疫应答,并能与相应的免疫应答产物(抗体或效应淋巴细胞)在体内或体外发生特异性结合的物质。
特性:有两种,1.免疫原性:是指抗原刺激机体特定的免疫细胞进行活化,增殖,分化,产生免疫效应物质(抗体或效应淋巴细胞)的特性。
2.抗原性:也称免疫反应性,是指抗原与其诱生的抗体或效应淋巴细胞特异性结合,产生免疫反应的特性。
决定抗原免疫原性决定因素是:主要取决于3个方面的因素:1.抗原的性质。
2.宿主自身的反应性。
3.免疫方式。
6.人类B细胞分化成熟的场所是?骨髓7.人类T细胞分化成熟的场所是?胸腺8.什么叫超敏反应?超敏反应:是指机体对某些抗原初次应答后,再次接受相同抗原刺激时,发生的一种以机体生理功能紊乱或组织细胞损伤为主的特异性免疫应答。
1. 霍乱症状致病物质1.鞭毛,菌毛2.霍乱肠毒素致病机理A亚单位(毒性亚单位):激活Gs,使细胞内cAMP水平升高,主动分泌Na+、K+、HCO3—和水,导致重的腹泻与呕吐B亚单位(结合亚单位): 与小肠粘膜上皮细胞GM1神经节苷脂受体结合,介导A亚单位进入细胞临床表现 1.泻吐期:多数以剧烈腹泻开始,继以呕吐(米泔水样腹泻物)。
2.脱水虚脱期:泻吐期严重泻吐引起水和电解质丧失,可出现脱水和周围循环衰竭。
3.反应期及恢复期:少数病人可有发热性反应,几天后自行消退。
传播途径主要是通过污染的水源或食物经口摄入传染源病人、无症状感染者防治原则“三管一灭”控制传染源、切断传播途径、提高易感者免疫力、严格进行疫点疫区处理。
治疗原则1、补充液体和电解质2、使用抗生素清除细菌,减少外毒素的产生2.STD 性传播疾病淋病奈瑟菌淋菌性尿道炎(淋病)淋病奈瑟菌性结膜炎沙眼衣原体1. 沙眼生物亚种①沙眼②包涵体结膜炎③泌尿生殖道感染:非淋菌性尿道炎(NGU)2.性病淋巴肉芽肿亚种性病淋巴肉芽肿梅毒螺旋体(学名:苍白密螺旋体苍白亚种)梅毒HBV(乙肝病毒)急、慢性乙肝重症肝炎肝硬化肝癌HSV-2(单纯疱疹病毒)生殖器疱疹HIV AIDS这两个看看吧:溶脲脲原体非淋菌性尿道炎(NGU)人乳头瘤病毒(HPV)生殖道尖锐湿疣3.破伤风的治病条件、作用机理、防治原则治病条件:破伤风梭菌由伤口侵入人体,其感染的重要条件是局部形成厌氧微环境:伤口窄而深,有泥土或异物感染;组织坏死、缺血、缺氧等。
无侵袭力,仅在局部感染,治病依赖其产生的外毒素。
致病物质及机理:产生破伤风痉挛毒素与破伤风溶血毒素两种外毒素。
其中破伤风痉挛毒素属于神经毒素,可逆行至中枢神经系统,对脊髓前角神经细胞和脑干神经细胞有高度亲和力,是引起破伤风的主要治病物质。
化学本质是蛋白质,不耐热。
细菌在局部繁殖生长,产生破伤风痉挛毒素,通过血液、淋巴或者延神经末梢逆行,到达脊髓前角、脑干,阻止抑制性神经介质的释放,屈肌和伸肌同时强烈收缩,角弓反张、牙关紧闭。
微生物:存在于自然界的一大群形体微小、结构简单、数量繁多,肉眼看不见,必须借助显微镜放大数百倍甚至上万倍,才能观察到的微小生物。
质粒:是细菌染色体外的遗传物质,存在于细胞质中。
消毒:指杀灭物体上病原微生物的方法。
灭菌:指杀灭物体上所有微生物和非病原微生物,细菌的繁殖体和芽孢的方法。
防腐:指防止或抑制微生物生长繁殖的方法。
无菌:指物体中没有任何活动的微生物存在。
无菌操作:防止微生物进入人体或其他物品上的操作方法。
噬菌体:是寄生在细菌、放线菌、支原体、真菌和螺旋体等微生物细胞中的病毒。
细菌的毒力:是指细菌致病的物质基础,主要包括侵袭力和毒素。
毒血症:致病菌侵入宿主后,旨在机体局部生长繁殖,病原菌不进入血循环,产生的外毒素入血。
菌血症:致病菌由局部侵入血流,但未在血流中生长繁殖,只是短暂通过血循环到达体内适宜部位后再进行繁殖而致病。
败血症:致病菌侵入血流后,在血中大量繁殖并产生毒性产物,引起严重的全身性中毒症状,如高热、皮肤和黏膜瘀斑、脾肿大等。
浓毒血症:指化脓性病菌侵入血流后,在血中大量繁殖,并通过血流扩散至宿主的其他组织或器官,产生新的化脓性病灶。
内毒素血症:革兰阴性菌侵入血流,并在其中大量繁殖,崩解后释放出大量的内毒素;也可由病灶内大量的革兰阴性菌死亡,释放的内毒素入血所致。
病毒:是一类体积微小,结构简单,基因组仅含一种类型的核酸,只在活细胞内寄生,以复制方式进行增殖的非细胞型微生物。
干扰素:抗体受病毒或干扰素诱发剂作用后有感染细胞等多种细胞所产生的能抑制病毒复制的小分子蛋白。
细菌感染:细菌侵入宿主机体内生长增殖,与宿主相互作用导致宿主出现不同程度的病理过程。
菌落:固体培养基中单个细菌生长后形成的细菌集团。
噬菌体:是寄生在细菌.放线菌.支原体.真菌和螺旋菌等微生物细胞中的病毒。
免疫:是机体识别和清除抗原性物质的一种生理功能包括对病原微生物及其毒性产物的识别和清除。
抗原:是一类能刺激机体免疫系统使之产生特异性免疫应答并能与相应免疫应答产物在体内或体外发生特异性结合的物质。
人血涂片(Giemsa染色)(红色箭头示白细胞,兰色箭头示红细胞)E玫瑰花环实验1、小吞噬细胞:即中性粒细胞。
胞内富含溶酶体酶等杀菌物质,是血液中数量最多、具有吞噬功能的细胞。
可随血流迅速动员至感染部位,在机体抗感染中发挥重要作用。
吞噬化脓球菌等。
革兰染色呈红色。
圆,体积小于单核细胞。
核呈分叶状,2、3叶居多。
2、大吞噬细胞:单核巨噬细胞。
包括大单核细胞和巨噬细胞。
吞噬病原体、凋亡的细胞和异物。
革兰染色呈蓝色。
圆,体积大,核偏大偏向一侧。
3、吞噬百分率:计数100个中性粒细胞中具有吞噬作用的细胞数。
即为吞噬百分率。
吞噬指数:观察100个中性粒细胞,计算被吞噬的细菌的总数,求平均每个中性粒细胞吞噬的细菌数即为吞噬指数。
4、淋巴细胞转化实验 原理:淋巴细胞在体外培养时,受到刺激物的刺激后可表现为体积增大、代谢物旺盛、蛋白质和核酸合成增加,即向淋巴母细胞转化和增殖。
此现象称为淋巴细胞的转化现象。
分型:小淋巴细胞、过渡型、淋巴母细胞、染色体型 意义:淋巴细胞转化率的高低可以反映机体的免疫水平,因此可作为测定机体细胞免疫状态的指标之一。
E 花环形成实验 原理:T 细胞表面有绵羊红细胞的受体,可在自然情况下于绵羊红细胞结合,形成E 玫瑰花环。
结果判定:淋巴细胞呈蓝紫色或淡蓝色,绵羊红细胞不着色,凡结合3个绵羊红细胞或以上者为E 花环形成细胞即是阳行反应。
计数200个淋巴细胞,求出E 花环形成率(%)。
意义:根据花环形成的多少,可测知T 细胞的数目,从而间接了解机体细胞免疫功能状态。
硫化氢试验硫化氢遇铅盐或铁盐形成黑色硫化铅或硫化亚铁沉淀物。
吲哚(靛基质)试验有些细菌分解色氨酸生成吲哚(靛基质),与加入的二甲基氨基苯甲醛反应生成玫瑰吲哚呈玫瑰红色为阳性;黄色为阴性。
尿素酶试验有些细菌具有尿素酶,能分解尿素形成大量的氨,使培养基PH上升,而变成碱性,使含有酚红指示剂的培养基呈红色为阳性;不变色为阴性。
液体培养基沉淀生长 混浊生长 表面生长半固体培养基 有鞭毛细菌 混浊生长 无鞭毛细菌 线状生长细菌的生化反应:糖发酵(产气为阳性) 吲哚试验(上层变红为阳性)尿素试验(变红为阳性,指示剂是酚红)硫化氢(黑为阳性)衣氏放线菌的S-R转变葡萄球菌G+链球菌G+肺炎链球菌G+淋病奈瑟氏菌G-金黄色葡萄球菌普平板金黄色葡萄球菌血平板链球菌G +营养要求较高,需补充血液、血清、葡萄糖等。
微免实验考试整理红色:填空黄色:重点(一)实验一步骤:1、洗手→消毒→扎手指(一针见血)2、一滴抗凝剂→双凹片→1滴血,用针混匀3、点酒精灯→接种环烧3次→取3~4环菌液→加入血中用接种环混匀→温育(37度)30分钟→推片(慢、厚)自然干燥4、加瑞氏染液2滴20秒→加缓冲液4滴(染液与缓冲液比为1:2)→混匀→染色10分钟→冲洗→吸干→油镜观察示教片:①大吞噬现象要认识“巨噬细胞”②小吞噬现象主要认识“中性粒细胞”(马蹄状形)吞噬功能的测定计数方法:吞噬百分率:计数100个中性粒细胞中具有吞噬作用的细胞数,即为吞噬百分率。
吞噬指数:观察100个中性粒细胞,计数被吞噬的细菌总数,求平均每个中性粒细胞吞噬的细菌数即为吞噬指数。
①淋巴细胞转化试验(原理、分型、意义)图片原理:T淋巴细胞可以在分裂剂的刺激下,向母细胞转化。
促分裂剂能选择性地激发T淋巴细胞合成DNA与细胞分裂。
转化百分率正常值为70%左右分裂相:即染色体型母细胞:较小淋巴细胞大4-5倍;核质疏松呈网状结构,有1-3个核仁;核周透明区;胞浆嗜碱性,有空泡过渡型:较小淋巴细胞略大;核质略疏松;着色较淡小淋巴细胞:核质致密;着色深;胞浆少意义:体外淋巴细胞转化反应,可为测定机体细胞免疫状态的指标之一。
②E玫瑰花环实验(原理、判定结果、意义)图片1、原理和意义:T细胞表面有绵羊红细胞受体,可在自然情况下与绵羊红细胞结合,形成E玫瑰花环,由此可区分T淋巴细胞与B淋巴细胞判定结果:凡是淋巴细胞周围围绕4个以上绵羊红细胞者为阳性E花环形式率=E阳性细胞/(E阴性淋巴细胞+E阳性细胞)x100%正常值40~70%(二)实验二血清学反应概念、特点、影响因素、分类1、基础:抗原决定簇——抗体的互补决定区2、特点:特异性、可逆性、比例性、阶段性3、抗原抗体反应因素:电解质、温度、酸碱度4、凝集反应、沉淀反应、免疫标记技术I 凝集反应:(原理、种类)凝集效价:概念:抗原+ 抗体= 凝集团块(1)直接凝集:颗粒性抗原+ 抗体= 凝集团块分为玻片凝集反应、试管凝集反应(2)间接凝集:可溶性抗原包被于载体+ 抗体= 凝集团块根据载体种类不同,分别称为间接血凝、间接乳凝、间接炭凝(3)反向间接凝集:抗体包被于载体+ 抗原 = 凝集团块(4)协同凝集:抗体结合金葡菌SPA + 抗原= 凝集团块II 沉淀反应:(原理、四种类型特点)概念:可溶性抗原与相应抗体在适当情况下(有适量电解质存在、抗原抗体二者比例适当)可形成肉眼可见的沉淀物或者沉淀线,称为沉淀反应。
可溶性抗原+ 抗体= 沉淀物①单向琼脂扩散单向琼脂扩散试验是一种定量试验。
将一定量已知抗体混于琼脂中,制板,在适当位置打孔,将抗原加入孔中扩散,与板中抗体相遇,在比例合适处呈现白色沉淀环,环的直径与抗原含量成正比。
意义:主要用于测定血清中各种Ig和补体成分的含量②双向琼脂扩散:定性试验,在琼脂板上打孔,把抗原和抗体分别加到相应孔中,二者自由向四周扩散,在比例合适处形成沉淀线。
若同时含有若干对抗原抗体系统,可出现多条沉淀线。
意义:用于分析鉴定标本中多种抗原成分(抗原、抗体同时扩散,自由、定向)缺点:所需时间长,不够敏感。
③对流免疫电泳:在相应抗原抗体孔之间可见白色沉淀线。
打孔:金属打孔器打两排孔,抗原孔与抗体孔间距离为4毫米至5毫米。
加样:抗AFP血清加于抗体孔内;病人血清、AFP阳性血清、阴性对照血清分别加于抗原孔内。
电泳:将琼脂板置电泳槽,抗原孔置阴极端。
板两端分别用湿纱布与缓冲液相连,通电20分钟。
观察:在相应抗原、抗体孔间出现沉淀线。
④火箭电泳:抗原定量试验(抗体琼脂板、抗原扩散(自由、定向)将一定量已知抗体混于琼脂中,制板,在板的一端打一排小孔,加入待检样品,置于阴极端进行电泳。
抗原在泳动过程中与抗体在比例合适部位形成锥形沉淀峰,状如火箭,称火箭电泳。
沉淀峰的高低与抗原的浓度成正比。
敏感度与单扩相仿,但需时较短。
III 直接凝集反应—拨片凝集(三)实验三①补体结合实验(简单了解)方法:待检系统:Ag(未知)+Ab(已知)+补体指示系统:绵羊红细胞(Ag)+溶血素(Ab)结果:溶血——阴性不溶血——阳性②中和反应实验:(病毒中和实验、毒素中和实验)略③免疫标记技术:(原理、常用标记物)概念:将已知抗体标记上显示性物质,通过检测标记物,反映有无抗原抗体反应,从而间接测出微量的抗原或抗体。
原理:免疫标记技术是在免疫学、生物化学及显微镜术进展的基础上发展起来的一项技术,具有特异、敏感、快速的特点。
将荧光色素(常用异硫氰基荧光黄,简称FITC)与特异性抗体(或抗原)以共价键基团牢固结合,但不影响该血清抗体的免疫特性。
这种荧光标记的抗原抗体复合物,可通过荧光灯源中产生的紫外光或蓝紫光激发产生荧光,而从荧光显微镜加以观察。
常用的标记物有:酶、荧光素、放射性同位素、胶体金、生物素、电子致密物等。
④E L I S A(酶联免疫吸附试验常用的方法及途径)原理:把抗原抗体的免疫反应和酶(主要有辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶等)的高效催化作用有机地结合起来,并仍保持其免疫和酶的活性。
结合在抗原抗体复合物上的酶在遇到相应的底物时,可以催化底物水解、氧化或还原,从而产生有色的物质。
颜色反应的深浅与抗体或抗原的量成正比。
方法:主要有间接法(用于测抗体)和双抗体夹心法(用于测抗原)。
实验:(四)实验四革兰染色(方法、意义、结果判定)意义:对细菌鉴别、选择抗菌药物、研究细菌致病性等有重要意义。
原理:1884年Gram创建,是细菌学中最为经典的染色法。
与细菌细胞壁有关,尚未完全阐明。
阴性—红色阳性—蓝色细菌学总论细菌是一类具有细胞壁的单细胞微生物,形体微小,一般以微米(µm)作为测量单位。
细菌按其外型可分为球菌、杆菌、螺型菌三大类。
不同种类的细菌大小不一,大多数球菌直径约1µm,杆菌长2∼5µm,宽0.3∼1µm。
细菌的特殊结构(特点及意义):荚膜、鞭毛、芽孢、菌毛①细菌生长现象(1)液体培养基沉淀生长、混浊生长、表面生长(2)半固体培养基(0.1%~0.3%琼脂粉)混浊生长、线状生长(3)固体培养基(1.4%~2%琼脂粉)菌落、菌苔②细菌变异一、菌落变异(S→R变异)S型菌落(Smooth)光滑菌落—表面光滑有光泽,边缘整齐。
R型菌落(Rough) 粗糙菌落—表面粗糙而暗淡,边缘不整齐。
菌落变异是由于菌体本身起变化。
一般光滑的细菌有毒力;粗糙的细菌没有毒力或毒力减退。
二、鞭毛变异(H→O变异)细菌的鞭毛在某些情况下可以消失而变成没有鞭毛的细菌。
③细菌色素④细菌生化反应(分类、指示剂、变色)消毒灭菌器材(看书)细菌的划线分离和药敏实验药敏实验结果判断:用精确度为1mm的游标卡尺量取抑菌圈直径。
根据NCCLS标准,作出“敏感”、“耐药”和“中介”的判断。
药敏实验意义:①可预测抗菌药物治疗的效果,“敏感”治疗可能有效;“耐药”可能失败;②指导临床医生合理选择抗生素,AST的结果为“耐药”,则应更换药物;③提供所选择药物的依据;④监测耐药性,分析耐药菌变迁,掌握耐药菌感染病流行病学,控制和预防耐药菌感染发生和流行(五)实验五1、常见化脓性球菌的形态及其培养特性①化脓性球菌:葡萄球菌(左上)、链球菌(右上)、肺炎球菌(左下)、淋球菌(右下)②甲型(α)乙型(β)丙型(γ)溶血链球菌、肺炎链球菌、淋病奈瑟菌1.甲型α—草绿色,不完全溶血2.乙型β—透明完全溶血3.丙型γ—不溶血4.肺炎链球菌G+ (血琼脂平板)(草绿色不完全溶血)5.淋病奈瑟菌G-(巧克力血琼脂平板)6.其中,链球菌的致病:扩散因子(透明质酸酶)使脓液稀释扩散。
杆菌毒力试验)③炭疽杆菌的形态及培养特性④结核杆菌的形态及培养特性、抗酸染色(齐-尼抗酸染色—红色)(罗氏培养基(绿色)—菜花样(黄色)(六)实验六①肥达反应(原理、意义、凝集效价、结果判定)概念:用已知的伤寒沙门菌菌体(O)抗原和鞭毛(H)抗原,以及引起副伤寒的甲型副伤寒沙门菌、乙型副伤寒沙门菌H抗原的诊断菌液与受检血清做试管或微孔板凝集实验,测定受检血清中有无相应抗体及其效价的试验。
结果判断:②肠道杆菌(SS培养基、双糖铁培养基)SS培养基:双糖铁培养基:④生化反应表④霍乱弧菌⑤厌氧芽孢梭菌的形态及培养特性(破伤风、产气荚膜、肉毒梭菌)1.破伤风梭菌G+(疱肉培养基)(毒素动物实验)2.产气荚膜梭菌G+(疱肉培养基)(血琼脂平板—双层溶血环)(高层琼脂断裂试验)(汹涌发酵试验)3.肉毒梭菌G+(疱肉培养基)(血琼脂平板—完全溶血)(七)实验七①白色念珠菌G+(普通琼脂、沙包培养基)②新型隐球菌(血琼脂、沙包培养基)(墨汁负染)③病毒的致细胞病变作用(CPE)许多病毒在细胞内复制增中,由于干扰细胞的正常代谢和损伤细胞结构,引起细胞形态的变化,如细胞皱缩、出现空泡、斑块、融合、变圆或坏死的现象,此种在光学显微镜下可观测到现象称病毒的致细胞病变作用(cytopathic effect,CPE)④包涵体胞浆、胞核内出现的圆形或椭圆形、嗜酸或嗜碱性的小体狂犬病毒包涵体—内基小体鸡胚接种:鸡胚在照蛋灯下标出气室和接种点,接种点一定要避开胚体和大血管。
用碘酒及酒精在标记处消毒,用打孔器按先气室后接种点的顺序打孔。
用注射器倾斜插入鸡胚2~3毫米,注入病毒0.2毫升。
用溶化石蜡按先接种点后气室的次序封口。
鸡胚置孵箱培养72小时后收获。
小白鼠脑内接种:碘酒及酒精在接种部位(眼角与耳根连线的中点)消毒用注射器倾斜进针2~3毫米,注入病毒0.02~0.03毫升。